Name: chromosome screening of human preimplantation embryos by using spent culture medium: sample collection and chromosomal ploidy analysis
Uploaded: 2021-09-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Chromosome Screening of Human Preimplantation Embryos by Using Spent Culture Medium: Sample Collection and Chromosomal Ploidy Analysis at JoVE.com

Die Autoren danken Shiping Bo und Shujie Ma für ihre Unterstützung bei der NGS-Datenanalyse. Finanzierung: Diese Arbeit wurde durch das National Key Research and Development Program unterstützt (Grant No. 2018YFC1003100).

Die ethische Erlaubnis wurde von der Ethikkommission des Dritten Krankenhauses der Universität Peking eingeholt.
1. Vorbereitung
HINWEIS: Die erforderlichen Materialien und Ausrüstungen sind in der Materialtabelle aufgeführt.
<ol><li>Reagenzien<ol><li>20-30 μl Gametenmedium/Befruchtungsmedium und Spalt-/Blastozystenstadium Kulturmedium (mit Mineralöl bedeckt) und Hyaluronidase (in einem dicht verschlossenen Röhrchen) bei 37 °C, 5 % CO2 und ...

<ol>
	<li>Barlow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+pregnancy+loss+and+obstetrical+risk+after+in-vitro+fertilization+and+embryo+replacement.">Early pregnancy loss and obstetrical risk after in-vitro fertilization and embryo replacement.</a> Human Reproduction. 3 (5), 671-675 (1988).</li><li>Munne, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+abnormalities+and+their+relationship+to+morphology+and+development+of+human+embryos.">Chromosome abnormalities and their relationship to morphology and development of human embryos.</a> Reproductive BioMedicine Online. 12 (2), 234-253 (2006).</li><li>Harton, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diminished+effect+of+maternal+age+on+implantation+after+preimplantation+genetic+diagnosis+with+array+comparative+genomic+hybridization.">Diminished effect of maternal age on implantation after preimplantation genetic diagnosis with array comparative genomic hybridization.</a> Fertility and Sterility. 100 (6), 1695-1703 (2013).</li><li>Hodes-Wertz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+recurrent+miscarriage+is+caused+mostly+by+aneuploid+embryos.">Idiopathic recurrent miscarriage is caused mostly by aneuploid embryos.</a> Fertility and Sterility. 98 (3), 675-680 (2012).</li><li>Keltz, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+screening+(PGS)+with+Comparative+genomic+hybridization+(CGH)+following+day+3+single+cell+blastomere+biopsy+markedly+improves+IVF+outcomes+while+lowering+multiple+pregnancies+and+miscarriages.">Preimplantation genetic screening (PGS) with Comparative genomic hybridization (CGH) following day 3 single cell blastomere biopsy markedly improves IVF outcomes while lowering multiple pregnancies and miscarriages.</a> Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 30 (10), 1333-1339 (2013).</li><li>Scott, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blastocyst+biopsy+with+comprehensive+chromosome+screening+and+fresh+embryo+transfer+significantly+increases+in+vitro+fertilization+implantation+and+delivery+rates:+a+randomized+controlled+trial.">Blastocyst biopsy with comprehensive chromosome screening and fresh embryo transfer significantly increases in vitro fertilization implantation and delivery rates: a randomized controlled trial.</a> Fertility and Sterility. 100 (3), 697-703 (2013).</li><li>Forman, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+fertilization+with+single+euploid+blastocyst+transfer:+a+randomized+controlled+trial.">In vitro fertilization with single euploid blastocyst transfer: a randomized controlled trial.</a> Fertility and Sterility. 100 (1), 100-107 (2013).</li><li>Yang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+of+single+blastocysts+for+fresh+transfer+via+standard+morphology+assessment+alone+and+with+array+CGH+for+good+prognosis+IVF+patients:+results+from+a+randomized+pilot+study.">Selection of single blastocysts for fresh transfer via standard morphology assessment alone and with array CGH for good prognosis IVF patients: results from a randomized pilot study.</a> Molecular Cytogenetics. 5 (1), 24 (2012).</li><li>Cimadomo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Impact+of+Biopsy+on+Human+Embryo+Developmental+Potential+during+Preimplantation+Genetic+Diagnosis.">The Impact of Biopsy on Human Embryo Developmental Potential during Preimplantation Genetic Diagnosis.</a> BioMed Research International. 2016, 7193075 (2016).</li><li>Scott, R. T., Upham, K. M., Forman, E. J., Zhao, T., Treff, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage-stage+biopsy+significantly+impairs+human+embryonic+implantation+potential+while+blastocyst+biopsy+does+not:+a+randomized+and+paired+clinical+trial.">Cleavage-stage biopsy significantly impairs human embryonic implantation potential while blastocyst biopsy does not: a randomized and paired clinical trial.</a> Fertility and Sterility. 100 (3), 624-630 (2013).</li><li>Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blastomere+biopsy+influences+epigenetic+reprogramming+during+early+embryo+development,+which+impacts+neural+development+and+function+in+resulting+mice.">Blastomere biopsy influences epigenetic reprogramming during early embryo development, which impacts neural development and function in resulting mice.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 71 (9), 1761-1774 (2014).</li><li>Zhao, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+epigenetic+modification+in+murine+brain+tissues+of+offspring+from+preimplantation+genetic+diagnosis+blastomere+biopsies.">Aberrant epigenetic modification in murine brain tissues of offspring from preimplantation genetic diagnosis blastomere biopsies.</a> Biology of Reproduction. 89 (5), 117 (2013).</li><li>Zeng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+diagnosis+(PGD)+influences+adrenal+development+and+response+to+cold+stress+in+resulting+mice.">Preimplantation genetic diagnosis (PGD) influences adrenal development and response to cold stress in resulting mice.</a> Cell and Tissue Research. 354 (3), 729-741 (2013).</li><li>Palini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+DNA+in+human+blastocoele+fluid.">Genomic DNA in human blastocoele fluid.</a> Reproductive BioMedicine Online. 26 (6), 603-610 (2013).</li><li>Gianaroli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blastocentesis:+a+source+of+DNA+for+preimplantation+genetic+testing.+Results+from+a+pilot+study.">Blastocentesis: a source of DNA for preimplantation genetic testing. Results from a pilot study.</a> Fertility and Sterility. 102 (6), 1692-1699 (2014).