Name: an automated microscopic scoring method for the &#947;-h2ax foci assay in human peripheral blood lymphocytes
Uploaded: 2021-12-25T14:00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Automated Microscopic Scoring Method for the ÃŽÂ³-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить участников исследования за сдачу крови, а также медсестру В. Принс за сбор образцов крови. Настоящим признается финансовая помощь Южноафриканского национального исследовательского фонда (NRF) в проведении этого исследования. Высказанные мнения и сделанные выводы являются мнениями авторов и не обязательно должны приписываться СРН. Эта работа была финансово поддержана Международным агентством по атомной энергии (МАГАТЭ) в рамках проекта технического сотрудничества (номер: URU6042) для поддержки В. Мартинеса-Лопеса, а также скоординированного исследовательского проекта E35010 (номер контракта: 22248).

С. Шунк является сотрудником компании MetaSystems Hard & Software GmbH, Альтлуссхайм, Германия.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin - BSA</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A3059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin Jar</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Slips (Size 24 x 50 mm)</td>
			<td>Lasec</td>
			<td>Glass2C29M2450Rec</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic Vials (1.2 mL)</td>
			<td>WhiteSci</td>
			<td>607101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin</td>
			<td>Healthcare Technologies</td>
			<td>JC370-12-L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin Clips</td>
			<td>Healthcare Technologies</td>
			<td>JC302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin filter cards</td>
			<td>Healthcare Technologies</td>
			<td>JC307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin Funnels</td>
			<td>Healthcare Technologies</td>
			<td>JC372</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAM-TRITC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A16022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI-Fluroshield</td>
			<td>Sigma/Merck</td>
			<td>F6057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Kimix</td>
			<td>ETD901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter tips</td>
			<td>WhiteSci</td>
			<td>&#160;200ul (312012) and 1000ul (313012)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid- HCl</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histopaque</td>
			<td>Sigma/Merck</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lithium&#8211;heparin collection tubes</td>
			<td>The Scientific Group</td>
			<td>367526</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaSystems - Metafer</td>
			<td>Metasystems</td>
			<td>Azio Imager Z2: 195-041848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Merck</td>
			<td>221465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NovoPen</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>NCL-PEN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma/Merck</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline Tablets</td>
			<td>Separations</td>
			<td>SH30028,02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes</td>
			<td>WhiteSci</td>
			<td>P11037 and P1033</td>
			<td>X-tra Clipped Corner Slides are clipped at 45&#176; angles to help reduce glass breakage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified anti-H2A.X Phospho (Ser139) Antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>613402 / 100 &#956;g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium</td>
			<td>WhiteSci</td>
			<td>BE12-702F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 (Octoxinol 9)</td>
			<td>Sigma/Merck</td>
			<td>T-9284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubes (15ml)</td>
			<td>WhiteSci</td>
			<td>601002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Tra adhesive slides &#8211; corner clipped</td>
			<td>SMM Technologies</td>
			<td>3800200E</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an automated microscopic scoring method for the &#947;-h2ax foci assay in human peripheral blood lymphocytes

Ионизирующее излучение является мощным индуктором повреждения ДНК и хорошо документированным канцерогеном. Биологическая дозиметрия включает в себя обнаружение биологических эффектов, вызванных воздействием ионизирующего излучения, для проведения индивидуальной оценки дозы. Это актуально в рамках чрезвычайных ситуаций, связанных с радиацией, где критически важное значение имеют оценки состояния здоровья и планирование клинического лечения пострадавших, подвергшихся воздействию. Поскольку двухцепочечные разрывы ДНК (DSB) считаются наиболее смертельной формой радиационно-индуцированного повреждения ДНК, этот протокол представляет собой метод обнаружения ДНК DSB в образцах крови. Методология основана на обнаружении флуоресцентного меченого фосфорилированного белка репарации ДНК, а именно γ-H2AX. Использование автоматизированной платформы микроскопии для оценки количества γ-H2AX очагов на ячейку позволяет проводить стандартизированный анализ со значительным уменьшением времени обработки. Таким образом, анализ γ-H2AX может стать одним из самых быстрых и чувствительных анализов для биологической дозиметрии. В этом протоколе образцы цельной крови здоровых взрослых добровольцев будут обработаны и облучены in vitro, чтобы проиллюстрировать использование автоматизированного и чувствительного анализа очагов γ-H2AX для применения в биодозиметрии. Используется автоматизированная система сканирования слайдов и платформа анализа со встроенным флуоресцентным микроскопом, что позволяет быстро и автоматически оценивать ДНК DSB с уменьшенной степенью смещения.

