Name: a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium
Uploaded: 2021-05-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium at JoVE.com

Detta arbete finansierades av Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (Conacyt, CB-221137). Adriana Campos är doktorand vid Programa de Doctorado en Ciencias Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México, och fick stöd av Conacyt (CVU: 1002502).

1. Standard och konditionerad medium förberedelse
<ol><li>För att förbereda standard RPMI 1640, komplettera RPMI 1640 odlingsmedium med 10% (v/v) fetala nötkreatur serum (FBS, tidigare värme inaktiverad) och 1% (v/v) av Penicillin-Streptomycin lösning. Förvara mediet vid 4 °C.Sterilisera med hjälp av 0,22 μm filter.</li>
	<li>För att förbereda palmitatbuljonglösning, bered en 50 mM lösning av palmitat i standard RPMI 1640 tidigare kompletterad med 1% av bovint serumalbumin (lipidfritt). En volym på 5-10 ...

<ol>
	<li>Younossi, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease+-+a+global+public+health+perspective.">Non-alcoholic fatty liver disease - a global public health perspective.</a> Journal of Hepatology. 70 (3), 531-544 (2019).</li><li>Younossi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+perspectives+on+nonalcoholic+fatty+liver+disease+and+nonalcoholic+steatohepatitis.">Global perspectives on nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis.</a> Hepatology. 69 (6), 2672-2682 (2019).</li><li>Eslam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+definition+for+metabolic+dysfunction-associated+fatty+liver+disease:+An+international+expert+consensus+statement.">A new definition for metabolic dysfunction-associated fatty liver disease: An international expert consensus statement.</a> Journal of Hepatology. 73 (1), 202-209 (2020).</li><li>Eslam, M., Sanyal, A. J., George, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAFLD:+A+consensus-driven+proposed+nomenclature+for+metabolic+associated+fatty+liver+disease.">MAFLD: A consensus-driven proposed nomenclature for metabolic associated fatty liver disease.</a> Gastroenterology. 158 (7), 1999-2014 (2020).</li><li>Chalasani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+management+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease:+Practice+guidance+from+the+American+association+for+the+study+of+liver+diseases.">The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American association for the study of liver diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 328-357 (2018).</li><li>Calzadilla Bertot, L., Adams, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+course+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">The natural course of non-alcoholic fatty liver disease.</a> International Journal of Molecular Science. 17 (5), 774 (2016).</li><li>Reccia, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+sign+of+systemic+disease.">Non-alcoholic fatty liver disease: A sign of systemic disease.</a> Metabolism. 72, 94-108 (2017).</li><li>Tomita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+cholesterol+accumulation+in+hepatic+stellate+cells:+Mechanism+of+liver+fibrosis+aggravation+in+nonalcoholic+steatohepatitis+in+mice.">Free cholesterol accumulation in hepatic stellate cells: Mechanism of liver fibrosis aggravation in nonalcoholic steatohepatitis in mice.</a> Hepatology. 59 (1), 154-169 (2014).</li><li>Byrne, C. D., Targher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nafld:+A+multisystem+disease.">Nafld: A multisystem disease.</a> Journal of Hepatology. 62, 47-64 (2015).</li><li>Ipsen, D. H., Lykkesfeldt, J., Tveden-Nyborg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+hepatic+lipid+accumulation+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Molecular mechanisms of hepatic lipid accumulation in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 75 (18), 3313-3327 (2018).</li><li>Diehl, A. M., Day, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause,+pathogenesis,+and+treatment+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Cause, pathogenesis, and treatment of nonalcoholic steatohepatitis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).</li><li>Zeng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+ameliorates+palmitic+acid+induced+hepatocellular+lipotoxicity+by+inhibition+of+ER+stress+and+pyroptosis.">Oleic acid ameliorates palmitic acid induced hepatocellular lipotoxicity by inhibition of ER stress and pyroptosis.</a> Nutrition and Metabolism. 17, 11 (2020).