Name: microinjection method for anopheles gambiae embryos
Uploaded: 2021-07-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microinjection Method for Anopheles gambiae Embryos at JoVE.com

We zijn Drusilla Stillinger, Kiona Parker, Parrish Powell en Madeline Nottoli dankbaar voor de muggenhouderij. Financiering werd verstrekt door de Universiteit van Californië, Irvine Malaria Initiative. AAJ is een Donald Bren Professor aan de Universiteit van Californië, Irvine.

1. Muggen voorbereiden op micro-injectie
<ol><li>Zaai een kooi13 (~ 5000 cm3) met ~ 100 mannelijke en 200-300 vrouwelijke 1-2 dagen volwassen post-eclosie muggen en laat ze 2 dagen paren.</li>
	<li>Geef muggen na de paarperiode een bloedmaaltijd met behulp van 2 ml bloed met een kunstmatig voedingsapparaat of levende verdoofde dieren, afhankelijk van insectenpraktijken14. Geef muggen de volgende dag een tweede bloedmaaltijd om ervoor te zorgen dat alle gepaarde...

<ol>
	<li>Feramisco, J., Perona, R., Lacal, J. C., Lacal, J. C., Feramisco, J., Perona, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Needle+Microinjection:+A+Brief+History.">Needle Microinjection: A Brief History.</a> Microinjection. Methods and Tools in Biosciences and Medicine. , (1999).</li><li>Windbichler, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+synthetic+homing+endonuclease-based+gene+drive+system+in+the+human+malaria+mosquito.">A synthetic homing endonuclease-based gene drive system in the human malaria mosquito.</a> Nature. 473 (7346), 212-215 (2011).</li><li>Meredith, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-specific+integration+and+expression+of+an+anti-malarial+gene+in+transgenic+Anopheles+gambiae+significantly+reduces+Plasmodium+infections.">Site-specific integration and expression of an anti-malarial gene in transgenic Anopheles gambiae significantly reduces Plasmodium infections.</a> PLoS One. 6 (1), 14587 (2011).</li><li>Hammond, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas9+gene+drive+system+targeting+female+reproduction+in+the+malaria+mosquito+vector+Anopheles+gambiae.">CRISPR-Cas9 gene drive system targeting female reproduction in the malaria mosquito vector Anopheles gambiae.</a> Nature Biotechnology. 34 (1), 78-83 (2016).</li><li>Carballar-Lejarazu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next-generation+gene+drive+for+population+modification+of+the+malaria+vector+mosquito,+Anopheles+gambiae.">Next-generation gene drive for population modification of the malaria vector mosquito, Anopheles gambiae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (37), 22805-22814 (2020).</li><li>Sim&#245;es, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Anopheles+FBN9+immune+factor+mediates+Plasmodium+species-specific+defense+through+transgenic+fat+body+expression.">The Anopheles FBN9 immune factor mediates Plasmodium species-specific defense through transgenic fat body expression.</a> Develomental &amp; Comparative Immunology. 67, 257-265 (2017).</li><li>Arik, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Akt+signaling+in+the+mosquito+fat+body+increases+adult+survivorship.">Increased Akt signaling in the mosquito fat body increases adult survivorship.</a> FASEB Journal. 4, 1404-1413 (2015).</li><li>Riabinina, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+olfactory+centres+in+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae.">Organization of olfactory centres in the malaria mosquito Anopheles gambiae.</a> Nature Communications. 7, 13010 (2016).</li><li>Kyrou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CRISPR-Cas9+gene+drive+targeting+doublesex+causes+complete+population+suppression+in+caged+Anopheles+gambiae+mosquitoes.">A CRISPR-Cas9 gene drive targeting doublesex causes complete population suppression in caged Anopheles gambiae mosquitoes.</a> Nature Biotechnology. 36 (11), 1062-1066 (2018).</li><li>Dong, Y., Sim&#245;es, M. L., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+transgenic+multistage+effector-gene+combinations+for+Plasmodium+falciparum+suppression+in+Anopheles.">Versatile transgenic multistage effector-gene combinations for Plasmodium falciparum suppression in Anopheles.</a> Science Advances. 6 (20), (2020).</li><li>Grossman, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+transformation+of+the+malaria+vector,+Anopheles+gambiae,+with+the+piggyBac+transposable+element.">Germline transformation of the malaria vector, Anopheles gambiae, with the piggyBac transposable element.</a> Insect Molecular Biology. 6, 597-604 (2001).</li><li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+Anopheles+research.+Chapter+3:+Specific+Anopheles+techniques.+3.1+Embryonic+Techniques.+3.1.1+Microinjection+methods+for+Anopheles+Embryos.">Methods in Anopheles research. Chapter 3: Specific Anopheles techniques. 3.1 Embryonic Techniques. 3.1.1 Microinjection methods for Anopheles Embryos.</a> BEI resources. , (2015).</li><li>Pham, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+population+modification+of+the+malaria+vector+mosquito,+Anopheles+stephensi.">Experimental population modification of the malaria vector mosquito, Anopheles stephensi.</a> PLoS Genetics. 15 (12), 1008440 (2019).</li><li>Benedict, M. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pragmatic+selection+of+larval+mosquito+diets+for+insectary+rearing+of+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Pragmatic selection of larval mosquito diets for insectary rearing of Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> PLoS One. 15 (3), 0221838 (2020).</li><li>Carballar-Lejaraz&#250;, R., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+modification+of+Anopheline+species+to+control+malaria+transmission.">Population modification of Anopheline species to control malaria transmission.</a> Pathogens and Global Health. 111 (8), 424-435 (2017).</li></ol>

