Name: portal vein injection of colorectal cancer organoids to study the liver metastasis stroma
Uploaded: 2021-09-03T13:45:00
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Este estudo foi apoiado por subsídios do Conselho Nacional de Saúde e Pesquisa Médica (APP1156391 a D.L.W., S.L.W.) (APP1081852 a D.L.W., APP1140236 para S.L.W., APP1099283 a D.L.W.,); O Cancer Council SA Beat Cancer Project em nome de seus doadores e do Governo do Estado da Austrália do Sul através do Departamento de Saúde (MCF0418 a S.L.W., D.L.W.); um Subsídio de Auxílio à Pesquisa Científica (B) (20H03467 a M.T.) encomendado pelo Ministério da Educação, Cultura, Esportes, Ciência e Tecnologia do Japão; AMED-CREST (Agência do Japão de Pesquisa e Desenvolvimento Médico, Pesquisa Central para Ciência e Tecnologia Evolução Evolução (19gm0810007h0104 e 19gm1210008s0101 a A.E.); o Projeto de Pesquisa e Evolução Terapêutica do Câncer (P-CREATE) da AMED (19cm0106332h0002 a A.E.); Japan Society for the Promotion of Science Overseas Challenge Program for Young Researchers (to H.K.), Takeda Science Foundation Fellowship (to H.K.), Greaton International Ph.D. Scholarship (to H.K.), Lions Medical Research Foundation Scholarship (to K.G.).
Agradecemos ao Dr. Leszek Lisowski da Vector and Genome Engineering Facility (VGEF), Instituto de Pesquisa Médica Infantil (CMRI) (NSW, AUSTRÁLIA) pela produção de vetores AAV recombinantes.

Todos os procedimentos animais deste artigo foram revisados e aprovados pelo Comitê de Ética Animal do Instituto de Saúde e Pesquisa Médica da Austrália do Sul (número de aprovação, SAM322).
1. Injeção de veia de cauda do vírus associado ao adeno
NOTA: O vírus associado ao Adeno (AAV) deve ser tratado como um risco biológico sob as diretrizes de Nível 1 de Biossegurança. Consulte o protocolo publicado para preparação, purificação e titulação<sup c...

