Name: identification of antibacterial immunity proteins in escherichia coli using maldi-tof-tof-ms/ms and top-down proteomic analysis
Uploaded: 2021-05-23T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Antibacterial Immunity Proteins in Escherichia coli using MALDI-TOF-TOF-MS/MS and Top-Down Proteomic Analysis at JoVE.com

Программное обеспечение Protein Biomarker Seeker находится в свободном доступе (бесплатно), связавшись с Клифтоном К. Фагерквистом по clifton.fagerquist@usda.gov. Мы хотим отметить поддержку этого исследования грантом ARS, USDA, CRIS: 2030-42000-051-00-D.

1. Микробиологическая пробоподготовка
<ol><li>Инокулировать 25 мл бульона Лурии (LB) в коническую трубку 50 мл штаммом E. coli O113:H21 RM7788 (или другим бактериальным штаммом) из глицеринового бульона с использованием стерильной петли 1 мкл. Заколоть трубку и предварительно культивную культуру ?...

Вопросы протокола Основными сильными сторонами текущего протокола являются его скорость, простота подготовки образцов и использование инструмента, который относительно прост в эксплуатации, обучении и обслуживании. Хотя протеомный анализ снизу вверх и сверху вниз с помощ?...

Анализ и идентификация непереваренных белков методом масс-спектрометрии называется нисходящим протеомным анализом1,2,3,4. В настоящее время это устоявшийся метод, который использует электрораспрозревшение ионизацию (ESI)5 и анализаторы массы высокого разрешения6,а также сложные методы диссоциации, например, диссоциацию переноса электронов (ETD), диссоциацию захвата электронов (ECD)7,ультрафиолетовую фотодиссоциацию (UV-PD)8и т. Д.
Другим методом мягкой ионизации является матричная лазерная десорбция/ионизация (MALDI)9,10,11, которая менее широко используется для анализа сверху вниз, отчасти потому, что она в основном связана с анализаторами массы времени пролета (TOF), которые имеют ограниченное разрешение по сравнению с другими анализаторами массы. Несмотря на эти ограничения, инструменты MALDI-TOF и MALDI-TOF-TOF были использованы для быстрого нисходящего анализа чистых белков и фракционированных и нефракционированных смесей белков. Для идентификации чистых белков распад в источнике (ISD) является особенно полезным методом, поскольку он позволяет проводить масс-спектрометрический (MS) анализ ионов фрагментов ФРАГМЕНТОВ ISD, а также тандемную масс-спектрометрию (MS / MS) фрагментов ионов белков, обеспечивающих последовательно-специфический фрагмент часто из N- и C-терминов целевого белка, аналогично секвенированию Эдмана12,13 . Недостатком подхода ISD является то, что, как и в секвенировании Эдмана, образец должен содержать только один белок. Одна потребность в белке обусловлена необходимостью однозначного отнесения фрагментов ионов к иону-предшественнику. Если в образце присутствуют два или более белков, может быть трудно назначить, какие фрагменты ионов принадлежат к каким ионам-предшественникам.
Атрибуция фрагментов ионов/ионов-предшественников может быть решена с помощью MALDI-TOF-TOF-MS/MS. Как и в любом классическом эксперименте с МС/МС, ионы-предшественники массово выбираются/выделяются до фрагментации, и обнаруженные фрагментированные ионы могут быть отнесены к конкретному иону-предшественнику. Однако методы диссоциации, доступные для этого подхода, ограничены в первую очередь диссоциацией, вызванной столкновением высоких энергий (HE-CID)14 или распадом после источника (PSD)15,16. HE-CID и PSD наиболее эффективны при фрагментации пептидов и небольших белков, и охват последовательности в некоторых случаях может быть ограничен. Кроме того, PSD приводит к расщеплению полипептидной магистрали (PBC) в первую очередь на стороне C-концевой стороны остатков аспарагиновой и глутаминовой кислоты явлением, называемым эффектом аспарагиновой кислоты17,18,19,20.
MALDI-TOF-MS также нашла нишу в таксономической идентификации микроорганизмов: бактерий21,грибов22и вирусов23. Например, спектры MS используются для идентификации неизвестных бактерий путем сравнения с эталонной библиотекой MS-спектров известных бактерий с использованием алгоритмов распознавания образов для сравнения. Этот подход оказался весьма успешным из-за его скорости и простоты, хотя и требовал ночной культивирования изолята. Ионы белка, обнаруженные при этом подходе (обычно менее 20 кДа), содержат отпечаток РС, позволяющий таксономическое разрешение на уровне рода и вида, а в некоторых случаях и на подвиде24 и штаммеуровня 25,26. Однако остается необходимость не только таксономически классифицировать потенциально патогенные микроорганизмы, но и идентифицировать специфические факторы вирулентности, токсины и факторы устойчивости к противомикробным препаратам (УВМ). Для этого масса пептидов, белков или малых молекул измеряется РС и впоследствии выделяется и фрагментируется МС/МС.