</li><li>Ore, A., Akinloye, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+antioxidant+biomarkers+in+clinical+and+experimental+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress and antioxidant biomarkers in clinical and experimental models of non-alcoholic fatty liver disease.</a> Medicina (Kaunas). 55 (2), 26 (2019).</li><li>Paradies, G., Paradies, V., Ruggiero, F. M., Petrosillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress,+cardiolipin+and+mitochondrial+dysfunction+in+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress, cardiolipin and mitochondrial dysfunction in nonalcoholic fatty liver disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 20 (39), 14205-14218 (2014).</li><li>Aravinthan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+senescence+predicts+progression+in+non-alcohol-related+fatty+liver+disease.">Hepatocyte senescence predicts progression in non-alcohol-related fatty liver disease.</a> Journal of Hepatology. 58 (3), 549-556 (2013).</li><li>Gomez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+hepatocellular+in+vitro+model+to+investigate+steatosis.">A human hepatocellular in vitro model to investigate steatosis.</a> Chemico Biological Interactions. 165 (2), 106-116 (2007).</li><li>Wu, W. K. K., Zhang, L., Chan, M. T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy,+NAFLD+and+NAFLD-related+HCC.">Autophagy, NAFLD and NAFLD-related HCC.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1061, 127-138 (2018).</li><li>Levy, G., Cohen, M., Nahmias, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+culture+models+of+hepatic+steatosis.">In vitro cell culture models of hepatic steatosis.</a> Methods in Molecular Biology. 1250, 377-390 (2015).</li><li>Kanuri, G., Bergheim, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease+(NAFLD).">In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).</a> International Journal of Molecular Science. 14 (6), 11963-11980 (2013).</li><li>Ricchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effect+of+oleic+and+palmitic+acid+on+lipid+accumulation+and+apoptosis+in+cultured+hepatocytes.">Differential effect of oleic and palmitic acid on lipid accumulation and apoptosis in cultured hepatocytes.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 24 (5), 830-840 (2009).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+biomarkers+of+de+novo+lipogenesis+fatty+acids+and+incident+heart+failure+in+older+adults:+The+cardiovascular+health+study.">Serial biomarkers of de novo lipogenesis fatty acids and incident heart failure in older adults: The cardiovascular health study.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (4), 014119 (2020).</li><li>Alnahdi, A., John, A., Raza, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+glucotoxicity,+oxidative+stress,+apoptosis+and+mitochondrial+dysfunction+in+Hepg2+cells+by+palmitic+acid.">Augmentation of glucotoxicity, oxidative stress, apoptosis and mitochondrial dysfunction in Hepg2 cells by palmitic acid.</a> Nutrients. 11 (9), 1979 (2019).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+protects+saturated+fatty+acid+mediated+lipotoxicity+in+hepatocytes+and+rat+of+non-alcoholic+steatohepatitis.">Oleic acid protects saturated fatty acid mediated lipotoxicity in hepatocytes and rat of non-alcoholic steatohepatitis.</a> Life Sciences. 203, 291-304 (2018).</li><li>Xing, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NLRP3+inflammasome+mediate+palmitate-induced+endothelial+dysfunction.">NLRP3 inflammasome mediate palmitate-induced endothelial dysfunction.</a> Life Sciences. 239, 116882 (2019).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+Growth+Factor+Binding+Protein+7+accelerates+hepatic+steatosis+and+insulin+resistance+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Insulin-like Growth Factor Binding Protein 7 accelerates hepatic steatosis and insulin resistance in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 46 (12), 1101-1110 (2019).</li><li>Wang, J., Hu, R., Yin, C., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tanshinone+IIA+reduces+palmitate-induced+apoptosis+via+inhibition+of+endoplasmic+reticulum+stress+in+Hepg2+liver+cells.">Tanshinone IIA reduces palmitate-induced apoptosis via inhibition of endoplasmic reticulum stress in Hepg2 liver cells.</a> Fundamental and Clinical Pharmacology. 34 (2), 249-262 (2020).</li><li>Xiao, Z., Chu, Y., Qin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGFBP5+modulates+lipid+metabolism+and+insulin+sensitivity+through+activating+ampk+pathway+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">IGFBP5 modulates lipid metabolism and insulin sensitivity through activating ampk pathway in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Life Sciences. 256, 117997 (2020).