Name: portal vein injection of colorectal cancer organoids to study the liver metastasis stroma
Uploaded: 2021-09-03T13:45:00
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이 연구는 National Health and Medical Research Council (APP1156391에서 D.L.W., S.L.W.)의 보조금으로 지원되었습니다. (APP1081852 내지 D.L.W., APP1140236 내지 S.L.W., APP1099283 내지 D.L.W.); 암 협의회 SA 비트 암 프로젝트 기증자 및 보건부를 통해 남호주 주 정부를 대신하여 (MCF0418 ~ S.L.W., D.L.W.); 일본 교육, 문화, 스포츠, 과학 기술부에서 위임 한 과학 연구 보조금 (B) (20H03467 ~ M.T.) AMED-CREST (일본 의학 연구 개발청, 진화 과학 기술 핵심 연구 (19gm0810007h0104 및 19gm1210008s0101 ~ A.E.); AMED (19cm0106332h0002에서 A.E.까지의 암 연구 및 치료 진화 프로젝트 (P-CREATE); 일본 젊은 연구자를위한 과학 해외 도전 프로그램 진흥 학회 (H.K.), 다케다 과학 재단 펠로우십 (H.K.), Greaton International Ph.D. 장학금 (H.K.), 라이온스 의료 연구 재단 장학금 (K.G.).
재조합 AAV 벡터를 생산해 주신 벡터 및 게놈 공학 시설(VGEF), 어린이 의학 연구소(CMRI)(NSW, AUSTRALIA)의 Leszek Lisowski 박사에게 감사드립니다.

이 기사의 모든 동물 절차는 사우스 오스트레일리아 보건 의학 연구소 동물 윤리위원회 (승인 번호, SAM322)에 의해 검토되고 승인되었습니다.
1. 아데노 관련 바이러스의 꼬리 정맥 주사
참고: 아데노 관련 바이러스(AAV)는 생물안전 레벨 1 지침에 따라 생물학적 위험으로 취급해야 합니다. AAV 제조, 정제 및 적정을 위해 공개된 프로토콜(33)을...

이 연구에서, 우리는 마우스 CRC 오가노이드의 문맥 정맥 주사가 인간 CRC 간 전이의 조직학적 특징을 모방하는 섬유아세포가 풍부한 간 전이를 재현가능하게 생성한다는 것을 보여주었다. 또한, AAV8 매개 유전자 요법과 같은 스트로마 지향 치료제와 조합될 때, 이 전임상 모델은 마우스 생존 및 종양 성장에 대한 치료 효과를 평가하는 데 유용한 도구로서 작용한다.
프로토콜에...

