Name: retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases
Uploaded: 2021-06-14T13:45:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases at JoVE.com

تم دعم هذه الدراسة من قبل IAF-PP (HMBS Domain) (OrBID): OculaR BIomaterials and Device ، A * STAR ، سنغافورة (H17/01/a0/013) ، منحة NUS Start-up NUS NUHSRO/2016/100/SU/01 ، منحة برنامج NUHS للعلماء السريريين (NCSP) وبرنامج البحوث التنافسية التابع للمؤسسة الوطنية للبحوث ، سنغافورة (NRF-CRP21-2018-0008) إلى X.S. ، Hong Leong أموال الأستاذية الممنوحة ل G.E.H. و B.V.S. نود أن نعرب عن تقديرنا للفريق البيطري في منصة النموذج ما قبل السريري الانتقالي (معهد سنغافورة لأبحاث العيون ، سنغافورة) لتقديم الدعم في إعداد جراحة NHP ومتابعة الحيوانات. نود أن نعرب عن تقديرنا لجيل تيو وزملائنا من C. Zeiss Meditec Singapore على الدعم الفني ل OPMI-Lumera 700 مع جهاز OCT المتكامل أثناء الجراحة.

يحمل بوريس ستانزل 9980851 براءة اختراع أمريكي على أداة (مكشطة RPE) المستخدمة في هذه الدراسة. المتحدث الفخري من C. Zeiss Meditec و Geuder إلى Boris Stanzel. وليس لدى المؤلفين الآخرين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.
The Authors section was updated from:
Ivan Seah*1, Zengping Liu*2,3,4, Daniel Soo Lin Wong3, Wendy Wong1, Graham E. Holder1,3,5, Veluchamy Amutha Barathi3,4,6, Gopal Lingam1,3,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
2Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), 
3Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally
to:
Ivan Seah*1,2, Zengping Liu*1,3,4, Daniel Soo Lin Wong1, Wendy Wong2, Graham E. Holder1,2,5, Veluchamy Amutha Barathi1,4,6, Gopal Lingam1,2,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore 
2Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
3Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR) 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