Патогенные бактерии часто несут круговые куски ДНК, называемые плазмидами. Плазмиды, наряду с профагами, являются основным вектором горизонтального переноса генов между бактериями и отвечают за быстрое распространение устойчивости к противомикробным препаратам и других факторов вирулентности среди бактерий. Плазмиды могут также нести антибактериальные (AB) гены, например, колицин и бактериоцин. Когда эти гены экспрессируются и белки секретируются, они действуют, чтобы отключить механизм трансляции белка соседних бактерий, занимающих ту же экологическую нишу27. Однако эти бактерицидные ферменты также могут представлять риск для хозяина, который их произвел. В результате ген совместно экспрессируется хозяином, который специфически ингибирует функцию фермента AB и называется его белком иммунитета (Im).
Повреждающие ДНК антибиотики, такие как митомицин-С и ципрофлоксацин, часто используются для индуцирования ответа SOS у токсин-продуцирующей шига E. coli (STEC), чей ген токсина Шига(stx) обнаружен в геноме профага, присутствующем в бактериальном геноме28. Ранее мы использовали индукцию антибиотиков, MALDI-TOF-TOF-MS / MS и нисходящий протеомный анализ для обнаружения и идентификации типов и подтипов Stx, продуцируемых штаммами STEC29,30,31,32. В предыдущей работе штамм STEC O113:H21 RM7788 культивировали в течение ночи на агаровых средах, дополненных митомицином-С. Однако вместо того, чтобы обнаружить ожидаемую B-субъединицу Stx2a при m/z ~7816, другой ион белка был обнаружен при m/z ~7839 и идентифицирован как плазмидно-кодируемый гипотетический белок неизвестной функции33. В текущей работе мы идентифицировали два плазмидно-кодированных белка AB-Im, продуцируемых этим штаммом, используя индукцию антибиотиков, MALDI-TOF-TOF-MS / MS и нисходящий протеомный анализ с использованием автономного программного обеспечения, разработанного для обработки и сканирования последовательностей белков в силико, полученных из секвенирования всего генома (WGS). Кроме того, в программное обеспечение была включена возможность модификаций постперевода (PTM), включающих усечение последовательностей. Белки иммунитета были идентифицированы с помощью этого программного обеспечения из измеренной массы зрелого иона белка и последовательно-специфических фрагментов ионов из ПБК, вызванных эффектом аспарагиновой кислоты и обнаруженных MS / MS-PSD. Наконец, промотор был идентифицирован выше генов AB / Im в геноме плазмиды, что может объяснить экспрессию этих генов, когда этот штамм подвергается воздействию повреждающего ДНК антибиотика. Части этой работы были представлены на виртуальной встрече и выставке Национального американского химического общества осень 2020 года (17-20 августа 2020 года)34.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4000 Series Explorer software</td>
			<td>AB Sciex</td>
			<td>Version 3.5.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4800 Plus MALDI TOF/TOF Analyzer</td>
			<td>AB Sciex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile Optima LC/MS grade</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A996-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSL-2 biohazard cabinet</td>
			<td>The Baker Company</td>
			<td>SG403A-HE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytochrome-C</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C2867-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Explorer software</td>
			<td>AB Sciex</td>
			<td>Version 4.9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Focus Protein Reduction-Alkylation kit</td>
			<td>G-Biosciences</td>
			<td>786-231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GPMAW software</td>
			<td>Lighthouse Data</td>
			<td>Version 10.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>9120973</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>22700-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luria Broth</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12795-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysozyme</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L4919-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Tubes, 2 mL, screw-cap, O-ring</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-681-343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MiniSpin Plus Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22620207</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mitomycin-C (from streptomyces)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0440-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myoglobin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5696-100MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker MaxQ 420HP Model 420</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Model 420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sinapinic acid</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1861580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1 uL loops</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thioredoxin (E. coli, recombinant)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T0910-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trifluoroacetic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>299537-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Optima LC/MS grade</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>W6-4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of antibacterial immunity proteins in escherichia coli using maldi-tof-tof-ms/ms and top-down proteomic analysis