대장암(CRC)은 전 세계적으로 암 사망률의 주요 원인이다1. CRC 환자의 절반 이상이 문맥 정맥 보급을 통해 발생하는 간 전이를 일으킨다1. 현재, 진행된 간 전이를 치료할 수 있는 효과적인 치료제는 없으며, 대부분의 환자들은 전이성 질환에 굴복한다.
전이성 틈새 또는 종양 미세환경은 보급된 CRC 세포2의 생착 및 성장에 중요한 역할을 한다. 암 관련 섬유아세포(CAFs)는 종양 미세환경의 두드러진 성분으로, 성장 인자 분비, 세포외 기질(ECM) 리모델링, 면역 환경 및 혈관 신생조절 3,4,5를 통해 암 진행을 촉진 또는 억제한다. CAF는 또한 화학 요법 및 면역 요법에 대한 내성을 부여합니다3. 또한, CAF는 CRC 간 전이의 개시 및 진행을 조절하고 CRC 3,6,7,8 환자의 예후를 예측합니다. 따라서, CAF 관련 인자는 CRC 간 전이를 억제하기 위한 치료 전략의 개발을 위해 이용될 수 있었다. 그러나, 전이성 종양 스트로마를 연구하기에 만족스러운 마우스 모델의 부족은 스트로마 표적 치료법 개발에 주요한 장애물이 되어 왔다.
현재, CRC 간 전이를 연구하는 동물 모델에는 간으로의 간 전이 및 암 세포 이식 모델을 자발적으로 개발하는 일차 CRC 모델이 포함됩니다. 유전자 조작 마우스 모델 및 암세포의 결장 주입과 같은 일차 CRC 마우스 모델은 간으로의 전이를 거의 나타내지 않습니다 9,10,11,12. 더욱이, 간 전이가 관찰되더라도, 이들 모델은 원발성 종양 유도로부터 전이까지의 긴 잠복기를 보여주고, 잠재적으로 원발성 종양 부담으로 사망한다(12). CRC 간 전이를 효율적으로 생성하기 위해 배양 된 CRC 세포는 비장 내 주사, 간으로의 직접 실질 내 주사 및 문맥 정맥 주사의 세 가지 주사 방법을 사용하여 간으로 이식됩니다. 비장 주사된 암세포는 비장 정맥, 문맥 정맥으로 확산되고, 궁극적으로는 간(13,14)으로 퍼진다. 그러나, 비장내 주사는 다른 이식 모델15,16에 비해 더 낮은 종양 취수율을 산출한다. 비장 내 주사를 사용하면 비장의 암 성장을 피하기 위해 비장의 외과 적 제거가 수행되며, 이는 잠재적으로 면역 세포 성숙을 손상시킬 수 있습니다17. 또한, 비장 내 주사는 또한 비장 및 복강(18)에서 의도하지 않은 종양 성장을 초래할 수 있으며, 이는 간 전이 분석을 복잡하게 만든다. 간으로의 직접 실질 내 주사는 간전이를 효율적으로 유도한다16,19,20. 그럼에도 불구하고,이 접근법은 문맥 정맥 보급을 통해 자연적으로 발생하는 간 전이의 생물학적 단계를 완전히 회복시키지 못합니다. 간으로의 직접 주사를 사용하여, 암세포를 비포털로 진입시키지만, 전신 순환은 또한 다수의 큰 폐 전이를 초래할 수 있다(16). CRC 간 전이를 가진 대다수의 환자가 간(21)에서 다수의 종양 결절을 보이지만, 특정 간엽으로의 직접 주사는 단일 종양 질량(19,20)을 생성한다. 포털 정맥 주사 또는 장간막 정맥 주사는 기술적으로 도전적이지만, 환자17에서 보이는 성장 패턴을 되살리는 방식으로 종양 세포를 간으로 효율적으로 전달할 수 있습니다. 이 전략은 이차 부위 전이의 가능성을 최소화하고 간에서 암세포의 급속한 성장을 가능하게하여 마우스 생존 분석을 단순화 할 수 있습니다.
역사적으로, 마우스 MC-38, 인간 HT-29, 및 SW-620과 같은 결장직장암 세포주는 간 전이22,23의 마우스 모델을 생성하는데 사용되었다. 그러나, 이들 결장직장암 세포주는 탈생물성 기질 반응을 유도하지 않는다. 종양에서 기질 함량이 낮으면 암 관련 섬유아세포의 생물학적 역할을 조사하기가 어렵습니다. CRC 오가노이드 및 이들의 이식에서의 최근의 발전은 암 진행(24)에서 스트로마의 중요한 역할을 평가하는 유용한 플랫폼을 제공하였다. CRC 오가노이드의 간 이식은 섬유아세포가 풍부한 종양 미세환경을 생성하며 기질 연구 6,25에 대한 새로운 통찰력을 제공하였다. 현재, 오가노이드의 문맥 또는 장간막 정맥 주사는 CRC 간 전이 6,25,26,27,28을 생성하는 황금 표준 접근법이되었습니다. 그럼에도 불구하고, 우리의 지식에 따르면, 이전의 논문은 대장 종양의 포털 정맥 주사에 대한 자세한 방법을 설명하지 않았습니다. 여기에서, 우리는 CRC 오가노이드의 문맥 정맥 주사를 사용하여 새로운 아데노 관련 바이러스 (AAV) 매개 스트로마 지시 요법을 개발하기위한 방법론을 제시합니다.
간세포는 간에서 전이성 종양 미세환경의 중요한 구성성분이며 전이성 암 진행에 중요한 역할을 한다(29). 비신생물성 환자30,31명에서 간세포에서 단백질 발현을 유도하기 위한 AAV 유전자 치료 접근법의 성공에 영감을 얻어, CRC25에서 간 종양 미세환경을 변형시키는 것을 목표로 유사한 접근법을 조사하였다. 이와 같이, 우리는 또한 간 종양 미세환경을 변형시키기 위해 항종양원성 단백질의 발현을 유도하기 위한 AAV8의 꼬리 정맥 주사를 본원에 기술한다. 바이러스 생산 동안 바이러스 캡시드 단백질의 선택에 의해 지정된 AAV8 혈청형은 간세포 특이적으로 높은 형질도입 효율(즉, 간 종양 미세환경에서의 표적화된 유전자 발현)32을 유도한다. 우리는 이전에 Islr (류신이 풍부한 반복을 포함하는 면역 글로불린 수퍼 패밀리)이 골형성 단백질 (BMP) 신호 전달을 유도하고, CRC 종양 성장을 감소시키고, Lgr5+ 장 줄기 세포 분화를 촉진하는 CAF 특이적 유전자임을 보여주었습니다25. 간세포에서 암-억제 기질 유전자인 Islr의 AAV8 매개된 과발현이 AAV8-Islr 처리된 마우스에서 CRC 종양형의 문맥 정맥 주사를 수행함으로써 간 전이 진행을 약화시킬 수 있는지 여부를 시험하였다.
이 논문에서는 먼저 간 열대 AAV의 꼬리 정맥 주입 절차를 설명합니다. 이어서, AAV 처리된 마우스로의 종양성 세포 제제 및 문맥 정맥 주사를 위한 방법을 설명한다. 마지막으로, 우리는 스트로마 지향 치료제의 효능을 평가하기 위해 전이성 종양 진행을 모니터링하는 접근법을 제시한다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>TSK</td>
			<td>LDS-33013</td>
			<td>For portal vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 vicryl suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>J494G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40-&#181;m cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>302130</td>
			<td>Used to apply saline to the intestine after portal vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS*50LE</td>
