Name: surgery and sample processing for correlative imaging of the murine pulmonary valve
Uploaded: 2021-08-05T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Surgery and Sample Processing for Correlative Imaging of the Murine Pulmonary Valve at JoVE.com

Эта работа поддерживается, в частности, грантами R01HL139796 и R01HL128847 для CKB и RO1DE028297 и CBET1608058 для DWM.

Использование животных в этом исследовании соответствовало Национальному детскому госпиталью по уходу за животными и их использованию в соответствии с протоколом AR13-00030.
1. Иссечение легочного клапана
<ol><li>Автоклав необходимых инструментов, необходимых для рассечения...

<ol>
	<li>Azari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+the+cost-effectiveness+of+heart+valve+replacement+with+a+mechanical+versus+biological+prosthesis+in+patients+with+heart+valvular+disease.">A systematic review of the cost-effectiveness of heart valve replacement with a mechanical versus biological prosthesis in patients with heart valvular disease.</a> Heart Failure Reviews. 25 (3), 495-503 (2020).</li><li>Ng, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;-dependent+pathogenesis+of+mitral+valve+prolapse+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome.">TGF-&#946;-dependent pathogenesis of mitral valve prolapse in a mouse model of Marfan syndrome.</a> Journal of Clinical Investigation. 114 (11), 1586-1592 (2004).</li><li>Cheek, J. D., Wirrig, E. E., Alfieri, C. M., James, J. F., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+activation+of+valvulogenic,+chondrogenic,+and+osteogenic+pathways+in+mouse+models+of+myxomatous+and+calcific+aortic+valve+disease.">Differential activation of valvulogenic, chondrogenic, and osteogenic pathways in mouse models of myxomatous and calcific aortic valve disease.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 52 (3), 689-700 (2012).</li><li>Jim&#233;nez-Altay&#243;, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stenosis+coexists+with+compromised+&#945;1-adrenergic+contractions+in+the+ascending+aorta+of+a+mouse+model+of+Williams-Beuren+syndrome.">Stenosis coexists with compromised &#945;1-adrenergic contractions in the ascending aorta of a mouse model of Williams-Beuren syndrome.</a> Scientific Reports. 10 (1), 889 (2020).</li><li>Thacoor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitral+valve+prolapse+and+Marfan+syndrome.">Mitral valve prolapse and Marfan syndrome.</a> Congenital Heart Disease. 12 (4), 430-434 (2017).</li><li>McAnulty, P., Dayan, A., Ganderup, N. -. C., Hastings, K., Dawson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Comparative+Assessment+of+the+Pig,+Mouse+and+Human+Genomes.">A Comparative Assessment of the Pig, Mouse and Human Genomes.</a> The Minipig in Biomedical Research. , (2011).</li><li>Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+structure+and+function+in+development+and+disease.">Heart valve structure and function in development and disease.</a> Annual Review of Physiology. 73, 29-46 (2011).</li><li>Hinton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+remodeling+and+organization+in+developing+and+diseased+aortic+valves.">Extracellular matrix remodeling and organization in developing and diseased aortic valves.</a> Circulation Research. 98 (11), 1431-1438 (2006).</li><li>Sacks, M. S., Merryman, W. D., Schmidt, D. E., David Merryman, D. W., Schmidt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+biomechanics+of+heart+valve+function.">On the biomechanics of heart valve function.</a> Journal of Biomechanics. 