Name: portal vein injection of colorectal cancer organoids to study the liver metastasis stroma
Uploaded: 2021-09-03T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma at JoVE.com

تم دعم هذه الدراسة من خلال منح من المجلس الوطني للصحة والبحوث الطبية (APP1156391 إلى D.L.W.، S.L.W.) (APP1081852 إلى D.L.W.، APP1140236 إلى S.L.W.، APPP1099283 إلى D.L.W.،)؛ مجلس السرطان SA فاز مشروع السرطان نيابة عن الجهات المانحة وحكومة ولاية جنوب أستراليا من خلال وزارة الصحة (MCF0418 إلى S.L.W., D.L.W.)؛ منحة معونة للبحث العلمي (B) (20H03467 إلى M.T) بتكليف من وزارة التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا في اليابان ؛ AMED-CREST (الوكالة اليابانية للبحث والتطوير الطبيين ، البحوث الأساسية للعلوم والتكنولوجيا التطورية (19gm0810007h0104 و 19gm1210008s0101 إلى A.E.) ؛ مشروع أبحاث السرطان والتطور العلاجي (P-CREATE) من AMED (19cm0106332h0002 إلى A.E.) ؛ الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم برنامج التحدي في الخارج للباحثين الشباب (إلى H.K.) ، زمالة مؤسسة تاكيدا للعلوم (إلى المملكة المتحدة) ، منحة Greaton الدولية للدكتوراه (إلى H.K.) ، منحة مؤسسة Lions Medical Research Foundation (إلى K.G).
نشكر الدكتور ليزيك ليسوفسكي في مرفق هندسة النواقل والجينوم (VGEF) ، معهد البحوث الطبية للأطفال (CMRI) (نيو ساوث ويلز ، أستراليا) لإنتاج ناقلات AAV المؤتلفة.

تمت مراجعة جميع الإجراءات الحيوانية في هذه المقالة والموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان التابعة لمعهد جنوب أستراليا للصحة والبحوث الطبية (رقم الموافقة ، SAM322).
1. حقن الوريد الذيل من الفيروس المرتبط بالغدية
ملاحظة: ينبغي التعامل مع الفيروس المرتبط بالأ...

في هذه الدراسة ، أظهرنا أن حقن الوريد البابي للفئران CRC العضوية يولد بشكل متكرر نقائل الكبد الغنية بالخلايا الليفية التي تحاكي السمات النسيجية للنقائل الكبدية CRC البشرية. علاوة على ذلك ، عندما يقترن هذا النموذج قبل السريري بالعلاجات الموجهة بالسدى مثل العلاج الجيني بوساطة AAV8 ، فإنه يعمل ك...