			<td>Luer lock syringe for perfusion fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Isopropyl alcohol wipe</td>
			<td>Briemar</td>
			<td>5730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaesthesia machine</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;SMA antibody</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>M0851</td>
			<td>Clone 1A4. 1/500 dilution for immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>TROY</td>
			<td>N/A</td>
			<td>ilium Temvet Injection, 300 &#181;g/ml Buprenorphine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton buds</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Johnson&#39;s pure cotton bud applicators. Need to be autoclaved before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>L-8220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>HAMILTON</td>
			<td>81020</td>
			<td>For portal vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat box (animal warming chamber)</td>
			<td>Datesand</td>
			<td>MK3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat lamp</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic sponge</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0891-04-015</td>
			<td>Gelfoam absorbable gelatin sponge, USP, 12-7 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>India ink</td>
			<td>Talens</td>
			<td>44727000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection syringe and needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>326769</td>
			<td>For tail vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Islr probe (RNAscope)</td>
			<td>ACD</td>
			<td>450041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>988-3244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>128113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRI fibrosis tool</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>https://github.com/MontpellierRessourcesImagerie/imagej_macros_and_scripts/wiki/MRI_Fibrosis_Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope kit</td>
			<td>ACD</td>
			<td>322300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent restrainer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosa26-Cas9 mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>024858</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>PHA19042010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin staplers</td>
			<td>Able Scientific</td>
			<td>AS59028</td>
			<td>9 mm wound clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stapler applicator</td>
			<td>Able Scientific</td>
			<td>AS59026</td>
			<td>9 mm wound clip applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stapler remover</td>
			<td>Able Scientific</td>
			<td>AS59037</td>
			<td>Wound clip remover</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>Multigate</td>
			<td>29-220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gauze</td>
			<td>Sentry Medical</td>
			<td>GS001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Topical anesthesia cream</td>
			<td>EMLA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>EMLA 5% cream, 25 mg/g lignocaine and 25 mg/g prilocaine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605028</td>
			<td>Recombinant cell-dissociation enzyme mix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

