Name: a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium
Uploaded: 2021-05-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (Conacyt, CB-221137). Adriana Campos er doktorgradsstudent ved Programa de Doctorado en Ciencias Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México, og ble støttet av Conacyt (CVU: 1002502).

1. Standard og betinget medium forberedelse
<ol><li>For å forberede standard RPMI 1640, supplere RPMI 1640 kulturmedium med 10% (v / v) foster bovint serum (FBS, tidligere varmeinaktivert) og 1% (v / v) av Penicillin-Streptomycin løsning. Oppbevar mediet ved 4 °C.Steriliser ved hjelp av 0,22 μm filtre.</li>
	<li>For å forberede palmitate lagerløsning, lag en 50 mM løsning av palmitate i standard RPMI 1640 tidligere supplert med 1% bovint serumalbumin (lipidfri). Et volum på 5-10 ml av dette lageret vil være ti...

<ol>
	<li>Younossi, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease+-+a+global+public+health+perspective.">Non-alcoholic fatty liver disease - a global public health perspective.</a> Journal of Hepatology. 70 (3), 531-544 (2019).</li><li>Younossi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+perspectives+on+nonalcoholic+fatty+liver+disease+and+nonalcoholic+steatohepatitis.">Global perspectives on nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis.</a> Hepatology. 69 (6), 2672-2682 (2019).</li><li>Eslam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+definition+for+metabolic+dysfunction-associated+fatty+liver+disease:+An+international+expert+consensus+statement.">A new definition for metabolic dysfunction-associated fatty liver disease: An international expert consensus statement.</a> Journal of Hepatology. 73 (1), 202-209 (2020).</li><li>Eslam, M., Sanyal, A. J., George, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAFLD:+A+consensus-driven+proposed+nomenclature+for+metabolic+associated+fatty+liver+disease.">MAFLD: A consensus-driven proposed nomenclature for metabolic associated fatty liver disease.</a> Gastroenterology. 158 (7), 1999-2014 (2020).</li><li>Chalasani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+management+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease:+Practice+guidance+from+the+American+association+for+the+study+of+liver+diseases.">The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American association for the study of liver diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 328-357 (2018).</li><li>Calzadilla Bertot, L., Adams, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+course+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">The natural course of non-alcoholic fatty liver disease.</a> International Journal of Molecular Science. 17 (5), 774 (2016).</li><li>Reccia, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+sign+of+systemic+disease.">Non-alcoholic fatty liver disease: A sign of systemic disease.</a> Metabolism. 72, 94-108 (2017).</li><li>Tomita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+cholesterol+accumulation+in+hepatic+stellate+cells:+Mechanism+of+liver+fibrosis+aggravation+in+nonalcoholic+steatohepatitis+in+mice.">Free cholesterol accumulation in hepatic stellate cells: Mechanism of liver fibrosis aggravation in nonalcoholic steatohepatitis in mice.</a> Hepatology. 59 (1), 154-169 (2014).</li><li>Byrne, C. D., Targher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nafld:+A+multisystem+disease.">Nafld: A multisystem disease.</a> Journal of Hepatology. 62, 47-64 (2015).</li><li>Ipsen, D. H., Lykkesfeldt, J., Tveden-Nyborg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+hepatic+lipid+accumulation+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Molecular mechanisms of hepatic lipid accumulation in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 75 (18), 3313-3327 (2018).</li><li>Diehl, A. M., Day, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause,+pathogenesis,+and+treatment+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Cause, pathogenesis, and treatment of nonalcoholic steatohepatitis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).</li><li>Zeng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+ameliorates+palmitic+acid+induced+hepatocellular+lipotoxicity+by+inhibition+of+ER+stress+and+pyroptosis.">Oleic acid ameliorates palmitic acid induced hepatocellular lipotoxicity by inhibition of ER stress and pyroptosis.</a> Nutrition and Metabolism. 17, 11 (2020).</li><li>Ore, A., Akinloye, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+antioxidant+biomarkers+in+clinical+and+experimental+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress and antioxidant biomarkers in clinical and experimental models of non-alcoholic fatty liver disease.