Name: immunophenotyping and cell sorting of human mks from human primary sources or differentiated in vitro from hematopoietic progenitors
Uploaded: 2021-08-07T15:00:00
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マルコス・ペレス・バステルレチェア、ロレナ・ロドリゲス・ロレンツォ、ベゴーニャ・ガルシア・メンデス(HUCA)、パロマ・セレッソ、アルムデナ・パエロ、マリア・デ・ラ・ポベダ=コロモ(HCSC)に技術サポートを感謝します。この研究は、A.B.、RYCフェローシップ(RYC-2013-12587)への医療助成金(ロシュSP200221001)によって部分的にサポートされました。デ・エコノミア・イ・コンペティティビダード、スペイン)とI +D 2017助成金(SAF2017-85489-P;シエンシア大臣、イノバシオン・イ・ウニバーシダーデス、スペイン、フォンドス・フェデエル)からセベロ・オチョア・グラント(PA-20-PF-BP19-014)までコンセヘリア・デ・シエンシア,イノバシオン・イ・ウニヴェルシダーデス・デル・プリンシパド・デ・アストゥリアス州)からP.M.-Bへ。そして、A.A.-Hへの壁内ポスドク助成金2018(フンダシオン・パラ・ラ・インベスティガシオン・イ・ラ・イノバシオン・ビバイサニタリア・デ・アストゥリアス - FINBA、オビエド、スペイン)。私たちは、彼の知識(と時間)、特にマルチカラータグ付き抗体パネルミックスと単色ビーズ制御製剤に関する彼の賢明なアドバイスを共有してくれたライニエ・ファン・デル・リンデンに感謝します。

全血および骨髄サンプルは、1964年のヘルシンキ宣言に従って取得され、処理された。全血サンプルは、私たちの機関医療倫理委員会(病院Universituniversitario Central deアストゥリアス-HUCA-)によって承認された研究の中で、インフォームド・コンセント(ISPA)を与えた後、健康なドナーから得られました。骨髄サンプルは、病院クリニコ・サン・カルロス(HCSC)の血液学部で管理された患者の骨髄吸入?...