portal vein injection of colorectal cancer organoids to study the liver metastasis stroma

대장암(CRC)의 간 전이는 암 관련 사망의 주요 원인이다. 종양 미세환경의 주요 구성 요소인 암 관련 섬유아세포(CAFs)는 전이성 CRC 진행에 중요한 역할을 하며 불량한 환자 예후를 예측합니다. 그러나, 전이성 암세포와 CAF 사이의 누화를 연구하기에 만족스러운 마우스 모델이 부족하다. 여기에서, 우리는 간 전이 진행이 전이성 틈새 시장에 의해 어떻게 조절되고 아마도 스트로마 지향 요법에 의해 억제 될 수 있는지를 조사하는 방법을 제시합니다. CRC 오가노이드의 포털 정맥 주사는 desmoplastic 반응을 일으켰고, 이는 인간 CRC 간 전이의 섬유아세포가 풍부한 조직학을 충실하게 되풀이했다. 이 모델은 비장내 주사 모델과 비교했을 때 간에서 더 높은 종양 부담을 갖는 조직 특이적이었으며, 마우스 생존 분석을 단순화하였다. 루시페라아제-발현 종양 오가노이드를 주입함으로써, 종양 성장 동역학은 생체내 영상화에 의해 모니터링될 수 있었다. 더욱이, 이러한 전임상 모델은 종양 중간엽을 표적화하는 치료제의 효능을 평가하는데 유용한 플랫폼을 제공한다. 우리는 간세포에 종양을 억제하는 기질 유전자의 아데노-관련 바이러스 매개 전달이 종양 미세환경을 리모델링하고 마우스 생존을 향상시킬 수 있는지 여부를 조사하는 방법을 기술한다. 이 접근법은 CRC의 간 전이를 억제하기위한 새로운 치료 전략의 개발 및 평가를 가능하게합니다.

간세포에서 종양-억제 기질 유전자인 Islr 4,25,43,44의 AAV 매개 과발현을 유도하기 위해, 우리는 AAV8을 코딩하는 Islr을 정맥내 주사하였다. AAV8-Islr의 1.0 x10 11 바이러스 게놈 (vg), 또는 대조군으로서, AAV8-mRuby2, 성인 마우스 꼬리 정맥에 주사하였다 (도 1A</...

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Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

결장직장암(CRC) 오가노이드의 포털 정맥 주사는 스트로마가 풍부한 간 전이를 일으킨다. CRC 간 전이의 이러한 마우스 모델은 종양-스트로마 상호작용을 연구하고 아데노-관련 바이러스-매개 유전자 요법과 같은 신규한 스트로마-지시 치료제를 개발하는데 유용한 도구를 나타낸다.

간 전이 스트로마를 연구하기 위해 대장암 오가노이드의 포털 정맥 주사

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...