سرطان القولون والمستقيم (CRC) هو سبب رئيسي لوفيات السرطان في جميع أنحاء العالم1. يصاب أكثر من نصف مرضى CRC بورم كبدي يحدث من خلال نشر الوريد البابي1. حاليا ، لا توجد علاجات فعالة يمكنها علاج ورم خبيث متقدم في الكبد ، ومعظم المرضى يستسلمون للمرض النقيلي.
يلعب المكان النقيلي أو البيئة الدقيقة للورم دورا رئيسيا في تطعيم ونمو خلايا CRC المنتشرة2. الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) ، وهي عنصر بارز في البيئة الدقيقة للورم ، تعزز أو تقيد تطور السرطان من خلال إفراز عوامل النمو ، وإعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية (ECM) ، وتعديل المناظر الطبيعية المناعية وتكوين الأوعيةالدموية 3،4،5. تمنح CAFs أيضا مقاومة للعلاجات الكيميائية والعلاجات المناعية3. علاوة على ذلك ، تنظم CAFs بدء وتطور ورم خبيث في الكبد CRC وتتنبأ بالتشخيص في المرضى الذين يعانون من CRC3،6،7،8. وبالتالي ، يمكن استغلال العوامل المتعلقة ب CAF لتطوير استراتيجيات علاجية لمنع ورم خبيث في الكبد CRC. ومع ذلك ، فإن عدم وجود نماذج مرضية للفئران لدراسة سدى الورم النقيلي كان عقبة رئيسية أمام تطوير علاجات تستهدف السدى.
حاليا ، تشمل النماذج الحيوانية لدراسة ورم خبيث في الكبد CRC نماذج CRC الأولية التي تطور تلقائيا ورم خبيث كبدي ونماذج زرع الخلايا السرطانية في الكبد. نادرا ما تظهر نماذج الفئران CRC الأولية ، مثل نماذج الفئران المعدلة وراثيا وحقن القولون للخلايا السرطانية ، ورم خبيث في الكبد9،10،11،12. علاوة على ذلك ، حتى لو لوحظ ورم خبيث في الكبد ، فإن هذه النماذج تظهر كمونا طويلا من تحريض الورم الأولي إلى ورم خبيث ، وربما تموت من عبء الورم الأولي12. لتوليد نقائل الكبد CRC بكفاءة ، يتم زرع خلايا CRC المستزرعة في الكبد باستخدام ثلاث طرق حقن: الحقن داخل الطحال ، والحقن المباشر داخل المتني في الكبد ، وحقن الوريد البابي. تنتشر الخلايا السرطانية المحقونة داخل الطحال في الوريد الطحالي ، الوريد البابي ، وفي النهاية إلى الكبد13,14. ومع ذلك ، فإن الحقن داخل الطحال ينتج نسبة أقل من أخذ الورم مقارنة بنماذج الزرع الأخرى15,16. مع الحقن داخل الطحال ، يتم إجراء الاستئصال الجراحي للطحال لتجنب نمو السرطان في الطحال ، والذي يمكن أن يضر بنضج الخلايا المناعية17. علاوة على ذلك ، يمكن أن يؤدي الحقن داخل الطحال أيضا إلى نمو الورم غير المقصود في الطحال وتجويف البطن18 ، مما يعقد تحليلات ورم خبيث الكبد. الحقن المباشر داخل المتني في الكبد يحفز بكفاءة ورم خبيث كبدي16،19،20. ومع ذلك ، فإن هذا النهج لا يلخص تماما خطوة بيولوجية من ورم خبيث في الكبد يحدث بشكل طبيعي من خلال نشر الوريد البابي. باستخدام الحقن المباشر في الكبد ، ودخول الخلايا السرطانية إلى غير البوابة ، ولكن الدورة الدموية الجهازية يمكن أن يؤدي أيضا إلى العديد من النقائل الرئوية الكبيرة16. على الرغم من أن غالبية المرضى الذين يعانون من ورم خبيث في الكبد CRC يظهرون عقيدات ورم متعددة في الكبد21 ، إلا أن الحقن المباشر في فص كبد معين يولد كتلة ورم واحدة 19,20. يسمح حقن الوريد البابي أو حقن الوريد المساريقي ، على الرغم من تحديه تقنيا ، بتوصيل الخلايا السرطانية بكفاءة إلى الكبد بطريقة تلخص أنماط النمو التي شوهدت في المرضى17. يمكن لهذه الاستراتيجية أن تقلل من إمكانية النقائل الثانوية وتمكن من النمو السريع للخلايا السرطانية في الكبد ، مما يبسط تحليلات بقاء الفئران.
تاريخيا ، تم استخدام خطوط خلايا سرطان القولون والمستقيم مثل الفأر MC-38 و HT-29 البشري و SW-620 لتوليد نماذج الفئران من ورم خبيث كبدي22,23. ومع ذلك ، فإن خطوط خلايا سرطان القولون والمستقيم هذه لا تحفز رد فعل اللحمية الديسموبلاستيكية. المحتوى اللحمي المنخفض في الأورام يجعل من الصعب التحقيق في الأدوار البيولوجية للخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان. قدمت التطورات الحديثة في المواد العضوية CRC وزرعها منصات مفيدة لتقييم الأدوار الحيوية للسدى في تطور السرطان24. يولد زرع الكبد من المواد العضوية CRC بيئة دقيقة غنية بالخلايا الليفية للورم وقد قدم رؤى جديدة في الأبحاث اللحمية 6,25. حاليا ، أصبح حقن الوريد البابي أو المساريقي للعضويات نهجا قياسيا ذهبيا لتوليد ورم خبيث في الكبد CRC 6,25,26,27,28. ومع ذلك ، على حد علمنا ، لم تصف أي أوراق سابقة طرقا مفصلة لحقن الوريد البابي لأورام القولون والمستقيم. هنا ، نقدم منهجية لاستخدام حقن الوريد البابي من المواد العضوية CRC لتطوير علاج جديد بوساطة الفيروس الغدي (AAV) بوساطة السدى.
خلايا الكبد هي مكون مهم للبيئة الدقيقة للورم النقيلي في الكبد وتلعب دورا حاسما في تطور السرطان النقيلي29. مستوحاة من نجاح أساليب العلاج الجيني AAV للحث على التعبير عن البروتين في خلايا الكبد في المرضى غير الورمية30,31 ، قمنا بالتحقيق في نهج مماثل ولكن يهدف إلى تعديل البيئة الدقيقة لورم الكبد في CRC25. على هذا النحو ، نصف أيضا هنا حقن الوريد الذيل من AAV8 للحث على التعبير عن البروتينات المضادة للأورام لتعديل البيئة الدقيقة لورم الكبد. يؤدي النمط المصلي AAV8 ، المعين من خلال اختيار بروتين القفيصة الفيروسية أثناء إنتاج الفيروس ، إلى كفاءة نقل عالية خاصة لخلايا الكبد (أي التعبير الجيني المستهدف في البيئة الدقيقة لورم الكبد)32. لقد أظهرنا سابقا أن Islr (عائلة الغلوبولين المناعي التي تحتوي على تكرار غني بالليوسين) هو جين خاص ب CAF يحفز إشارات البروتين المورفوجيني العظمي (BMP) ، ويقلل من نمو الورم CRC ، ويعزز تمايز الخلايا الجذعية المعوية Lgr5 + 25. لقد اختبرنا ما إذا كان الإفراط في التعبير بوساطة AAV8 عن الجين اللحمي المقيد للسرطان ، Islr ، في خلايا الكبد يمكن أن يخفف من تطور ورم خبيث كبدي عن طريق إجراء حقن الوريد البابي للأورام CRC في الفئران المعالجة ب AAV8-Islr.
