Name: reconstruct human retinoblastoma in vitro
Uploaded: 2022-10-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Reconstruct Human Retinoblastoma In Vitro at JoVE.com

Vi takker 502-teamet for all hjelp. Dette arbeidet støttes delvis av Beijing Municipal Natural Science Foundation (Z200014) og National Key R&D Program of China (2017YFA0105300).

Denne studien er godkjent av den institusjonelle etiske komiteen i Beijing Tongren Hospital, Capital Medical University. H9 hESCs er hentet fra WiCell Research Institute.
1. Generering av RB1 mutert hESC
<ol><li>CRISPR/Cas9 målvektor for knockout (KO) av RB1.
	<ol><li>Design et par sgRNA. For ablasjon av RB1, målrette den første ekson av dette genet. Den fremre primersekvensen er CACCGCGGTGGCGGCCGTTTTTCGG, og den omvendte primersekvensen er AAACCCGAAAAACGGCCGCC...

<ol>
	<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+embryonic+stem+cell-derived+organoid+retinoblastoma+reveals+a+cancerous+origin.">Human embryonic stem cell-derived organoid retinoblastoma reveals a cancerous origin.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (52), 33628-33638 (2020).</li><li>Singh, H. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+stage-specific+proliferation+and+retinoblastoma+genesis+in+RB-deficient+human+but+not+mouse+cone+precursors.">Developmental stage-specific proliferation and retinoblastoma genesis in RB-deficient human but not mouse cone precursors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (40), 9391-9400 (2018).</li><li>Xu, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rb+suppresses+human+cone-precursor-derived+retinoblastoma+tumours.">Rb suppresses human cone-precursor-derived retinoblastoma tumours.</a> Nature. 514 (7522), 385-388 (2014).</li><li>Mendoza, P. R., Grossniklaus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+of+retinoblastoma.">The biology of retinoblastoma.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 134, 503-516 (2015).</li><li>Benavente, C. A., Dyer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+and+epigenetics+of+human+retinoblastoma.">Genetics and epigenetics of human retinoblastoma.</a> Annual Review of Pathology. 10, 547-562 (2015).</li><li>Wu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+MYCN-driven+retinoblastoma+reveals+MYCN-independent+tumor+reemergence.">A mouse model of MYCN-driven retinoblastoma reveals MYCN-independent tumor reemergence.</a> The Journal of Clinical Investigation. 127 (3), 888-898 (2017).</li><li>Boucherie, C., Sowden, J. C., Ali, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+technology+for+generating+photoreceptors.">Induced pluripotent stem cell technology for generating photoreceptors.</a> Regenerative Medicine. 6 (4), 469-479 (2011).</li><li>Nakano, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-formation+of+optic+cups+and+storable+stratified+neural+retina+from+human+ESCs.">Self-formation of optic cups and storable stratified neural retina from human ESCs.</a> Cell Stem Cell. 10 (6), 771-785 (2012).</li><li>Lowe, A., Harris, R., Bhansali, P., Cvekl, A., Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intercellular+adhesion-dependent+cell+survival+and+rock-regulated+actomyosin-driven+forces+mediate+self-formation+of+a+retinal+organoid.">Intercellular adhesion-dependent cell survival and rock-regulated actomyosin-driven forces mediate self-formation of a retinal organoid.</a> Stem Cell Reports. 6 (5), 743-756 (2016).</li><li>Zheng, C., Schneider, J. W., Hsieh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+RB1+in+human+embryonic+stem+cell-derived+retinal+organoids.">Role of RB1 in human embryonic stem cell-derived retinal organoids.</a> Developmental Biology. 462 (2), 197-207 (2020).</li><li>Dimaras, H., Corson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoblastoma,+the+visible+CNS+tumor:+A+review.">Retinoblastoma, the visible CNS tumor: A review.</a> Journal of Neuroscience Research. 97 (1), 29-44 (2019).</li><li>Xu, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoblastoma+has+properties+of+a+cone+precursor+tumor+and+depends+upon+cone-specific+MDM2+signaling.">Retinoblastoma has properties of a cone precursor tumor and depends upon cone-specific MDM2 signaling.</a> Cell. 137 (6), 1018-1031 (2009).</li><li>Qi, D. L., Cobrinik, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MDM2+but+not+MDM4+promotes+retinoblastoma+cell+proliferation+through+p53-independent+regulation+of+MYCN+translation.">MDM2 but not MDM4 promotes retinoblastoma cell proliferation through p53-independent regulation of MYCN translation.</a> Oncogene. 36 (13), 1760-1769 (2017).</li></ol>

Humant retinoblastom (RB) er forårsaket av inaktivering av RB1 og dysfunksjon av Rb-protein. I denne protokollen er RB1-KO hESC det sentrale trinnet for generering av RB i en tallerken. Mens selv med RB1-/- hESC, er det mulig at det ikke er noen RB-dannelse på grunn av metodene for retinal organoiddifferensiering10. I denne protokollen er overføringen fra tilhengerkultur til flytende kultur viktig i differensieringsprosessen. Tettheten av cyster, typer plur...