</li><li>Stigliani, S., Anserini, P., Venturini, P. L., Scaruffi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+content+in+embryo+culture+medium+is+significantly+associated+with+human+embryo+fragmentation.">Mitochondrial DNA content in embryo culture medium is significantly associated with human embryo fragmentation.</a> Human Reproduction. 28 (10), 2652-2660 (2013).</li><li>Stigliani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+in+Day+3+embryo+culture+medium+is+a+novel,+non-invasive+biomarker+of+blastocyst+potential+and+implantation+outcome.">Mitochondrial DNA in Day 3 embryo culture medium is a novel, non-invasive biomarker of blastocyst potential and implantation outcome.</a> Molecular Human Reproduction. 20 (12), 1238-1246 (2014).</li><li>Wu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medium-Based+Noninvasive+Preimplantation+Genetic+Diagnosis+for+Human+&#945;-Thalassemias-SEA.">Medium-Based Noninvasive Preimplantation Genetic Diagnosis for Human &#945;-Thalassemias-SEA.</a> Medicine. 94 (12), e669 (2015).</li><li>Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+chromosome+screening+of+human+embryos+by+genome+sequencing+of+embryo+culture+medium+for+in+vitro+fertilization.">Noninvasive chromosome screening of human embryos by genome sequencing of embryo culture medium for in vitro fertilization.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 113 (42), 11907-11912 (2016).</li><li>Capalbo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+efficacy+of+blastocoel+fluid+and+spent+media+as+sources+of+DNA+for+preimplantation+genetic+testing+in+standard+clinical+conditions.">Diagnostic efficacy of blastocoel fluid and spent media as sources of DNA for preimplantation genetic testing in standard clinical conditions.</a> Fertility and Sterility. 110 (5), 870-879 (2018).</li><li>Tobler, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blastocoel+fluid+from+differentiated+blastocysts+harbors+embryonic+genomic+material+capable+of+a+whole-genome+deoxyribonucleic+acid+amplification+and+comprehensive+chromosome+microarray+analysis.">Blastocoel fluid from differentiated blastocysts harbors embryonic genomic material capable of a whole-genome deoxyribonucleic acid amplification and comprehensive chromosome microarray analysis.</a> Fertility and Sterility. 104 (2), 418-425 (2015).</li><li>Magli, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+genetic+testing:+polar+bodies,+blastomeres,+trophectoderm+cells,+or+blastocoelic+fluid?.">Preimplantation genetic testing: polar bodies, blastomeres, trophectoderm cells, or blastocoelic fluid?.</a> Fertility and Sterility. 105 (3), 676-683 (2016).</li><li>Kuznyetsov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+novel+non-invasive+preimplantation+genetic+screening+approach.">Evaluation of a novel non-invasive preimplantation genetic screening approach.</a> PLoS One. 13 (5), e0197262 (2018).</li><li>Li, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preimplantation+Genetic+Screening+with+Spent+Culture+Medium/Blastocoel+Fluid+for+in+Vitro+Fertilization.">Preimplantation Genetic Screening with Spent Culture Medium/Blastocoel Fluid for in Vitro Fertilization.</a> Scientific Reports. 8 (1), 9275 (2018).</li><li>Jiao, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+invasive+preimplantation+genetic+testing+using+blastocyst+culture+medium.">Minimally invasive preimplantation genetic testing using blastocyst culture medium.</a> Human Reproduction. 34 (7), 1369-1379 (2019).</li><li>Palermo, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Births+after+intracytoplasmic+injection+of+sperm+obtained+by+testicular+extraction+from+men+with+nonmosaic+Klinefelter's+syndrome.">Births after intracytoplasmic injection of sperm obtained by testicular extraction from men with nonmosaic Klinefelter's syndrome.</a> New England Journal of Medicine. 338 (9), 588-590 (1998).</li><li>Alpha Scientists in Reproductive, M., &#38; Embryology, E. S. I. G. o. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Istanbul+consensus+workshop+on+embryo+assessment:+proceedings+of+an+expert+meeting.">The Istanbul consensus workshop on embryo assessment: proceedings of an expert meeting.</a> Human Reproduction. 26 (6), 1270-1283 (2011).</li><li>. Qubit dsDNA HS Assay Kit Available from: <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q32851?ICID=search-product">https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q32851?ICID=search-product</a> (2015)</li><li>. Miseq system use guide Available from: <a target="_blank" href="https://support.illumina.com/downloads/miseq_system">https://support.illumina.com/downloads/miseq_system</a> (2016)</li><li>Lane, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ability+to+detect+aneuploidy+from+cell+free+DNA+collected+from+media+is+dependent+on+the+stage+of+development+of+the+embryo.">Ability to detect aneuploidy from cell free DNA collected from media is dependent on the stage of development of the embryo.</a> Fertility and Sterility. 108 (3), (2017).</li><li>Rubio, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicenter+prospective+study+of+concordance+between+embryonic+cell-free+DNA+and+trophectoderm+biopsies+from+1301+human+blastocysts.">Multicenter prospective study of concordance between embryonic cell-free DNA and trophectoderm biopsies from 1301 human blastocysts.</a> American Journal of Obstetrics and Gynecology. 223 (5), 751-751 (2020).</li><li>Rubio, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+cell-free+DNA+versus+trophectoderm+biopsy+for+aneuploidy+testing:+concordance+rate+and+clinical+implications.">Embryonic cell-free DNA versus trophectoderm biopsy for aneuploidy testing: concordance rate and clinical implications.</a> Fertility and Sterility. 112 (3), 510-519 (2019).</li><li>Lledo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistent+results+of+non-invasive+PGT-A+of+human+embryos+using+two+different+techniques+for+chromosomal+analysis.">Consistent results of non-invasive PGT-A of human embryos using two different techniques for chromosomal analysis.</a> Reproductive BioMedicine Online. 42 (3), 555-563 (2021).</li><li>Kuznyetsov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+Invasive+Cell-Free+Human+Embryo+Aneuploidy+Testing+(miPGT-A)+Utilizing+Combined+Spent+Embryo+Culture+Medium+and+Blastocoel+Fluid+-Towards+Development+of+a+Clinical+Assay.">Minimally Invasive Cell-Free Human Embryo Aneuploidy Testing (miPGT-A) Utilizing Combined Spent Embryo Culture Medium and Blastocoel Fluid -Towards Development of a Clinical Assay.</a> Scientific Reports. 10 (1), 7244 (2020).</li></ol>