تحمل زراعة الشبكية RPE وعدا كبيرا لعلاج الأمراض التنكسية الموروثة والمكتسبة في الشبكية. وتشمل هذه الحالات التهاب الشبكية الصباغي (RP ، حثل القضيب المخروطي) والأشكال المتقدمة من AMD مثل GA. بشكل جماعي ، تمثل هذه الاضطرابات نسبة كبيرة من العمى غير القابل للعلاج حاليا على مستوى العالم1,2. يتم تصنيف المراحل المتقدمة من AMD إلى AMD الوعائية الجديدة (nAMD) و GA. في حين أن هناك خيارات علاج فعالة ل nAMD ، مثل حقن عامل النمو البطاني المضاد للأوعية الدموية (anti-VEGF) ، فإن المرضى الذين يعانون من GA لديهم خيارات علاج محدودة. RP هي مجموعة غير متجانسة للغاية من اضطرابات الشبكية الموروثة التي تتميز بانحطاط مستقبلات ضوئية تدريجية للشبكية. في بعض المرضى ، يقع العيب الوراثي المسبب داخل RPE بدلا من المستقبلات الضوئية. وبالتالي ، قد يكون العلاج البديل RPE استراتيجية بديلة إذا كان العلاج الجيني غير ممكن.
هناك اهتمام كبير بتطوير علاجات فعالة لهذه الحالات. على وجه الخصوص ، اكتسبت زراعة RPE زخما كنهج علاجي محتمل3،4،5،6،7،8. منذ ظهور التقارير الأولى عن زرع RPE في 1980s9 ، توسع المجال ليشمل مصادر خلايا RPE المختلفة ، واستراتيجيات التسليم ، والنماذج التجريبية للمرض والزرع 10،11،12،13،14. من بين النماذج الحيوانية المختلفة ، فقط NHP لديها "البقعة اللوتية" مع "fovea centralis" ، وهو تخصص تشريحي في القطب الخلفي من شبكية العين مشترك مع البشر. يحتوي fovea على كثافة عالية جدا من المستقبلات الضوئية المخروطية التي تتيح رؤية مركزية عالية الدقة15. لدى NHP أيضا تركيبة جينومية وبروتينية مماثلة16 عند مقارنتها بالبشر. أوجه التشابه هذه تجعله نموذجا حيوانيا مهما ومناسبا لدراسة أمراض العين التي تؤثر على شبكية العين البشرية17,18.
تصف هذه المخطوطة طريقة للزرع تحت الدبقي ل RPE xenograft ، بدعم من حامل خلية PET ، في NHPs المثبطة للمناعة. تم وصف تقنية عبر الجسم الزجاجي لزرع RPE تحت الشبكية في الأرانب في مخطوطة سابقة19. ومع ذلك ، في NHPs ، يتطلب وجود fovea عناية خاصة أثناء التلاعب أثناء الجراحة20. على وجه الخصوص ، هناك خطر كبير من تمزق الحويصلة إذا كانت طرق حقن السائل تحت الشبكية تولد قوة مفرطة على شبكية العين20. لذلك ، ينصب تركيز هذه المخطوطة على استراتيجيات للحد من خطر صدمة البقر غير المقصودة في NHP.
وتشمل هذه استخدام حقن البلازمينوجين داخل الجسم الزجاجي قبل الجراحة لإطلاق الالتصاقات شبه البؤرية والتصوير المقطعي للتماسك البصري المتكامل بالمجهر الجراحي (miOCT) أثناء العملية الجراحية للتصور في الوقت الحقيقي لتشريح البؤرة. ويقترح إنشاء قنية تحت الشبكية مزدوجة التجويف 25/41 G حسب الطلب مع سدادة PFCL داخل العين تحت إعدادات IOP منخفضة للسماح بعملية أكثر تحكما في انفصال الحفريات. علاوة على ذلك ، يوصى بالاستئصال الجراحي ل RPE الأصلي قبل الزرع للسماح بتكامل أفضل بين خلايا RPE المزروعة والمستقبلات الضوئية المضيفة. وأخيرا، يتم وصف بروتوكول تثبيط المناعة الجهازية في الفترة المحيطة وبعد العملية الجراحية لنماذج NHP لتحسين بقاء زينوغرافيت RPE xenograft بعد الزرع11,21.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Mydriacyl (Tropicamide 1.0%) Sterile Ophthalmic preparation</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>SIN 4715P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3800598</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% Mydfrin (Phenylephrine hydrochloride) Ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01785</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G AWH Vivid Chandelier</td>
			<td>Synergetics</td>
			<td>56.54.25P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 Ga Bi-Blade Vitreous Cutter Combined Wide-Field Stellaris Elite Pack</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>SE5525WVB</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMO ENDOSOL Balanced Salt Solution for ophthalmic irrigation</td>
			<td>Abbott Medical Optics</td>
			<td>15020</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apo-minocycline</td>
			<td>Apotex Inc</td>
			<td>2084104</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUROVISC - Hypromellose Ophthalmic Solution USP 2% w/v</td>
			<td>Aurolab</td>
			<td>TN 00002387</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave MELAG, Vacuklav</td>
			<td>MELAG</td>
			<td>1131-B2300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer XL (ST5010)</td>
			<td>Leica</td>
			<td>2433</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced Saline Solution</td>
			<td>Beaver Visitec</td>
			<td>581732</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Bud</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NA6-100</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnosys Espion E3 Console</td>
			<td>Diagnosys</td>
			<td>272</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>MAL 19950403AEZ</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0100</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet contact lens electrodes</td>
			<td>Fabrinal</td>
			<td>F-06</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extendable PolyTip Cannula 25 G/38 G</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3247</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexTip Brush (25 g) 1.5 mm</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3222</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine 10% Faure</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Swab</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NP3275</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton gas tight syringe 250 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81101</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis HRA + OCT Computer System</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td>N.A.</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Gill II</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>3801520</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope eclipse Ti-E main body (100-240V)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>33131</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin injection</td>
			<td>Ceva</td>
			<td>37711/58317</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium carbonate</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.05680.0250</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monkey plasminogen</td>
			<td>Molecular Innovations</td>
			<td>SKU-CYPLG</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-contact wide angled 128 degree fundus lens</td>
			<td>C. Zeiss Medtech</td>
			<td>Resight 700</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven Ophthalmic Drape</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065103120</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Corneal/Scleral V-Lance Knife 20 G</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065912001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding Station</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EG1150 H</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast High Melt Paraffin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>39601095</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0025</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prepowdered Surgical Gloves</td>
			<td>MAXITEX</td>
			<td>85-173-2/85-173-3/85-173-4</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRODINE Povidone-Iodine Solution BP</td>
			<td>ICM PHARMA</td>
			<td>PMLBLP20-01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Righton Slit Lamp Model MW50D (RAA133CB)</td>
			<td>Righton-Oph</td>
			<td>5200162</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2255</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safil Polyglycolic acid, braided, coated, absorbable surgical suture 7/0</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>G1048711</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHINCORT I.M. INJ. Triamcinolone Acetonide 40 mg/mL</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>SHI40 SGP-2610015-001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 21 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657527</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 23 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657667</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirolimus</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>SIN12034P</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel subdermal needle electrode</td>
			<td>OcuScience</td>
			<td>F-E2</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stellaris Elite vision enhancement system</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>BL15455</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 27 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4665406</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 30 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4656300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gown + 2 Hand Towels</td>
			<td>STERIL</td>
			<td>APP10 00 01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626W</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 1 cc/mL Luer SlipTip with needle 26 G</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-01S</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 3 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-03L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 5 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-05L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TobraDex (Tobramycin, Dexamethasone) Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01577</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Topcon Retinal Camera TRC-50DX</td>
			<td>Topcon</td>
			<td>948605</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vidisic Gel</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>GB41789155517</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazil-20</td>
			<td>Ilium</td>
			<td>38653/50276</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Opmi Rescan 700</td>
			<td>Carl Zeiss Meditec AG</td>
			<td>7210</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases

تحمل زراعة الشبكية الظهارية الصباغية (RPE) وعدا كبيرا لعلاج الأمراض التنكسية الموروثة والمكتسبة للشبكية. وتشمل هذه الحالات التهاب الشبكية الصباغي (RP) والأشكال المتقدمة من التنكس البقعي المرتبط بالعمر (AMD)، مثل الضمور الجغرافي (GA). وتمثل هذه الاضطرابات مجتمعة نسبة كبيرة من العمى غير القابل للعلاج حاليا على مستوى العالم. وقد ولدت هذه الاحتياجات الطبية غير الملباة اهتماما أكاديميا متزايدا بتطوير أساليب استبدال RPE. من بين النماذج الحيوانية المستخدمة عادة للاختبار قبل السريري للعلاجات ، فإن الرئيسيات غير البشرية (NHP) هي النموذج الحيواني الوحيد الذي يحتوي على بقعة. نظرا لأنها تشترك في هذا التشابه التشريحي مع العين البشرية ، فإن عين NHP هي نموذج حيواني مهم ومناسب قبل السريرية لتطوير المنتجات الطبية العلاجية المتقدمة (ATMPs) مثل العلاج بالخلايا RPE.
تصف هذه المخطوطة طريقة للزرع تحت الدبقي لطبقة أحادية RPE ، مستنبتة على حامل خلية البولي إيثيلين تيريفثاليت (PET) ، تحت البقعة على جرح RPE تم إنشاؤه جراحيا في NHPs المثبطة للمناعة. ال fovea - الجزء اللاوعائي المركزي من البقعة - هو موقع أكبر ضعف ميكانيكي أثناء عملية الزرع. ستحدث صدمة الثقب إذا كان حقن السائل الأولي تحت الشبكية يولد قوة مفرطة على شبكية العين. وبالتالي، يوصى بالحقن البطيء تحت السدادة الزجاجية للسائل المشبع بالفلور (PFCL) باستخدام قنية حقن تحت الشبكية ثنائية التجويف في إعدادات ضغط العين المنخفض (IOP) لإنشاء غشاء شبكية العين. 
ينصح أيضا بالمعالجة المسبقة بحقن البلازمينوجين داخل الجسم الزجاجي لإطلاق التصاقات المستقبلات الضوئية RPE-photoceptor parafoveal. هذه الاستراتيجيات مجتمعة يمكن أن تقلل من احتمال تمزق الأبقار بالمقارنة مع التقنيات التقليدية. NHP هو نموذج حيواني رئيسي في المرحلة ما قبل السريرية من تطوير العلاج الخلوي RPE. يعالج هذا البروتوكول التحديات التقنية المرتبطة بتقديم العلاج الخلوي RPE في عين NHP.