</li><li>Avila, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+conjugated+linoleic+acid+(CLA)+on+inflammatory+functions+of+bovine+monocytes.">In vitro effects of conjugated linoleic acid (CLA) on inflammatory functions of bovine monocytes.</a> Journal of Dairy Science. 103 (9), 8554-8563 (2020).</li><li>Malhi, H., Bronk, S. F., Werneburg, N. W., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+induce+JNK-dependent+hepatocyte+lipoapoptosis.">Free fatty acids induce JNK-dependent hepatocyte lipoapoptosis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 281 (17), 12093-12101 (2006).</li><li>Oh, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+palmitic+acid+on+TNF-alpha-induced+cytotoxicity+in+SK-Hep-1+cells.">Effects of palmitic acid on TNF-alpha-induced cytotoxicity in SK-Hep-1 cells.</a> Toxicology In Vitro: An International Journal Published in Association with BIBRA. 26 (6), 783-790 (2012).</li><li>Stellavato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assessment+of+nutraceutical+compounds+and+novel+nutraceutical+formulations+in+a+liver-steatosis-based+model.">In vitro assessment of nutraceutical compounds and novel nutraceutical formulations in a liver-steatosis-based model.</a> Lipids in Health and Disease. 17 (1), 24 (2018).</li><li>Pachikian, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implication+of+trans-11,+trans-13+conjugated+linoleic+acid+in+the+development+of+hepatic+steatosis.">Implication of trans-11, trans-13 conjugated linoleic acid in the development of hepatic steatosis.</a> PLoS One. 13 (2), 0192447 (2018).</li><li>Ferreira, T., Rasband, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyze.">Analyze.</a> ImageJ User Guide. , 132-135 (2012).</li><li>Geng, Y., Wu, Z., Buist-Homan, M., Blokzijl, H., Moshage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hesperetin+protects+against+palmitate-induced+cellular+toxicity+via+induction+of+GRP78+in+hepatocytes.">Hesperetin protects against palmitate-induced cellular toxicity via induction of GRP78 in hepatocytes.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. , 404 (2020).</li><li>Geng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+metformin+against+palmitate-induced+hepatic+cell+death.">Protective effect of metformin against palmitate-induced hepatic cell death.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. 1866 (3), 165621 (2020).</li><li>Sarnyai, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cis-+and+trans-monounsaturated+fatty+acids+on+palmitate+toxicity+and+on+palmitate-induced+accumulation+of+ceramides+and+diglycerides.">Effect of cis- and trans-monounsaturated fatty acids on palmitate toxicity and on palmitate-induced accumulation of ceramides and diglycerides.</a> International Journal of Molecular Science. 21 (7), 2626 (2020).</li><li>Chen, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrahydrocurcumin+ameliorates+free+fatty+acid-induced+hepatic+steatosis+and+improves+insulin+resistance+in+HepG2+cells.">Tetrahydrocurcumin ameliorates free fatty acid-induced hepatic steatosis and improves insulin resistance in HepG2 cells.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (3), 1075-1085 (2018).</li><li>Burhans, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+oleate+regulates+adipose+tissue+lipogenesis+and+fatty+acid+oxidation.">Hepatic oleate regulates adipose tissue lipogenesis and fatty acid oxidation.</a> Journal of Lipid Research. 56 (2), 304-318 (2015).</li><li>Abenavoli, L., Milanovic, M., Milic, N., Luzza, F., Giuffre, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olive+oil+antioxidants+and+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Olive oil antioxidants and non-alcoholic fatty liver disease.</a> Expert Reviews in Gastroenterology and Hepatology. 13 (8), 739-749 (2019).</li><li>Nagarajan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+and+glucose+metabolism+in+hepatocyte+cell+lines+and+primary+mouse+hepatocytes:+A+comprehensive+resource+for+in+vitro+studies+of+hepatic+metabolism.">Lipid and glucose metabolism in hepatocyte cell lines and primary mouse hepatocytes: A comprehensive resource for in vitro studies of hepatic metabolism.</a> American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. 316 (4), 578-589 (2019).</li><li>Hodson, L., Skeaff, C. M., Fielding, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+composition+of+adipose+tissue+and+blood+in+humans+and+its+use+as+a+biomarker+of+dietary+intake.">Fatty acid composition of adipose tissue and blood in humans and its use as a biomarker of dietary intake.</a> Progress in Lipid Research. 47 (5), 348-380 (2008).</li></ol>