Modifikationen und Fehlerbehebung
Wenn die NICS-Ergebnisse mit elterlichem genetischen Material verunreinigt sind, stellen Sie sicher, dass alle Cumulus-Corona-Radiata-Zellen entfernt werden und stellen Sie sicher, dass eine ICSI zur Befruchtung durchgeführt wird. Unsachgemäße Medienlagerung oder Template-Vorbereitungsprozesse werden vermieden, die die DNA abbauen können. Der Arbeitsraum wurde gründlich mit DNase- und RNase-Dekontaminationsreagenzien gereinigt. Um eine Ko...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62619">Chromosome Screening of Human Preimplantation Embryos by Using Spent Culture Medium: Sample Collection and Chromosomal Ploidy Analysis</a>. The Protocol and Representaive Results sections were&#160;updated.
In the Protocol, step 3.8.2 was updated from:
After logging into the system, click Create Submission under the NICS tab. Then, select the sequencing platform, choose ChromInst for the reagent, enter the project information in the box under Project ID, set the analysis preferences and upload the files. Once all sequencing files are successfully uploaded, click Submit to start the analysis (Figure 3A).
to:
After logging into the system, click Create Submission under the NICS-A tab. Then, choose NGS for the platform, select corporation, choose ChromInst for the reagent, enter the project information in the box under Project ID, set the analysis preferences and upload the files. Once all sequencing files are successfully uploaded, click Submit to start the analysis (Figure 3A).
In the Representative Results, Figure 3 was updated from:
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62619/62619fig03.jpg" /> 
Figure 3. Data Analysis. (A) The page of Create Submission. There are different options for the user application. For sequencing platform, users can choose Illumina or Ion Torrent. For analysis criterion, there are two length detection resolution for selection, the whole chromosome and whole arm level. The users also can choose whether the mosaicism or gender information is reported. Finished the above parameter setting,click on the box under File upload and choose the appropriate sequencing files to upload. For Illumina, choose the files with an extension of fastq.gz. For Ion Torrent platform, choose files with an extension of bam. Click Submit to start the analysis after successfully upload. (B) The view of summary table. The summary table consists of following information: Sample Name: The name of each NICS sample is listed; Data QC: Indicates whether the sequencing file passes the QC for NICS analysis; Conclusion: Indicates whether the NICS analysis is normal or abnormal, &#34;N/A&#34; indicates no conclusive result is available; Gender: If the user chooses to report the sex information, this column will appear in the summary table; Karyotype: Shows the analysis results; CNV plot (Whole Genome): View the CNV profiles of all chromosomes; CNV plot (By Chromosome): View the CNV profiles of each chromosome. (C) The Save Report Page. Click Export report button next to the Summary of Results. Select the information you want to show on the final report and click Export. Select Save File in the appearing dialog window and then click OK. The reports will be saved to the Download folder of the computer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62619/62619fig03large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62619/62619fig3v2.jpg" /> 
Figure 3. Data Analysis. (A) There are different options for the user application. For sequencing platform corporation, users can choose Illumina, Ion Torrent or MGI. The users can choose whether the gender information is reported. Finished the above parameter setting, click on the box under File upload and choose the appropriate sequencing files to upload. For Illumina, choose the files with an extension of fastq.gz. Click Submit&#160;to start the analysis after successfully upload. (B) The view of summary table. The summary table consists of following information: Sample Name: The name of each NICS sample is listed; Data QC: Indicates whether the sequencing file passes the QC for NICS analysis; AI Rating: The rating (A, B or C) for each NICS sample; AI_Rating Interpretation: Evaluation of embryo implantation potential; AI Grading: The score for each NICS sample; CNV plot (Whole Genome): View the CNV profiles of all chromosomes; (C) The Save Report Page. Click Export report&#160;button next to the Summary of Results. Select the information you want to show on the final report and click Export. The reports will be saved to the Download&#160;folder of your computer. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62619/62619fig3v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62619">Chromosome Screening of Human Preimplantation Embryos by Using Spent Culture Medium: Sample Collection and Chromosomal Ploidy Analysis</a>. The Protocol and Representaive Results sections were&#160;updated.