</a> Medicina (Kaunas). 55 (2), 26 (2019).</li><li>Paradies, G., Paradies, V., Ruggiero, F. M., Petrosillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress,+cardiolipin+and+mitochondrial+dysfunction+in+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress, cardiolipin and mitochondrial dysfunction in nonalcoholic fatty liver disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 20 (39), 14205-14218 (2014).</li><li>Aravinthan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+senescence+predicts+progression+in+non-alcohol-related+fatty+liver+disease.">Hepatocyte senescence predicts progression in non-alcohol-related fatty liver disease.</a> Journal of Hepatology. 58 (3), 549-556 (2013).</li><li>Gomez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+hepatocellular+in+vitro+model+to+investigate+steatosis.">A human hepatocellular in vitro model to investigate steatosis.</a> Chemico Biological Interactions. 165 (2), 106-116 (2007).</li><li>Wu, W. K. K., Zhang, L., Chan, M. T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy,+NAFLD+and+NAFLD-related+HCC.">Autophagy, NAFLD and NAFLD-related HCC.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1061, 127-138 (2018).</li><li>Levy, G., Cohen, M., Nahmias, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+culture+models+of+hepatic+steatosis.">In vitro cell culture models of hepatic steatosis.</a> Methods in Molecular Biology. 1250, 377-390 (2015).</li><li>Kanuri, G., Bergheim, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease+(NAFLD).">In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).</a> International Journal of Molecular Science. 14 (6), 11963-11980 (2013).</li><li>Ricchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effect+of+oleic+and+palmitic+acid+on+lipid+accumulation+and+apoptosis+in+cultured+hepatocytes.">Differential effect of oleic and palmitic acid on lipid accumulation and apoptosis in cultured hepatocytes.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 24 (5), 830-840 (2009).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+biomarkers+of+de+novo+lipogenesis+fatty+acids+and+incident+heart+failure+in+older+adults:+The+cardiovascular+health+study.">Serial biomarkers of de novo lipogenesis fatty acids and incident heart failure in older adults: The cardiovascular health study.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (4), 014119 (2020).</li><li>Alnahdi, A., John, A., Raza, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+glucotoxicity,+oxidative+stress,+apoptosis+and+mitochondrial+dysfunction+in+Hepg2+cells+by+palmitic+acid.">Augmentation of glucotoxicity, oxidative stress, apoptosis and mitochondrial dysfunction in Hepg2 cells by palmitic acid.</a> Nutrients. 11 (9), 1979 (2019).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+protects+saturated+fatty+acid+mediated+lipotoxicity+in+hepatocytes+and+rat+of+non-alcoholic+steatohepatitis.">Oleic acid protects saturated fatty acid mediated lipotoxicity in hepatocytes and rat of non-alcoholic steatohepatitis.</a> Life Sciences. 203, 291-304 (2018).</li><li>Xing, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NLRP3+inflammasome+mediate+palmitate-induced+endothelial+dysfunction.">NLRP3 inflammasome mediate palmitate-induced endothelial dysfunction.</a> Life Sciences. 239, 116882 (2019).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+Growth+Factor+Binding+Protein+7+accelerates+hepatic+steatosis+and+insulin+resistance+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Insulin-like Growth Factor Binding Protein 7 accelerates hepatic steatosis and insulin resistance in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 46 (12), 1101-1110 (2019).</li><li>Wang, J., Hu, R., Yin, C., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tanshinone+IIA+reduces+palmitate-induced+apoptosis+via+inhibition+of+endoplasmic+reticulum+stress+in+Hepg2+liver+cells.">Tanshinone IIA reduces palmitate-induced apoptosis via inhibition of endoplasmic reticulum stress in Hepg2 liver cells.</a> Fundamental and Clinical Pharmacology. 34 (2), 249-262 (2020).</li><li>Xiao, Z., Chu, Y., Qin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGFBP5+modulates+lipid+metabolism+and+insulin+sensitivity+through+activating+ampk+pathway+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">IGFBP5 modulates lipid metabolism and insulin sensitivity through activating ampk pathway in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Life Sciences. 256, 117997 (2020).