Detta protokoll är avsett att ge en strategi för att studera steatos in vitro. Cellkultur är ett kraftfullt verktyg för att studera cellulära, molekylära, biokemiska och toxikologiska aspekter av de celler som utsätts för olika tillstånd. Med detta tillvägagångssätt kan steatos visualiseras inte bara som ett stadium av den komplexa sjukdomen som är MAFLD, men också som hepatocyt överexponering för lipider och de möjliga resultaten som härrör från sådan exponering. Därför är dess tillämpn...

Fettlever i samband med metabolisk dysfunktion är mycket utbredd överhela världen 1,2; det uppskattas att upp till 25% av befolkningen påverkas3. Denna sjukdom som tidigare var känd som alkoholfri fettleversjukdom (NAFLD), har uppdaterat sin nomenklatur till metabolisk dysfunktion associerad fettleversjukdom (MAFLD) för att noggrant återspegla patogenesen i samband med fetma, insulinresistens, diabetes typ 2 och dyslipidemi, liksom de möjliga hanteringarna av sjukdomen3,4.
Oavsett namn innehåller sjukdomen ett brett spektrum av histopatologiska förändringar som kännetecknas av onormalt hög ackumulering av lipider i levern (>5% fett i hepatocyterna5) och kan utvecklas genom lipidackumuleringen som vanligtvis finns i enkel steatohepatit, vilket i sin tur kan leda till utveckling av fibros, cirros, hepatocellulärt carcinom och leversvikt5,6,7,8. På grund av dess ökande prevalens förväntas MAFLD bli den första indikationen på levertransplantation och den främsta orsaken till hepatocellulär carcinom9.
Även om det har betraktats som en godartad eller mild form av fettlever sjukdom, lever steatosis är i själva verket den metaboliska nyckeln i MAFLD10. Olika metaboliska vägar påverkas av lipid ackumulering i levern, inklusive men inte begränsat till lipidsyntes, export och metabolism10. Insulinresistens, oxidativ stress, retikulär stress och cellulär dysfunktion är starkt förknippade med lever lipotoxicity11,12. Å andra sidan är feta hepatocyter målet för reaktiva syrearter, vilket gör metaboliter som lipidperoxider, proteinkarbonyler och addukter av nukleinsyror13. På cellnivå kan feta hepatocyter genomgå mitokondriell skada14, cellulär senescens15, apoptos16, pyroptos12, och autofagi17, bland andra händelser.
Hepatocyter är mycket ansvariga för metabolism, avgiftning och syntes av ett brett spektrum av molekyler. Många av dessa funktioner kan äventyras av lipid ackumulering observeras i steatosis. Därför är det av stor betydelse att ha reproducerbara verktyg som möjliggör en korrekt utvärdering av steatos. I den meningen är in vitro-modeller lätt tillämpliga och mycket reproducerbara. Steatos in vitro har använts med olika mål16,18,19. HepG2-cellerna används ofta som hepatocytcelllinje. Det har fördelar som att vara lätt att odla och väl karakteriserad. Kanske är den enda nackdelen med HepG2-celler det faktum att det är en cancerframkallande cellinje, så detta måste beaktas när man analyserar resultaten. Här visas applicering av en blandning av fettsyror som ofta används i cellkulturen: palmitinsyra (PA) och oljesyra (OA). Både PA och OA erbjuder olika resultat i kultur20. PA (C 16:0) är den vanligaste mättade fettsyran som erhålls från kosten16. PA anses vara en biomarkör av de-novo lipogenes ,ett avgörande steg i utvecklingen av NAFLD21. PA har visat sig vara mycketgiftigt 22. Därför kanske det inte rekommenderas att inducera steatos in vitro. OA (C 18:1) är en enkelomättad fettsyra. I motsats till PA har OA föreslagits att ha antiinflammatoriska och antioxidantegenskaper, kunna motverka PA12. Både PA och OA är de viktigaste fettsyrorna som finns i triglycerider, oavsett hälsotillstånd eller sjukdom16. Tabell 1 ger exempel på hepatocytkulturen med PA, OA och deras blandning, liksom de rapporteraderesultaten 12,23,24,25,26,27. Andra fettsyror har också använts i hepatocytkultur, inklusive stearinsyra (C 18:0)28,29,30, linolsyra (C 18:1)28,30,31 och dess konjugat (CLA)28,32, palmitoleinsyra (C 16:1)29. Deras användning rapporteras dock minst ofta i litteraturen, kanske för att deras leveröverskott är lägre än PA och OA16.
Tillsammans liknar båda fettsyrorna steatos in vitro, vilket ger prolifererande celler, med ökad celldöd och lägre livskraft jämfört med kontrollförhållanden. Det är värt att nämna att respektive salter av dessa fettsyror finns tillgängliga och kan användas också. Ett av de största problemen vid bedömning av lipidöverbelastning i hepatocytcellkulturen ges i differentiering mellan toxikologiska modeller och en modell som bäst representerar steatos. Många modeller kan redovisas i det första fallet. Faktum är att användningen av PA ensam kan övervägas bland dem, och den höga dödligheten är det mest uppenbararesultatet 12,16,23,24,25,26,27. Användningen av höga doser även när det gäller OA kan också betraktas som en toxikologisk modell. Protokollet som visas här är i högre överensstämmelse med steatosutveckling eftersom det visar låg dödlighet jämfört med det som observerats i andra modeller och gör det möjligt att följa det under flera dagar med progressiv lipidackumulering som det förekommer i NAFLD. Möjligheten att bedöma mild och svår steatos genom experimentella tillstånd anses vara en annan fördel.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Fettsyror</td>
			<td colspan="2">Villkor</td>
			<td colspan="2">Resultat</td>
			<td>Hänvisning</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 200 μM</td>
			<td colspan="2">Lipidackumulering</td>
			<td rowspan="3">Yan et al, 201925.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidsexponering: 24 timmar</td>
			<td colspan="2">Skador på hepatocyter</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2"></td>
			<td colspan="2">Transaminas höjd</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 50, 100 och 200 μM</td>