Humant retinoblastom (RB) er en sjelden, dødelig svulst avledet fra retinal kjegleforløperne 1,2,3, er den vanligste typen intraokulær malignitet i barndommen4. Homozygot inaktivering av RB1-genet er den initierende genetiske lesjonen i RB5. Imidlertid klarer ikke mus med RB1-mutasjoner å danne retinaltumoren2. Selv om musetumorene kan genereres med kombinasjonen av Rb1-mutasjoner og andre genetiske modifikasjoner, mangler de fortsatt egenskapene til menneskelig RB6. Takket være utviklingen av retinal organoiddifferensiering, kunne den hESC-avledede RB oppnås, og vise tegnene til menneskelig RB1.
Tallrike protokoller for retinal organoiddifferensiering har blitt etablert i det siste tiåret, inkludert 2D7, 3D8 og en kombinasjon av 2D og 3D9. Metoden som brukes her for å generere den menneskelige RB er konsolideringen av tilhengerkultur og flytende kultur9. Ved å differensiere RB1 mutert hESC i retinale organoider, oppdages dannelsen av RB rundt dag 45, og deretter sprer den seg raskt på rundt dag 60. På dag 90 er isolering av RBer og generering av RB-cellelinjen mulig; Videre omgir RB nesten alle retinale organoider på dag 120.
hESC-avledet RB er en innovativ modell for å utforske opprinnelse, tumorigenese og behandlinger for RB. I denne protokollen er genereringen av genredigering hESC, differensiering av RB og karakterisering for RB beskrevet i detalj.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-ARR3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HPA063129</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CRX (M02)</td>
			<td>Abnove</td>
			<td>ABN-H00001406-M02</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Ki67</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>&#160;ab15580</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Syk (D3Z1E)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>13198</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BbsI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R3539S</td>
			<td>Restriction enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase (1U/mL)</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>7923</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM basic</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10566-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12-GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10565-042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C141905005BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>15575020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified for Human Embryonic Stem Cells</td>
			<td>Biological Industry</td>
			<td>04-002-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F-12 Nutrient Mix (Hams F12)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11765-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-essential Amino Acid Solution (100X)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M7145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P3 Primary Cell 4D-Nucleofector X Kit S</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>V4XP-3032</td>
			<td>Nucleofection kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin</td>
			<td>Gene Operation</td>
			<td>ISY1130- 0025MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>28104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ncEpic-hiPSC/hESC culture medium</td>
			<td>Nuwacell</td>
			<td>RP01001</td>
			<td>ncEpic-hiPSC/hESC culture medium in 1.2.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth factor reduced basement membrane matrix</td>
			<td>BD</td>
			<td>356231</td>
			<td>Matrigel in 1.2.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell dissociation enzyme</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12563-011</td>
			<td>TrypLE Express in 1.2.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Midi Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>75144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplement A</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17502-048</td>
			<td>N-2 Supplement (100X), liquid, supplemet in medum I</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplement B</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17105-041</td>
			<td>B-27 Supplement (50X),liquid, supplemet in medum I,II,III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 Polynucleotide Kinase</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>EK0032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T-8691-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632 2HCl</td>
			<td>Selleck</td>
			<td>S1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pX330-U6- Chimeric BB-CBh-hSpCas9-2A-Puro</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>42230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleofector 4D</td>
			<td>Lonza</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R0883-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reconstruct human retinoblastoma in vitro

Human RB er pediatrisk kreft, som er dødelig hvis ingen behandling administreres. Siden RB stammer fra kjegleforløpere, som er relativt sjelden i gnagermodeller, er en sykdomsmodell avledet fra mennesker mer gunstig for å avdekke mekanismene til menneskelig RB og søke målene for terapi. Her beskriver protokollen genereringen av to genredigerte hESC-linjer med henholdsvis en biallelisk RB1-punktmutasjon (RB1 Mut/Mut) og en RB1-knockoutmutasjon (RB1-/-). Under prosessen med retinal utvikling observeres dannelsen av RB. RB-cellelinjene etableres også ved å segregere fra RB-organoidene. Til sammen, ved å differensiere de genredigerte hESC-linjene i retinale organoider ved hjelp av en 2D- og 3D-kombinert differensieringsprotokoll, har vi vellykket rekonstruert den menneskelige RB i en tallerken og identifisert dens kjegleforløperopprinnelse. Det ville gi en nyttig sykdomsmodell for å observere retinoblastomgenes, spredning og vekst, samt videreutvikle nye terapeutiske midler.