Met de toegenomen beschikbaarheid van nauwkeurige en flexibele genetische manipulatietechnologieën zoals CRISPR/Cas9 kunnen transgene organismen op een eenvoudigere en stabielere manier worden ontwikkeld dan voorheen mogelijk was. Deze tools hebben onderzoekers in staat gesteld om transgene stammen van muggenvectoren te creëren die zeer dicht bij het bereiken van de gewenste eigenschappen van refractie voor pathogenen (populatiemodificatie) of erfelijke steriliteit (populatieonderdrukking) liggen. Om echter de meest ve...

Micro-injectietechnieken worden sinds de vroege jaren 1900 gebruikt om organismen experimenteel te manipuleren1. Micro-injectie is gebruikt om zowel biologische basisfuncties te bestuderen als /of belangrijke veranderingen in de biologie van een gewenst organisme aan te brengen. De micro-injectietechniek is van bijzonder belang geweest voor vectorbiologen en is veel gebruikt om vectorgenomen2-11te manipuleren. Transgenese-experimenten in geleedpotige vectoren zijn vaak bedoeld om vectoren minder efficiënt te maken in het overbrengen van pathogenen door veranderingen door te voeren die de fitheid van een vector verminderen of de refractie verhogen voor de pathogenen die ze overbrengen. Muggen brengen een verscheidenheid aan menselijke ziekteverwekkers over en hebben een aanzienlijke impact op de morbiditeit en mortaliteit wereldwijd. Het geslacht Van muggen anopheles brengt de menselijke malariaparasitaire pathogenen, Plasmodium spp, over. Genetische manipulatie-experimenten met Anopheles hebben tot doel de biologie beter te begrijpen en de vectoriële capaciteit van deze muggen te verminderen in pogingen om nieuwe malaria-eliminatiestrategieën te ontwikkelen.
De muggenvectoren die wereldwijd de meeste malaria-infecties veroorzaken, bevinden zich in het Anopheles gambiae-soortencomplex. De meeste succesvolle transgenese-experimenten zijn echter uitgevoerd op de malariavector van het Indiase subcontinent, Anopheles stephensi. Hoewel er veel laboratorium-aangepaste Anopheles gambiae stammen bestaan, is het aantal transgene Anopheles gambiae spp. lijnen gerapporteerd in de literatuur niet te vergelijken met dat van Anopheles stephensi. Er wordt gedacht dat het Anopheles gambiae embryo moeilijker te injecteren is en succesvolle transgenese bereikt dan Anopheles stephensi, hoewel de redenen voor deze verschillen onbekend zijn. Dit protocol beschrijft een methode waarvan bewezen is dat deze consistent succesvol is in het bereiken van transgenese van Anopheles gambiae embryo's via micro-injectie. Het protocol is gebaseerd op een methode die eerder is ontwikkeld door Hervé Bossin en Mark Benedict12 met enkele aanvullende details en wijzigingen die zijn toegevoegd die de efficiëntie van transgenese blijken te verhogen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >10x Microinjection Buffer</td>
			<td >-</td>
			<td >-</td>
			<td >1 mM NaHPO4 buffer, pH 6.8, 50 mM KCl</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Blotting membrane (Zeta-Probe GT Genomic Tested Blotting Membrane)</td>
			<td >Bio-Rad</td>
			<td ></td>
			<td >Neatly and straightly cut into 2x1 cm piece</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Conical tubes 50 ml (disposable centrifuge tube, polypropylene)</td>
			<td >Fisher Brand</td>
			<td ></td>
			<td >Ends cut</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >De-ionized or double-distilled water (ddH20)&#160;</td>