</li><li>Avila, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+conjugated+linoleic+acid+(CLA)+on+inflammatory+functions+of+bovine+monocytes.">In vitro effects of conjugated linoleic acid (CLA) on inflammatory functions of bovine monocytes.</a> Journal of Dairy Science. 103 (9), 8554-8563 (2020).</li><li>Malhi, H., Bronk, S. F., Werneburg, N. W., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+induce+JNK-dependent+hepatocyte+lipoapoptosis.">Free fatty acids induce JNK-dependent hepatocyte lipoapoptosis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 281 (17), 12093-12101 (2006).</li><li>Oh, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+palmitic+acid+on+TNF-alpha-induced+cytotoxicity+in+SK-Hep-1+cells.">Effects of palmitic acid on TNF-alpha-induced cytotoxicity in SK-Hep-1 cells.</a> Toxicology In Vitro: An International Journal Published in Association with BIBRA. 26 (6), 783-790 (2012).</li><li>Stellavato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assessment+of+nutraceutical+compounds+and+novel+nutraceutical+formulations+in+a+liver-steatosis-based+model.">In vitro assessment of nutraceutical compounds and novel nutraceutical formulations in a liver-steatosis-based model.</a> Lipids in Health and Disease. 17 (1), 24 (2018).</li><li>Pachikian, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implication+of+trans-11,+trans-13+conjugated+linoleic+acid+in+the+development+of+hepatic+steatosis.">Implication of trans-11, trans-13 conjugated linoleic acid in the development of hepatic steatosis.</a> PLoS One. 13 (2), 0192447 (2018).</li><li>Ferreira, T., Rasband, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyze.">Analyze.</a> ImageJ User Guide. , 132-135 (2012).</li><li>Geng, Y., Wu, Z., Buist-Homan, M., Blokzijl, H., Moshage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hesperetin+protects+against+palmitate-induced+cellular+toxicity+via+induction+of+GRP78+in+hepatocytes.">Hesperetin protects against palmitate-induced cellular toxicity via induction of GRP78 in hepatocytes.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. , 404 (2020).</li><li>Geng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+metformin+against+palmitate-induced+hepatic+cell+death.">Protective effect of metformin against palmitate-induced hepatic cell death.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. 1866 (3), 165621 (2020).</li><li>Sarnyai, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cis-+and+trans-monounsaturated+fatty+acids+on+palmitate+toxicity+and+on+palmitate-induced+accumulation+of+ceramides+and+diglycerides.">Effect of cis- and trans-monounsaturated fatty acids on palmitate toxicity and on palmitate-induced accumulation of ceramides and diglycerides.</a> International Journal of Molecular Science. 21 (7), 2626 (2020).</li><li>Chen, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrahydrocurcumin+ameliorates+free+fatty+acid-induced+hepatic+steatosis+and+improves+insulin+resistance+in+HepG2+cells.">Tetrahydrocurcumin ameliorates free fatty acid-induced hepatic steatosis and improves insulin resistance in HepG2 cells.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (3), 1075-1085 (2018).</li><li>Burhans, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+oleate+regulates+adipose+tissue+lipogenesis+and+fatty+acid+oxidation.">Hepatic oleate regulates adipose tissue lipogenesis and fatty acid oxidation.</a> Journal of Lipid Research. 56 (2), 304-318 (2015).</li><li>Abenavoli, L., Milanovic, M., Milic, N., Luzza, F., Giuffre, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olive+oil+antioxidants+and+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Olive oil antioxidants and non-alcoholic fatty liver disease.</a> Expert Reviews in Gastroenterology and Hepatology. 13 (8), 739-749 (2019).</li><li>Nagarajan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+and+glucose+metabolism+in+hepatocyte+cell+lines+and+primary+mouse+hepatocytes:+A+comprehensive+resource+for+in+vitro+studies+of+hepatic+metabolism.">Lipid and glucose metabolism in hepatocyte cell lines and primary mouse hepatocytes: A comprehensive resource for in vitro studies of hepatic metabolism.</a> American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. 316 (4), 578-589 (2019).</li><li>Hodson, L., Skeaff, C. M., Fielding, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+composition+of+adipose+tissue+and+blood+in+humans+and+its+use+as+a+biomarker+of+dietary+intake.">Fatty acid composition of adipose tissue and blood in humans and its use as a biomarker of dietary intake.</a> Progress in Lipid Research. 47 (5), 348-380 (2008).</li></ol>