Erratum: Chromosome Screening of Human Preimplantation Embryos by Using Spent Culture Medium: Sample Collection and Chromosomal Ploidy Analysis

Assistierte Reproduktionstechnologien (ARTs) werden zunehmend zur Behandlung von Unfruchtbarkeit eingesetzt. Die Erfolgsrate von ART, wie z. B. IVF, ist jedoch begrenzt, und die Rate der Fehlgeburten ist deutlich höher als die der Normalbevölkerung1. Die Hauptursache für diese Probleme sind Chromosomenanomalien, die häufig bei menschlichen Präimplantationsembryonen auftreten2. PGT-A ist eine wirksame Methode zum Screening von Embryonen auf Chromosomengleichgewicht vor der Implantation 3,4. Einige Studien haben bewiesen, dass PGT-A die Abtreibungsrate senken und die Schwangerschaftsrate verbessern kann 5,6,7,8. PGT-A erfordert jedoch komplexes technisches Fachwissen, das eine spezifische Ausbildung und Erfahrung erfordert. Die invasive Embryonenbiopsie kann auch zu einer Schädigung der Embryonen führen9. Studien haben gezeigt, dass die Blastomerbiopsie die spätere Entwicklung behindern kann und die Anzahl der biopsierten TEs die Implantationsraten beeinflussen kann10. Obwohl das Problem der langfristigen biologischen Sicherheit der Embryonenbiopsie beim Menschen noch nicht gründlich untersucht wurde, haben Tierstudien gezeigt, dass sie negative Auswirkungen auf die Embryonalentwicklung hat11,12,13.
Frühere Berichte deuteten darauf hin, dass während der Embryonalentwicklung Spuren von DNA-Material in das Kulturmedium abgesondert wurden, und es wurden Anstrengungen unternommen, ein umfassendes Chromosomen-Screening (CCS) mit verbrauchtem Embryokulturmedium durchzuführen 14,15,16,17,18. Die Nachweisraten und die Genauigkeit der Tests haben jedoch nicht die Anforderungen für einen umfassenden klinischen Einsatz erfüllt. Die vorliegende Studie berichtete über eine Verbesserung des NICS-Assays zur Erhöhung der Detektionsraten sowie der Genauigkeit des NICS-Tests19. In den letzten Jahren wurde Blastocoele-Flüssigkeit (BF) als analytische Probe der minimalinvasiven PGT-A untersucht. Der Anteil der erfolgreichen genomweiten Amplifikation und der nachweisbaren DNA in Blastozystenflüssigkeitsproben liegt jedoch zwischen 34,8 % und 82 %20,21,22. Das in verschiedenen Studien berichtete BF-Volumen reicht von 0,3 nL bis 1 μL. Angesichts der geringen Menge an DNA in BF ist es möglich, die Menge an zellfreier DNA durch Mischen von Blastozystenflüssigkeit und Kulturmedium zu erhöhen, um die Erfolgsrate und Konsistenz des Nachweises zu verbessern. Kuznyetsov et al.23 und Li et al.24 behandelten die Zona pellucida mit einem Laser und setzten Blastozystenflüssigkeit in das Kulturmedium frei, um die Gesamtmenge der embryonalen DNA zu verbessern, und die Amplifikationsrate der kombinierten Medium/BF-Proben nach WGA betrug 100 % bzw. 97,5 %. Jiao et al.25 erhielten mit der gleichen Methode ebenfalls eine 100%ige Amplifikationserfolgsrate.
Die vorliegende Studie berichtet über ein detailliertes Protokoll, das die Probenvorbereitung für verbrauchte Medien, die NGS-Vorbereitung und die Datenanalyse umfasst. Durch die sorgfältige Entfernung von Kumuluszellen aus den Eizellen wurden in der vorliegenden Studie intrazytoplasmatische Einzelspermieninjektionen (ICSI) und Blastozystenkulturen durchgeführt. Das verbrauchte Medium an Tag 4 Tag 5/Tag 6 wurde für die Vorbereitung der WGA- und NGS-Bibliothek gesammelt. Durch den Einsatz der NICS-Technologie konnte die vorliegende Studie die Vorbereitungsschritte der WGA- und NGS-Bibliothek in ca. 3 h rationalisieren und die nicht-invasiven CCS-Ergebnisse in ca. 9 h erhalten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL EP tube, 0.2 mL PCR tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C, PCR-02-C</td>
			<td>DNase/RNase free, Low Binding PCR tubes and 1.5 mL micro-centrifuge tubes are recommended.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L, 200 &#181;L, 1000 &#181;L DNase /RNase Free Tips</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>T-300-R-S, T-200-Y-R-S, T-1000-B-R-S</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For sample transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 % ethanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical</td>
			<td>10009218</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For DNA library purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barcode Primer1-48</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>For library amplificaton</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Falcon Organ Culture Dish, Sterile</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>363037</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Falcon Tissue culture Dishes (Easy Grip) , Sterile</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>353001</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Falcon Tissue culture Dishes, Sterile</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>353002</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Lysis Buffer</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>For culture medium pre-treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Lysis Enzyme</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>For culture medium pre-treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChromGo software</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td></td>
			<td>Data analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMPure Magbeads</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>For library purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotop open systerm</td>
			<td>&#160;KITAZATO BioPharma</td>
			<td>81110</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distill water</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>To dissolve DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ES (Vitrification kit)</td>
			<td>&#160;KITAZATO BioPharma</td>
			<td>Reagent inVitrification kit</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HOLDNIG</td>
			<td>ORIGIO</td>
			<td>MPH-MED-35</td>
			<td>This can be replaced by other 
			brand/For ICSI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase solution, 80 U/mL</td>
			<td>SAGE</td>
			<td>ART4007-A</td>
			<td>This can be replaced by other brand/Digest oocyte-corona-cumulus complex</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICSI</td>
			<td>ORIGIO</td>
			<td>MPH-35-35</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For ICSI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illumina MiSeq&#174; System</td>
			<td>Illumina</td>
			<td>SY-410-1001</td>
			<td>For library sequencing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Labotect</td>
			<td>Inkubator C16</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Library buffer</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>For library amplificaton</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Library Enzyme Mix</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>For library amplificaton</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Stand</td>
			<td>DynaMagTM-2</td>
			<td>12321D</td>
			<td>For library purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>1X71</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo observation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-centrifuge</td>
			<td>ESSENSCIEN</td>
			<td>ELF6</td>
			<td>For separation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MT Enzyme Mix</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>For culture medium pre-treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NICSInst library preparation kit</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>KT1000800324</td>
			<td>Whole genome amplification and library construction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NICSInst Sample Prep Station</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>&#160;ME1001003</td>
			<td>Amplificate DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc IVF 4-Well Dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>144444</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo washing and blastocyst culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur Pipette</td>
			<td>Oirgio</td>
			<td>&#160;MXL3-IND-135</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo tansfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>ORIGIO</td>
			<td>PP-9-1000</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For IVF laboratory</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-Lib Buffer</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>Pre-library preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pre-Lib Enzyme</td>
			<td>Yikon Genomics</td>
			<td>Reagent in NICSInst library preparation kit</td>
			<td>Pre-library preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit&#174; 3.0 Fluorometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Q33216</td>
			<td>For library quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#39;s Advantage Blastocyst Medium</td>
			<td>SAGE</td>
			<td>ART-1029</td>
			<td>For embryo blastocyst stage culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#39;s Advantage Cleavage Medium</td>
			<td>SAGE</td>
			<td>ART-1026</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo cleavage stage culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#39;s Advantage Fertilization Medium</td>
			<td>SAGE</td>
			<td>ART-1020</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For oocyte and sperm fertilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#39;s Advantage m-HTF Medium with HEPES</td>
			<td>SAGE</td>
			<td>ART-1023</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo clutrure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#39;s Advantage SPS Serum protein Substitute Kit</td>
			<td>SAGE</td>
			<td>ART-3010</td>
			<td>This can be replaced by other brand/To denude the oocyte</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quinn&#39;s Advantage Tissue culture mineral oil</td>
			<td>SAGE</td>
			<td>ART-4008P</td>
			<td>This can be replaced by other brand/To cover the culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STRIPPER TIPS</td>
			<td>ORIGIO</td>
			<td>MXL3-IND-135</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For denudating granulosa cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Cryotop Open systerm</td>
			<td>KIZTAZATO</td>
			<td>81111</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification kit</td>
			<td>&#160;KITAZATO BioPharma</td>
			<td>VT101</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>Qilinbeier</td>
			<td>DNYS8</td>
			<td>Sample mix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VS (Vitrification kit)</td>
			<td>&#160;KITAZATO BioPharma</td>
			<td>Reagent inVitrification kit</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For embryo vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZILOS-tk Laser System</td>
			<td>Hamilton Thorne</td>
			<td>CLASS 1 laser</td>
			<td>This can be replaced by other brand/For artificial blastocoele collapse</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