تسلط طرق التصوير متعددة الوسائط (تصوير قاع العين ، تصوير قاع العين الذاتي (FAF) ، تصوير الأوعية الدموية بالفلوريسين (FFA) - المرحلة المبكرة والمرحلة المتأخرة ، والتصوير المقطعي بالتماسك البصري (OCT)) الضوء على ميزات عملية زرع الكسب غير المشروع RPE تحت الرقعة تحت الغرامية (الشكل 1). يظهر تصوير قاع العين وضع عملية زرع الكسب غير المشروع RPE في الحفرة دون هجرة بمرور الوقت. يظهر تصوير FAF تغييرات طفيفة في فرط التألق الذاتي (كما هو موضح في المناطق البيضاء عالية الكثافة) المتداخلة مع طعم RPE. لا تظهر المرحلة المبكرة والمتأخرة من FFA أي تسرب واضح (كما هو موضح في المناطق البيضاء عالية الكثافة التي تتضخم مع مرور الوقت) المحيطة بطعم RPE. تظهر الصور الأولية في اليوم 3 عيبا في النافذة بسبب إزالة RPE الأصلي قبل زرع الكسب غير المشروع. تظهر صور OCT البقعية الحفاظ على طبقات الشبكية الخارجية (على وجه الخصوص ، طبقة المستقبلات الضوئية) فوق الكسب غير المشروع RPE مع تقدم الوقت. يظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين طبقات شبكية العين سليمة مع عدم وجود دليل على وجود ستيرز دقيق. يشير الحفاظ على الطبقة النووية الخارجية فوق أطراف الكسب غير المشروع إلى أن خلايا RPE تؤدي وظائفها الفسيولوجية للحفاظ على صحة المستقبلات الضوئية.
تسلط المناظر داخل العين والخارجة للقنية ثنائية التجويف 25/41 G الضوء على الآلية التي يتم من خلالها التحكم في IOP أثناء الحقن تحت الشبكية (الشكل 2). يدخل BSS الفضاء تحت الشبكية أثناء حقن السائل تحت الشبكية عبر القنية المركزية الأطول. تؤدي الزيادات الكبيرة في ضغط العين إلى خروج BSS داخل التجويف الزجاجي من العين عبر التجويف المعدني الأكبر للقنية. ثم ينتقل BSS على طول القنية ويتم طرده في النهاية من منفذ الخروج بالقرب من محور القنية. لتقييم ما إذا كانت القنية تعمل كما هو متوقع ، تأكد من تدفق السوائل من منفذ الخروج بالقرب من محور القنية.
يسمح miOCT بتصور أبعاد البليف وتمزق فوفال محتمل أثناء العملية أثناء انفصال البؤرة (الشكل 3). الشكل 3A1-A3 يسلط الضوء على حالة من bleb مع تمزق foveal. في الشكل 3A1 ، في حين أن اللطخة السفلية مرئية تحت المجهر الجراحي ، فإن تصور المسيل للدموع أمر صعب. يوضح الشكل 3A2 القسم الطولي من البليب دون أي دموع. يوضح الشكل 3A3 تمزقا في الحفرة عند تقييم القسم الرأسي من اللطخة. يوضح الشكل 3B1-B3 بليب تم إنشاؤه بنجاح دون وجود أي دموع.
يشير عدم وجود تدهور كبير في الأشكال الموجية ERG إلى أن الوظيفة العالمية لكل من المستقبلات الضوئية للقضيب والمخروط يتم الحفاظ عليها باستخدام xenografts RPE تحت الشبكية (الشكل 4). تظهر الأشكال الموجية ERG الوظيفة الكلية للشبكية. على وجه الخصوص ، ينبغي إيلاء الاهتمام للموجات A لتحديد أي فقدان لوظيفة المستقبلات الضوئية.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig01.jpg"> الشكل 1: تحليل ما بعد الجراحة في الجسم الحي مع التصوير متعدد الوسائط. (أ) التصوير في الجسم الحي لزرع الكسب غير المشروع RPE تحت الجسم العظمي للعين اليسرى (أصفر في تصوير قاع العين) على طرق تصوير مختلفة (الأعمدة من اليسار إلى اليمين: تصوير قاع العين، التألق الذاتي، تصوير الأوعية الدموية بالفلورسين - المرحلة المبكرة، تصوير الأوعية الدموية بالفلوريسين - المرحلة المتأخرة، التصوير المقطعي