Denne protokollen er ment å gi en strategi for å studere steatose in vitro. Cellekultur er et kraftig verktøy for å studere cellulære, molekylære, biokjemiske og toksikologiske aspekter av cellene utsatt for forskjellige forhold. Med denne tilnærmingen kan steatose visualiseres ikke bare som et stadium av den komplekse sykdommen som er MAFLD, men også som hepatocyt overeksponering til lipider og mulige utfall som følge av slik eksponering. Derfor er søknaden ikke begrenset til fysiopatologien til MAFLD...

Fettlever forbundet med metabolsk dysfunksjon er svært utbredt over hele verden1,2; Det anslås at opptil 25% av befolkningen påvirkes3. Denne sykdommen tidligere kjent som alkoholfri fettleversykdom (NAFLD), har oppdatert sin nomenklatur til metabolsk dysfunksjon assosiert fettleversykdom (MAFLD) for å nøyaktig reflektere patogenesen relatert til fedme, insulinresistens, diabetes type 2 og dyslipidemi, samt mulige styringer av sykdommen3,4.
Uansett navn inneholder sykdommen et bredt spekter av histopatologiske endringer preget av unormalt høy akkumulering av lipider i leveren (>5% fett i hepatocyttene5) og kan utvikle seg gjennom lipidakkumulering som vanligvis finnes i enkel steatohepatitt, noe som igjen kan føre til utvikling av fibrose, skrumplever, hepatocellulært karsinom og leversvikt5,6,7,8. På grunn av sin økende utbredelse forventes MAFLD å bli den første indikasjonen på levertransplantasjon og den ledende årsaken til hepatocellulært karsinom9.
Selv om det har blitt ansett som en godartet eller mild form for fettleversykdom, er leversteatose faktisk den metabolske nøkkelen i MAFLD10. Ulike metabolske veier påvirkes av lipidakkumulering i leveren, inkludert, men ikke begrenset til lipidsyntese, eksport og metabolisme10. Insulinresistens, oksidativt stress, retikulært stress og cellulær dysfunksjon er sterkt forbundet med leverletoksisitet11,12. På den annen side er fete hepatocytter målet for reaktive oksygenarter, noe som gjør metabolitter som lipidperoksider, proteinkarbonyler og addukter av nukleinsyrer13. På cellenivå kan fett hepatocytter gjennomgå mitokondrieskade14, cellulær senescence15, apoptose16, pyroptose12og autofagi17, blant andre hendelser.
Hepatocytter er svært ansvarlige for metabolisme, avgiftning og syntese av et bredt spekter av molekyler. Mange av disse funksjonene kan bli kompromittert av lipidakkumulering observert ved steatose. Derfor er det av stor betydning å ha reproduserbare verktøy som tillater en nøyaktig evaluering av steatose. I denne forstand er in vitro-modeller lett anvendelige og svært reproduserbare. Steatose in vitro har blitt brukt med forskjellige mål16,18,19. HepG2-cellene er mye brukt som hepatocyttcellelinje. Det har fordeler som å være lett å kultur og godt karakterisert. Kanskje er den eneste ulempen ved HepG2-celler det faktum at det er en kreftfremkallende cellelinje, så dette må vurderes når du analyserer resultatene. Her vises anvendelsen av en blanding av fettsyrer som er mye brukt i cellekulturen: palmittsyre (PA) og oljesyre (OA). Både PA og OA tilbyr forskjellige resultater i kultur20. PA (C 16:0) er den vanligste mettede fettsyren oppnådd fra dietten16. PA regnes som en biomarkør for de-novo lipogenese, et avgjørende skritt i utviklingen av NAFLD21. PA er vist å være svært giftig22; Derfor kan det ikke anbefales å indusere steatose in vitro. OA (C 18:1) er en enumettet fettsyre. I motsetning til PA har OA blitt foreslått å ha antiinflammatoriske og antioksidantegenskaper, og kunne motvirke PA12. Både PA og OA er de viktigste fettsyrene som er tilstede i triglyseridene, uavhengig av tilstanden til helse eller sykdom16. Tabell 1 inneholder eksempler på hepatocyttkulturen med PA, OA og deres blanding, i tillegg til resultatene som er rapportert12,23,24,25,26,27. Andre fettsyrer har også blitt brukt i hepatocyttkultur, inkludert stearinsyre (C 18:0)28,29,30, linolsyre (C 18:1)28,30,31 og dens konjugater (CLA)28,32, palmitoleinsyre (C 16:1)29. Imidlertid er deres bruk minst ofte rapportert i litteraturen, kanskje fordi deres lever overflod er lavere enn PA og OA16.
I forbindelse ligner begge fettsyrene steatose in vitro, gir proliferating celler, med økt celledød og lavere levedyktighet sammenlignet med kontrollforhold. Det er verdt å nevne at de respektive saltene til disse fettsyrene er tilgjengelige og også kan brukes. Et av hovedproblemene ved vurdering av lipidoverbelastning i hepatocytcellekultur er gitt i differensiering mellom toksikologiske modeller og en modell som best representerer steatose. Mange modeller kan redegjøres i det første tilfellet. Faktisk kan bruken av PA alene vurderes blant dem, og den høye dødeligheten er det mest åpenbare utfallet12,16,23,24,25,26,27. Bruk av høye doser selv ved OA kan også betraktes som en toksikologisk modell. Protokollen som vises her er i høyere samsvar med steatoseutvikling siden den viser lav dødelighet sammenlignet med den som er observert i andre modeller og gjør at den kan følges i løpet av flere dager med progressiv lipidakkumulering som det forekommer i NAFLD. Muligheten til å vurdere mild og alvorlig steatose gjennom eksperimentelle forhold regnes som en annen fordel.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Fettsyrer</td>
			<td colspan="2">Betingelser</td>
			<td colspan="2">Resultater</td>
			<td>Referanse</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">PA</td>
			<td colspan="2">Konsentrasjon: 200 μM</td>
			<td colspan="2">Lipid akkumulering</td>
			<td rowspan="3">Yan et al, 201925.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