42 (12), 1804-1824 (2009).</li><li>Sacks, M. S., Yoganathan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+function:+a+biomechanical+perspective.">Heart valve function: a biomechanical perspective.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 362 (1484), 1369-1391 (2007).</li><li>Morales, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-CT+scouting+for+transmission+electron+microscopy+of+human+tissue+specimens.">Micro-CT scouting for transmission electron microscopy of human tissue specimens.</a> Journal of Microscopy. 263 (1), 113-117 (2016).</li><li>Sacks, M. S., Smith, D. B., Hiester, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+aortic+valve+microstructure:+Effects+of+transvalvular+pressure.">The aortic valve microstructure: Effects of transvalvular pressure.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 41 (1), 131-141 (1998).</li><li>Ayoub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+biomechanics+and+underlying+mechanobiology.">Heart valve biomechanics and underlying mechanobiology.</a> Comprehensive Physiology. 6 (4), 1743-1780 (2016).</li><li>Stella, J. A., Liao, J., Sacks, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-dependent+biaxial+mechanical+behavior+of+the+aortic+heart+valve+leaflet.">Time-dependent biaxial mechanical behavior of the aortic heart valve leaflet.</a> Journal of Biomechanics. 40 (14), 3169-3177 (2007).</li><li>Korn, E. D., Weisman, R. A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=loss+of+lipids+during+preparation+of+amoebae+for+electron+microscopy.">loss of lipids during preparation of amoebae for electron microscopy.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)/Lipids and Lipid Metabolism. 116 (2), 309-316 (1966).</li><li>Tapia, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-contrast+en+bloc+staining+of+neuronal+tissue+for+field+emission+scanning+electron+microscopy.">High-contrast en bloc staining of neuronal tissue for field emission scanning electron microscopy.</a> Nature Protocols. 7 (2), 193-206 (2012).</li><li>Hinton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+heart+valve+structure+and+function:+Echocardiographic+and+morphometric+analyses+from+the+fetus+through+the+aged+adult.">Mouse heart valve structure and function: Echocardiographic and morphometric analyses from the fetus through the aged adult.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 294 (6), 2480-2488 (2008).</li><li>Denk, W., Horstmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+block-face+scanning+electron+microscopy+to+reconstruct+three-dimensional+tissue+nanostructure.">Serial block-face scanning electron microscopy to reconstruct three-dimensional tissue nanostructure.</a> Plos Biology. 2 (11), 1900-1909 (2004).</li><li>Lincoln, J., Florer, J. B., Deutsch, G. H., Wenstrup, R. J., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ColVa1+and+ColXIa1+are+required+for+myocardial+morphogenesis+and+heart+valve+development.">ColVa1 and ColXIa1 are required for myocardial morphogenesis and heart valve development.</a> Developmental Dynamics. 235 (12), 3295-3305 (2006).</li><li>Hamatani, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+investigation+of+congenital+bicuspid+aortic+valve+stenosis,+compared+with+atherosclerotic+tricuspid+aortic+valve+stenosis+and+congenital+bicuspid+aortic+valve+regurgitation.">Pathological investigation of congenital bicuspid aortic valve stenosis, compared with atherosclerotic tricuspid aortic valve stenosis and congenital bicuspid aortic valve regurgitation.</a> PLoS One. 11 (8), (2016).</li></ol>