			<td colspan="2" rowspan="2">Lipidackumulering</td>
			<td rowspan="2">Xing et al, 201924.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidsexponering: 24 timmar</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 250 μM, 500 μM, 750 μM och 1 000 μM</td>
			<td colspan="2">Lipidackumulering</td>
			<td rowspan="2">Wang et al, 202026.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidsexponering: 24 timmar</td>
			<td colspan="2">Progressiv minskning av cellens livskraft</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Blandning av OA/PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 1 mM</td>
			<td colspan="2">Lipidackumulering</td>
			<td rowspan="3">Xiao et al, 202027.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidsexponering: 24 timmar</td>
			<td colspan="2">Rapporterar inte lipotoxicity</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2OA:1PA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Blandning av OA/PA</td>
			<td colspan="2">Första stimuleringen med 200 μM och 400 μM PA och sedan andra stimuleringen med 200 μM OA</td>
			<td colspan="2">Lipid ackumulering.</td>
			<td rowspan="4">Zeng et al, 202012.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Koncentration:400 μM PA: 200 μM OA</td>
			<td colspan="2">Bevis på lipotoxicity framkallas av PA minskades genom stimulering av OA.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidsexponering: 24 timmar</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Blandning av OA/PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 400 μM PA: 200 μM OA</td>
			<td colspan="2" rowspan="3">Lipidackumulering</td>
			<td rowspan="3">Chen et al, 201823.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2PA:1OA</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidsexponering: 24 timmar</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Blandning av OA/PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration :50 och 500 μM</td>
			<td colspan="2">Generering av två typer av steatos: mild steatos och svår steatos.</td>
			<td rowspan="3">Campos och Guzmán 2021</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2">Simulerar kronisk utställning av lipidöverbelastning</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidsexponering: 24 timmar, 2 dagar, 3 dagar och 4 dagar.</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabell 1. Hepatocyt kultur i steatogenic villkor. Tabellen presenterar vilken typ av fettsyra som används, de villkor som upprätthålls och de observerade resultaten i hepatocytkulturen. Palmitsyra. OA: Oljesyra.
Slutligen är denna modell tillämplig inte bara på studier av steatos och fettlever, men också på levermetaboliska, syntetiska och avgiftningsvägar i samband med steatos. In vitro-inducerad steatos kan också ge bevis för identifiering av potentiella markörer för sjukdomen samt terapeutiska mål.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>ESCO Airstream</td>
			<td>AC2-452+C2:C26</td>
			<td>Class II&#160;Type A2&#160;Biological Safety Cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle top filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>430513</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, polystyrene, sterile. 1 filter/Bag. 0.22 &#956;m, 500 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albimun (BSA)</td>
			<td>Gold Biotechnology, US</td>
			<td>A-421-10</td>
			<td>BSA Fatty Acid Free for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture media RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>31800-022</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>A4766801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Marienfeld, DE</td>
			<td>640010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2 cell line</td>
			<td>ATCC, US</td>
			<td>HB-8065</td>
			<td>Hepatocellular carcinoma human cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidified incubator</td>
			<td>Thermo Electronic Corporation,US</td>
			<td>Model: 3110</td>
			<td>Temperature (37 &#176;C &#177; 1 &#176;C), humidity (90% &#177; 5%) , CO2 (5% &#177; 1%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope Eclipse</td>
			<td>NIKON, JPN</td>
			<td>Model: TE2000-S</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>I9030-4L</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O Kit</td>
			<td>Abcam, US</td>
			<td>ab150678</td>
			<td>Kit for histological visualization of neutral fat.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Antibiotics 10,000 U/mL Penicillin, 10,000 &#956;g/mL Streptomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Beckman, US</td>
			<td>Model: 360 PH/Temp/MV Meter</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>86.1253.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>&#160;86.1254.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>S5761-1KG</td>
			<td>Preparation of culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium oleate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215879A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium palmitate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215881</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syring filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>431219</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 28 mm, 0.2 &#956;m.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>T6146-25G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.05% /EDTA 0.53 mM</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>25-052-Cl</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3524</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3599</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium

Metabolisk dysfunktion-associerade fettleversjukdom (MAFLD), tidigare känd som alkoholfri fettleversjukdom (NAFLD), är den vanligaste leversjukdomen i världen på grund av dess förhållande till fetma, diabetes typ 2 och dyslipidemi. Leversteatos, ackumulering av lipiddroppar i leverparenkym, är ett viktigt inslag i sjukdomen före inflammationen som observerats vid steatohepatit, fibros och leversjukdom i slutstadiet. Lipid ackumulering i hepatocyter kan störa korrekt metabolism av xenobiotika och endogena molekyler, samt att inducera cellulära processer som leder till sjukdomsförloppet. Även om den experimentella studien av steatos kan utföras in vivo, är in vitro-metoder för studier av steatos kompletterande verktyg med olika fördelar. Hepatocyt kultur i lipid överbelastning-konditionerade medium är ett utmärkt reproducerbart alternativ för studier av lever steatosis tillåter identifiering av cellulära processer relaterade till lipid ackumulering, såsom oxidativa och reticular påfrestningar, autofagi, spridning, celldöd, etcetera, liksom andra tester inklusive läkemedelseffektivitet, och toxikologiska tester, bland många andra möjliga tillämpningar. Här syftade det till att beskriva metoden för hepatocyt cell kultur i lipid överbelastning-konditionerade medium. HepG2 celler odlades i RMPI 1640 medium konditionerade med natriumpalmitat och natriumoleat. Viktigt är förhållandet mellan dessa två lipider avgörande för att gynna lipiddroppe ackumulering, samtidigt upprätthålla cellproliferation och en måttlig dödlighet, som förekommer i levern under sjukdomen. Metoden, från beredningen av lipidlösningsbestånden, blandningen, tillsatsen till mediet och hepatocytkulturen visas. Med detta tillvägagångssätt är det möjligt att identifiera lipiddroppar i hepatocyterna som lätt kan observeras av oljeröd O-färgning, liksom kurvor av spridning / dödlighet.