Для этого протокола мононуклеарные клетки периферической крови человека (PMBC) были выделены из цельной крови четырех здоровых взрослых добровольцев и подвергались воздействию доз радиации 0,125, 0,250, 0,500, 1000 и 2000 Гр. После этого образцы инкубировали в течение 1 часа при 37 °C в увлажненном 5% CO2 инкубаторе. После фиксации и иммунофлуоресцентного окрашивания слайды автоматически сканируются и оцениваются. Рисунки 6,7 и 8 дают представление о том, что программное обеспечение выводит пользователю. После завершения сканирования появляется окно анализа, дающее обзор оцененных очагов. Галерея дает все фокусы, оцененные с помощью интерактивного меню, которое может удалять выбросы и, наконец, дается гистограмма с подробной сводкой данных.
Выход γ-H2AX после воздействия γ-лучей представлен на фиг.9. Наблюдалось постепенное увеличение количества очагов γ-H2AX с увеличением дозы. Этот график не только иллюстрирует дозовую зависимость и чувствительность анализа, но и может быть использован для оценки дозы, когда образец получен от человека, который подвергся воздействию неизвестной дозы. Важно отметить, что у этого человека не будет фиктивного облученного контроля или фоновых очагов. Таким образом, рисунок 9 включает значение 0 Гр контрольных образцов с фиктарным облучением, которое составило 0,57 ± 0,23 Гр для четырех взрослых доноров в этом исследовании.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62623/62623fig01.jpg"> Рисунок 1: Подготовка слайдов для цитоцентрифугирования. Поместите слайд в держатель зажима, добавьте поверх него карту фильтра и, наконец, воронку. Закрепите зажимы для слайдов и поместите в цитоцентрифугу. После цитоцентрифугирования снимите слайд с держателя зажима и нарисуйте круг вокруг пятна с помощью клеток с помощью гидрофобной ручки. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62623/62623fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62623/62623fig02.jpg"> Рисунок 2: Автоматизированная сканирующая платформа, которая использовалась в этом протоколе, содержащая автоматический сканер, прикрепленный к флуоресцентному микроскопу. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62623/62623fig02large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62623/62623fig03.jpg"> Рисунок 3:Меню для настройки слайдов. Откройте диалоговое окно, нажав кнопку SETUP на боковой панели. Выберите или введите целевой каталог для результирующих файлов <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62623/62623fig03large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62623/62623fig04.jpg"> Рисунок 4:Меню настройки классификатора. Убедитесь, что выбранные параметры классификатора соответствуют текущему типу ячейки, условиям подготовки и шаблонам окрашивания образца. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62623/62623fig04large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62623/62623fig05.jpg"> Рисунок 5:Меню настройки для окна ручного поиска. Окно было выбрано при настройке слайда; откроется диалог, позволяющий определить область сканирования. С помощью цели 10x прямоугольная область поиска на слайде выбирается в интерактивном режиме путем фиксации двух углов поля поиска щелчком мыши левой кнопкой мыши. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62623/62623fig05large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62623/62623fig06.jpg"> Рисунок 6:Окно анализа, после завершения сканирования в окне анализа отображаются результаты сканирования. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62623/62623fig06large.jpg" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62623/62623fig07.jpg"> Рисунок 7:Вид галереи для выбранного слайда. Вкладка Галерея находится на боковой панели. Галерея изображений состоит из небольших изображений обнаруженных ячеек, отображаемых в виде комбинированного изображения DAPI-TRITC. В левом и правом нижнем углу каждого изображения отображается прямое количество фокусов и скорректированное количество фокусов. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62623/62623fig07large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62623/62623fig08.jpg"> Рисунок 8:Изображения гистограммы для выбранного слайда. Это окно открывается щелчком правой кнопкой мыши по гистограмме. Нажимая на гистограмму, лист вкладки гистограммы предоставляет сводку данных, в которой перечислены среднее, стандартное отклонение, коэффициент вариации, минимальные, максимальные и медианные значения анализируемых ячеек. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62623/62623fig08large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62623/62623fig09.jpg"> Рисунок 9:Количество очагов γ-H2AX в зависимости от дозы для лимфоцитов, подвергшихся воздействию 60Co γ-лучей. Полосы ошибок представляют собой стандартные отклонения, представляющие межиндивидуальные различия среди доноров. Данные представляют собой среднее число очагов γ-H2AX ± стандартным отклонением четырех здоровых добровольцев. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62623/62623fig09large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>