Этот протокол идентифицирует белки иммунитета бактерицидных ферментов: колицина E3 и бактериоцина, продуцируемых патогенным штаммом Escherichia coli с использованием индукции антибиотиков и идентифицированных тандемной масс-спектрометрией MALDI-TOF-TOF и нисходящим протеомным анализом с помощью программного обеспечения, разработанного на месте. Белок иммунитета колицина E3 (Im3) и белок иммунитета бактериоцина (Im-Bac) были идентифицированы из заметных ионов фрагментов b- и/или Y-типа, генерируемых полипептидным расщеплением позвоночника (PBC) на С-концевой стороне аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты и остатков аспарагина механизмом фрагментации эффекта аспарагиновой кислоты. Программное обеспечение быстро сканирует последовательности белков в силико, полученные из секвенирования всего генома бактериального штамма. Программное обеспечение также итеративно удаляет аминокислотные остатки белковой последовательности в случае, если зрелая белковая последовательность усечена. Одна белковая последовательность обладала массой и фрагментами ионов, согласуемых с теми, которые были обнаружены для каждого белка иммунитета. Затем последовательность-кандидат проверялась вручную, чтобы подтвердить, что все обнаруженные фрагменты ионов могут быть назначены. N-концевой метионин Im3 был постпереводно удален, тогда как Im-Bac имел полную последовательность. Кроме того, мы обнаружили, что только два или три некомментарных фрагмента ионов, образованных ПБК, необходимы для идентификации правильной последовательности белка. Наконец, промотор (SOS box) был идентифицирован перед генами антибактериального и иммунитета в плазмидном геноме бактериального штамма.

На рисунке 3 (верхняя панель) показан MS штамма STEC O113:H21 RM7788, культивируемого в течение ночи на LBA, дополненном 400 нг/мл митомицина-C. Пики при m/z 7276, 7337 и 7841 были ранее идентифицированы как белок холодового шока C (CspC), белок холодного шока E (CspE) и плазмидный белок неизвестной фун...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Antibacterial Immunity Proteins in Escherichia coli using MALDI-TOF-TOF-MS/MS and Top-Down Proteomic Analysis at JoVE.com

Identification of Antibacterial Immunity Proteins in Escherichia coli using MALDI-TOF-TOF-MS/MS and Top-Down Proteomic Analysis

Здесь мы представляем протокол для быстрой идентификации белков, продуцируемых геномно секвенированных патогенными бактериями, с использованием тандемной масс-спектрометрии MALDI-TOF-TOF и нисходящего протеомного анализа с программным обеспечением, разработанным на месте. Метастабильные ионы белка фрагментируются из-за эффекта аспарагиновой кислоты, и эта специфичность используется для идентификации белка.

Идентификация белков антибактериального иммунитета в кишечной палочке с использованием MALDI-TOF-TOF-MS/MS и нисходящего протеомного анализа

This protocol identifies the immunity proteins of the bactericidal enzymes: colicin E3 and bacteriocin, produced by a pathogenic Escherichia coli strain ...