chromosome screening of human preimplantation embryos by using spent culture medium: sample collection and chromosomal ploidy analysis

Bei der klinischen In-vitro-Fertilisation (IVF) erfordert die vorherrschende Methode für PGT-A die Biopsie einiger Zellen aus dem Trophektoderm (TE). Dies ist die Abstammungslinie, die die Plazenta bildet. Diese Methode erfordert jedoch spezielle Fähigkeiten, ist invasiv und leidet unter falsch-positiven und negativen Ergebnissen, da die Chromosomenzahlen im TE und die innere Zellmasse (ICM), die sich zum Fötus entwickelt, nicht immer gleich sind. NICS, eine Technologie, die die Sequenzierung von DNA erfordert, die sowohl von TE als auch von ICM in das Nährmedium freigesetzt wird, könnte einen Ausweg aus diesen Problemen bieten, hat sich aber bisher als begrenzt wirksam erwiesen. Die vorliegende Studie berichtet über das vollständige NICS-Protokoll, das Methoden zur Probenahme von Nährmedien, zur Amplifikation des gesamten Genoms (WGA) und zur Bibliotheksvorbereitung sowie zur NGS-Datenanalyse durch Analysesoftware umfasst. In Anbetracht der unterschiedlichen Kryokonservierungszeiten in verschiedenen Embryonenlabors stehen den Embryologen zwei Methoden zur Entnahme des Embryokulturmediums zur Verfügung, die je nach den tatsächlichen Bedingungen des IVF-Labors ausgewählt werden können.

In der vorliegenden Studie wurde die vorgeschlagene Methode auf einen Patienten angewendet. Die IRB-Genehmigung und die Einwilligung nach Aufklärung wurden vor der Anwendung der NICS-Analyse eingeholt. In der vorliegenden Studie wurden 6 Blastozysten von Patientinnen entnommen und NICS an allen 6 Embryonen an Tag 4 bis Tag 5 durchgeführt. Chromosomenanomalien, die durch die balancierte Translokation der Eltern verursacht wurden, wurden in fünf Chromosomen mit dem NICS-Assay nachgewiesen; daher konnten sie nicht für d...