			<td >Mili-Q</td>
			<td ></td>
			<td >In a wash bottle&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissecting microscope&#160;</td>
			<td >Leica&#160;</td>
			<td >Leica MZ12</td>
			<td >For embryo alignment</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Forceps&#160;</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >No. 5 size&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass container&#160;</td>
			<td >Pyrex</td>
			<td >No. 3140</td>
			<td >125 x 65</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass slide&#160;</td>
			<td >Fisher Brand</td>
			<td >No. 12-549-3</td>
			<td >75x26 mm</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Incubator</td>
			<td >Barnsted Lab-line</td>
			<td >Model No. 150</td>
			<td >28 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KCl</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >50 mM</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Latex dental film&#160;</td>
			<td >Crosstex International</td>
			<td >No. 19302</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microinjector</td>
			<td >Sutter Instrument</td>
			<td ></td>
			<td >XenoWorks Digital Microinjector</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microloader Pipette tips&#160;</td>
			<td >Eppendorf&#160;</td>
			<td ></td>
			<td >20 &#181;L microloader epT.I.P.S.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micromanipulator</td>
			<td >Sutter Instrument</td>
			<td ></td>
			<td >XenoWorks Micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette&#160;</td>
			<td >Rainin&#160;</td>
			<td ></td>
			<td >20 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette puller&#160;</td>
			<td >Sutter Instrument</td>
			<td >Sutter P-2000 micropipette puller</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microscope&#160;</td>
			<td >Leica</td>
			<td >DM 1000 LED or M165 FC</td>
			<td >For microinjection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Minimum fiber filter paper&#160;</td>
			<td >Fisher Brand</td>
			<td >No. 05-714-4</td>
			<td >Chromatography Paper, Thick&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Mosquitoes&#160;</td>
			<td >MR4, BEI Resources</td>
			<td ></td>
			<td >Anopheles gambiae, mated adult females, blood-fed 4-5 days post-eclosion</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaHPO4 buffer&#160;</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >1 mM, ph 6.8</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Nylon mesh</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paint brush</td>
			<td >Blick</td>
			<td >No. 05831-7040</td>
			<td >Fine, size 4/0</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Petri dish</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >Plastic, (60x15 mm, 90x15 mm)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium acetate</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >&#160;3M</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Quartz glass capillaries&#160;</td>
			<td >Sutter Instrument</td>
			<td >No. QF100-70-10</td>
			<td >With filament, 1 mm OD,&#160; ID 0.7 10 cm length</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Water PCR grade&#160;</td>
			<td >Roche</td>
			<td >No. 03315843001</td>
			<td ></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microinjection method for anopheles gambiae embryos