في هذه الورقة ، نصف أولا إجراء حقن الوريد الذيل ل AAV المدارية الكبدية. بعد ذلك ، نصف طريقة لإعداد الخلايا السرطانية وحقن الوريد البابي في الفئران المعالجة ب AAV. أخيرا ، نقدم طرقا لمراقبة تطور الورم النقيلي لتقييم فعالية العلاجات الموجهة بالسدى.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>TSK</td>
			<td>LDS-33013</td>
			<td>For portal vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 vicryl suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>J494G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40-&#181;m cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>302130</td>
			<td>Used to apply saline to the intestine after portal vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS*50LE</td>
			<td>Luer lock syringe for perfusion fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Isopropyl alcohol wipe</td>
			<td>Briemar</td>
			<td>5730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaesthesia machine</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;SMA antibody</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>M0851</td>
			<td>Clone 1A4. 1/500 dilution for immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>TROY</td>
			<td>N/A</td>
			<td>ilium Temvet Injection, 300 &#181;g/ml Buprenorphine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton buds</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Johnson&#39;s pure cotton bud applicators. Need to be autoclaved before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>L-8220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>HAMILTON</td>
			<td>81020</td>
			<td>For portal vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat box (animal warming chamber)</td>
			<td>Datesand</td>
			<td>MK3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat lamp</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic sponge</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0891-04-015</td>
			<td>Gelfoam absorbable gelatin sponge, USP, 12-7 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>India ink</td>
			<td>Talens</td>
			<td>44727000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection syringe and needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>326769</td>
			<td>For tail vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Islr probe (RNAscope)</td>
			<td>ACD</td>
			<td>450041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>988-3244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>128113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRI fibrosis tool</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>https://github.com/MontpellierRessourcesImagerie/imagej_macros_and_scripts/wiki/MRI_Fibrosis_Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope kit</td>
			<td>ACD</td>
			<td>322300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent restrainer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosa26-Cas9 mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>024858</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>PHA19042010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin staplers</td>
			<td>Able Scientific</td>
			<td>AS59028</td>
			<td>9 mm wound clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stapler applicator</td>
			<td>Able Scientific</td>
			<td>AS59026</td>
			<td>9 mm wound clip applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stapler remover</td>
			<td>Able Scientific</td>
			<td>AS59037</td>
			<td>Wound clip remover</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>Multigate</td>
			<td>29-220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gauze</td>
			<td>Sentry Medical</td>
			<td>GS001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Topical anesthesia cream</td>
			<td>EMLA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>EMLA 5% cream, 25 mg/g lignocaine and 25 mg/g prilocaine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605028</td>
			<td>Recombinant cell-dissociation enzyme mix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