للتماسك البصري) لنقاط زمنية تصل إلى 3 أشهر (الصفوف من الأعلى إلى الأسفل: الأيام 3، 14؛ الأشهر 1، 3). تشير العلامة النجمية على صورة قاع العين إلى موقع بضع الشبكية. يشير السهم الأبيض المتقطع إلى اتجاه فحص الخط. يسلط الشكل الأصفر المرسوم على تصوير قاع العين الذاتي الضوء على موقع عملية الزرع. تشير المثلثات البيضاء الموجودة على صور OCT إلى الحواف الجانبية للطعم (وفقا لمسح الخط على صورة قاع العين الملونة). (ب) تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين من عملية الزرع تحت فوفيا ضمورية (بسبب تمزق أثناء الجراحة) مع طبقات مسماة. أشرطة المقياس = 1 مم في A (صور التألق الذاتي و FA) ، و 200 ميكرومتر في A (صور OCT) ، و 100 ميكرومتر في B. الاختصارات: FA = تصوير الأوعية الدموية. OCT = التصوير المقطعي للتماسك البصري; RGC = طبقة خلية العقدة الشبكية; INL = الطبقة النووية الداخلية; ONL = الطبقة النووية الخارجية; RPE = ظهارة صبغة الشبكية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig02.jpg"> الشكل 2: مناظر داخل العين وخارجية للقنية ثنائية التجويف 25/41 G. (أ) منظر داخل العين للقنية ثنائية التجويف 25/41 G أثناء إنشاء اللطخة تحت الشبكية. يشير السهم الأبيض إلى القنية المركزية الأطول للحقن تحت الشبكية. يشير السهم المتقطع إلى فتح قنية الخروج التي يمر من خلالها BSS للخروج من العين. (ب) منظر خارجي للقنية مزدوجة التجويف 25/41 G. تشير العلامة النجمية إلى منفذ الخروج بالقرب من محور القنية الذي يتم تصريف BSS داخل العين منه. اختصار: BSS = محلول ملح متوازن. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig03.jpg"> الشكل 3: صور المجهر أثناء الجراحة وصور miOCT للبلب تحت الشبكية المعقد بسبب تمزق في الحويصلة. (A1) صورة مجهرية أثناء الجراحة تظهر موضع المسح الطولي (الأزرق) والعرضي (الأحمر) في بليب مع تمزق بوفيال. (ج2) مسح miOCT طولي يظهر فقاعة تحت الشبكية في منطقة البوق (السهم الأصفر). (أ3) مسح miOCT عرضي يلتقط تمزقا فوريا (رأس سهم أبيض) ، إلى جانب بضع الشبكية (علامة نجمية وبليب تحت الشبكية (سهم أصفر). (ب1) صورة مجهرية أثناء العملية تظهر موضع المسح الطولي (الأزرق) والعرضي (الأحمر) في بقعة تشكلت بنجاح. (ب2) مسح miOCT طولي يظهر فقاعة تحت الشبكية في منطقة البوق (السهم الأصفر). (ب3) يظهر مسح miOCT المستعرض بليب تحت الشبكية تم إنشاؤه بنجاح مع فوفيا سليمة بشكل متفوق (الماس الأبيض). اختصار: miOCT = التصوير المقطعي للتماسك البصري المتكامل بالمجهر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig03large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig04.jpg"> الشكل 4: ERG للعين المزروعة ب RPE xenograft. بالنسبة للتقييم الوظيفي لشبكية العين، لا تظهر تقييمات ERG الكاملة الميدانية للعين RPE-xenografted التي أجريت عند خط الأساس (الصف العلوي) و 3 أشهر بعد الزرع (الصف السفلي) أي تأثير كبير لزرع RPE xenograft على أي سعات استجابة أو توقيت أو شكل موجي في ظل ظروف مكيفة مع الظلام أو مكيفة مع الضوء. الاختصارات: RPE = ظهارة صبغة الشبكية. ERG = مخطط كهربية الشبكية; DA = الظلام التكيف; LA = تكييف الضوء. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig04large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases at JoVE.com