Neste estudo, mostramos que a injeção de veia portal de organoides de CRC do camundongo gera reproduzivelmente metástases hepáticas ricas em fibroblastos que imitam características histológicas de metástases hepáticas crc humanas. Além disso, quando combinado com terapêuticas dirigidas ao estroma, como a terapia genética mediada pelo AAV8, este modelo pré-clínico serve como uma ferramenta útil para avaliar os efeitos terapêuticos sobre a sobrevivência do camundongo e o crescimento do tumor.
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O câncer colorretal (CRC) é uma das principais causas de mortalidade por câncer em todo o mundo1. Mais da metade dos pacientes do CRC desenvolve metástase hepática que ocorre através da disseminação venosado portal 1. Atualmente, não há terapêuticas eficazes que possam curar metástase hepática avançada, e a maioria dos pacientes sucumbe à doença metastática.
O nicho metastático ou microambiente tumoral desempenha um papel fundamental no enenxermento e crescimento das células CRC disseminadas2. Os fibroblastos associados ao câncer (CAFs), um componente proeminente do microambiente tumoral, promovem ou restringem a progressão do câncer através de fatores de crescimento secretos, remodelação da matriz extracelular (ECM) e modulação de paisagens imunes e angiogênese 3,4,5. Os CAFs também conferem resistência às quimioterapias e imunoterápicos3. Além disso, os CAFs regulam a iniciação e progressão da metástase hepática do CRC e prevêem prognóstico em pacientes com C CRC 3,6,7,8. Assim, fatores relacionados ao CAF poderiam ser explorados para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas para inibir a metástase hepática do CRC. No entanto, a falta de modelos satisfatórios de camundongos para estudar o estromoma tumoral metastático tem sido um grande obstáculo para o desenvolvimento de terapias direcionadas ao estroma.
Atualmente, modelos animais para estudar metástase hepática crc incluem modelos primários de CRC que desenvolvem espontaneamente modelos de metástase hepática e transplante de células cancerosas no fígado. Modelos primários de camundongos CRC, como modelos de camundongos geneticamente modificados e injeção cólon de células cancerosas, raramente apresentam metástase no fígado 9,10,11,12. Além disso, mesmo que seja observada uma metástase hepática, esses modelos mostram longa latência desde a indução do tumor primário até a metástase, e potencialmente morrem de carga tumoral primária12. Para gerar eficientemente metástases hepáticas crc, células de CRC cultivadas são transplantadas no fígado usando três abordagens de injeção: injeção intra-esplênica, injeção intra-parenchímal direta no fígado e injeção de veia portal. Células cancerígenas injetadas intra-esplenticamente se espalharam pela veia esplênica, a veia portal, e, finalmente, para o fígado13,14. No entanto, a injeção intra-esplênica produz uma menor relação de dor tumoral em comparação com outros modelos de transplante15,16. Com injeção intra-esplênica, a remoção cirúrgica do baço é realizada para evitar o crescimento do câncer no baço, o que pode comprometer potencialmente a maturação das células imunes17. Além disso, a injeção intra-esplênica também pode resultar em crescimento tumoral não intencional no baço e cavidade abdominal18, complicando as análises de metástase hepática. A injeção intra-pareínrima direta no fígado induz eficientemente a metástase hepática 16,19,20. No entanto, essa abordagem não recapitula totalmente um passo biológico de metástase hepática que ocorre naturalmente através da disseminação da veia portal. Usando injeção direta no fígado, a entrada de células cancerígenas em um não-portal, mas a circulação sistêmica também pode resultar em múltiplas metástases pulmonaresgrandes 16. Embora a maioria dos pacientes com metástase hepática CRC apresentem nódulos tumorais múltiplos no fígado21, a injeção direta em um lobo hepático específico gera uma única massa tumoral19,20. A injeção de veia portal ou injeção de veia mesentérico, embora tecnicamente desafiadora, permite a entrega eficiente de células tumorais no fígado de forma a recapitular os padrões de crescimento vistos em pacientes17. Essa estratégia pode minimizar a possibilidade de metástases de local secundário e permite o rápido crescimento de células cancerígenas no fígado, simplificando as análises de sobrevivência do camundongo.
Historicamente, linhas de células cancerígenas colorretais como o mouse MC-38, o HT-29 humano e o SW-620 foram usadas para gerar modelos de camundongos de metástase hepática22,23. No entanto, essas linhas de células cancerígenas colorretais não induzem uma reação escromato desmoplástica. O baixo teor estroma nos tumores dificulta a investigação dos papéis biológicos dos fibroblastos associados ao câncer. Os recentes avanços nos organoides de CRC e seus transplantes têm oferecido plataformas úteis para avaliar papéis vitais do estroma na progressãodo câncer 24. O transplante de fígado de organoides CRC gera um microambiente tumoral rico em fibroblasto e forneceu novas informações sobre a pesquisa estromal 6,25. Atualmente, a injeção de veias mesentóricas de organoides tornou-se uma abordagem padrão-ouro para gerar metástase hepática CRC 6,25,26,27,28. No entanto, pelo que sabemos, nenhum trabalho anterior descreveu métodos detalhados para a injeção venosa portal de tumoróides colorretais. Aqui, apresentamos uma metodologia para o uso da injeção venosa portal de organoides CRC para desenvolver uma nova terapia orientada a adeno -mediada pelo estromoma ..