portal vein injection of colorectal cancer organoids to study the liver metastasis stroma

يعد الانبثاث الكبدي لسرطان القولون والمستقيم (CRC) سببا رئيسيا للوفاة المرتبطة بالسرطان. تلعب الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) ، وهي مكون رئيسي في البيئة الدقيقة للورم ، دورا حاسما في تطور CRC النقيلي والتنبؤ بسوء تشخيص المريض. ومع ذلك ، هناك نقص في نماذج الفئران المرضية لدراسة الحديث المتبادل بين الخلايا السرطانية النقيلية و CAFs. هنا ، نقدم طريقة للتحقيق في كيفية تنظيم تطور ورم خبيث في الكبد بواسطة مكانة النقيلي وربما يمكن تقييده عن طريق العلاج الموجه بالسدى. ولد حقن الوريد البابي للعضويات CRC تفاعلا ديسموبلاستيكيا ، والذي لخص بأمانة الأنسجة الغنية بالخلايا الليفية لنقائل الكبد البشرية CRC. كان هذا النموذج خاصا بالأنسجة مع وجود عبء ورم أعلى في الكبد عند مقارنته بنموذج الحقن داخل الطحال ، مما يبسط تحليلات بقاء الفئران. عن طريق حقن الأعضاء العضوية للورم المعبر عن اللوسيفيراز ، يمكن مراقبة حركية نمو الورم عن طريق التصوير في الجسم الحي . علاوة على ذلك ، يوفر هذا النموذج قبل السريري منصة مفيدة لتقييم فعالية العلاجات التي تستهدف اللحمة المتوسطة للورم. نحن نصف طرقا لفحص ما إذا كان التسليم بوساطة الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لجين لحمي مثبط للورم إلى خلايا الكبد يمكن أن يعيد تشكيل البيئة الدقيقة للورم ويحسن بقاء الفئران. يتيح هذا النهج تطوير وتقييم استراتيجيات علاجية جديدة لمنع الانبثاث الكبدي ل CRC.

للحث على التعبير المفرط بوساطة AAV عن جين لحمية مقيد للورم ، Islr 4,25,43,44 ، في خلايا الكبد ، قمنا بحقن AAV8 المشفر عن طريق الوريد. تم حقن 1.0 × 1011 جينوم فيروسي (vg) من AAV8-Islr ، أو كعنصر تحكم ، AAV8-mRuby2 ، في وريد ذيل الفأر ا...