Удаление желудочков служит двум целям. Во-первых, подвергая сторону желудочка атмосферному давлению, тем самым нужно лишь прикладывать трансклапанное давление с артериальной стороны легочного клапана для закрытия, а во-вторых, обеспечивая стабильное основание для предотвращения скр?...

Легочный клапан (PV) служит для обеспечения однонаправленного кровотока между правым желудочком и легочной артерией. Пороки развития легочного клапана связаны с несколькими формами врожденных пороков сердца. В настоящее время лечение врожденного заболевания клапанов сердца (HVD) - это восстановление клапанов или замена клапанов, что может потребовать нескольких инвазивных операций в течение всей жизни пациента1. Широко признано, что функция сердечного клапана происходит от его структуры, часто называемой структурно-функциональным коррелятом. Более конкретно, геометрические и биомеханические свойства сердца диктуют его функцию. Механические свойства, в свою очередь, определяются составом и организацией ECM. Разрабатывая метод определения биомеханических свойств клапанов сердца мысей, трансгенные животные модели могут быть использованы для опроса о роли ECM на функции сердечного клапана и дисфункции2,3,4,5.
Модель мышиных животных уже давно считается стандартом для молекулярных исследований, потому что трансгенные модели более доступны у мышей по сравнению с другими видами. Мышиные трансгенные модели обеспечивают универсальную платформу для исследования заболеваний, связанных с сердечными клапанами6. Тем не менее, хирургический опыт и требования к инструментам для характеристики как геометрии, так и организации ECM были основным препятствием в продвижении исследований HVD. Хстологические данные в литературе дают картину содержания внеклеточного матрикса мышиного клапана сердца, но только в виде 2D-изображений, и не в состоянии описать его 3D-архитектуру7,8. Кроме того, сердечный клапан является как пространственно, так и временно неоднородным, что затрудняет выводы в экспериментах относительно организации ECM, если выборка и конформация не фиксированы. Обычные методы 3D-характеристики, такие как МРТ или 3D-эхокардиография, не обеспечивают разрешения, необходимого для разрешения компонентов ECM9,10.
Эта работа подробно описывает полностью коррелятивный рабочий процесс, где временная гетерогенность, обусловленная сердечным циклом, была устранена путем фиксации конформации мышиного PV с гидростатическим трансклапанным давлением. Пространственная гетерогенность контролировалась именно путем выборки интересующих областей и регистрации наборов данных из различных методов визуализации, в частности μCT и последовательной блочной сканирующей электронной микроскопии, в разных масштабах длины. Этот метод разведки с помощью μCT для направления отбора проб вниз по течению был предложен ранее, но поскольку легочный клапан демонстрирует временные вариации, на хирургическом уровне11потребовался дополнительный уровень контроля.
Исследования in vivo, описывающие биомеханику клапанов сердца мыщ, редки и вместо этого полагаются на вычислительные модели при описании деформационного поведения. Крайне важно, чтобы локальные внеклеточные данные по шкале нанометровой длины были связаны с геометрией и расположением сердечного клапана. Это, в свою очередь, обеспечивает количественное, пространственно отображенное распределение механически способствующих белков ECM, которые могут быть использованы для усиления существующих биомеханических моделей клапанов сердца12,13,14.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>25% glutaraldehyde (aq)</td>
			<td>EMS</td>
			<td>16210</td>
			<td>Primary fixative component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% sodium chloride injection</td>
			<td>Hospira Inc.</td>
			<td>NDC 0409-4888-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 proof ethanol</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 mL syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way stopcock</td>
			<td>Smiths Medical ASD, Inc.</td>
			<td>MX5311L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% osmium tetroxide</td>
			<td>EMS</td>
			<td>19150</td>
			<td>Staining component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde (aq)</td>
			<td>EMS</td>
			<td>157-4-100</td>
			<td>Primary fixative component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbable hemostat</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>1961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>EMS</td>
			<td>10012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black polyamide monofilament suture, 10-0</td>
			<td>AROSurgical instruments Corporation</td>
			<td>TI38402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black polyamide monofilament suture, 6-0</td>
			<td>AROSurgical instruments Corporation</td>
			<td>SN-1956</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>664</td>
			<td>Approximately 1 yo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp applying forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>00072-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton tip applicators</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-400-118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 fine forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durcupan ACM resin</td>
			<td>EMS</td>
			<td>14040</td>
			<td>For embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14028-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heliscan microCT</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Micro-CT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride injection</td>
			<td>Hospira Inc.</td>
			<td>NDC 0409-2053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-aspartic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-84-8</td>
			<td>Staining component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead nitrate</td>
			<td>EMS</td>
			<td>17900</td>
			<td>Staining component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>low-vacuum backscatter detector</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>VSDBS</td>
			<td>SEM backscatter detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-adson forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11018-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-GP filter, 0.22 um, PES 33mm, non-sterile</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>SLGP033NS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven songes</td>
			<td>McKesson Corp.</td>
			<td>94442000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hexacyanoferrate(II) trihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>14459-95-1</td>
			<td>Staining component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1310-58-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pressure monitor line</td>
			<td>Smiths Medical ASD, Inc.</td>
			<td>MX562</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (sterile 0.9% sodium chloride)</td>
			<td>Hospira Inc.</td>
			<td>NDC 0409-0138-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Size 3 BEEM capsule</td>
			<td>EMS</td>
			<td>69910-01</td>
			<td>Embedding container</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium cacodylate trihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>6131-99-3</td>
			<td>Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solibri retractors</td>
			<td>FST</td>
			<td>17000-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputter, carbon and e-beam coater</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EM ACE600</td>
			<td>Gold coater</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiocarbohydrazide (TCH)</td>
			<td>EMS</td>
			<td>21900</td>
			<td>Staining component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tish needle holder/forcep</td>
			<td>Micrins</td>
			<td>MI1540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9854-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>EMS</td>
			<td>22400</td>
			<td>Staining component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volumescope scanning electron microscope</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>VOLUMESCOPESEM</td>
			<td>Serial Block Face Scanning Electron Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine sterile solution</td>
			<td>Akorn Inc.</td>
			<td>NADA# 139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