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

الرئيسيات غير البشرية (NHP) هي نموذج مثالي لدراسة العلاجات الخلوية للشبكية البشرية بسبب أوجه التشابه التشريحية والجينية. تصف هذه المخطوطة طريقة للزرع تحت الزرع تحت الجبهي للخلايا الظهارية الصباغية الشبكية في عين NHP واستراتيجيات لمنع المضاعفات أثناء الجراحة المرتبطة بالتلاعب البقعي.

زرع ظهارة صبغة الشبكية في نموذج الرئيسيات غير البشرية لأمراض الشبكية التنكسية

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

يمكن أن تؤدي صدمة البؤرة أثناء زرع الطعم الظهاري الصبغي للشبكية إلى نتائج بصرية سيئة. هذه الطريقة المقترحة يمكن أن تقلل من احتمال تمزق الحمى بالمقارنة مع التقنيات التقليدية. تعالج الطريقة المقترحة عوامل متعددة تساهم في صدمة الثقبية بما في ذلك إطلاق التصاقات تحت الشبكية ، وتصور أفضل لطبقات الشبكية ، وقوى القص العرضية أثناء تكوين اللطخة.هذه التقنية ، التي تنطوي على المعالجة المسبقة للبلازمينوجين داخل الجسم الزجاجي ، والمجهر المتكامل تكوين الشبكية الموجهة ب OCT ، والسدادة الزجاجية السائلة المشبعة بالفلور باستخدام قنية مزدوجة التجويف تنتج احتمال حدوث صدمة بؤرية مع إجراء ألطف. وسيقدم الإجراء الدكتور زينبينغ ليو، وهو زميل باحث أول، والسيد دانيال سو لين وونغ، مساعد باحث، وكلاهما من مختبر. كما سيقوم البروفيسور غوبال لينغام، وهو استشاري أول، بعرض إجراءات العملية.للبدء ، استخدم مقص Vannas لشق الملتحمة بالقرب من limbus للحصول على محيط الملتحمة بزاوية 360 درجة وقم بإجراء تشريح حاد لتوسيع السمحاق. استخدم شفرة زجاجية دقيقة قياس 25 لعمل شق بثلاثة ملليمترات في الصلبة عند الساعة الثامنة في العين اليمنى أو الساعة الرابعة في العين اليسرى. أدخل قنية ضخ منفذ جانبي مخصصة قياس 25 وخياطة باستخدام خياطة Vicryl 7-0.بعد التأكد من الموقع داخل الجسم الزجاجي ، ابدأ ضخ محلول الملح المتوازن واضبط النظام للحفاظ على ضغط العين البالغ 20 ملليلتر من الزئبق. استخدم مبزل مسطح الرأس بمقياس 25 لشق الصلبة عند الساعة الثانية في العين اليمنى أو الساعة 10 في العين اليسرى. أدخل ضوء ثريا بقياس 25 في المبزل مسطح الرأس وقم بتأمين الضوء بشريط لاصق.اضبط مصدر الضوء على حوالي 60٪ قم بإجراء عملية تصلب أخرى عند الساعة 10 للعين اليمنى أو الساعة الثانية للعين اليسرى كما هو موضح. ضع خياطة Vicryl 7-0 على شكل حرف U حول بضع التصلب دون ربط العقدة. أدخل مبزل استئصال الزجاجية من خلال بضع التصلب.قم بإجراء استئصال الزجاجية حول منفذ الدخول ، يليه استئصال زجاجي قصير النواة بحد أقصى 5000 قطعة في الدقيقة والحد الأقصى للشفط عند 400 ملم من الزئبق. حقن 20 إلى 50 ميكرولتر من تريامسينولون لتحسين تصور الجسم الزجاجي. افصل الجسم الزجاجي عن الشبكية للحث على انفصال الجسم الزجاجي الخلفي.ضع الزجاجي فوق القرص البصري للسماح بالحث اللطيف للانفصال الزجاجي الخلفي. احتفظ بالمؤشر الزجاجي فقط عند الشفط بحد أقصى 400 ملليمتر من الزئبق دون أن ينطوي على أي قطع. إذا لزم الأمر، استخدم ملقط العين عيار 25 لتمزيق القشرة الزجاجية لتسهيل الانفصال.افتح الغشاء اللامي الخلفي باستخدام القاطع وقم بإزالة التنورة الزجاجية المنفصلة حتى القاعدة الزجاجية. شفط أي تريامسينولون متبقي على سطح الشبكية. حقن واحد إلى 2 ملليلتر من السائل المشبع بالفلور لتغطية القطب الخلفي حتى الشبكية الطرفية الأمامية والمتوسطة.أدخل العين مع قنية حقن تحت الشبكية. استخدم إما قنية الحقن تحت الشبكية ثنائية التجويف المخصصة بمقياس 25 × 41 أو قنية حقن تحت الشبكية 25 × 38 مقياس متصلة بحقنة 250 ميكرولتر للحقن تحت الشبكية. اضبط ضغط العين على صفر إلى أربعة ملليمترات من الزئبق.قم بإجراء حقن تحت الشبكية من BSS بلطف للحث على انفصال الشبكية الموضعي. بمجرد أن يعبر البليب الحفرة ، توقف عن حقن BSS. قم بإنشاء نقطة ثانية من اتجاه منفصل.