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Chromosome Screening of Human Preimplantation Embryos by Using Spent Culture Medium: Sample Collection and Chromosomal Ploidy Analysis

Die vorliegende Studie berichtet über ein Protokoll für das Chromosomen-Screening menschlicher Embryonen, das verbrauchtes Kulturmedium verwendet, das eine Embryonenbiopsie vermeidet und die Identifizierung der Chromosomenploidie mittels NGS ermöglicht. Der vorliegende Artikel stellt das detaillierte Verfahren vor, einschließlich der Herstellung des Nährmediums, der Amplifikation des gesamten Genoms (WGA), der Vorbereitung der Next-Generation-Sequencing-Bibliothek (NGS) und der Datenanalyse.

Chromosomen-Screening von humanen Präimplantationsembryonen unter Verwendung von verbrauchtem Kulturmedium: Probenentnahme und Chromosomenploidie-Analyse

In clinical in vitro fertilization (IVF), the prevailing method for PGT-A requires biopsy of a few cells from the trophectoderm (TE). This is the lineage ...

Das Protokoll besteht darin, die Sammlung des Kulturmediums und die chromosomale Ploidieanalyse auf der Grundlage nicht-invasiver Chromosomen-Screening-NICS von menschlichen Präimplantationsembryonen zu normalisieren. Der Hauptvorteil von NICS ist die einfache Bedienung anstelle der TiDieR-Mikromanipulation, die Zeitersparnis und die effektive Reduzierung des Verlusts invasiver Biopsieproben. Die Probenahmemethode ist sehr flexibel.Hier bieten wir Ihnen zwei verschiedene Optionen an, eine für die routinemäßige sequentielle Embryonenkultur und eine andere für einen Schritt. Dies sind die Hauptkollegen unseres Teams, Dr. Yaxin Yao und Dr. Xiaohui Zhu, die hauptsächlich für die Bibliotheksvorbereitung und die NICS-Regenerationssequenzierung verantwortlich sind. Dr. Jialin Jia und ich führen die embryologische Arbeit und die Probenentnahme durch.Professor Liu ist der Leiter unserer Gruppe. Sie ist auch die korrespondierende Autorin dieses Artikels. Bereiten Sie zunächst die Reagenzien und Werkzeuge vor.Vor Gebrauch 20 bis 30 Mikroliter Nährmedium und Hyaluronidase vorwärmen und ausgleichen. Geben Sie dann das Nährmedium und die Hyaluronidase auf eine Arbeitsfläche in einem Abzug. Überführen Sie die verdauten OCCCs schnell in die Kulturschale für die Handhabung der Eizellen und bedecken Sie sie in jeder Vertiefung mit Mineralöl.Saugen Sie die Eizellen sanft fünf bis 10 Mal ab und lassen Sie sie frei, um die verbleibenden Granulosazellen um die Eizellen herum zu entfernen. Wiederholen Sie diesen Schritt in den verbleibenden drei Vertiefungen, um die Granulosazellen vollständig zu entfernen. Beurteilen Sie die Vollständigkeit der Entfernung von Granulosazellen mit einem Mikroskop.Dann führen Sie eine intrazytoplasmatische Spermieninjektion, auch ICSI genannt, durch und übertragen den Embryo auf das Kulturmedium. Bereiten Sie für jeden Embryo 20 bis 30 Mikroliter Mikrotröpfchen des Blastozystenkulturmediums vor. Am zweiten Tag werden die Embryonen in einer Gewebekulturschale mit Mineralöl bedeckt und bei 37 Grad Celsius, 5 % Kohlendioxid und 5 % Sauerstoff inkubiert.Nachdem Sie den Embryo am dritten Tag in das Waschmikrotröpfchen übertragen haben, saugen Sie den Embryo vorsichtig ab und geben Sie ihn in den drei Tröpfchen nacheinander mit den Pipetten in den drei Tröpfchen frei. Anschließend wird der Embryo in das Blastozystenkulturmedium übertragen. Bereiten Sie die Waschmikrotröpfchen vor und kultivieren Sie die Mikrotröpfchen.Am Nachmittag des vierten Tages wird der Embryo in vorgewärmte Mikrotröpfchen des Nährmediums überführt und jeder Embryo mit den Pipetten sanft nacheinander in drei Mikrotröpfchen gewaschen. Jeder Embryo wird zur Probenentnahme in ein einzigartiges, vorgewärmtes einzelnes Mikrotröpfchen Kulturmedium übertragen. Kultivieren Sie den Blastozystenembryo vor der Kryokonservierung.Um die Vitrifikation vor der Kryokonservierung des Embryos durchzuführen, bereiten Sie die Mikrotröpfchen der Kultur vor und überführen Sie den Embryo in vorgewärmte Mikrotröpfchen von 10 bis 15 Mikrolitern Kulturmedium. Und waschen Sie jeden Embryo sanft nacheinander in drei Mikrotröpfchen, indem Sie am Morgen des fünften Tages pipettieren. Wie bereits gezeigt, wird jeder Embryo zur Probenentnahme in ein einzigartiges, vorgewärmtes einzelnes Mikrotröpfchen des Kulturmediums übertragen.Und kultivieren Sie den Blastozystenembryo bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid vor der Kryokonservierung. Als nächstes stellen Sie das ICM vorsichtig in einem beträchtlichen Abstand vom Zielpunkt des Laserstrahls ein, der sich auf die Zellverbindung des Trophektoderms konzentriert, um ein kleines Loch im Trophektoderm zu erzeugen, um die Flüssigkeit aus dem Blastocoel-Hohlraum freizusetzen. Um die Probe zu sammeln, tauen Sie den Puffer im Kit bei Raumtemperatur auf und zentrifugieren Sie ihn kurz.Anschließend wird das Kulturmedium von jedem kultivierten Embryo in ein RNase-DNase-freies PCR-Röhrchen überführt, das fünf Mikroliter des Zelllysepuffers enthält. Bereiten Sie die Reagenzien und Werkzeuge vor. Nach der Quantifizierung der genomischen DNA wird sie mit dem