대장암 환자의 50% 이상이 문맥 정맥 보급을 통해 간 전이를 일으킨다. 그리고 대장암 간 전이를 연구하는 현재의 동물 모델은 생물학적 과정을 재구성하기에 부적절하다. 결장직장암 종양의 포탈 정맥 주사는 결장직장암 간 전이에서 전이성 암 세포와 CAS 사이의 누화를 조사할 수 있는 섬유아세포가 풍부한 종양 환경을 제공한다.이 기술은 대장암 간 전이의 종양 미세환경을 표적화하는 치료 전략의 효능을 평가하는 플랫폼을 제공한다. 이 방법은 CAS, 종양 세포 및 종양 미세환경 사이의 상호작용을 조사하는데 특히 유용하다. 면봉을 주사 부위에 올바르게 배치하지 않으면 바늘 제거 후 과도한 출혈이 발생할 수 있습니다.면봉 팁의 담그기는 주사 부위가 있으면 멈 춥니 다. 포털 정맥을 식별하고 주사 부위를 시각화하는 것은이 절차의 시각적 시연 없이는 어려울 수 있습니다. 시작하려면 가열 패드에 멸균 커튼을 사용하여 무균 수술 영역을 준비하십시오.또한 텍스트 원고에 설명 된대로 수술에 필요한 모든 도구를 준비하십시오. 그런 다음 광원의 위치를 조정하여 수술 부위를 비추십시오. 다음으로, 외과 적 통증 관리를 위해 부프레 노르 핀 (buprenorphine)의 체중 1kg 당 0.1 밀리그램을 마우스에 피하 주사하십시오.그런 다음 마우스를 마취시키고 전기 면도기를 사용하여 무균 수술 부위에서 멀리 떨어진 부위의 중간 부분을 상복부로 면도하여 머리카락이 부위를 오염시키지 않도록하십시오. Betadine 및 80 % 에탄올로 번갈아 절개 부위를 청소하여 수술 부위를 살균하십시오. 세 번 반복하십시오.마우스를 이소플루란 마취 유지와 함께 수핀 위치의 가열 패드 상의 수술 부위에 놓는다. 그런 다음 복부에 구멍이있는 외과 용 커튼을 놓습니다. 포셉으로 복부 피부를 들어 올리고 가위로 중간 선에서 두세 센티미터 정도의 피부 절개를 만들고 피부 만 자르고 절개가 중간 복부에서 흉골의 xiphoid 과정에 이르기까지 다양하고 xiphoid 과정의 하단 끝이 아닌지 확인하십시오.그런 다음 포셉으로 복막 벽을 완전히 들어 올리고 가위로 복막에 비슷한 두세 센티미터 절개를하십시오. 창자와 횡격막을 자르지 마십시오. 다음으로, 따뜻한 식염수로 수술 거즈를 담그고 외과 의사의 오른쪽 절개 옆에 놓습니다.식염수에 적신 면봉을 사용하여 소장과 대장을 부드럽게 당겨 식염수에 담근 거즈 위에 놓습니다. 내장을 촉촉하게 유지하기 위해 젖은 거즈를 추가로 덮으십시오. 다음으로, 젖은 거즈로 장을 외과 의사의 오른쪽으로 부드럽게 당깁니다.그런 다음 부드러운 긴장을 적용하여 포털 정맥을 시각화하십시오. 포털 정맥의 시각화가 어려운 경우 젖은 면봉으로 위장의 위치를 부드럽게 조정하십시오. 종양성 현탁액을 여러 번 부드럽게 파이핑하여 균질한 세포 현탁액을 얻은 후, 100 마이크로리터의 세포 현탁액을 해밀턴 또는 33 게이지 바늘에 부착된 1밀리리터 주사기에 끌어올려 기포를 피한다.천천히 바늘 경사를 포털 정맥에 삽입하여 삽입 깊이가 서너 밀리미터이고 바늘 각도가 포털 정맥과 거의 평행하게 삽입하십시오. 문맥 정맥의 폐색을 방지하기 위해 종양 세포를 30 초 이상 천천히 주입하십시오. 간장의 색깔은 일시적으로 빨간색에서 흰색으로 바뀝니다.주사 후, 바늘을 천천히 제거하고 즉시 다섯 분 동안 마른 면봉으로 주사 부위에 부드러운 압력을 가하십시오. 면봉을 제거하고 즉시 지혈 스폰지를 주사 부위에 바르십시오. 스폰지를 면봉이나 포셉으로 잡고 다섯 분 동안 부드러운 압력을 가하십시오.다섯 분 후, 지혈 스폰지에 압력을 제거하고 주사 부위에서 출혈이 없는지 확인하십시오. 출혈이 발생하면 즉시 약 10 분 동안면봉으로 압력 지혈을 수행하십시오. 그런 다음 추가로 다섯 분 동안 지혈 스폰지를 바르십시오.출혈이 없음을 확인한 후 장의 외과 적 거즈를 제거하십시오. 그런 다음 다섯 밀리리터의 식염수로 채워진 주사기를 사용하여 식염수를 장으로 분출하여 장기 유착을 방지하십시오. 부드럽게 복강 안쪽으로 창자를 다시 놓고 4-0 개의 폴리 글락틴 봉합사를 사용하여 복막을 봉합하십시오.그런 다음 포셉으로 피부의 양면을 들어 올리고 피부 스테이플러를 적용하여 피부 절개를 닫고 장을 스테이플링하지 않도록주의하십시오. 