Watch this Scientific Journal Video about An Automated Microscopic Scoring Method for the ÃŽÂ³-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes at JoVE.com

An Automated Microscopic Scoring Method for the ÃƒÅ½Ã‚Â³-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes

В этом протоколе представлена подготовка слайдов и автоматизированное оценивание γ-H2AX на лимфоцитах периферической крови. Чтобы проиллюстрировать метод и чувствительность анализа, изолированные лимфоциты облучали in vitro. Этот автоматизированный метод обнаружения ДНК DSB полезен для быстрых и высокопроизводительных биологических дозиметрических приложений.

Автоматизированный микроскопический метод подсчета баллов для анализа γ-H2AX в лимфоцитах периферической крови человека

Ionizing radiation is a potent inducer of DNA damage and a well-documented carcinogen. Biological dosimetry comprises the detection of biological effects ...

Меня зовут доктор Шанкари Наир, и я являюсь постдокторантом в отделе радиационной биофизики в отделе ядерной медицины в NRF, iThemba LABS. В этом видео мы продемонстрируем использование автоматизированного анализа фокусов Gamma H2AX на лимфоцитах периферической крови человека для его использования в приложениях пакетной симметрии. Радиационные риски для персонала строго контролируются.Ионизирующее излучение напрямую влияет на структуру ДНК, вызывая разрывы ДНК. Особенно двухцепочечные разрывы. Одним из самых ранних этапов в процессе распознавания двухцепочечного разрыва ДНК является фоспохорилизация гистонового варианта H2AX и набор репарационных белков.В этом видео будет описано использование микроскопии для оценки количества гамма-H2AX очагов ren-nucleus с использованием автоматизированной системы сканирования слайдов и платформы анализа, интегрирующей флуоресцентный микроскоп. Лимфоциты выделяют из цельной крови. Разбавьте цельную кровь PBS в соотношении один к одному, затем аккуратно положите разбавленную кровь на один объем среды градиента плотности.Постепенно наслаивайте кровь, удерживая трубку наклоненной под углом 45 градусов. Переложите суспензию в центрифугу и открутите при комнатной температуре в течение 20 минут при 900 Г. После центрификации образуется четыре слоя. Осторожно перенесите мутный слой, содержащий лимфоциты, в новую стерильную коническую трубку.Промыть лимфоциты PBS и посчитать с помощью гемоцитометра. После определения общего количества лимфоцитов разбавляют лимфоцит и суспензию до концентрации примерно 800 000 лимфоцитов в одном миллилитре полного RPMI. Образцы и готовы к нашему облучению.Лимфоциты облучают гамма-лучами из источника кобальта 60, а затем инкубируют в течение одного часа при 37 градусах Цельсия в увлажненном 5% инкубаторе углекислого газа. Для каждого состояния облучения или трубки готовят три слайда. Поместите скольжение в держатель зажима, затем в карту фильтра и, наконец, в воронку.Закрепите скользящие зажимы и поместите в цитоцентрифугу. Добавьте 250 микролитров клеточной суспензии на каждую воронку и вращайте в течение 30 г в течение пяти минут. Использование цитоцентрифуги имеет важное значение для получения стандартизированных условий на автоматизации слайдов.После вращения извлеките слайды из клипа, а затем, используя гидрофобное перо, нарисуйте круг вокруг места, где находятся клетки. Теперь, когда слайды сделаны, клетки должны быть прикреплены к слайду, чтобы могло произойти иммунофлуоресцентное окрашивание. Клетки фиксируют с помощью 3%-ного параформальдегида, или PFA, и раствора PBS в течение 20 минут.После фиксации промывайте слайды в банке Coplin с PBS в течение пяти минут. Затем накройте клетки Triton X, чтобы обеспечить пермеабилизацию. Стадия пермеабилизации удаляет больше липидов клеточной мембраны, чтобы позволить антителам проникнуть внутрь ядра клетки.С этого момента мы используем блокирующий раствор, изготовленный из 1% BSA в PBS, для мытья слайдов, чтобы уменьшить потенциальное неспецифическое связывание. После трех шагов промывки по 10 минут с 1% BSA и PBS слайды инкубируют при комнатной температуре с одним до 500 первичным антигамма-антителом H2AX в течение одного часа в увлажняющей камере, что легко достигается путем добавления влажной папиросной бумаги в основание прямоугольного ящика для хранения слайдов. После инкубации с первичным антителом отверните жидкость и снова смойте слайды в 1%-ном растворе BSA.Инкубируйте слайды с разбавленным от одного до одной тысячи вторичных анти-мышиных антител triTC в течение одного часа в увлажняющей камере. Удалите антитело перед выполнением трех 10-минутных промывок в PBS. Накройте банку Coplin алюминиевой фольгой, чтобы предотвратить воздействие света на протяжении всего этапа стирки.Удалите слайды и вытрите лишний PBS за пределы гидрофобного круга с помощью беспылевой папиросной бумаги. Наконец, добавьте одну-две капли DAPI, что привело к отказу от монтажной среды и аккуратно накройте слайды скольжением крышки. Убедитесь, что нет захваченных пузырьков воздуха, а затем храните образцы в темном месте при четырех градусах по Цельсию в течение ночи.Аккуратно протрите слайды 70% этанолом и поместите слайды на автоматизированную сканирующую платформу или слайд-сцену, прикрепленную к осевым микроскопу ZED-2. Выберите настройку классификации на вкладке MetaCyte, чтобы изменить классификатор. Выбранный классификатор будет использоваться системой для сканирования и оценки слайдов, и основан на наборе заранее определенных параметров, которые будут определять, как система отбирает ячейки и оценивает фокусы.