Embryo micro-injectie technieken zijn essentieel voor vele moleculaire en genetische studies van insectensoorten. Ze bieden een middel om exogene DNA-fragmenten die coderen voor genen van belang en gunstige eigenschappen op een stabiele en erfelijke manier in de kiembaan van insecten te introduceren. De resulterende transgene stammen kunnen worden bestudeerd voor fenotypische veranderingen als gevolg van de expressie van het geïntegreerde DNA om basisvragen te beantwoorden of worden gebruikt in praktische toepassingen. Hoewel de technologie eenvoudig is, vereist het van de onderzoeker geduld en oefening om een vaardigheidsniveau te bereiken dat de efficiëntie maximaliseert. Hier afgebeeld is een methode voor micro-injectie van embryo's van de Afrikaanse malariamug, Anopheles gambiae. Het doel is om door middel van micro-injectie exogene DNA aan het embryo af te leveren, zodat het kan worden opgenomen in de zich ontwikkelende kiembaan (pool) cellen. Expressie uit het geïnjecteerde DNA van transposasen, integrasen, recombinases of andere nucleasen (bijvoorbeeld CRISPR-geassocieerde eiwitten, Cas) kan gebeurtenissen veroorzaken die leiden tot de covalente insertie in chromosomen. Transgene An. gambiae gegenereerd uit deze technologieën zijn gebruikt voor basisstudies van componenten van het immuunsysteem, genen die betrokken zijn bij bloedvoeding en elementen van het reuksysteem. Bovendien zijn deze technieken gebruikt om An. gambiae-stammen te produceren met eigenschappen die kunnen helpen de overdracht van malariaparasieten onder controle te houden.

Een representatief voorbeeld van de toepassing van het beschreven micro-injectieprotocol is te vinden in Carballar-Lejarazú et al5. De bedoeling hier was om een autonoom gene-drive systeem in te brengen in de kiembaan van een laboratoriumstam, G3, van An. gambiae. Het systeem is ontworpen om zich te richten op de kardinaal ortholog locus (Agcd) op het derde chromosoom in deze soort, dat codeert voor een heemperoxidase dat de omzetting van 3-hydroxykynurenine naar xantho...

Watch this Scientific Journal Video about Microinjection Method for Anopheles gambiae Embryos at JoVE.com

Microinjection Method for Anopheles gambiae Embryos

Micro-injectietechnieken zijn essentieel om exogene genen in het genoom van muggen te introduceren. Dit protocol verklaart een methode die door het James-laboratorium wordt gebruikt om DNA-constructies in Anopheles gambiae-embryo's te micro-injecteren om getransformeerde muggen te genereren.

Micro-injectie methode voor Anopheles gambiae embryo's

Embryo microinjection techniques are essential for many molecular and genetic studies of insect species. They provide a means to introduce exogenous DNA ...