دمج كل من blebs لفصل fovea تماما. تمكين وظيفة التصوير المقطعي للتماسك البصري أثناء العملية لتصور تكوين الفقاعات ، مما يضمن أن تكون عمليات مسح الخط والمكعب في وضع عالي الوضوح للحصول على صورة في الحفرة. قم بتكبير شق الشبكية إلى 1.5 ملم باستخدام زوج من المقص الزجاجي العمودي قياس 25 للسماح بالوصول إلى المساحة تحت الشبكية للزرع.اضبط ضغط العين على 50 ملليمترا من الزئبق. استخدم قنية ذات طرف سيليكون مصقول لإزالة السائل المشبع بالفلور. استخدم سكين شق 1.4 ملم لتمديد بضع التصلب.أدخل أداة حلقة قابلة للتوسيع بمقياس 20 وقم بإزالة ظهارة صبغة الشبكية المضيفة تحت الساكنة عن طريق الكشط. أدخل طرف جهاز مطلق النار من خلال بضع التصلب ومر عبر التجويف الزجاجي عند ضغط داخل العين يبلغ 20 ملم من الزئبق. حقن الغرسة نحو الفضاء تحت الشبكية عبر حافة بضع الشبكية التي تم إنشاؤها من سطح الشبكية مع الجانب الناقل للخلية الذي يواجه غشاء بروكس والزينوغرافت الذي يواجه المستقبلات الضوئية.تصور موقع الزرع من خلال تمكين وظيفة التصوير المقطعي للتماسك البصري أثناء الجراحة. اضبط موضع الزرع باستخدام قنية الحقن تحت الشبكية أو مقص داخل العين المنحني بمقياس 25 للتأكد من أن الغرسة تستقر بشكل مسطح على غشاء بروكس في الفضاء تحت الشبكية مع شبكية العين العلوية سليمة ، وكذلك تقع بعيدا عن بضع الشبكية الذي تم إنشاؤه ولا تصطدم بموقع بضع الشبكية. استخدم قنية طرف سيليكون مصقول لتبادل السوائل والهواء واستشفط السائل تحت الشبكية بلطف من انفصال الشبكية وتثبيت حافة بضع الشبكية حتى يتم إعادة توصيل الشبكية فوق الغرسة.ثم لإنهاء الجراحة ، أغلق بضع تصلب منفذ العمل باستخدام خياطة Vicryl الموضوعة مسبقا 7-0. إعطاء 0.05 ملليلتر لكل ملليغرام من تريامسينولون الخالي من المواد الحافظة داخل الجسم الزجاجي في بضع التصلب في الساعة الثامنة. إزالة الثريا وقنية التسريب.أغلق هذه الصلبات باستخدام خيوط فيكريل. ملامسة العين للتأكد من أن ضغط العين ضمن النطاق المقبول. حقن الهواء المصفى أو BSS عبر إبرة قياس 30 إذا لزم الأمر.تم إجراء تصوير في الجسم الحي لزرع الطعم الظهاري الصبغي الظهاري للعين اليسرى تحت الرقاقة على طرق تصوير مختلفة لمدة تصل إلى ثلاثة أشهر. أشار تصوير قاع العين إلى أن الكسب غير المشروع المزروع في الحفرة لم يهاجر بمرور الوقت. أظهر التصوير الفلوري التلقائي لقاع العين تغييرات طفيفة في فرط التألق الذاتي المتداخل مع الطعم الظهاري الصباغي للشبكية.لم يظهر تصوير الأوعية الدموية بالفلوريسين في المرحلة المبكرة والمتأخرة أي تسرب يحيط بالكسب غير المشروع. أظهرت صور التصوير المقطعي للتماسك البصري البقعي الحفاظ على طبقات الشبكية الخارجية فوق الكسب غير المشروع مع تقدم الوقت ، مما يشير إلى وظيفة الخلايا الظهارية الصباغية الشبكية. أظهر تلطيخ HE طبقات شبكية العين سليمة مع عدم وجود دليل على وجود تمزقات صغيرة.يسمح التصوير المقطعي للتماسك البصري أثناء الجراحة بتصور أبعاد البليف وتمزق الثقب المحتمل أثناء العملية أثناء انفصال البؤرة. يمكن أن يتداخل وجود المسيل للدموع مع تكوين bleb. تمت الإشارة إلى نجاح تشكيل bleb الصحيح من خلال عدم وجود تمزق.للتقييم الوظيفي للشبكية ، تم إجراء تقييمات تخطيط كهربية الشبكية الكاملة المجال للعين الظهارية الظهارية للشبكية. يشير عدم وجود تدهور كبير في الأشكال الموجية لمخطط الشبكية الكهربائي إلى أنه تم الحفاظ على وظيفة كل من المستقبلات الضوئية للقضيب والمخروط مع xenografts. أثناء إنشاء الشبكية الموضعية الموضعية ، قم بذلك بلطف شديد لأن أي تغيير مفاجئ في سرعة الطائرة يمكن أن يؤدي إلى تمزقات الثقب.تنفيذ هذه الخطوة ببطء هو المفتاح للحد من إصابة foveal. التصوير متعدد الوسائط بما في ذلك التألق الذاتي لقاع العين ، وتصوير الأوعية الدموية بالفلوريسين ، والتصوير المقطعي للتماسك البصري جنبا إلى جنب مع دراسات الفيزيولوجيا الكهربية يمكن أن توفر نظرة ثاقبة أكبر على بقاء الكسب غير المشروع والعوامل التي تؤثر عليه.