Watch this Scientific Journal Video about Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma at JoVE.com

Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

حقن الوريد البابي من سرطان القولون والمستقيم (CRC) العضوية يولد ورم خبيث الكبد الغنية بالسدى. يمثل نموذج الفأر هذا من الانبثاث الكبدي CRC أداة مفيدة لدراسة تفاعلات الورم والسدى وتطوير علاجات جديدة موجهة للسدى مثل العلاجات الجينية المرتبطة بالفيروسات الغدية.

حقن الوريد البابي لسرطان القولون والمستقيم العضوي لدراسة سدى ورم خبيث في الكبد

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...

يصاب أكثر من 50٪ من مرضى سرطان القولون والمستقيم بورم خبيث في الكبد من خلال نشر الوريد البابي. ولا تزال النماذج الحيوانية الحالية لدراسة ورم خبيث في الكبد بسرطان القولون والمستقيم غير كافية لتلخيص العملية البيولوجية. يوفر حقن الوريد البابي لأورام سرطان القولون والمستقيم بيئة ورم غنية بالخلايا الليفية تسمح بالتحقيق في الحديث المتبادل بين الخلايا السرطانية النقيلية و CAS في ورم خبيث في سرطان القولون والمستقيم الكبد.توفر هذه التقنية منصة لتقييم فعالية الاستراتيجيات العلاجية التي تستهدف البيئة الدقيقة للورم من ورم خبيث في الكبد من سرطان القولون والمستقيم. هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص للتحقيق في التفاعلات بين CAS والخلايا السرطانية والبيئة الدقيقة للورم. إذا لم يتم وضع طرف القطن بشكل صحيح على موقع الحقن، فقد يحدث نزيف مفرط بعد إزالة الإبرة.يتوقف نقع طرف القطن بمجرد تحديد موقع الحقن. قد يكون من الصعب تحديد الوريد البابي وتصور موقع الحقن دون إظهار مرئي لهذا الإجراء. للبدء ، قم بإعداد منطقة جراحية معقمة باستخدام ستائر معقمة على وسادة تدفئة.بالإضافة إلى ذلك ، قم بإعداد جميع الأدوات اللازمة للجراحة كما هو موضح في مخطوطة النص. ثم قم بإضاءة المنطقة الجراحية عن طريق ضبط موضع مصدر الضوء. بعد ذلك ، حقن 0.1 ملليغرام تحت الجلد لكل كيلوغرام من وزن الجسم من البوبرينورفين في فأر لإدارة الألم الجراحي.ثم قم بتخدير الفأر واستخدام ماكينة حلاقة كهربائية ، احلق من المنتصف إلى أعلى البطن في منطقة بعيدة عن المنطقة الجراحية المعقمة لتجنب تلويث الشعر للموقع. تنظيف موقع الشق بالتناوب مع بيتادين و 80٪ من الإيثانول لتعقيم المنطقة الجراحية. كرر ثلاث مرات.ضع الماوس في المنطقة الجراحية على وسادة تدفئة في وضع ضعيف مع صيانة تخدير الأيزوفلوران. ثم ضع ستارة جراحية مع ثقب على بطنها. ارفع جلد البطن بالملقط وقم بعمل شق جلدي من سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات عند خط الوسط باستخدام مقص ، مع قطع الجلد فقط ، مع التأكد من أن الشق يتراوح من منتصف البطن إلى عملية الخناق في القص وليس فوق الطرف السفلي من عملية الخنازير.ثم ارفع الجدار البريتوني بالكامل باستخدام ملقط وقم بعمل شق مماثل من سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات إلى الصفاق باستخدام مقص. تجنب قطع الأمعاء والحجاب الحاجز. بعد ذلك ، انقع شاشا جراحيا بمحلول ملحي دافئ وضعه بجوار الشق الموجود على يمين الجراح.اسحب الأمعاء الدقيقة والغليظة بلطف باستخدام برعم قطني منقوع بالمحلول الملحي وضعه على الشاش المنقوع بمحلول ملحي. قم بتغطية الأمعاء بشاش رطب إضافي لإبقائها رطبة. بعد ذلك ، اسحب الأمعاء بلطف إلى يمين الجراح باستخدام الشاش الرطب.ثم ضع توترا لطيفا لتصور الوريد البابي. إذا كان تصور الوريد البابي صعبا ، فقم بضبط موضع المعدة بلطف باستخدام برعم قطني رطب. بعد توصيل التعليق الورمي بلطف عدة مرات للحصول على تعليق خلوي متجانس ، اسحب 100 ميكرولتر من تعليق الخلية في حقنة هاميلتون أو حقنة ملليلتر واحدة متصلة بإبرة قياس 33 ، وتجنب فقاعات الهواء.