Dit protocol is belangrijk omdat het een specifieke micro-injectiemethode biedt voor een Anopheles gambiae, die historisch moeilijk te transformeren is met behulp van gangbare genetische manipulatietechnieken. Het grote voordeel van deze techniek is dat het op betrouwbare wijze transgene Anopheles gambiae creëert. De toepassingen van deze techniek strekken zich uit tot nieuwe strategieën voor de eliminatie van malaria door het vergemakkelijken van de creatie van muggen die geschikt zijn voor populatieonderdrukking of wijziging van wild-type Anopheles gambiae populaties.Deze methodologie kan eenvoudig worden aangepast aan verschillende muggensoorten. Onze micro-injectietechnologie vergt geduld en oefening. Er is een leercurve.Gebruik om te beginnen een aspirator om 20 tot 30 vrouwtjes in een transparante conische buis van 50 milliliter te plaatsen. Zorg ervoor dat de buis aan beide uiteinden wordt opengesneden en aan het ene uiteinde bedekt is met latex tandfolie en aan het andere uiteinde met nylon gaas en filtreerpapier, waar muggen hun eieren leggen. Plaats de met muggen gevulde buis in een kleine petrischaal gevuld met dubbel gedestilleerd water en plaats de buis en schaal vervolgens gedurende 45 minuten in een incubator bij 28 graden Celsius.Haal de buis uit de couveuse en steek de buis in een lege kooi. Tik zachtjes op de buis om muggen naar buiten te laten vliegen. Verwijder de buis uit de kooi zodra alle muggen eruit zijn gevlogen.Wanneer de buis vrij is van muggen, schroeft u de onderste ring los, verwijdert u het nylon en gebruikt u een tang om het filterpapier met de eieren voorzichtig uit de buis te verwijderen. Leg het met eieren beladen filterpapier in een plastic petrischaaltje met daarin een laag met water bevochtigd filtreerpapier. Plaats een membraan op een schone glasplaat en gebruik een schone tang om het membraan te bedekken met een stuk filterpapier, waardoor ongeveer een millimeter van het membraanfilter onbedekt blijft.Maak het filterpapier nat met gedeïoniseerd water en gebruik vervolgens de borstel om voorzichtig 30 tot 50 embryo's naar de rand van het membraan over te brengen en de eieren verticaal langs het membraan uit te lijnen. Oriënteer de eieren in dezelfde richting, zodat wanneer eieren onder de micro-injectiemicroscoop worden waargenomen, het achterste uiteinde zich in een neerwaartse positie bevindt en een hoek van 15 graden vormt met de naald. Bekleed de hele rand van het membraan met eieren.Gebruik een microloader tip om de naalden te vullen met twee microliter DNA mengsel. Steek de naald in de naaldhouder en sluit de automatische drukpompslang aan. Lijn de naald zo uit dat deze een hoek van 15 graden maakt met het vlak van de dia.Open de naaldpunt door het eerste ei voorzichtig aan te raken en steek vervolgens de punt van de naald tot ongeveer 10 micrometer in de achterste paal. Een succesvolle injectie zal leiden tot een kleine beweging van het cytoplasma in het ei. Gebruik de coaxiale faseregelaars van de microscoop om naar het volgende ei te gaan om de injectie voort te zetten.Om ervoor te zorgen dat de punt van de naald open blijft en niet verstopt is, drukt u op de injecteerknop voordat u een ander embryo binnengaat en visualiseert u het kleine druppeltje bij de opening van de naald. Als de naald verstopt raakt, drukt u op de knop Wissen om de naald te wissen en herhaalt u de druppelvisualisatietest. Pas de druk indien nodig aan als de opening van de naaldpunt iets groter wordt om ervoor te zorgen dat de druppelgrootte klein blijft.Injecteer ongeveer 40 tot 50 eieren met één naald. Nadat de injecties zijn voltooid, spoelt u de eieren af in een glazen container bekleed met filtreerpapier en gevuld met 50 milliliter gedeïoniseerd water. Met behulp van dit protocol werd een autonoom gengestuurd systeem ingebracht in de kiembaan van een laboratoriumstam G3 van Anopheles gambiae.Het systeem is ontworpen om de kardinaalsortoloog, of Agcd, op het derde chromosoom in deze soort te richten. Het plasmide pCO37 wordt getoond. Het bevat Streptococcus pyogenes Cas9 endonuclease onder controle van de regulerende elementen van het nanos gen ortholoog.Daarnaast heeft het een geleidings-RNA onder controle van een U6-genpromotor en de 3XP3 CFP dominante markercassette die het cyaan fluorescerende eiwit tot expressie brengt. Moleculaire benaderingen verifieerden de nauwkeurige inbrenging van ongeveer 10 kilo basenparen DNA, die werd aangeduid als AgNosCd-1. Uitgebreide follow-upanalyses toonden aan dat AgNosCd-1 zeer efficiënt was bij het aandrijven, weinig resistente allelen creëerde en geen grote genetische belasting had als gevolg van de integratie en expressie van het gene drive-systeem.Homozygote gene drive met muggen waren mutanten met functieverlies, met larven, poppen en nieuw ontstane volwassenen met een rood-ogenfenotype. Bij het proberen van dit protocol is het cruciaal om op 88 te blijven voor een goede uitkomst om lichtgrijze eieren te verlichten en witte eieren te vermijden.