Os hepatócitos são um importante constituinte do microambiente tumoral metastático no fígado e desempenham um papel crítico na progressão do câncer metastático29. Inspirados pelo sucesso das abordagens da terapia genética AAV para induzir a expressão proteica em hepatocitos em pacientes não neoplásicos30,31, investigamos uma abordagem semelhante, mas que visava modificar o microambiente do tumor hepático no CRC25. Como tal, também descrevemos aqui a injeção da veia da cauda do AAV8 para induzir a expressão de proteínas anti-tumorigênicas para modificar o microambiente tumoral hepático. O sorotipo AAV8, designado pela escolha da proteína capsida viral durante a produção do vírus, leva à alta eficiência de transdução especificamente dos hepatócitos (ou seja, expressão genética direcionada no microambiente do tumor hepático)32. Já mostramos anteriormente que islr (superfamília imunoglobulina contendo repetição rica em leucina) é um gene específico da CAF que induz a sinalização de proteína morfogenética óssea (BMP), reduz o crescimento tumoróide do CRC e promove a diferenciação de células-tronco intestinais Lgr5+25. Testamos se a superexpressão mediada pelo AAV8 do gene estromal que restringe o câncer, Islr, em hepatócitos poderia atenuar a progressão da metástase hepática realizando a injeção de veia portal de tumoróides CRC em camundongos tratados com AAV8-Islr.
Neste artigo, descrevemos primeiro o procedimento de injeção da veia da cauda do AAV trópico hepático. Em seguida, descrevemos um método de preparação de células tumoróides e injeção de veia portal nos camundongos tratados com AAV. Por fim, apresentamos abordagens para monitorar a progressão do tumor metastático para avaliar a eficácia da terapêutica dirigida ao estroma.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Formalin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>33-gauge needle</td>
			<td>TSK</td>
			<td>LDS-33013</td>
			<td>For portal vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 vicryl suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>J494G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40-&#181;m cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>302130</td>
			<td>Used to apply saline to the intestine after portal vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL centrifuge tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL syringe</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>SS*50LE</td>
			<td>Luer lock syringe for perfusion fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Isopropyl alcohol wipe</td>
			<td>Briemar</td>
			<td>5730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaesthesia machine</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9356</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;SMA antibody</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>M0851</td>
			<td>Clone 1A4. 1/500 dilution for immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>TROY</td>
			<td>N/A</td>
			<td>ilium Temvet Injection, 300 &#181;g/ml Buprenorphine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton buds</td>
			<td>Johnson &#38; Johnson</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Johnson&#39;s pure cotton bud applicators. Need to be autoclaved before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-luciferin</td>
			<td>Biosynth</td>
			<td>L-8220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>HAMILTON</td>
			<td>81020</td>
			<td>For portal vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat box (animal warming chamber)</td>
			<td>Datesand</td>
			<td>MK3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat lamp</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic sponge</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>09-0891-04-015</td>
			<td>Gelfoam absorbable gelatin sponge, USP, 12-7 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>India ink</td>
			<td>Talens</td>
			<td>44727000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection syringe and needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>326769</td>
			<td>For tail vein injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Islr probe (RNAscope)</td>
			<td>ACD</td>
			<td>450041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>988-3244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Living Image Software</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>128113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRI fibrosis tool</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>https://github.com/MontpellierRessourcesImagerie/imagej_macros_and_scripts/wiki/MRI_Fibrosis_Tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAscope kit</td>
			<td>ACD</td>
			<td>322300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent restrainer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rosa26-Cas9 mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>024858</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>PHA19042010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sold by multiple suppliers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin staplers</td>
			<td>Able Scientific</td>
			<td>AS59028</td>
			<td>9 mm wound clips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stapler applicator</td>
			<td>Able Scientific</td>
			<td>AS59026</td>
			<td>9 mm wound clip applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stapler remover</td>
			<td>Able Scientific</td>
			<td>AS59037</td>
			<td>Wound clip remover</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>Multigate</td>
			<td>29-220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gauze</td>
			<td>Sentry Medical</td>
			<td>GS001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Topical anesthesia cream</td>
			<td>EMLA</td>
			<td>N/A</td>
			<td>EMLA 5% cream, 25 mg/g lignocaine and 25 mg/g prilocaine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605028</td>
			<td>Recombinant cell-dissociation enzyme mix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