أدخل ببطء الإبرة المشطوفة في الوريد البابي بعمق إدخال من ثلاثة إلى أربعة ملليمترات وزاوية الإبرة موازية تقريبا لوريد الباب. حقن الخلايا السرطانية ببطء على مدى 30 ثانية لمنع انسداد الوريد البابي. يتغير لون الكبد مؤقتا من الأحمر إلى الأبيض.بعد الحقن ، قم بإزالة الإبرة ببطء وقم بتطبيق ضغط لطيف على الفور على موقع الحقن باستخدام برعم قطني جاف لمدة خمس دقائق. قم بإزالة برعم القطن وقم بتطبيق إسفنجة مرقئ على الفور على موقع الحقن. امسك الإسفنجة ببرعم قطني أو ملقط واضغط بضغط لطيف لمدة خمس دقائق أخرى.بعد خمس دقائق ، قم بإزالة الضغط على الإسفنجة المرقئة وتأكد من عدم وجود نزيف من موقع الحقن. في حالة حدوث نزيف ، قم بإجراء الإرقاء بالضغط على الفور باستخدام برعم قطني لمدة 10 دقائق تقريبا. ثم ضع إسفنجة مرقئ إضافية لمدة خمس دقائق أخرى.بعد التأكد من عدم وجود نزيف ، قم بإزالة الشاش الجراحي على الأمعاء. ثم باستخدام حقنة مملوءة بخمسة ملليلترات من المياه المالحة ، قم برش المحلول الملحي على الأمعاء لمنع التصاق الأعضاء. ضع الأمعاء بلطف داخل تجويف البطن وقم بخياطة الصفاق باستخدام 4-0 خيوط بولي جلاكتين.ثم رفع جانبي الجلد مع ملقط ، وتطبيق دبابيس الجلد لإغلاق شق الجلد ، مع الحرص على عدم تدبيس الأمعاء. قم بإيقاف تشغيل الأيزوفلوران ، ولكن حافظ على تدفق الأكسجين قيد التشغيل. راقب الماوس بعناية.وعندما يستيقظ الماوس ، ضعه في قفص فارغ على وسادة تدفئة. راقب الماوس حتى يصبح واعيا ومتنقلا بشكل طبيعي. بعد أربع ساعات من الجراحة ، حقن تحت الجلد 0.1 ملليغرام لكل كيلوغرام من البوبرينورفين.راقب الماوس بعناية يوميا لمدة أسبوع ، وتحقق من الغرز والتئام الجروح. بعد سبعة إلى 10 أيام من الجراحة، قم بإزالة دبابيس الجلد باستخدام مزيل دباسة. أظهر التهجين بالحمض النووي الريبي في الموقع بعد أسبوعين من حقن الوريد الذيل AAV-8 Islr الإفراط في التعبير عن Islr في الكبد.بعد أسبوعين من حقن AAV mRuby2 ، تم حقن معلقات خلية واحدة من المواد العضوية لسرطان القولون في الوريد البابي للفأر. من الناحية العيانية ، أدى حقن الوريد البابي هذا إلى عقيدات ورم بيضاء متعددة في الكبد. أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين للنقائل الكبدية لسرطان القولون والمستقيم الناجم عن حقن الوريد البابي علم الأنسجة المرضي للسرطان الغدي الأنبوبي المتمايز بشكل معتدل مصحوبا برد فعل لحمية ونخر من البلاستيك الوهمي.هذا علم الأنسجة الغني بالسدى يلخص بأمانة نقائل الكبد البشرية لسرطان القولون والمستقيم ، مما يجعل هذا النموذج مناسبا للبحوث الانتقالية التي تحقق في سدى الورم النقيلي. أكدت الكيمياء النسيجية المناعية لأكتين العضلات الملساء ألفا وجود الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان ، في حين أظهر تلطيخ Picro-Sirius الأحمر مصفوفة وفيرة خارج الخلية في اللحمة المتوسطة للورم. كشفت الكيمياء المناعية ل EPCAM أن سرطان القولون والمستقيم النقيلي أظهر تبرعم الورم ، وهو سمة من سمات سوء تشخيص سرطان القولون والمستقيم.وكان مؤشر وضع العلامات Ki67 حوالي 80٪ مما يشير إلى أن معظم الخلايا السرطانية نشطة من الناحية الانقسامية. وأظهرت الفئران متوسط بقاء على قيد الحياة لمدة 57 يوما بعد حقن الورم في الوريد البابي. أظهرت الفئران المعالجة ب AAV-8 Islr تحسنا في بقاء الفئران ، وانخفضت في إشارات التصوير الحي من الأورام ، وزادت من إشارات البروتين المورفوجيني العظمي ، وانخفضت خلايا Ki67 المتكاثرة.تأكد من تطبيق طرف القطن على موقع الحقن الصحيح ويتم تطبيق الإسفنجة المرقئة فقط بعد توقف النزيف. يمكن مراقبة ظهور الورم باستخدام تصوير IVIS للتأكد من أن الخلايا السرطانية تنمو داخل الكبد.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