이소플루란을 끄되 산소 흐름을 계속 유지하십시오. 마우스를 주의 깊게 모니터링합니다.마우스가 깨어 났을 때 가열 패드의 빈 케이지에 놓습니다. 마우스가 의식이 있고 정상적으로 움직일 때까지 마우스를 모니터링하십시오. 수술 후 네 시간, 피하 부프레노르핀 킬로그램 당 0.1 밀리그램을 주입.조심스럽게 일주일 동안 매일 마우스를 모니터하고 봉합사와 상처 치유를 확인하십시오. 수술 후 7 내지 10 일 후, 스테이플러 제거제를 사용하여 피부 스테이플러를 제거한다. 꼬리 정맥 AAV-8 Islr 주사 후 두 주 후에 계내 혼성화된 RNA는 간에서 Islr의 과발현을 보였다.AAV mRuby2 주사 2주 후, 결장암 오가노이드의 단일 세포 현탁액을 마우스 포털 정맥에 주사하였다. 거시적으로,이 포털 정맥 주사는 간에서 여러 개의 흰색 종양 결절을 초래했습니다. 문맥 정맥 주사에 의해 유도된 결장직장암 간암의 헤마톡실린 및 에오신 염색은 desmoplastic 기질 반응 및 괴사를 수반하는 적당히 분화된 관형 선암종의 조직병리학을 입증하였다.이 스트로마가 풍부한 조직학은 인간 대장암 간 전이의 조직을 충실하게 되풀이하여 전이성 종양 기질을 조사하는 번역 연구에 적합하게 만들었습니다. 알파 평활근 액틴에 대한 면역조직화학은 암과 관련된 섬유아세포의 존재를 확인한 반면, 피크로-시리우스 레드 염색은 종양 중간엽에서 풍부한 세포외 매트릭스를 입증했다. EPCAM에 대한 면역 화학은 전이성 결장직장암이 종양 출아를 나타냈다는 것을 밝혀냈으며, 이는 불량한 예후 결장직장암의 특징이다.그리고 Ki67 표지 지수는 약 80%였으며, 이는 대부분의 종양 세포가 유사체적으로 활성임을 나타낸다. 마우스는 문맥 정맥으로의 종양성 주사 후 57일의 중간 생존율을 보였다. AAV-8 Islr-처리된 마우스는 향상된 마우스 생존, 종양으로부터의 생체내 영상화 신호 감소, 증강된 골형성 단백질 신호전달, 및 Ki67 증식 세포 감소를 나타냈다.면봉이 올바른 주사 부위에 적용되고 출혈이 멈춘 후에 만 지혈 스폰지가 적용되는지 확인하십시오. 종양 확립은 종양 세포가 간 내에서 성장하고 있는지 확인하기 위해 IVIS 이미징을 사용하여 모니터링 할 수 있습니다.

Research

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Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary liver tumor developing in the wake of chronic liver disease. Chronic liver disease and inflammation leads to a ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

염증성 유방암 세포의 꼬리 정맥 주입을 통한 뇌 전이 모델링

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

A Permanent Window for Investigating Cancer Metastasis to the Lung

폐에 암 전이를 조사하기위한 영구적 인 창

Metastasis, accounting for ~90% of cancer-related mortality, involves the systemic spread of cancer cells from primary tumors to secondary sites such as ...

Intratibial Osteosarcoma Cell Injection to Generate Orthotopic Osteosarcoma and Lung Metastasis Mouse Models

경골 내 골육종 세포 주사 동위원소 골육종 및 폐 전이 마우스 모델 생성

Osteosarcoma is the most common primary bone cancer in children and adolescents, with lungs as the most common metastatic site. The five-year survival ...