Kulturmedium auf eine Konzentration von 50 Pikogramm pro Mikroliter verdünnt.Nach gründlichem Mischen wird das Röhrchen fünf Sekunden lang kurz bei 200 G zentrifugiert. Nach dem Zentrifugieren des Nährmediums in einer Mikrozentrifuge für 30 bis 60 Sekunden werden 10 Mikroliter Kulturmedium vom Boden des Röhrchens mit verdünnter Positivkontrolle und frischem Nährmedium in ein neues 0,2-Milliliter-PCR-Röhrchen pipettiert. Fügen Sie einen Mikroliter MT-Enzymmischung hinzu und mischen Sie sie gründlich durch Pipettieren.Dann sofort für zwei bis drei Sekunden zentrifugieren. Legen Sie das PCR-Röhrchen in eine vorgeheizte Vorbereitungsstation für gemischte Proben und führen Sie das Lyseprogramm durch. Sobald der Pre-Lib-Puffer aufgetaut und gemischt ist, zentrifugieren Sie ihn sofort für zwei bis drei Sekunden bei 200 G. Bereiten Sie einen Mastermix für die Pre-Library-Reaktion vor, indem Sie zwei Mikroliter Pre-Library-Enzymmischung zu 60 Mikrolitern Pre-Library-Puffer hinzufügen.Die Reaktion gründlich mischen und kurz zentrifugieren. Geben Sie 60 Mikroliter Reaktionsmischung aus der Vorbibliothek in die vorbehandelte Mediumprobe. Nach gründlichem Mischen durch Pipettieren sofort zwei bis drei Sekunden bei 200 G zentrifugieren.Stellen Sie das PCR-Röhrchen in die vorgewärmte Probenvorbereitungsstation.Führen Sie das Pre-Library-Programm aus und halten Sie es bei vier Grad Celsius. Bereiten Sie eine Mastermischung für die Bibliotheksreaktion vor, indem Sie 1,6 Mikroliter Bibliotheksenzymmischung zu 60 Mikrolitern Bibliothekspuffer hinzufügen. Mischen Sie die Reaktion gründlich und zentrifugieren Sie sie wie zuvor gezeigt.Geben Sie 60 Mikroliter der Bibliotheksreaktionsmischung und zwei Mikroliter des Barcode-Primers zu jedem Vorbibliotheksprodukt. Dann wird die Reaktion gründlich gemischt und wie gezeigt zentrifugiert. Legen Sie das PCR-Röhrchen nach der Zentrifugation in den Thermocycler.Führen Sie das Bibliotheksvorbereitungsprogramm aus und halten Sie es dann bei vier Grad Celsius. Bereiten Sie die Reagenzien und Werkzeuge vor. Fügen Sie die vorbereiteten 1X präparierten Megaperlen zum Bibliotheksbeispiel hinzu.Quantifizieren Sie die gereinigten Bibliotheken, wie im Textmanuskript beschrieben, und verwenden Sie 10 Nanogramm jeder Bibliotheksprobe für das Pooling. Lesen Sie das Benutzerhandbuch für die Sequenzierung und führen Sie nach Abschluss der Sequenzierung eine Datenanalyse durch. Geben Sie den Namen und das Passwort des Benutzers auf der Anmeldeseite für die Datenanalyse in ChromGo ein.Sobald Sie angemeldet sind, klicken Sie auf der Registerkarte "NICS" auf "Übermittlung erstellen". Wählen Sie dann NGS für die Plattform, Illumina für Corporation und NICSInst für das Reagenz. Geben Sie die Projektinformationen in das Feld unter Projekt-ID ein.Legen Sie die Analyseeinstellungen fest und laden Sie die Dateien hoch.Sobald alle Sequenzierungsdateien erfolgreich hochgeladen wurden, klicken Sie auf Senden, um die Analyse zu starten. Die eingereichten Projekte werden auf der Registerkarte "Einreichungen anzeigen" aufgelistet. Klicken Sie im Feld Bericht auf die Schaltfläche Anzeigen, um die Übersichtstabelle der NICS-Analyse anzuzeigen.Klicken Sie auf die Schaltfläche Bericht exportieren, um die Berichte zu speichern. Sechs Blastozysten wurden von den Patientinnen entnommen und NICS wurde an allen sechs Embryonen vom vierten bis zum fünften Tag durchgeführt. Die Chromosomenanomalien, die durch die balancierte Translokation der Eltern verursacht wurden, wurden in fünf der Chromosomen mit dem NICS-Assay nachgewiesen und daher nicht für den Transfer verwendet.Die NICS-Ergebnisse der beiden Embryonen zeigten, dass der gleiche Karyotyp 45 XN und die Chromosom-18-Deletion beide Chromosom-18-Deletionen waren. Der kurze Arm des Karyotyps 46 XN der Deletion der Chromosomenregion war nur der kurze Arm der Deletion der Chromosomenregion. Die NICS-Ergebnisse zeigten den Karyotyp 46 XN mit dem langen Arm der Chromosom-18-Regionendeletion und dem kurzen Arm der Duplikation der Chromosom-18-Region.Obwohl es sich bei den Karyotypen um Chromosomen-5-Duplikationen handelte und acht Mosaikunterschiede aufwiesen, konnte der NICS-Assay alle 24 Chromosomen auf Aneuploidie untersuchen. Dieses Verfahren bietet eine neue Methode zur Übertragung einzelner Blastozysten des normalen Karyotyps. Bei diesem Verfahren ist es wichtig, daran zu denken, die kumulären Zellen vollständig zu entfernen, um die Kontamination mütterlichen Ursprungs zu vermeiden, und das Kulturmedium und das Blastozystenstadium zu sammeln, wenn der DNA-Gehalt für die Amplifikation ausreicht.Durch den Einsatz der NICS-Technologie rationalisierte die vorliegende Studie die Vorbereitungsschritte der WGA- und WGS-Bibliothek in etwa drei Stunden und das nicht-invasive CCS-Ergebnis in etwa neun Stunden. Nach ihrer Entwicklung bot die Technik dem Kliniker in der ART eine neuartige Möglichkeit, die morphologische Beurteilung mit NICS zu kombinieren, um aploiden Embryo mit guter Morphologie in die Gebärmutter zu übertragen, was die laufenden Schwangerschaftsraten und Lebendgeburtenraten verbessern könnte.