المتقدم نموذج حيواني من القولون والمستقيم ورم خبيث في الكبد: تقنيات التصوير وخصائص النقيلي النسخ

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid حقن الخلية السرطانية لإنتاج نماذج الماوس من الدماغ الانبثاث

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

نموذج الرئة اللاخلوي والخلوية لدراسة ورم خبيث

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

الجمع بين استخدام الذيل الوريد الانبثاث الاختبارات والوقت الحقيقي في التصوير فيفو لقياس سرطان الثدي الاستعمار المنتشر والعبء في الرئتين

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

التحليل المرضي لنقائل الرئة بعد الحقن الجانبي الوريد الذيل من الخلايا السرطانية

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Biomimetic Model for Liver Cancer to Study Tumor-Stroma Interactions in a 3D Environment with Tunable Bio-Physical Properties

نموذج حيوي لسرطان الكبد لدراسة التفاعلات الورم ستروما في بيئة 3D مع خصائص بيو فيزيائية قابلة للتوابل

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary liver tumor developing in the wake of chronic liver disease. Chronic liver disease and inflammation leads to a ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

نمذجة ورم خبيث في الدماغ عن طريق حقن الوريد الخلفي لخلايا سرطان الثدي الالتهابية

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

A Permanent Window for Investigating Cancer Metastasis to the Lung

نافذة دائمة للتحقيق في انتشار السرطان إلى الرئة

Metastasis, accounting for ~90% of cancer-related mortality, involves the systemic spread of cancer cells from primary tumors to secondary sites such as ...

Intratibial Osteosarcoma Cell Injection to Generate Orthotopic Osteosarcoma and Lung Metastasis Mouse Models

حقن الساركوما العظمية داخل الظنبوب لتوليد الساركوما العظمية العظمية ونماذج الفئران الخبيثة الرئوية

Osteosarcoma is the most common primary bone cancer in children and adolescents, with lungs as the most common metastatic site. The five-year survival ...