Hepatocyter odlade i det steatogena mediet visar tillväxt över hela brunnens yta; Feta hepatocyter visar dock lägre tillväxthastighet jämfört med celler odlade i kontrollmedium. Det föreslagna förhållandet och koncentrationen av OA och PA, garanterar cellens överlevnad under kulturen. Sådd av 1 x 105 celler per brunn i 24-brunnsplattor ger optimal sammanflöde enligt figur 1.
Livskraften i odlade celler var lägre i de steatogena grupperna Mi...

Watch this Scientific Journal Video about A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium at JoVE.com

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

Detta protokoll är avsett att vara ett verktyg för att studera steatos och de molekylära, biokemiska, cellulära förändringar som produceras av överexponering av hepatocyter för lipider in vitro.

En modell av experimentell steatos in vitro:Hepatocyt cellkultur i lipid överbelastning-konditionerat medium

Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MAFLD), previously known as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), is the most prevalent liver ...

Detta protokoll är tillämpligt på studier av leversteatos samt för lever- och lever-, metaboliska, syntetiska och toxifieringsvägarna i samband med steatos. De främsta fördelarna med denna metod är dess reproducerbarhet och den korta tid som behövs för att uppnå resultat. Lägg till det faktum att det erbjuder två nivåer av steatos, mild och svår.In vitro inducerad steatos kan ge bevis för identifiering av potentiella markörer för diagnos av sjukdomen, liksom terapeutiska mål. Denna metod är avsedd att tillämpas i steatosresultatet. Det kan dock justeras till ett brett spektrum av olika celler som påverkas av lipid överexponeringar, som under fetma och lipidemi.Förbered standard RPMI 1640. Komplettera RPMI 1640 odlingsmedium med 10% av värmeaktiverad FBS och 1% penicillin streptomycin lösning. Sterilisera det genom att använda 0,22 mikrometerfilter och lagra tillägget vid fyra grader Celsius.För att förbereda en palmitatbuljonglösning bereda en 50 millimolär lösning av palmitat i standard RPMI 1640 kompletterad med 1% lipidfri BSA. Sterilisera cirka fem till tio milliliter av lagerlösningen med hjälp av 0,22 mikrometerfilter och förvara vid fyra grader Celsius skyddat från ljus i upp till en månad. För att förbereda oleate stock lösning förbereda en 50 millimolar lösning av oleat i den kompletterade RPMI 1640.Och sterilisera stamlösningen med hjälp av 0,22 mikrometerfilter. Förvara den på minus 20 grader Celsius, skyddad från ljus i upp till en månad. För att förbereda steatogent medium från de tidigare beredda lagren, förbered 100 millimeter av en 50 mikromolarblandning av en del palmitat och tvådelad oleat.För milda nivåer, häll en 500 mikromolär blandning av en del palmitat och tvådelad oleat för svåra nivåer i standard RPMI 1640. Och sterilisera med 0,22 mikrometerfilter. Förvara på fyra grader Celsius i upp till en vecka.Alternativt, för att förbereda stamlösningar med respektive fettsyror med hjälp av fri lipidalbumin, lös upp antingen palmitat eller oleat i två milliliter absolut etanol och blanda sedan i den slutliga volymen av standard RPMI 1640. Lös upp oleate direkt genom att lagra i standard RPMI 1640 odlingsmedium. Tillåt avdunstning av etanol genom att inkubera i ett vattenbad vid 70 grader Celsius och blanda noggrant.Sterilisera båda lagerlösningarna med 0,22 mikrometerfilter och förvara palmitatlagerlösningen vid fyra grader Celsius. Och oleate stock lösning på minus 20 grader Celsius. Plats 0,1 miljoner Hep G2-celler per brunn i en 24-brunnsplatta.Tillsätt en milliliter standard RPMI 1640. Förinkubera vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid i 24 timmar, vilket möjliggör celltillsats. Kassera standardmediet RPMI 1640 efter förkultur.Och tillsätt det steatogena mediet. Kassera supernaten och tillsätt ett friskt steatogent medium var 24: e timme. För att utföra livskraft och morfologi bedömning, kassera supernatanten och ta bort celler från brunnen genom att lägga till 500 mikroliter på 0,05% trypsin EDTA.Inkubera i fem minuter vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid. Samla de återanvända cellerna i ett mikrorör. Och centrifugera vid 300 gånger G.Kassera sedan supernatanten, tillsätt en 200 mikroliter standard RPMI 1640 och återanvänd cellerna.Tillsätt 