Классификатор может быть оптимизирован и обучен на основе ряда предварительно классифицированных полей изображения. В зависимости от увеличения микроскопа, типа и антител, которые используются для окрашивания, может быть оптимизирован различный классификатор. Поэтому классификаторы обычно варьируются от лаборатории к лаборатории, но мы дадим обзор наиболее основных шагов, которые необходимо учитывать при корректировке установки классификатора.На вкладке Захват можно найти фильтр, который будет использоваться, здесь DAPI и TRITC, с максимальным временем интеграции 1,04 секунды. Последний основан на оригинальном классификаторе, который был предоставлен компанией и позже скорректирован на интенсивность антител и фоновый гамма-сигнал H2AX, или TRITC, в этом конкретном типе клеток, а именно лимфоцитах. На вкладке Экспозиция определяется минимальное время интеграции.Классификатор всегда будет оставаться в пределах минимального и максимального времени интеграции, что предотвращает чрезмерное или недостаточное воздействие слайда. На вкладке «Выделение ячеек» были определены минимальная и максимальная области объектов на основе размера и формы анализируемых ячеек. Например, заранее определенное значение вогнутости и соотношение сторон специфичны для лимфоцитов, которые обычно имеют круглую форму.На вкладке «Функции» вы можете изменить представление галереи и гистограммы, а также определить, что нужно для оценки микроскопа. Система может оценивать множество предметов, в зависимости от функций, выбранных пользователем. Примером является пороговое значение того, как программное обеспечение оценивает отдельные объекты.После того, как подходящий классификатор был определен, выберите настройку на боковой панели и присвойте каждому слайду уникальное имя, а затем выберите соответствующий классификатор. Выберите «Максимальное количество ячеек» и добавьте максимальное количество ячеек, необходимое для сканирования. Поиск прекращается, даже если выбранное окно поиска еще не было полностью отсканировано, как только достигнуто максимальное количество ячеек.Для применения биодиссимметрии достаточно автоматического подсчета 1000 клеток на слайд, учитывая, что подготовлено три слайда на образец крови. Нажмите кнопку ОК, чтобы подтвердить настройки. Чтобы отсканировать слайды, выберите Поиск'на боковой панели.Если в настройках слайда была выбрана настройка Окно ручного поиска, откроется строка для определения области сканирования. С помощью 10-кратной цели прямоугольная область поиска на слайде выбирается в интерактивном режиме путем фиксации двух углов поля поиска щелчком левой кнопки мыши. Это можно подтвердить с помощью кнопки OK'.Отрегулируйте начальное положение фокуса. Программное обеспечение будет запрашивать фокус и центрировать опорное ядро, используя цель 40 раз для каждого слайда и подтверждать настройки с помощью OK. Система будет автоматически перемещаться во все стороны последовательно. При необходимости настройте настройку Live Image 'и время интеграции' для этого шага.Проверьте все настройки микроскопа. Убедитесь, что рычаг трубки микроскопа находится в положении, которое направляет весь свет на камеру, и подтвердите системный запрос с помощью OK. Система запускает автофокус сетки в ближайшем к опорному полю положении сетки. Он продолжает фокусировать поле на обычной сетке, двигаясь в меандре к передней и задней части окна поиска.Сканирование начинается после завершения автофокусировки сетки. Этап перемещается в поле за полем шаблона меандра для сбора данных. При обнаружении ячейки она позиционируется, изображение галереи сохраняется и отображается на экране, а количество ячеек обновляется.Поиск прекращается, если весь поиск был отсканирован, если достигнуто максимальное количество ячеек или если поиск был отменен. Когда сканирование будет завершено, щелкните правой кнопкой мыши на панели внизу и откройте образец. Просмотрите галерею, которая состоит из небольших изображений обнаруженных клеток.В этом окне вы можете указать ячейки, хранящиеся в галерее, с помощью критерия, который будет выбран из выпадающего меню. Клетки обычно отображаются в том порядке, в котором они были обнаружены. Нажмите на Quality Histogram'или Feature Value Diagram', чтобы дать распределение обнаруженных клеток, а также средние значения и стандартное отклонение оцениваемых очагов.Здесь мы сравниваем нулевой серый с 1,5 серыми образцами. Обычно это контрольный слайд со средним значением 0,124 фокуса на ячейку, где ячейка не была облучена. В контексте биодиссимметрии это будет означать, что человек не подвергался воздействию высоких доз радиации.На графике видно, что большинство клеток имеют почти ноль очагов на клетку, и нет стороны нормального распределения. Когда мы сравниваем это с дозой 1,5 грея, ясно видно, что это облученный образец. В контексте биодиссимметрии это нормальное распределение является явным признаком того, что образец подвергся воздействию радиации.Автоматизированное сканирование достаточно чувствительно для обнаружения очагов, индуцированных при низких дозах. Результаты показывают четкое линейное увеличение количества очагов на клетку с дозой. Автоматизированный метод обнаружения двухцепочечного разрыва ДНК полезен для быстрых и высокопроизводительных применений биологической диссимметрии.Спасибо за просмотр.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