Протокол демонстрирует быстрый метод идентификации бактериальных белков с помощью индукции антибиотиков и масс-спектрометрии. Главным преимуществом техники является ее скорость и простота. Пробоподготовка несложная.Метод может быть распространен на характеристику любых патогенных бактерий, таких как факторы вирулентности или устойчивость к антибиотикам, чтобы лучше информировать о соответствующем лечении бактериальной инфекции. Для начала используйте стерильную петлю в один микролитр для сбора бактерий из отдельных колоний, выращенных на агаровой пластине LB. И переложить на двухмиллилитровую уплотнительная кольцевая кольцевая линия винтовой крышки микроцентрифуги трубки, содержащей 300 микролитров воды класса ВЭЖХ.Затем кратковременно вихрьте трубку и гранулируют ячейки центрифугированием, на 0,75 микролитра реликтовой воды образца супернатанта на мишени MALDI из нержавеющей стали и дайте ей высохнуть. Налейте высушенное место образца 0,75 микролитра насыщенного раствора синапиновой кислоты, приготовленного в 33% ацетонитриле, 67% воды и 0,2% трифторуксусной кислоты, и дайте пятну высохнуть. Как только пятно высохнет, загрузите мишень в масс-спектрометр.Откройте программное обеспечение для сбора данных и щелкните MS Linear Mode Acquisition Или диапазон массы-заряда и массы-заряд нижней и верхней границ в соответствующих полях. Нажмите на место образца для анализа в целевом шаблоне MALDI. Затем нажмите левую кнопку мыши и перетащите курсор на место образца, чтобы указать прямоугольную область, которая будет отобрана для лазерной абляции или ионизации.Отпустите кнопку мыши, чтобы начать сбор и собрать 1000 лазерных снимков для каждого образца пятна. Если ионы не обнаружены, увеличьте интенсивность лазера, регулируя скользящую шкалу стержень под интенсивность лазера до тех пор, пока не будет обнаружен сигнал ионов белка. После завершения сбора данных в линейном режиме MS щелкните сбор режима ms/MS Reflectron.Введите массу прекурсора для анализа в поле Масса прекурсора. Затем введите ширину изоляции в дальтонах в окне «Масса предшественника» для стороны низкой и высокой массы массы предшественника. Нажмите кнопку CID Off (Выключить CID).Затем нажмите кнопку Metastable Suppressor On (Вк) Отрегулируйте интенсивность лазера по крайней мере до 90% от его максимального значения, отрегулировав скользящую шкалу, как показано на демонстрации. Щелкните место для анализа образца на целевом шаблоне MALDI, затем нажмите левую кнопку мыши и перетащите курсор на место образца, чтобы указать прямоугольную область, которая будет отобрана для лазерной абляции или ионизации, отпустите кнопку мыши, чтобы начать сбор и собрать 10 000 лазерных снимков для каждого места образца, как показано.Дважды щелкните исполняемый файл Protein Biomarker Seeker, и появится окно графического интерфейса пользователя. Введите массу биомаркера белка в поле «Масса зрелого белка» и погрешность измерения массы в поле «Массовая толерантность». При желании нажмите кнопку «Калькулятор массы белка в зависимости от b/y», чтобы рассчитать массу белка из предполагаемой дополнительной пары ионов фрагментов, и появится всплывающее окно инструмента «Калькулятор массы белка».Введите отношение массы к заряду предполагаемой пары дополнительных фрагментов ионов, нажмите кнопку «Добавить пару», и появится калькулятор белковой массы. Скопируйте вставьте это значение в поле «Масса зрелого белка» и закройте окно инструментов «Калькулятор массы белка». Нажмите на поле Установить ограничение остатков.Выберите длину пептида конечного сигнала терминала, и появится всплывающее окно со скользящей шкалой и курсором и переместит курсор на нужную длину сигнального пептида. Если длина сигнального пептида не выбрана, программное обеспечение будет выполнять неограниченное усечение последовательности. В разделе Условие фрагмента ионов выберите Остатки для полипептидного магистрального расщепления, щелкнув по полям одного или нескольких остатков, D-E-N и / или P.А затем нажмите кнопку Ввести fragment Ions Plus One для поиска, и появится всплывающая страница фрагмента.Затем нажмите кнопку «Добавить ион фрагмента», и появится выпадающее поле для каждого вводимого фрагмента. Введите массу по соотношениям зарядов ионов фрагментов и связанную с ними массу по допуску заряда. Затем нажмите кнопку Сохранить и закрыть.В правом боковом поле Сколько фрагментов ионов должно быть сопоставлено прокрутите, чтобы выбрать минимальное количество фрагментов ионов, которые должны быть сопоставлены для идентификации, и выберите остатки цистеина в их окисленном состоянии. Если белки не идентифицированы после поиска, повторите поиск с цистеинами в их восстановленном состоянии. В разделе Настройка файла щелкните значок Выбрать файл FASTA, чтобы просмотреть и выбрать файл FASTA, содержащий последовательности белка in silico ранее созданного бактериального штамма.Затем выберите выходную папку и создайте имя выходного файла. Щелкните значок Выполнить поиск по записям файлов. Появится всплывающее окно под названием «Подтвердить параметры поиска», отображающее параметры поиска перед началом поиска.Если параметры поиска верны, нажмите кнопку Начать поиск. Если параметры неправильные, нажмите кнопку Отмена и повторно введите правильные параметры. Как только поиск будет инициирован, окно параметров закроется и появится новое всплывающее окно с индикатором выполнения, показывающее ход поиска и бегущий подсчет количества найденных идентификаций.По завершении поиска индикатор выполнения будет автоматически закрыт, а сводка поиска будет отображаться в поле журнала графического интерфейса пользователя вместе с новым всплывающим окном, отображающим найденные идентификаторы белков. В текущем исследовании бактериальные культуры выращивались в LB с двумя различными концентрациями митомицина-C. Массовый спектр бактериальной культуры, выращенной с концентрацией митомицина-С.Были идентифицированы белок холодного шока С, белок холодного шока Е и плазмидный белок неизвестной функции. Неизвестный ион белка на 9780 был проанализирован MS/MS, и ион-предшественник был выделен с окном селектора временных ионов примерно 100 дальтон. Фрагмент иона при массе заряда 9675,9 является побочным эффектом диссоциации метастабильной белковой иона при 9655.Последовательность белка иммунитета для колицина Е3 содержит основной остаток возможных участков ионизации. Фрагмент ионов обнаружен из полипептидного магистрали расщепления, когда при поиске использовалась восстановленная форма цистеина. N-концевой метионин удаляется как модификация постперевода.Когда бактериальную культуру выращивали в высокой концентрации митомицина-С, был идентифицирован белок иммунитета бактериоцина. Неизвестный пик в 9651 был проанализирован MS/MS, и ион-предшественник был выделен с более узким и асимметричным окном TIS минус 75 плюс 60 дальтон. Последовательность иммунитета белка бактериоцина содержит основные остатки возможных участков ионизации.Фрагмент ионов обнаружен из полипептидного магистрали расщепления, когда при поиске использовалась восстановленная форма цистеина. при различных концентрациях антибиотиков относительное содержание белка может варьироваться. И они были проанализированы с помощью масс-спектрометрии.При сборе бактериальных клеток наблюдают морфологию колоний и рост бактерий относительно антибиотиков и концентрации. Для обнаружения белков необходима одна микролитровая петля клеток.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Identification of Antibacterial Immunity Proteins in Escherichia coli using MALDI-TOF-TOF-MS/MS and Top-Down Proteomic Analysis