surgery and sample processing for correlative imaging of the murine pulmonary valve

Основные причины заболеваний, связанных с сердечным клапаном (HVD), неуловимы. Мышиные животные модели обеспечивают отличный инструмент для изучения HVD, однако хирургический и инструментальный опыт, необходимый для точной количественной оценки структуры и организации в нескольких масштабах длины, затмил его продвижение. Эта работа содержит подробное описание рассечения мыша, окрашивания блока, обработки образцов и корреляционных процедур визуализации для изображения сердечного клапана в различных масштабах длины. Гидростатическое трансклапанное давление использовалось для контроля временной гетерогенности путем химической фиксации конформации сердечного клапана. Микрокоммуническая томография (мкКТ) использовалась для подтверждения геометрии сердечного клапана и обеспечения ориентира для последующей обработки образцов, необходимой для последовательной блочной сканирующей электронной микроскопии лица (SBF-SEM). Были взяты и реконструированы последовательные SEM-изображения внеклеточного матрикса (ECM) с высоким разрешением, чтобы обеспечить локальное 3D-представление его организации. Затем методы визуализации μCT и SBF-SEM были коррелированы для преодоления пространственных вариаций в легочном клапане. Хотя представленная работа посвящена исключительно легочному клапану, эта методология может быть принята для описания иерархической организации в биологических системах и имеет решающее значение для структурной характеристики в нескольких масштабах длины.

Анастомоз легочной артерии до напорной трубки показан на фиг.1А. После применения гидростатического давления легочный ствол растяжение радиально(рисунок 1B),что указывает на то, что створки легочного клапана находятся в закрытой конфигурации. Конформац?...

Watch this Scientific Journal Video about Surgery and Sample Processing for Correlative Imaging of the Murine Pulmonary Valve at JoVE.com

Surgery and Sample Processing for Correlative Imaging of the Murine Pulmonary Valve

Здесь мы описываем коррелятивный рабочий процесс для иссечения, герметизации, фиксации и визуализации мышиного легочного клапана для определения валовой конформации и локальных структур внеклеточного матрикса.

Хирургия и обработка образцов для коррелятивной визуализации мышиного легочного клапана

The underlying causes of heart valve related-disease (HVD) are elusive. Murine animal models provide an excellent tool for studying HVD, however, the ...