portal vein injection of colorectal cancer organoids to study the liver metastasis stroma

A metástase hepática do câncer colorretal (CRC) é uma das principais causas de morte relacionada ao câncer. Os fibroblastos associados ao câncer (CAFs), um dos principais componentes do microambiente tumoral, desempenham um papel crucial na progressão metastática do CRC e predizem um prognóstico ruim do paciente. No entanto, há falta de modelos satisfatórios de camundongos para estudar o crosstalk entre células cancerígenas metastáticas e CAFs. Aqui, apresentamos um método para investigar como a progressão da metástase hepática é regulada pelo nicho metastático e possivelmente poderia ser contida pela terapia dirigida por estroma. A injeção de veia portal de organoides crc gerou uma reação desmoplástica, que recapitulou fielmente a histologia rica em fibroblasto de metástases hepáticas crc humanas. Este modelo foi específico do tecido com maior carga tumoral no fígado quando comparado a um modelo de injeção intra-esplênica, simplificando as análises de sobrevivência do camundongo. Ao injetar organoides tumorais que expressam luciferase, a cinética de crescimento tumoral poderia ser monitorada por imagens in vivo . Além disso, este modelo pré-clínico fornece uma plataforma útil para avaliar a eficácia da terapêutica voltada para o mesenquime tumoral. Descrevemos métodos para examinar se a entrega mediada por vírus adeno de um gene estromal inibidor de tumores para hepatócitos poderia remodelar o microambiente tumoral e melhorar a sobrevivência do camundongo. Essa abordagem permite o desenvolvimento e a avaliação de novas estratégias terapêuticas para inibir a metástase hepática do CRC.

Para induzir a superexpressão mediada pelo AAV de um gene escroto de contenção de tumores, Islr 4,25,43,44, em hepatócitos, injetamos intravenosamente AAV8 codificadora de Islr. 1.0 x 1011 genomas virais (vg) de AAV8-Islr, ou como controle, AAV8-mRuby2, foi injetado na veia da cauda do rato adulto (Figura 1A). Duas...

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Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

A injeção de veia portal de organoides de câncer colorretal (CRC) gera metástase hepática rica em estroma. Este modelo de camundongos de metástase hepática crc representa uma ferramenta útil para estudar interações tumorais-estroma e desenvolver novas terapêuticas dirigidas a estroma, como terapias genéticas mediadas por vírus associados ao adeno.

Portal Injeção de Veia de Organoides de Câncer Colorretal para Estudar o Estroma metástase hepática

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...