			<td colspan="2">Hepatocyte skade</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2"></td>
			<td colspan="2">Transaminaser høyde</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">PA</td>
			<td colspan="2">Konsentrasjon: 50, 100 og 200 μM</td>
			<td colspan="2" rowspan="2">Lipid akkumulering</td>
			<td rowspan="2">Xing et al, 201924.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">PA</td>
			<td colspan="2">Konsentrasjon: 250 μM, 500 μM, 750 μM og 1000 μM</td>
			<td colspan="2">Lipid akkumulering</td>
			<td rowspan="2">Wang et al, 202026.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
			<td colspan="2">Progressiv reduksjon av celle levedyktighet</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Blanding av OA/PA</td>
			<td colspan="2">Konsentrasjon: 1 mM</td>
			<td colspan="2">Lipid akkumulering</td>
			<td rowspan="3">Xiao et al, 202027.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
			<td colspan="2">Rapporterer ikke liptoksisitet</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Hastighet: 2OA:1PA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Blanding av OA/PA</td>
			<td colspan="2">Første stimulering med 200 μM og 400 μM PA og deretter andre stimulering med 200 μM OA</td>
			<td colspan="2">Lipid akkumulering.</td>
			<td rowspan="4">Zeng et al, 202012.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Konsentrasjon: 400 μM PA: 200 μM OA</td>
			<td colspan="2">Tegn på lipotoksisitet indusert av PA ble redusert ved stimulering av OA.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Blanding av OA/PA</td>
			<td colspan="2">Konsentrasjon: 400 μM PA: 200 μM OA</td>
			<td colspan="2" rowspan="3">Lipid akkumulering</td>
			<td rowspan="3">Chen et al, 201823.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2PA:1OA</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Blanding av OA/PA</td>
			<td colspan="2">Konsentrasjon : 50 og 500 μM</td>
			<td colspan="2">Generering av to typer steatose: mild steatose og alvorlig steatose.</td>
			<td rowspan="3">Campos og Guzmán 2021</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2">Simulerer kronisk utstilling av lipidoverbelastning</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer, 2 dager, 3 dager og 4 dager.</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabell 1. Hepatocyttkultur i steatogene forhold. Tabellen presenterer typen fettsyre som brukes, forholdene opprettholdes og de observerte resultatene i hepatocyttkulturen. Palmitisk syre. OA: Oljesyre.
Til slutt gjelder denne modellen ikke bare for studiet av steatose og fettlever, men også for levermetabolismen, syntetiske og avgiftningsveiene i sammenheng med steatose. Også in vitro indusert steatose kan gi bevis for identifisering av potensielle markører av sykdommen samt terapeutiske mål.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>ESCO Airstream</td>
			<td>AC2-452+C2:C26</td>
			<td>Class II&#160;Type A2&#160;Biological Safety Cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle top filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>430513</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, polystyrene, sterile. 1 filter/Bag. 0.22 &#956;m, 500 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albimun (BSA)</td>
			<td>Gold Biotechnology, US</td>
			<td>A-421-10</td>
			<td>BSA Fatty Acid Free for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture media RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>31800-022</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>A4766801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Marienfeld, DE</td>
			<td>640010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2 cell line</td>
			<td>ATCC, US</td>
			<td>HB-8065</td>
			<td>Hepatocellular carcinoma human cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidified incubator</td>
			<td>Thermo Electronic Corporation,US</td>
			<td>Model: 3110</td>
			<td>Temperature (37 &#176;C &#177; 1 &#176;C), humidity (90% &#177; 5%) , CO2 (5% &#177; 1%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope Eclipse</td>
			<td>NIKON, JPN</td>
			<td>Model: TE2000-S</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>I9030-4L</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O Kit</td>
			<td>Abcam, US</td>
			<td>ab150678</td>
			<td>Kit for histological visualization of neutral fat.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Antibiotics 10,000 U/mL Penicillin, 10,000 &#956;g/mL Streptomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Beckman, US</td>
			<td>Model: 360 PH/Temp/MV Meter</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>86.1253.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>&#160;86.1254.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>S5761-1KG</td>
			<td>Preparation of culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium oleate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215879A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium palmitate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215881</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syring filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>431219</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 28 mm, 0.2 &#956;m.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>T6146-25G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.05% /EDTA 0.53 mM</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>25-052-Cl</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3524</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3599</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium

Metabolsk dysfunksjon-assosiert fettleversykdom (MAFLD), tidligere kjent som alkoholfri fettleversykdom (NAFLD), er den mest utbredte leversykdommen over hele verden på grunn av forholdet til fedme, diabetes type 2 og dyslipidemi. Leversteatose, akkumulering av lipiddråper i leverparenchyma, er et sentralt trekk ved sykdommen før betennelsen observert i steatohepatitt, fibrose og end-stage leversykdom. Lipidakkumulering i hepatocytter kan forstyrre riktig metabolisme av xenobiotika og endogene molekyler, samt å indusere cellulære prosesser som fører til sykdomsforløpet. Selv om den eksperimentelle studien av steatose kan utføres in vivo, in vitro tilnærminger til studiet av steatose er komplementære verktøy med forskjellige fordeler. Hepatocyttkultur i lipid overbelastningskondisjonerte medium er et utmerket reproduserbart alternativ for studiet av leversteatose som tillater identifisering av cellulære prosesser relatert til lipidakkumulering, for eksempel oksidative og retikulære stress, autofagi, spredning, celledød, etcetera, samt andre tester, inkludert legemiddeleffektivitet og toksikologiske tester, blant mange andre mulige applikasjoner. Her var det rettet mot å beskrive metodikken til hepatocyttcellekultur i lipid overbelastningskondisjonerte medium. HepG2 celler ble dyrket i RMPI 1640 medium betinget med natrium palmitate og natrium oleate. Viktigst, forholdet mellom disse to lipidene er avgjørende for å favorisere lipiddråpeakkumulering, samtidig som celleproliferasjon og moderat dødelighet opprettholdes, som forekommer i leveren under sykdommen. Metodikken, fra utarbeidelsen av lipidoppløsningsbestandene, vises blanding, tillegg til mediet og hepatocyttkulturen. Med denne tilnærmingen er det mulig å identifisere lipiddråper i hepatocyttene som er lett observerbare av oljerød O-farging, samt kurver av spredning / dødelighet.