Этот протокол важен, потому что он предназначен для ответа на вопросы о структурной функции коррелята мышиного легочного клапана, что, как правило, сложно из-за присущей ему гетерогенности. Контролируемая фиксация и коррелятивная визуализация использовались для захвата структуры на нескольких масштабах длины. Локальные изображения с высоким разрешением затем могут быть сопоставлены с точным анатомическим местоположением на легочном клапане.Продемонстрировать процедуру будет доктор Тай И, директор по микрохирургии в Центре регенеративной медицины При Национальной детской больнице. Начните с автоклавирования инструментов, необходимых для рассечения мыши, включая тонкие ножницы, микрофорсы, микрососудистые зажимы, щипцы для применения зажимов, держатели микроигл, пружинные ножницы и втягивающие средства. После усыпления взрослой мыши C57BL/6 поместите ее в дорсальное лежачее положение на лотке, закрепите ее конечности скотчем и выполните торакотомию.Обнажите сердце, удалив излишки жировой ткани и фасции, затем удалите правое предсердие и перфузите левый желудочек физиологическим раствором комнатной температуры. Удалите все сердце, разрезав верхнюю полую вену, нижнюю полую вену, легочную артерию и аорту, и разрезайте примерно на два миллиметра выше желудочкового соединения, которое будет служить каналом для наддува. Удалите левый и правый желудочки, чтобы подвергнуть камеры атмосферному давлению, гарантируя, что структура легочного ствола не будет затронута удалением желудочков.Анастомозная трубка напора с легочной артерией, оставляя приблизительно одно миллиметровое расстояние между синотубулярным соединением и концом трубки для размещения больших движений листочков и легочного ствола. Поднимите резервуар до аналогичного физиологического давления и заполните его солевым раствором. Проверьте проточную систему, чтобы убедиться в отсутствии засоров или пузырьков воздуха.Прикрепите запорный кран к анастомозированному легочному клапану и обеспечьте достаточный поток через трубку, переключив тракт оттока. Как только поток будет достаточным, переключите отток на анастомозированный легочный клапан и обеспечьте давление легочной ствола, определяемое растяжением ствола. После подтверждения герметизации легочной ствола постепенно включайте первичный фиксаторный раствор до тех пор, пока не будет продувано 25% емкости резервуара солевого раствора.Поместите пропитанную фиксаторами марлю на образец ткани, чтобы предотвратить высыхание. Перфьмируйте фиксатор в течение трех часов, заправляя резервуар для поддержания постоянного давления. После перфузии храните сердечный клапан в фиксаторном растворе при четырех градусах Цельсия до использования в течение одной недели.Для окрашивания промыть образец неподвижного сердечного клапана три раза холодным 0,15 молярным какодилатным буфером в течение пяти минут и полностью погрузить сердечный клапан в раствор из 1,5 ферроцианида калия, 0,15 молярного какодилата, двух миллимоляров хлорида кальция и 2%-ного тетроксида осмия на льду в течение одного часа. Промыть образцы двойной дистиллированной водой комнатной температуры, поместив их в трубку на пять минут с легким перемешиванием. После еще трех промывок поместите образец в фильтрованный раствор тиокарбогидразида при комнатной температуре.Через 20 минут промыть образец три раза водой, как показано ранее. Затем поместите образец в 2% тетроксид осмия при комнатной температуре. Через 30 минут промыть его водой три раза в течение пяти минут каждый и инкубировать образец в 1% уранилацетата в течение ночи при четырех градусах Цельсия.Тем временем готовят раствор нитрата свинца. На следующий день выполните этап промывания три раза, как было показано ранее, затем инкубируют ткань сердечного клапана в растворе аспартата свинца при 60 градусах Цельсия в течение 30 минут. Промыть образцы еще три раза, затем выполнить серийную обработку обезвоживания тканей сердечного клапана свежеприготовленным 20, 50, 70 и 90% этанолом на льду в течение пяти минут каждая, после чего следуют две последующие обработки 100% этанолом.После обезвоживания переместите ткани в ледяной холод ацетона, затем поместите его в свежий ацетон комнатной температуры на 10 минут. Для встраивания внесите смоляную смесь в соответствии со спецификациями производителя. Поместите ткани в последующие обработки от 25 до 75, от 50 до 50 и от 75 до 25 смол в смесь ацетона в течение двух часов каждая.Наконец, поместите ткани в 100% смолу на ночь. На следующий день поместите ткани в свежую 100% смолу. Через два часа перенесите ткани во встраиваемую капсулу, добавьте свежую 100% смолу и поместите ее в духовку с 60 градусами Цельсия на 48 часов для лечения.Здесь показана иссеченная анастомозированная легочная артерия до и после применения гидростатического давления. Легочный ствол растяжение радиально указывает на то, что листочки легочного клапана находятся в закрытой конфигурации. Микрокомпьютная томография подтвердила подтверждение легочного клапана.Листочки были закрыты, а кольцевое кольцо было круглым, в то время как наблюдалась различная степень неадекватного давления легочного клапана либо фиксацией, либо артериальным коллапсом. Виртуальные поперечные сечения объемного рендеринга микроКТ коррелировали с оптическими изображениями для подтверждения направления и местоположения нарезки. Изображения SEM высокого разрешения SBF были сделаны в локальном регионе внутри листовки, когда блок образцов находился в нужном месте и ориентации.Здесь показаны коррелированные изображения между виртуальным срезом рендеринга объема микро КТ, изображениями SEM с низким разрешением и SBF SEM высокого разрешения. В 3D-представлении сегментированной области легочного клапана могут быть идентифицированы внеклеточные компоненты, такие как эндотелиальные клетки, клапанные интерстициальные клетки и внеклеточные волокна. При попытке использовать этот протокол, пожалуйста, имейте в виду, что выполнение надавливания имеет решающее значение и гарантирует, что выход будет как можно выше.