Mais de 50% dos pacientes com câncer colorretal desenvolvem metástase hepática através da disseminação da veia portal. E os modelos animais atuais para estudar metástase hepática de câncer colorretal permanecem inadequados para recapitular o processo biológico. A injeção de câncer colorretal fornece um ambiente tumoral rico em fibroblastos que permite a investigação do crosstalk entre células cancerígenas metastáticas e CAS em metástase hepática de câncer colorretal.Esta técnica fornece uma plataforma para avaliar a eficácia das estratégias terapêuticas voltadas para o microambiente tumoral da metástase hepática do câncer colorretal. Este método é particularmente útil para investigar interações entre CAS, células tumorais e o microambiente tumoral. Se a ponta de algodão não for colocada corretamente no local da injeção, o sangramento excessivo pode ocorrer após a remoção da agulha.A imersão da ponta de algodão pára assim que o local da injeção estiver localizado. Identificar a veia do portal e visualizar o local da injeção pode ser difícil sem demonstração visual deste procedimento. Para começar, prepare uma área cirúrgica asséptica usando cortinas estéreis em uma almofada de aquecimento.Além disso, prepare todos os instrumentos necessários para a cirurgia, conforme descrito no manuscrito do texto. Em seguida, ilumine a área cirúrgica ajustando a posição da fonte de luz. Em seguida, injete subcutâneamente 0,1 miligramas por quilograma de peso corporal de buprenorfina em um camundongo para o tratamento da dor cirúrgica.Em seguida, anestesiar o mouse e usar uma máquina de barbear elétrica, raspar o meio para o abdômen superior em uma área distante da área cirúrgica asséptica para evitar que o cabelo contamine o local. Limpe o local de incisão alternando com Betadine e 80% de etanol para esterilizar a área cirúrgica. Repita três vezes.Coloque o mouse na área cirúrgica em uma almofada de aquecimento em uma posição supina com manutenção da anestesia isoflurane. Em seguida, coloque uma cortina cirúrgica com um buraco sobre seu abdômen. Levante a pele abdominal com fórceps e faça uma incisão de pele de dois a três centímetros na linha média com uma tesoura, cortando apenas a pele, certificando-se de que a incisão varia do abdômen médio ao processo xifoide do esterno e não acima da extremidade inferior do processo xifoide.Em seguida, levante totalmente a parede peritifica com fórceps e faça uma incisão semelhante de dois a três centímetros ao peritônio com uma tesoura. Evite cortar o intestino e o diafragma. Em seguida, mergulhe uma gaze cirúrgica com soro fisiológico quente e coloque-a ao lado da incisão à direita do cirurgião.Puxe suavemente os intestinos pequenos e grandes para fora usando um broto de algodão encharcado com soro fisiológico e coloque-os na gaze salina encharcada. Cubra os intestinos com gaze molhada adicional para mantê-los úmidos. Em seguida, puxe suavemente o intestino para a direita do cirurgião com a gaze molhada.Em seguida, aplique uma tensão suave para visualizar a veia do portal. Se a visualização da veia portal for difícil, ajuste suavemente a posição do estômago com um broto de algodão molhado. Depois de canalizar suavemente a suspensão tumoróide várias vezes para obter uma suspensão celular homogênea, elabove 100 microlitres da suspensão celular em uma seringa Hamilton ou mililitro presa a uma agulha calibre 33, evitando bolhas de ar.Insira lentamente o bisbisco da agulha na veia portal com uma profundidade de inserção de três a quatro milímetros e o ângulo da agulha quase paralelo à veia portal. Injete as células tumorais lentamente em 30 segundos para evitar a oclusão da veia portal. A cor do fígado muda temporariamente de vermelho para branco.Após a injeção, remova a agulha lentamente e imediatamente aplique pressão suave no local da injeção com um broto de algodão seco por cinco minutos. Retire o broto de algodão e aplique imediatamente uma esponja hemostática no local da injeção. Segure a esponja com um broto de algodão ou fórceps e aplique pressão suave por mais cinco minutos.Após cinco minutos, remova a pressão para a esponja hemostática e confirme que não há sangramento do local da injeção. Se ocorrer sangramento, realize imediatamente hemostasia de pressão com um broto de algodão por cerca de 10 minutos. Em seguida, aplique uma esponja hemostática adicional por mais cinco minutos.Depois de confirmar que não há sangramento, remova as gazes cirúrgicas nos intestinos. Em seguida, usando uma seringa cheia de cinco mililitros de soro fisiológico, esguiche o soro fisiológico nos intestinos para evitar a adesão dos órgãos. Coloque suavemente os intestinos de volta dentro da cavidade abdominal e sutura o peritônio usando suturas de poliglactina 4-0.Em seguida, levantando ambos os lados da pele com fórceps, aplique grampos de pele para fechar a incisão da pele, tomando cuidado para não grampear o intestino. Desligue o isoflurane, mas mantenha o fluxo de oxigênio funcionando. Monitore cuidadosamente o mouse.E quando o rato acordar, coloque-o em uma gaiola vazia em uma almofada de aquecimento. Monitore o mouse até que ele esteja consciente e ambulando normalmente. Quatro horas após a cirurgia, injete subcutâneamente 0,1 miligramas por quilograma de buprenorfina.Monitore cuidadosamente o mouse diariamente durante uma semana, verificando as suturas e a cicatrização da ferida. Sete a dez dias após a cirurgia, remova os grampeadores de pele usando um removedor de grampeador. RNA in situ hibridização duas semanas após a veia traseira AAV-8 Islr injeção mostrou superexpressão de Islr no fígado.Duas semanas após a injeção de AAV mRuby2, suspensões de células únicas de organoides de câncer de cólon foram injetadas na veia portal do rato. Macroscopicamente, esta injeção de veia portal resultou em múltiplos nódulos tumorais brancos no fígado. A hematoxilina e a coloração de eosina das metástases hepáticas do câncer colorretal induzidas pela injeção de veia portal demonstraram histopatologia de adenocarcinoma tubular moderadamente diferenciado acompanhado de uma reação estromal desmoplástica e necrose.Esta histologia rica em estroma fielmente recapitulava fielmente a das metástases hepáticas de câncer colorretal humano, tornando este modelo adequado para pesquisas translacionais que investigam o estromoma tumoral metastático. A imunohistoquímica para actina muscular suave alfa confirmou a presença de fibroblastos associados ao câncer, enquanto a coloração vermelha picro-Sirius demonstrou matriz extracelular abundante no tumor mesenchyme. A imunoquímica da EPCAM revelou que o câncer colorretal metastático mostrou brotamento tumoral, característica do câncer colorretal de prognóstico ruim.E o índice de rotulagem Ki67 foi de aproximadamente 80% indicando que a maioria das células tumorais são mitoticamente ativas. Os camundongos apresentaram uma sobrevida mediana de 57 dias após a injeção tumoróide na veia portal. Os camundongos tratados com islr AAV-8 mostraram melhor sobrevivência do camundongo, diminuíram os sinais de imagem in vivo de tumores, aumentaram a sinalização de proteína morfogenética óssea e diminuíram as células proliferadoras de Ki67.Certifique-se de que a ponta de algodão seja aplicada no local certo de injeção e a esponja hemostática só é aplicada depois que o sangramento parar. O estabelecimento do tumor pode ser monitorado usando a imagem IVIS para garantir que as células tumorais estejam crescendo dentro do fígado.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