<ol>
	<li>Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+Mechanisms+That+Control+Platelet+Production.">Unraveling Mechanisms That Control Platelet Production.</a> Semin Thrombosis And Haemostasis. 39 (1), 15-24 (2013).</li><li>Machlus, K. R., Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Incredible+Journey:+From+Megakaryocyte+Development+To+Platelet+Formation.">The Incredible Journey: From Megakaryocyte Development To Platelet Formation.</a> Journal Of Cell Biology. 201 (6), 785-796 (2013).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis+Of+The+Demarcation+Membrane+System+(DMS)+In+Megakaryocytes.">Biogenesis Of The Demarcation Membrane System (DMS) In Megakaryocytes.</a> Blood. 123 (6), 921-930 (2014).</li><li>Couldwell, G., Machlus, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+Of+Megakaryopoiesis+And+Platelet+Production+During+Inflammation.">Modulation Of Megakaryopoiesis And Platelet Production During Inflammation.</a> Thrombosis Research. 179, 114-120 (2019).</li><li>Kosaki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Platelet+Production+From+Mature+Megakaryocytes:+Does+Platelet+Release+Occur+Via+Proplatelets.">In Vivo Platelet Production From Mature Megakaryocytes: Does Platelet Release Occur Via Proplatelets.</a> International Journal Of Hematology. 81 (3), 208-219 (2005).</li><li>Lefrancais, E., Looney, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+Biogenesis+In+The+Lung+Circulation.">Platelet Biogenesis In The Lung Circulation.</a> Physiology (Bethesda). 34 (6), 392-401 (2019).</li><li>Nieswandt, B., Stritt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocyte+Rupture+For+Acute+Platelet+Needs.">Megakaryocyte Rupture For Acute Platelet Needs.</a> Journal Of Cell Biology. 209 (3), 327-328 (2015).</li><li>Nishimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1alpha+Induces+Thrombopoiesis+Through+Megakaryocyte+Rupture+In+Response+To+Acute+Platelet+Needs.">IL-1alpha Induces Thrombopoiesis Through Megakaryocyte Rupture In Response To Acute Platelet Needs.</a> Journal Of Cell Biology. 209 (3), 453-466 (2015).</li><li>Sanjuan-Pla, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-Biased+Stem+Cells+Reside+At+The+Apex+Of+The+Haematopoietic+Stem-Cell+Hierarchy.">Platelet-Biased Stem Cells Reside At The Apex Of The Haematopoietic Stem-Cell Hierarchy.</a> Nature. 502 (7470), 232-236 (2013).</li><li>Notta, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+Routes+Of+Lineage+Development+Reshape+The+Human+Blood+Hierarchy+Across+Ontogeny.">Distinct Routes Of Lineage Development Reshape The Human Blood Hierarchy Across Ontogeny.</a> Science. 351 (6269), 2116 (2016).</li><li>Yamamoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+Analysis+Unveils+Self-Renewing+Lineage-Restricted+Progenitors+Generated+Directly+From+Hematopoietic+Stem+Cells.">Clonal Analysis Unveils Self-Renewing Lineage-Restricted Progenitors Generated Directly From Hematopoietic Stem Cells.</a> Cell. 154 (5), 1112-1126 (2013).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decoding+Human+Megakaryocyte+Development.">Decoding Human Megakaryocyte Development.</a> Cell Stem Cell. , (2020).</li><li>Meinders, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repercussion+Of+Megakaryocyte-Specific+Gata1+Loss+On+Megakaryopoiesis+And+The+Hematopoietic+Precursor+Compartment.">Repercussion Of Megakaryocyte-Specific Gata1 Loss On Megakaryopoiesis And The Hematopoietic Precursor Compartment.</a> Plos One. 11 (5), 0154342 (2016).</li><li>Meinders, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sp1/Sp3+Transcription+Factors+Regulate+Hallmarks+Of+Megakaryocyte+Maturation+And+Platelet+Formation+And+Function.">Sp1/Sp3 Transcription Factors Regulate Hallmarks Of Megakaryocyte Maturation And Platelet Formation And Function.</a> Blood. 125 (12), 1957-1967 (2015).</li><li>Salunkhe, V. P., Guti&#233;rrez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+Of+Megakaryocytes+From+Human+Peripheral+Blood+Mononuclear+Cells.">Culture Of Megakaryocytes From Human Peripheral Blood Mononuclear Cells.</a> Bio-Protocol. 5 (21), 1639 (2015).</li><li>Choudry, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+Characterization+Of+Human+Megakaryocyte+Polyploidization+And+Lineage+Commitment.">Transcriptional Characterization Of Human Megakaryocyte Polyploidization And Lineage Commitment.</a> Journal Of Thrombosis And Haemostasis. , 15271 (2021).</li><li>Heazlewood, S. Y., Williams, B., Storan, M. J., Nilsson, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prospective+Isolation+Of+Viable,+High+Ploidy+Megakaryocytes+From+Adult+Murine+Bone+Marrow+By+Fluorescence+Activated+Cell+Sorting.">The Prospective Isolation Of Viable, High Ploidy Megakaryocytes From Adult Murine Bone Marrow By Fluorescence Activated Cell Sorting.</a> Methods In Molecular Biology. 1035, 121-133 (2013).</li><li>Tomer, A., Harker, L. A., Burstein, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+Of+Human+Megakaryocytes+By+Fluorescence-Activated+Cell+Sorting.">Purification Of Human Megakaryocytes By Fluorescence-Activated Cell Sorting.</a> Blood. 70 (6), 1735-1742 (1987).</li><li>Martinez-Botia, P., Acebes-Huerta, A., Seghatchian, J., Gutierrez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+The+Quest+For+In+Vitro+Platelet+Production+By+Re-Tailoring+The+Concepts+Of+Megakaryocyte+Differentiation.">On The Quest For In Vitro Platelet Production By Re-Tailoring The Concepts Of Megakaryocyte Differentiation.</a> Medicina. 56 (12), (2020).</li><li>Martinez-Botia, P., Acebes-Huerta, A., Seghatchian, J., Gutierrez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Platelet+Production+For+Transfusion+Purposes:+Where+Are+We+Now.">In Vitro Platelet Production For Transfusion Purposes: Where Are We Now.</a> Transfusion And Apheresis Science. 59 (4), 102864 (2020).</li><li>Butov, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Megakaryocyte+Culture+From+Human+Bone+Marrow+Aspirates+As+A+Research+And+Diagnostic+Tool.">In Vitro Megakaryocyte Culture From Human Bone Marrow Aspirates As A Research And Diagnostic Tool.</a> Platelets. , 1-8 (2020).</li><li>Di Buduo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Gold+Standard+Protocol+For+Human+Megakaryocyte+Culture+Based+On+The+Analysis+Of+1,500+Umbilical+Cord+Blood+Samples.">A Gold Standard Protocol For Human Megakaryocyte Culture Based On The Analysis Of 1,500 Umbilical Cord Blood Samples.</a> Thrombosis And Haemostasis. , (2020).</li></ol>