Hepatocytter dyrket i den steatogene medium displayveksten over hele overflaten av brønnen; Imidlertid viser fete hepatocytter lavere vekstrate sammenlignet med celler dyrket i kontrollmedium. Det foreslåtte forholdet og konsentrasjonen av OA og PA garanterer celleoverlevelse under kultur. Såing 1 x 105 celler per brønn i 24-brønnsplater gir optimal samløp som vist i figur 1.
Levedyktigheten i dyrkede celler var lavere i desteatogene gruppene Mild...

Watch this Scientific Journal Video about A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium at JoVE.com

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

Denne protokollen er ment å være et verktøy for å studere steatose og molekylære, biokjemiske, cellulære endringer produsert ved overeksponering av hepatocytter til lipider in vitro.

En modell av eksperimentell steatose in vitro: Hepatocyte cellekultur i Lipid overbelastningskondisjonerte medium

Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MAFLD), previously known as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), is the most prevalent liver ...

Denne protokollen gjelder for studiet av leversteatose så vel som for leveren, metabolsk, syntetisk og toksifikasjonsveiene i sammenheng med steatose. De viktigste fordelene ved denne metoden er dens reproduserbarhet og den korte tiden som trengs for å oppnå resultater. Legg til det faktum at det tilbyr to nivåer av steatose, mild og alvorlig.In vitro indusert steatose kan gi bevis for identifisering av potensielle markører for diagnostisering av sykdommen, samt terapeutiske mål. Denne metoden er ment å brukes i steatoseresultatet. Det kan imidlertid justeres til et bredt spekter av forskjellige celler påvirket av lipidovereksponeringer, som under fedme og lipidemi.Klargjør standard RPMI 1640. Supplement RPMI 1640 kulturmedium med 10% av varmeaktivert FBS, og 1% av penicillin streptomycin løsning. Steriliser det ved å bruke 0,22 mikrometerfiltre og lagre tilskuddet ved fire grader Celsius.For å forberede en palmitate lagerløsning, lag en 50 millimolar løsning av palmitat i standard RPMI 1640 supplert med 1% lipidfri BSA. Steriliser omtrent fem til ti milliliter av lagerløsningen ved å bruke 0,22 mikrometerfiltre og lagre ved fire grader Celsius beskyttet mot lys i opptil en måned. For å forberede oleate lagerløsning lag en 50 millimolar løsning av oleat i den ekstra RPMI 1640.Og steriliser lagerløsningen ved å bruke 0,22 mikrometerfiltre. Oppbevar den på minus 20 grader Celsius, beskyttet mot lys i opptil en måned. For å forberede steatogene medium fra de tidligere forberedte bestandene, lag 100 millimeter av en 50 mikromolarblanding av en del palmitate og to deler oleat.For milde nivåer, hell en 500 mikromolar blanding av en del palmitate og to deler oleate for alvorlige nivåer i standard RPMI 1640. Og steriliser med 0,22 mikrometerfiltre. Oppbevares ved fire grader Celsius i opptil en uke.Alternativt, for å forberede lagerløsninger med de respektive fettsyrene ved hjelp av gratis lipidalbumin, oppløs enten palmitate eller oleat i to milliliter absolutt etanol og bland deretter i det endelige volumet av standard RPMI 1640. Løs opp oleate direkte ved å lagre i standard RPMI 1640 kulturmedium. Tillat fordampning av etanol ved å inkubere i et vannbad ved 70 grader Celsius og bland grundig.Steriliser begge lagerløsningene ved hjelp av 0,22 mikrometerfiltre og lagre palmitate lagerløsningen ved fire grader Celsius. Og oleate lagerløsning ved minus 20 grader Celsius. Sete 0,1 millioner Hep G2-celler per brønn i en 24-brønnsplate.Tilsett en milliliter standard RPMI 1640. Pre-inkubere ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i 24 timer, slik at cellevedlegg. Etter prekulturen, kast standard RPMI 1640 medium.Og legg til det steatogene mediet. Kast supernatanten og tilsett et friskt steatogent medium hver 24. For å utføre levedyktighets- og morfologivurdering, kast de supernatante og løsne cellene fra brønnen ved å legge til 500 mikroliter med 0,05% trypsin EDTA.Inkuber i fem minutter ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. Samle de resuspenderte cellene i et mikrorør. Og sentrifuge på 300 ganger G.Kast deretter supernatanten, legg