Prosedyren for RB-generering er belyst i figur 1, som kombinerer tilhenger og flytende kultur. Det var mulig å høste den menneskelige RB fra RB1-KO hESC, og oppnå RB-cellelinjen ved å isolere RB-organoider.
Her gir protokollen detaljer om differensieringen i ulike stadier (figur 2). Hule kuler dannes i løpet av de første 3 dagene som festes til kulturoverflaten og deretter utvides (figur 2<...

Watch this Scientific Journal Video about Reconstruct Human Retinoblastoma In Vitro at JoVE.com

Reconstruct Human Retinoblastoma In Vitro

Vi beskriver en metode for å generere humant retinoblastom (RB) ved å introdusere bialleliske RB1-mutasjoner i humane embryonale stamceller (hESC). RB-cellelinjer kan også vellykket dyrkes ved hjelp av den isolerte RB i en tallerken.

Rekonstruere humant retinoblastom in vitro

Human RB is pediatric cancer, which is lethal if no treatment is administered. As RB originates from cone precursors, which is relatively rare in rodent ...

Humant retinoblastom er den vanligste typen intraokulær kreft i barndommen. Kliniske prøver er vanskelige å oppnå, og musemodeller kan ikke danne retinoblastom. Derfor er in vitro retinoblastomgenerering avgjørende for å observere retinoblastomgenese, proliferasjon og vekst, og for å utvikle nye terapeutiske midler.Effektiviteten til denne protokollen kan nå omtrent 100%, selv om varigheten for retinoblastomgenerering er variabel fra dag 45 til dag 120. For vedlikehold av retinoblastom en eller RB en knockout menneskelige embryonale stamceller, kultur genet redigerte H ni celler i en seks brønnplate belagt med vekstfaktor redusert kjellermembranmatrise og endre mediet hver dag. For å passere cellene, inkuber dem i EDTA-buffer i 3,5 minutter ved 37 grader Celsius eller fem minutter ved romtemperatur.Dyrk cellene til de når 80% sammenløp. Deretter, for å starte retinal celledifferensiering, fjern mediet og skyll cellene med en milliliter DPBS. Deretter løfter du cellekoloniene ved å legge til en milliliter Dispase-buffer og inkubere ved 37 grader Celsius i fem minutter.Observer cellekoloniene under et mikroskop. Når kantene på koloniene begynner å rulle ut, aspirerer Dispase-bufferen og skyll forsiktig cellene en gang med en milliliter DPBS. Tilsett deretter en milliliter middels en i brønnen og bruk en 10 mikroliter standard pipettespiss, kutt koloniene i stykker.Bruk en celleskraper til å skrape de gjenværende cellene i mediet. Høst cellene ved sentrifugering i et 15 milliliter rør. Etter sentrifugering, la rundt 50 mikroliter av supernatanten dispergere cellene i mediet.Deretter tilsettes 250 mikroliter vekstfaktor redusert kjellermembranmatrise og blandes ved forsiktig omrøring. Etter blanding, plasser 15 milliliter røret med de suspenderte cellene i en 37 grader Celsius inkubator. Etter en 20 minutters inkubasjon skal cellene og vekstfaktorens reduserte kjellermembranmatrise danne en størknet gel.Deretter legger du til en milliliter medium en til 15 milliliter røret. Ved hjelp av en milliliter pipette, pipette den størknede gelen to til tre ganger for å spre klumpen. Tilsett deretter ytterligere ni milliliter medium en og overfør cellesuspensjonen til en 10 centimeter cellekulturskål.Inkuber parabolen ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. Dette regnes som dag null. På dag én, undersøk cellene ved hjelp av et mikroskop.I gjennomsnitt observeres tre til fire cyster i ett stykke gel. På dag fem, bytt medium ved å samle supernatanten i et 15 milliliter rør, slik at cystene kan slå seg ned i bunnen og erstatte supernatanten med fersk medium. Spred cystene i røret i to 10 centimeter retter, og sørg for minst 300 cyster i hver tallerken.På dag syv sprer de fleste cyster festet til parabolen seg ut og danner tilhørende kolonier. På dag 10, bytt medium med fersk middels, slik at alle cyster forblir festet til parabolen. Observer cellene under et mikroskop fra dag 13 til 17 for å sikre at cellene sprer seg ut.På dag 15, etter å ha skyllet cellene en gang med en milliliter DPBS, tilsett en milliliter Dispase-løsning og inkuber ved 37 grader Celsius. Etter fem minutter, fjern Dispase-bufferen og skyll forsiktig kulturene med en milliliter DPBS. Tilsett deretter 10 milliliter medium to til hver 10 centimeter tallerken og inkuber i en 37 grader Celsius og 5% karbondioksidinkubator.Etter 24 timer løsner tilhengerkulturer spontant og samles i retinale organoider. Tre dager etter løsrivelse, samle cellene fra cellekulturskålen i et 15 milliliter rør. Når organoidene bosetter seg, fjern supernatanten fra røret og overfør organoidene til en ny ikke-klebende petriskål med 10 milliliter medium to i de følgende fire dagene.En uke etter løsningen, bytt medium til middels tre og fra denne dagen og fremover, kultur organoider i middels tre. På dag 27 av retinal organoidkulturen er den optiske vesikkelarkitekturen tydelig, og rundt 90% av organoider viser denne strukturen. Den første påvisning av retinoblastom skjer på dag 45 og det blir palpabelt på dag 50.Når den vokser til dag 90, er de optiske vesikkelstrukturene hovedsakelig omsluttet av retinoblastomet. Retinoblastomet kan nå isoleres og dyrkes videre som en cellelinje. På dag 105 er mer enn 80% av retinale organoider fullt innhyllet av retinoblastomet.Disse organoidene uttrykker sterkt proliferasjonsmarkøren Ki67 og onkogenmarkøren SYK sammenlignet med H nine avledede retinale organoider, noe som indikerer tumorigenese. I tillegg viser høyt uttrykk av kjegleforløpermarkøren ARR3 og fotoreseptorforløpermarkøren CRX i retinoblastomorganoider at de stammer fra kjegleforløperceller. Dårligere og overlegne resultater i løpet av de tre morfologiske stadiene av retinoblastomgenerering er avbildet her.Differensierte og udifferensierte humane embryonale stamceller kan lett skilles ut fra deres morfologi. De udifferensierte cellene er valgt for retinoblastomdannelse. På dag fem skal sfæren som genereres være hul i stedet for solid.Retinoblastomet er avledet fra retinale organoider som viser optisk vesikkelarkitektur. Ingen retinoblastom genereres fra de dårligere organoider. Mens du utfører prosedyren, skal alle spissene avkjøles og kjellermembranmatrisen smeltes ved fire grader før den legges inn i røret.Dette er et viktig trinn for denne differensieringsprotokollen.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliaca Injection for effektiv og selektiv Modellering av Mikroskopisk Bone Metastase