フローサイトメトリーによる巨核生物の研究に焦点を当てた研究のほとんどは、系統特異的な表面マーカー(すなわち、CD42A/CD42B、CD41/CD61)のみを使用したMKサブセットの同定に限定され、以前のMK分化段階は十分に検討されていません。本稿ではヒト巨核代の包括的なフローサイトメトリー特性解析に取り組む免疫フェノタイピング戦略を示す。全体として、MK特異的および非特異的な表...

巨核球(MC)は、主にホルモントロンボポエチン(TPO)によって調整される巨核球症と呼ばれる複雑なプロセスに続いて、造血幹細胞(HSC)から発症する。巨核代の古典的な見解は、HSCからの細胞の旅を、コミットされた前駆細胞および前駆細胞の階層的な段階の連続を通して記述し、最終的には成熟したMKにつながる。成熟の間、MKはエンドミドーシスの複数のラウンドを経験し、血小板産生のための十分な膜表面を提供する複雑な細胞内境界膜系(DMS)を開発し、成熟した血小板1、2、3によって受け継がれる異なる顆粒に含まれる多数の因子を効率的に生成し、パックする。その結果、成熟したMKは、高倍数核(>64Nにも達する)を特徴とする大細胞(40〜60μm)です。最近の研究では、HSCが特定の生理病理学的状態4、5、6、7、8、9、10、11に応答して従来の系統コミットメントチェックポイントをバイパスしてMKに分化する代替ルートを示唆している。これらの知見は、成熟したMKに対する造血性分化が生物学的ニーズに対応する連続的かつ適応的なプロセスであることを強調している。
細胞生物学に関する知識の増加と巨核代種症12の分子的側面に関する知識が高まる中、フローサイトメトリーによるプロセスの研究に特化した研究のほとんどは、系統特異的な表面マーカー(CD42A/B、CD41/CD61)を用いた成熟したMCの同定に限定されているが、MK分化段階は未踏のままである。我々は以前に、ヒト15に適応し、適用してきたマウス骨髄および骨髄由来MK培養13、14において巨核代を上演する戦略を文書化した。本稿では、ヒトの主要なソース(骨髄-BM-および末梢血-PB-)またはMK特異的および非特異的表面マーカー(CD61、CD42B、CD49B、CD31、CD71)を組み込んだパネルを用いたインビトロ培養物において、HSCから成熟したMCまで、巨核化の特徴を可能にする免疫フェノタイピング戦略を示す。MKは、大きなサイズと脆弱性にもかかわらず、上記の細胞表面マーカーを使用して免疫整形され、細胞の破裂や損傷を最小限に抑えるために、圧力とノズル径の特定の条件下で蛍光活性化細胞選別によって濃縮することができます。この技術は、人間の健康と病気における巨核代と血小板産生の複雑さをよりよく理解することを目的として、マルチオミクスのアプローチを促進する。注目に値する、それは需要の増大の臨床文脈で診断と予後を助けるために有用なツールとして提起する。
この原稿では、MK特異的および非特異的な表面マーカーを主要なソースまたは生成されたインビトロから統合したパネルを用いて、ヒト巨核代を上演する戦略を文書化する。さらに、蛍光活性化細胞選別機、好ましい分数および成熟したMKを用いて、並べ替えプロトコルを提供します(図1)。この手順は、サイズが大きく、また、MK の脆弱性が大きいため、技術的に難しいため、一般的ではありません。しかし、それは以前マウスとヒト骨髄サンプルの両方で採用されており、技術の進歩により、毎回16、17、18より良い結果が得られます。MCまたはMK前駆体を研究できるヒトの主要な情報源には、骨髄、臍帯血および末梢血などが含まれる。各サンプルの分析のために関連する細胞分数を分離するための適切なサンプル処理が重要です。標準的な手順を組み込み、巨大核代の研究を目指す際に考慮すべきいくつかの考慮事項があります。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>130 micron Nozzle</td>
			<td>BD</td>
			<td>643943</td>
			<td>required for MK sorting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5810R Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>Cell isolation and washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-4-62 Swing Bucket Rotor</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>Cell isolation and washes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerospray Pro Hematology Slide Stainer / Cytocentrifuge</td>
			<td>ELITech Group</td>
			<td></td>
			<td>Automatized cytology devise, where slides are stained with Mat-Gr&#252;nwald Giemsa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 Incubator Galaxy 170 S</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td>Cell Incubation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin 4 Cytocentrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td>To prepare cytospins</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSAria IIu sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>Lasers 488-nm and 633-nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSCanto II flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>Lasers 488-nm , 633-nm and 405-nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus Microscope BX 41</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Microphotographs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus Microscope BX 61</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Microphotographs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoe Fluorescent Cell Imager</td>
			<td>BioRad</td>
			<td></td>
			<td>Microphotographs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>To obtain PBMCs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipids Cholesterol Rich from adult bovine serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L4646</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>#07801</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Erythropoietin (EPO)</td>