Modelo Animal avançado de Colorectal metástase no fígado: técnicas de imagem e Propriedades de metastáticos Clones

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Pesquisa do câncer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Um modelo de injeção da veia porta para o Estudo do Fígado metástase do câncer de mama

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotídeo injeção de células de cancer para produzir mouse modelos de metástases cerebrais

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Modelo de pulmão acelular e celular para estudar o Tumor metástase

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Combined Use of Tail Vein Metastasis Assays and Real-Time In Vivo Imaging to Quantify Breast Cancer Metastatic Colonization and Burden in the Lungs

Uso combinado de ensaios de metástase de veia de cauda e imagens in vivo em tempo real para quantificar a colonização metastática do câncer de mama e carga nos pulmões

Metastasis is the main cause of cancer-related deaths and there are limited therapeutic options for patients with metastatic disease. The identification ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Análise patológica da metástase pulmonar após injeção lateral de cauda-veia de células tumorais

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Biomimetic Model for Liver Cancer to Study Tumor-Stroma Interactions in a 3D Environment with Tunable Bio-Physical Properties

Um modelo biomimético para câncer de fígado para estudar interações tumorais-estroma em um ambiente 3D com propriedades biofísicos incapazes

Hepatocellular carcinoma (HCC) is a primary liver tumor developing in the wake of chronic liver disease. Chronic liver disease and inflammation leads to a ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modelando Metástase Cerebral Via Injeção Venosa Caudal de Células Inflamatórias de Câncer de Mama

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

A Permanent Window for Investigating Cancer Metastasis to the Lung

Uma janela permanente para investigar metástase do câncer no pulmão

Metastasis, accounting for ~90% of cancer-related mortality, involves the systemic spread of cancer cells from primary tumors to secondary sites such as ...

Intratibial Osteosarcoma Cell Injection to Generate Orthotopic Osteosarcoma and Lung Metastasis Mouse Models

Injeção de células osteossarcoma intratibiais para gerar modelos de osteossarcoma ortotópico e metástase pulmonar

Osteosarcoma is the most common primary bone cancer in children and adolescents, with lungs as the most common metastatic site. The five-year survival ...