15 mikroliter med 0,4 % trypanblå lösning i ett nytt mikrorör. Tillsätt och blanda 15 mikroliter av den tidigare cellupphängningen. Räkna de färgade och icke-färgade cellerna i en hemocytometer och beräkna livskraften och dödligheten.Sätt en cellkulturomslagsglidning i varje brunn i en 24-brunnsplatta och frö Hep G2-celler som beskrivs i textmanuskriptet. Efter lämplig inkubation, tvätta cellerna med en milliliter PBS och kassera supernatanten. Blanda dem med en milliliter 4%paraformaldehyd i PBS och inkubera i en timme vid rumstemperatur.Kassera överskottet av paraformaldehyd och skölj cellerna med en milliliter destillerat vatten. Tillsätt sedan en milliliter 70% isopropanol och inkubera i fem minuter. Kassera överskottet av isopropanol och tillsätt en milliliter oljeröd O-lösning och inkubera i 30 minuter.Kassera den överflödiga oljeröda O-lösningen och skölj sedan med en milliliter destillerat vatten. Observera cellerna under mikroskopet vid en förstoring av 400x. Slumpmässigt välja och ta fotografier av 10 optiska fält från hela brunnen.Upprepa avbildningen för varje brunn. För att bedöma procentandelen rödbetsat område, öppna ImageJ-programvara och importera nödvändiga filer, klicka sedan på justera och använda färgtröskeln"-verktyget, definiera hue-parametern för röd färgdetektering. Justera sedan mättnaden och ljusstyrkan för bilden.Jämför det färgade området med hela området i det optiska fältet, med hjälp av analyspartiklarna"-verktyget och beräkna den genomsnittliga procentandelen av varje brunn. Sittplatser på 0,1 miljoner hepatocyter per brunn i 24-brunnsplattor ger optimal sammanflöde. Livskraften minskade gradvis när tiden för kulturen ökade och nådde den lägsta av 60%vid fyra dagar i svår steatos.Följaktligen var dödligheten högre i hepatocyter odlade under de steatogenic förhållandena. Och det ökade gradvis med tiden för exponering för lipider. Cellantalet ökade successivt till följd av spridning.Spridningshastigheten var dock lägre vid mild steatos vid tre och fyra dagar. Däremot var allvarliga steatosis associeras med lägre spridning med 24 timmar. Färgning celler med olja-röd O visat minst en dubbel ökning av lipid droppar i celler odlas under steatogenic villkor.Intracellulärt fett ökade beroende på tidpunkten för exponering av kultur i det steatogenic mediet. Vid mild steatos ökade lipidinnehållet från dag två, medan de vid svår steatos var signifikant höga från 24 timmar. Cellkultur kräver tidigare erfarenhet.Odling av Hep G2-celler i standardtillstånd innan du använder det här protokollet kan vara till hjälp. Beredning av fettsyrabeståndet är också en avgörande punkt. Palmitinsyra är fast vid rumstemperatur, och den måste värmas innan den används.Denna metod bör möjliggöra molekylär analys av olika vägar, inklusive, men inte begränsat till spridning, apoptos, autofagi, oxidativ stress och farmakologisk och toxikologisk analys.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Multi-photon avbildning av tumörcellen invasion i ett Orthotopic musmodell av oral skivepitelcancer

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stamcellstransplantation i en In vitro Simulerad ischemi / Reperfusion Modell

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Bedömning Teratogena Förändringar i ett Zebrafish modell av Fetal Alcohol Exponering

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro mesothelial Avslutande analys att modeller de tidiga stegen av äggstockscancer Metastasis

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxisk Stimulering av Brain Microslices som en<em&gt; In vitro</em&gt; Modell av stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Neural stamcellstransplantation i experimentell Contusive Modell av ryggmärgsskada

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimerad Analys av<em&gt; In Vivo</em&gt; och<em&gt; In Vitro</em&gt; Leversteatos

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Med In Vitro Live-cell Imaging att utforska kemoterapeutika levereras av Lipid-baserade nanopartiklar

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

En Cell kultur modell av motstånd artärer

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissektion och Explant kultur av murina Allantois för In vitro- analys av allantoiska fastsättning

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...