			<td>&#160;R&#38;D Systems</td>
			<td>287-TC-500</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human stem cell factor (SCF)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Gibco&#8482;</td>
			<td>PHC2115</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human thrombopoietin (TPO)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, Gibco&#8482;</td>
			<td>PHC9514</td>
			<td>or TPO receptor agonists</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemSpan SFEM</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>#09650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow Cytometry Analyses</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A7906-100G</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD CompBead Anti-Mouse Ig, &#954;/Negative Control Compensation Particles Set</td>
			<td>BD</td>
			<td>552843</td>
			<td>Antibodies for human cells are generally from mouse.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix/Cytoperm</td>
			<td>BD</td>
			<td>554714</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACS Accudrop Beads</td>
			<td>BD</td>
			<td>345249</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 AF-647</td>
			<td>BD</td>
			<td>561654</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 FITC</td>
			<td>Immunostep</td>
			<td>31F-100T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34 FITC</td>
			<td>BD</td>
			<td>555821</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD41 PE</td>
			<td>BD</td>
			<td>555467</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD41 PerCP-Cy5.5</td>
			<td>BD</td>
			<td>333148</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD42A APC</td>
			<td>Immunostep</td>
			<td>42AA-100T</td>
			<td>We observed unspecific binding... that needs to be assessed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD42A PE</td>
			<td>BD</td>
			<td>558819</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD42B PerCP</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>303910</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD49B PE</td>
			<td>BD</td>
			<td>555669</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD61 FITC</td>
			<td>BD</td>
			<td>555753</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD71 APC-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>334109</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human BD Fc Block</td>
			<td>BD</td>
			<td>564219</td>
			<td>Fc blocking - control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KIT PE-Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>313212</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lineage Cocktail 2 FITC</td>
			<td>BD</td>
			<td>643397</td>
			<td>Mouse anti-human</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAse</td>
			<td>Merck</td>
			<td>R6513</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-500</td>
			<td>Merck</td>
			<td>93443-500ML</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainers for sorting</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTrics Filters 100 micrometers</td>
			<td>Sysmex</td>
			<td>04-004-2328</td>
			<td>Cell strainers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Note: we do not specify general reagents/chemicals (PBS, EDTA, etc) or disposables (tubes, etc), or reagents specified in previous published and standard protocols&#160; - unless otherwise specified.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunophenotyping and cell sorting of human mks from human primary sources or differentiated in vitro from hematopoietic progenitors