Research

JoVE Journal

Genetics

Microinjection Method for Anopheles gambiae Embryos

Laser-assisted Cytoplasmic Microinjection in Livestock Zygotes

Laser-assisted Cytoplasmatische Micro-injectie in Livestock Zygotes

Cytoplasmic microinjection into one-cell embryos is a very powerful technique. As an example, it enables the delivery of genome editing tools that can ...

Delivery of Nucleic Acids through Embryo Microinjection in the Worldwide Agricultural Pest Insect, Ceratitis capitata

Delivery of Nucleic Acids through Embryo Microinjection in the Worldwide Agricultural Pest Insect, Ceratitis capitata

Levering van nucleïnezuren door middel van Embryo micro-injectie in de Worldwide Landbouw Pest Insect,<em&gt; Middellandse-Zeevlieg</em

The Mediterranean fruit fly (medfly) Ceratitis capitata (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae) is a pest species with extremely high agricultural relevance. ...

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection van CRISPR/Cas9 eiwit in Channel Catfish, Ictalurus punctatus, embryo's voor Gene Editing

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

Hoge resolutie fluorescentie In Situ hybridisatie in Drosophila embryo's en weefsels met behulp van Tyramide signaal versterking

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

Embryo Microinjection and Transplantation Technique for Nasonia vitripennis Genome Manipulation

Embryo Microinjection and Transplantation Technique for Nasonia vitripennis Genome Manipulation

Embryo Microinjection en transplantatie techniek voor Nasonia vitripennis genoom manipulatie

The jewel wasp Nasonia vitripennis has emerged as an effective model system for the study of processes including sex determination, haplo-diploid sex ...

Generation of Genome-wide Chromatin Conformation Capture Libraries from Tightly Staged Early Drosophila Embryos

Generation of Genome-wide Chromatin Conformation Capture Libraries from Tightly Staged Early Drosophila Embryos

Generatie van genoom-brede chromatine conformatie Capture bibliotheken uit strak geënsceneerde vroege Drosophila embryo 's

Investigating the three-dimensional architecture of chromatin offers invaluable insight into the mechanisms of gene regulation. Here, we describe a ...

Use of Freeze-thawed Embryos for High-efficiency Production of Genetically Modified Mice

Gebruik van gevriesde embryo's voor hoogrendementproductie van genetisch gemodificeerde muizen

The use of genetically modified (GM) mice has become crucial for understanding gene function and deciphering the underlying mechanisms of human diseases. ...

Embryo Microinjection Techniques for Efficient Site-Specific Mutagenesis in Culex quinquefasciatus

Embryo Microinjection Techniques for Efficient Site-Specific Mutagenesis in Culex quinquefasciatus

Embryo micro-injection technieken voor efficiënte site-specifieke mutagenese in Culex quinquefasciatus

Culex quinquefasciatus is a vector of a diverse range of vector-borne diseases such as avian malaria, West Nile virus (WNV), Japanese encephalitis, ...

Sand Fly (Phlebotomus papatasi) Embryo Microinjection for CRISPR/Cas9 Mutagenesis

Sand Fly Phlebotomus papatasi Embryo Microinjection for CRISPR/Cas9 Mutagenesis

Zandvlieg (Phlebotomus papatasi) Embryo Microinjection voor CRISPR/Cas9 Mutagenese

Sand flies are the natural vectors for Leishmania species, protozoan parasites producing a broad spectrum of symptoms ranging from cutaneous lesions to ...

Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae

Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae

Gebruik van het GAL4-UAS-systeem voor functionele genetica in Anopheles gambiae

The bipartite GAL4-UAS system is a versatile and powerful tool for functional genetic analysis. The essence of the system is to cross transgenic 'driver' ...