An Automated Microscopic Scoring Method for the &#947;-H2AX Foci Assay in Human Peripheral Blood Lymphocytes

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-подвздошной артерией Инъекции для эффективного и селективного моделирования Микроскопическое костными метастазами

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Мышь Модель усталости, индуцированный Peripheral Облучение

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Modeling Osteosarcoma Using Li-Fraumeni Syndrome Patient-derived Induced Pluripotent Stem Cells

Моделирование остеосаркома, используя синдром ли Фраумени, которую пациент производные индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

Li-Fraumeni syndrome (LFS) is an autosomal dominant hereditary cancer disorder. Patients with LFS are predisposed to a various type of tumors, including ...

Methods for Evaluating the Role of c-Fos and Dusp1 in Oncogene Dependence

Методы для оценки роли c-Fos и Dusp1 в зависимости от онкогена

The demonstration of tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in treating chronic myeloid leukemia (CML) has heralded a new era in cancer therapeutics. However, ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Моноядерная клетка периферической крови человека (PBMC) привитала гуманизированная модель ксенотрансплантата для трансляционной иммуноонкологии (I-O)

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

В vitro Анализ для изучения опухоли макрофаг взаимодействия

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

An Automated Differential Nuclear Staining Assay for Accurate Determination of Mitocan Cytotoxicity

Автоматизированное дифференциальное ядерное окрашивание анализ для точного определения цитотоксичности митокана

The contribution of mitochondria to oncogenic transformation is a subject of wide interest and active study. As the field of cancer metabolism becomes ...

Immunofluorescence Imaging of DNA Damage and Repair Foci in Human Colon Cancer Cells

Иммунофлуоресценция Визуализация повреждения ДНК и ремонт Фочи в раковых клетках толстой кишки человека

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage ...

Detection of Cell-Free DNA in Blood Plasma Samples of Cancer Patients

Обнаружение ДНК без клеток в образцах плазмы крови онкологических больных

Identifying mutations in tumors of cancer patients is a very important step in disease management. These mutations serve as biomarkers for tumor diagnosis ...

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from S&#233;zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from SÃƒÆ’Ã‚Â©zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Выделение мононуклеарных клеток периферической крови человека и CD4+ Т-клеток у пациентов с синдромом Сезари для транскриптомного профилирования

Cutaneous T-cell lymphomas (CTCL) are derived from the transformation and uncontrolled proliferation of mature skin-homing T cells, and mycosis fungoides ...