巨核球(MK)分化は、非常に多倍(>64Nに達する)および非常に大きな細胞(40-60 μm)をもたらす多くのエンドミトティックサイクルを包含する。細胞生物学と分子レベルでの巨核代の急速な知識とは対照的に、フローサイトメトリーによる巨核生物の特徴付けは、系統特異的な表面マーカーを用いた成熟したMCの同定に限定される一方、以前のMK分化段階は未踏のままである。ここでは、MK特異的および非特異的な表面マーカーを含むパネルを用いたヒトの一次源または インビトロ 培養において、連続したMK分化段階の同定を可能にする免疫フェノタイピング戦略を提示する。その大きさと脆弱性にもかかわらず、MKは上記のパネルを使用して免疫フェノタイプすることができ、圧力およびノズル直径の特定の条件下で蛍光活性化細胞選別によって濃縮される。このアプローチは、ヒトにおける巨核代と血小板産生の複雑性をよりよく理解することを目的として、マルチオミックス研究を促進する。巨核代の特徴付けが良いと、系統関連の病理や悪性腫瘍の診断や予後に根本的なものとなる可能性があります。

骨髄と策略 図4では、患者からのBMサンプル(吸引)における巨核代の代表的な免疫型解析を示す。CD71とCD31に対して細胞分数をプロットする際には、CD31- CD71- (赤)、CD31 - CD71+ (青)、CD31 + CD71- (オレンジ)、CD31+ CD71+ CD71+ CD71 + (濃い緑色) および CD31++ CD71ミッドクリー?...

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Immunophenotyping and Cell Sorting of Human MKs from Human Primary Sources or Differentiated In Vitro from Hematopoietic Progenitors

ここでは、巨核球分化の特徴付けに関する免疫型付け戦略を紹介し、その戦略が蛍光活性化細胞選別機を用いて異なる段階で巨核球を選別する方法を示す。この方法論はヒトの一次組織に適用できるが、 インビトロの培養で生成された巨核球にも適用できる。

ヒトの一次源または造血前駆体からの分化 インビトロ からのヒトMKの免疫フェノタイピングと細胞選別

Megakaryocyte (MK) differentiation encompasses a number of endomitotic cycles that result in a highly polyploid (reaching even&#160;&#62;64N) and ...

ISPAアストゥリアス公国健康研究所の血小板研究所のアンドレア・アセビス・ウエルタ博士研究員です。これはオビエド、スペインに位置しています。こんにちは.こんにちは.私はローラ・グティです

Research

JoVE Journal

Biology

Immunophenotyping and Cell Sorting of Human MKs from Human Primary Sources or Differentiated In Vitro from Hematopoietic Progenitors

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

冷凍細胞から出発培養：ヒトES細胞

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

エレクトロポレーションのためのマウス骨髄からの一次造血細胞培養の準備

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

外植片から成長した初代ヒト気管支上皮細胞

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

レンチウイルスを介したノックダウン中生体外で</emヒト造血幹細胞の>赤血球

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

小分子の誘導と多能性ヒト胚性幹細胞からヒト心筋前駆体と心筋細胞の効率的な導出

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

マウス造血幹細胞およびリネージュコミット前駆細胞の表現型の解析と分離

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

初代ヒト線維芽細胞培養からナイーブ成人幹細胞の分離

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

マウスおよびヒト結腸組織からの一次筋線維芽細胞の分離

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

ヒト骨格筋からの血管由来の多能前駆体の単離

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

仙台ウイルスのヒト体細胞からの効率的な次世代ヒューマン誘導多能性幹細胞

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

ヒトの一次源または造血前駆体からの分化 インビトロ からのヒトMKの免疫フェノタイピングと細胞選別

ヒトの一次源または造血前駆体からの分化インビトロからのヒトMKの免疫フェノタイピングと細胞選別