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Evaluating In Vitro DNA Damage Using Comet Assay

Evaluating In Vitro DNA Damage Using Comet Assay

Evaluere In Vitro DNA skade bruk av Comet analysen

DNA damage is a common phenomenon for each cell during its lifespan, and is defined as an alteration of the chemical structure of genomic DNA. Cancer ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Flytte oppover: En enkel og fleksibel In Vitro tredimensjonale invasjonen analysen protokoll

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

In Vitro Assay to Study Tumor-macrophage Interaction

In vitro-analysen for å studere tumor-macrophage interaksjon

Tumor associated macrophages (TAMs) account for a large percentage of cells in the tumor mass for different types of cancers. Glioblastoma (GBM), a ...

Prostate Organoid Cultures as Tools to Translate Genotypes and Mutational Profiles to Pharmacological Responses

Prostata Organoid kulturer som verktøy for å oversette genotyper og mutational profiler til farmakologiske reaksjoner

Presented here is a protocol to study pharmacodynamics, stem cell potential, and cancer differentiation in prostate epithelial organoids. Prostate ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

Opprettelse av en genetisk konstruert murine hode-og nakke kreftcelle linje ved bruk av et Adeno-tilknyttet virus Cas9 system

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Measuring Real-time Drug Response in Organotypic Tumor Tissue Slices

Måle sanntids narkotikarespons i organotypic tumor vev skiver

Tumor tissues are composed of cancerous cells, infiltrated immune cells, endothelial cells, fibroblasts, and extracellular matrix. This complex milieu ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

In Vitro evaluering av onkogen transformasjon i humane pattedyr epitelceller

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Tredimensjonal in vitro biomimetisk modell av neuroblastom ved bruk av kollagenbaserte stillas

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor in children, accounting for 15% of overall pediatric cancer deaths. The native tumor tissue is a ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay ved bruk av pasientavledede tumororganoider

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...