Qualitative Identification of Carboxylic Acids, Boronic Acids, and Amines Using Cruciform Fluorophores

Качественная идентификация карбоновые кислоты, борной кислоты и аминов с использованием крестообразных Флуорофоры

Molecular cruciforms are X-shaped systems in which two conjugation axes intersect at a central core. If one axis of these molecules is substituted with ...

Optimization of Synthetic Proteins: Identification of Interpositional Dependencies Indicating Structurally and/or Functionally Linked Residues

Оптимизация синтетических белков: Идентификация Interpositional зависимостей индикации Конструктивно и / или функционально связанных остатков

Protein alignments are commonly used to evaluate the similarity of protein residues, and the derived consensus sequence used for identifying functional ...

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical Methylation and Physical Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance Techniques

Секвенирование растений стены Heteroxylans Использование ферментативной, химической (метилирование) и физический (масс-спектрометрия, ядерный магнитный резонанс) Методики

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

Rapid High-throughput Species Identification of Botanical Material Using Direct Analysis in Real Time High Resolution Mass Spectrometry

Rapid Высокая пропускная способность Виды Идентификация ботанического материала с использованием прямого анализа в реальном времени с высоким разрешением масс-спектрометрии

We demonstrate that direct analysis in real time-high resolution mass spectrometry can be used to produce mass spectral profiles of botanical material, ...

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

Использование капиллярный электрофорез для Количественно органических кислот из растительных тканей: Случай испытания экспертизы<em&gt; Арабика</em&gt; Семена

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic ...

In Situ Detection and Single Cell Quantification of Metal Oxide Nanoparticles Using Nuclear Microprobe Analysis

In Situ Detection and Single Cell Quantification of Metal Oxide Nanoparticles Using Nuclear Microprobe Analysis

На месте Выявление и количественная оценка одноклеточного наночастиц оксидов металлов, с использованием ядерных рентгенофлуоресцентного анализа

Micro-analytical techniques based on chemical element imaging enable the localization and quantification of chemical composition at the cellular level. ...

DNA-magnetic Particle Binding Analysis by Dynamic and Electrophoretic Light Scattering

ДНК-магнитопорошковый обязательного анализа динамических и электрофоретической рассеяние света

Isolation of DNA using magnetic particles is a field of high importance in biotechnology and molecular biology research. This protocol describes the ...

Large-scale Top-down Proteomics Using Capillary Zone Electrophoresis Tandem Mass Spectrometry

Крупномасштабные протеомики сверху вниз с использованием зоне капиллярного электрофореза тандем масс-спектрометрия

Capillary zone electrophoresis-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (CZE-ESI-MS/MS) has been recognized as a useful tool for top-down ...

Escherichia coli-Based Cell-Free Protein Synthesis: Protocols for a robust, flexible, and accessible platform technology

Escherichia coli-Based Cell-Free Protein Synthesis: Protocols for a robust, flexible, and accessible platform technology

Кишечная палочка-синтез белка на основе свободных клеток: протоколы для технологии, надежные, гибкие и доступные платформы

Over the last 50 years, Cell-Free Protein Synthesis (CFPS) has emerged as a powerful technology to harness the transcriptional and translational capacity ...