Research

JoVE Journal

Medicine

Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis

تقنيات لمعالجة العيون تزرع لهم تعويضات الشبكية لتحليل المرضية المترجمة

With  the recent development of retinal prostheses, it is important to develop  reliable techniques for assessing the safety of these devices in ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

شبكية العين مفرزة النموذجي في القوارض بواسطة حقن تحت الشبكية من هيالورونات الصوديوم

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

أداء تحت الشبكية الحقن في القوارض لتسليم خلايا الظهارة الصبغية الشبكية في تعليق

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

تقنيات لمعالجة عيون مزروع مع الشبكية الأطراف الاصطناعية للالمترجمة تحليل المرضية: الجزء 2 فوق الشبكي يزرع مع الشبكية المسامير

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

الكمية قاع العين تألق ذاتي لتقييم أمراض الشبكية

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

خطوة بالبروتوكول الخطوة لجراحة تحت الشبكية في الأرانب

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

نموذج الفأر من الشبكية الإسكيمية-ضخه إصابة خلال ارتفاع ضغط العين

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

نموذج الحاد الشبكية لتقييم الدم الشبكية الحاجز خرق والمحتملة أدوية لعلاج

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset (Callithrix jacchus)

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset Callithrix jacchus

إجراء العمليات الجراحية "إدارة المخدرات" بالإذن الداخلية في الإنسان عدم "المهيمنة مرموز المشتركة" (جاكتشوس كاليثريكس)

Hearing research has long been facilitated by rodent models, although in some diseases, human symptoms cannot be recapitulated. The common marmoset ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

الأكسجين الناجم عن نموذج اعتلال الشبكية لأمراض الشبكية الإقفاري في القوارض

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...