Research

JoVE Journal

Engineering

Solid-state Graft Copolymer Electrolytes for Lithium Battery Applications

Твердотельные привитой сополимер электролитов для литиевых аккумуляторов Приложения

Battery safety has been a very important research area over the past decade. Commercially available lithium ion batteries employ low flash point (&lt;80 ...

Spatial Separation of Molecular Conformers and Clusters

Пространственное разделение молекулярных конформеров и кластеров

Gas-phase molecular physics and physical chemistry experiments commonly use supersonic expansions through pulsed valves for the production of cold ...

Fast Imaging Technique to Study Drop Impact Dynamics of Non-Newtonian Fluids

Быстрый метод визуализации по изучению падения Impact Динамика неньютоновских жидкостей

In the field of fluid mechanics, many dynamical processes not only occur over a very short time interval but also require high spatial resolution for ...

Electron Channeling Contrast Imaging for Rapid III-V Heteroepitaxial Characterization

Электрон Ченнелинг Контрастность изображений для быстрого III-V гетероэпитаксиального Характеристика

Misfit dislocations in heteroepitaxial layers of GaP grown on Si(001) substrates are characterized through use of electron channeling contrast imaging ...

Use of a Multi-compartment Dynamic Single Enzyme Phantom for Studies of Hyperpolarized Magnetic Resonance Agents

Использование Multi-купе Dynamic один энзим Phantom для исследований гиперполяризованным магнитно-резонансных агентов

Imaging of hyperpolarized substrates by magnetic resonance shows great clinical promise for assessment of critical biochemical processes in real time. Due ...

Wicking Tests for Unidirectional Fabrics: Measurements of Capillary Parameters to Evaluate Capillary Pressure in Liquid Composite Molding Processes

Влагоотведение тесты для однонаправленных материалов: Измерения капиллярных параметров для оценки капиллярного давления в жидких Композитный процессов формования

During impregnation of a fibrous reinforcement in liquid composite molding (LCM) processes, capillary effects have to be understood in order to identify ...

Processing of Bulk Nanocrystalline Metals at the US Army Research Laboratory

Обработка металлов нанокристаллических сыпучих исследовательской лаборатории армии США

Given their potential for significant property improvements relative to their large grained counterparts, much work has been devoted to the continued ...

Guidelines and Experience Using Imaging Biomarker Explorer (IBEX) for Radiomics

Guidelines and Experience Using Imaging Biomarker Explorer IBEX for Radiomics

Руководящие принципы и опыт использования изображений биомаркер Explorer (Козерог) для Radiomics

Imaging Biomarker Explorer (IBEX) is an open-source tool for medical imaging radiomics work. The purpose of this paper is to describe how to use IBEX's ...

Fused Filament Fabrication (FFF) of Metal-Ceramic Components

Fused Filament Fabrication FFF of Metal-Ceramic Components

Изготовление (FFF) расплавленный накаливания металлокерамические компонентов

Technical ceramics are widely used for industrial and research applications, as well as for consumer goods. Today, the demand for complex geometries with ...

Fabrication of Nanoheight Channels Incorporating Surface Acoustic Wave Actuation via Lithium Niobate for Acoustic Nanofluidics

Изготовление нановысотных каналов, включающих поверхностную акустическую волну, активацию с помощью литиевого ниобата для акустических нанофлюидиков

Controlled nanoscale manipulation of fluids is known to be exceptionally difficult due to the dominance of surface and viscous forces. Megahertz-order ...