til en 200 mikroliter standard RPMI 1640, og resuspend cellene.Tilsett 15 mikroliter 0,4% av trypan blå oppløsning i et friskt mikrorør. Tilsett og bland 15 mikroliter av forrige cellefjæring. Tell de fargede og ikke-fargede cellene i et hemocytometer og beregn levedyktigheten og dødeligheten.Sett et cellekulturdeksel i hver brønn i en 24-brønns plate og frø Hep G2 celler som beskrevet i tekstmanuskriptet. Etter riktig inkubasjon, vask cellene med en milliliter PBS og kast supernatanten. Bland dem med en milliliter 4% paraformaldehyd i PBS og inkuber i en time ved romtemperatur.Kast overflødig paraformaldehyd og skyll cellene med en milliliter destillert vann. Tilsett deretter en milliliter 70% isopropanol og inkuber i fem minutter. Kast overflødig isopropanol og tilsett en milliliter oljerød O-løsning og inkuber i 30 minutter.Kast den overflødige oljerøde O-løsningen, og skyll deretter med en milliliter destillert vann. Vær oppmerksom på cellene under mikroskopet med en forstørrelse på 400x. Velg og ta bilder av 10 optiske felt tilfeldig fra hele brønnområdet.Gjenta bildet for hver brønn. For å vurdere prosentandelen av rødt farget område, åpne ImageJ-programvare og importer nødvendige filer, klikk deretter på juster og bruk fargeterskelverktøyet", definer fargetoneparameteren for rød fargedeteksjon. Juster deretter metning og lysstyrke for bildet.Sammenlign det fargede området med det komplette området av det optiske feltet, bruk analysepartiklene"-verktøyet og beregn den gjennomsnittlige prosentandelen av hver brønn. Plass til 0,1 millioner hepatocytter per brønn i 24-brønnsplater gir optimal samløp. Levedyktigheten ble gradvis redusert etter hvert som kulturens tid økte, og nådde den laveste av 60% på fire dager ved alvorlig steatose.Følgelig var dødeligheten høyere i hepatocytter dyrket i desteatogene forholdene. Og det økte gradvis med tidspunktet for eksponering for lipider. Celletallene økte gradvis som følge av spredning.Spredningsraten var imidlertid lavere ved mildsteatose på tre og fire dager. Til sammenligning var alvorlig steatose forbundet med lavere spredning med 24 timer. Farging av celler med oljerød O viste minst en todelt økning av lipiddråper i celler dyrket under steatogene forhold.Intracellulært fett økte i henhold til tidspunktet for eksponering av kultur i det steatogene mediet. Ved mildsteatose ble lipidinnholdet økt fra dag to, mens de i alvorlig steatose var betydelig høye fra 24 timer. Cellekultur krever tidligere erfaring.Det kan være nyttig å dyrke Hep G2-celler i en standardtilstand før du bruker denne protokollen. Forberedelse av fettsyrebestanden er også et avgjørende punkt. Palmitisk syre er fast ved romtemperatur, og den må varmes opp før forvaltningen.Denne metoden bør tillate molekylær analyse av forskjellige veier, inkludert, men ikke begrenset til spredning, apoptose, autofagi, oksidativt stress og farmakologisk og toksikologisk analyse.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stamcelletransplantasjon i en In vitro Simulert ischemia / reperfusjon Model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Vurdere Teratogene Endringer i en sebrafisk Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro mesothelial Clearance Assay at modeller av de tidlige trinnene på eggstokkreft Metastase

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Eksitotoksiske Stimulering av Hjerne Microslices som en<em&gt; In vitro</em&gt; Modell av Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Nevrale stamcelletransplantasjon i Experimental Contusive Modell av ryggmargsskade

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimalisert Analyse av<em&gt; I Vivo</em&gt; og<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatose

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Bruke In Vitro Live-celle Imaging for å utforske Chemotherapeutics levert av Lipid-baserte nanopartikler

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

En celle kultur modell av motstand arterier

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Disseksjon og Explant kultur Murine Allantois for In Vitro analyse av Allantoic vedlegg

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...