Research

JoVE Journal

Genetics

Analysis of the Ambient Particulate Matter-induced Chromosomal Aberrations Using an In Vitro System

Analysis of the Ambient Particulate Matter-induced Chromosomal Aberrations Using an In Vitro System

Die Analyse der Feinstaub in der Luft-induzierte Chromosomenaberrationen Mit Hilfe eines<em&gt; In Vitro</em&gt; System

Exposure to particulate matter (PM) is a major world health concern, which may damage various cellular components, including the nuclear genetic material. ...

Forschung

Genetik

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization (mFISH) and Spectral Karyotyping (SKY) in Irradiated Mice

Detection of Inter-chromosomal Stable Aberrations by Multiple Fluorescence In Situ Hybridization mFISH and Spectral Karyotyping SKY in Irradiated Mice

Der Nachweis von Inter-chromosomale Stable Abberationen durch Mehrfachfluoreszenz<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisierung (MFISH) und Spektrale Karyotypisierung (SKY) in Bestrahlte Mäuse

Ionizing radiation (IR) induces numerous stable and unstable chromosomal aberrations. Unstable aberrations, where chromosome morphology is substantially ...

Determination of the Optimal Chromosomal Location(s) for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

Determination of the Optimal Chromosomal Locations for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

Bestimmung der optimalen chromosomalen Speicherorte für eine DNA-Element in Escherichia coli mit einem neuartigen Transposon-vermittelte Ansatz

The optimal chromosomal position(s) of a given DNA element was/were determined by transposon-mediated random insertion followed by fitness selection. In ...

Sample Preparation and Analysis of RNASeq-based Gene Expression Data from Zebrafish

Probenvorbereitung und Analyse der RNASeq-basierte Genexpressionsdaten von Zebrafisch

The analysis of global gene expression changes is a valuable tool for identifying novel pathways underlying observed phenotypes. The zebrafish is an ...

Expedited Radiation Biodosimetry by Automated Dicentric Chromosome Identification (ADCI) and Dose Estimation

Expedited Radiation Biodosimetry by Automated Dicentric Chromosome Identification ADCI and Dose Estimation

Beschleunigten Strahlung Biodosimetry automatisiert durch dizentrische Chromosom Identifikation (ADCI) und Abschätzung der Dosis

Biological radiation dose can be estimated from dicentric chromosome frequencies in metaphase cells. Performing these cytogenetic dicentric chromosome ...

Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans

Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans

Manipulation der Diploidie in Caenorhabditis elegans

Mechanisms that involve whole genome polyploidy play important roles in development and evolution; also, an abnormal generation of tetraploid cells has ...

Semiconductor Sequencing for Preimplantation Genetic Testing for Aneuploidy

Halbleitersequenzierung für Präimplantationsgenetische Tests für Aneuploidie

Chromosomal aneuploidy, one of the main causes leading to embryonic development arrest, implantation failure, or pregnancy loss, has been well documented ...

Microsatellite DNA Genotyping and Flow Cytometry Ploidy Analyses of Formalin-fixed Paraffin-embedded Hydatidiform Molar Tissues

Mikrosatelliten-DNA-Genotypisierung und Durchflusszytometrie-Ploidy-Analysen von formalinfixierten Paraffin-eingebetteten Hydatidiform-Molargeweben

Hydatidiform mole (HM) is an abnormal human pregnancy characterized by excessive trophoblastic proliferation and abnormal embryonic development. There are ...

Characterization of In Vitro Differentiation of Human Primary Keratinocytes by RNA-Seq Analysis

Charakterisierung der In-Vitro-Differenzierung menschlicher Primärkeratinozyten durch RNA-Seq-Analyse

Human primary keratinocytes are often used as in vitro models for studies on epidermal differentiation and related diseases. Methods have been reported ...

Identification of Enhancer-Promoter Contacts in Embryoid Bodies by Quantitative Chromosome Conformation Capture (4C)

Identification of Enhancer-Promoter Contacts in Embryoid Bodies by Quantitative Chromosome Conformation Capture 4C

Identifizierung von Enhancer-Promoter-Kontakten in embryoiden Körpern durch quantitative Chromosomenkonformationserfassung (4C)

During mammalian development, cell fates are determined through the establishment of regulatory networks that define the specificity, timing, and spatial ...