Name: retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases
Uploaded: 2021-06-14T13:45:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases at JoVE.com

Questo studio è stato supportato da IAF-PP (HMBS Domain) (OrBID): OculaR BIomaterials and Device, A*STAR, Singapore (H17/01/a0/013), la sovvenzione NUS Start-up NUHSRO/2016/100/SU/01, nuhs Clinical Scientist Program (NCSP) grant e National Research Foundation Competitive Research Programme, Singapore (NRF-CRP21-2018-0008) a X.S., Hong Leong Endowed Professorship fondi a G.E.H. e B.V.S. Vorremmo ringraziare il team veterinario della Translational Pre-Clinical Model Platform (Singapore Eye Research Institute, Singapore) per aver fornito supporto nella preparazione alla chirurgia NHP e nel follow-up degli animali. Vorremmo estendere il nostro apprezzamento a Jill Teo e ai colleghi di C. Zeiss Meditec Singapore per il supporto tecnico per OPMI-Lumera 700 con dispositivo OCT intraoperatorio integrato.

Boris Stanzel detiene un brevetto statunitense 9980851 su uno strumento (raschietto RPE) utilizzato in questo studio. Relatore onorario da C. Zeiss Meditec e Geuder a Boris Stanzel. Gli altri autori non hanno alcun conflitto di interessi da dichiarare.

Esistono due approcci principali in fase di valutazione per il trapianto submaculare di RPE: l'iniezione di una sospensione di RPE e il trapianto di un innesto di RPE monostrato. Un confronto dettagliato tra i due metodi esula dallo scopo di questo manoscritto. Tuttavia, il trapianto di un innesto RPE monostrato può essere vantaggioso in quanto le cellule RPE sono più organizzate in un monostrato che in una sospensione. Le cellule RPE nell'innesto sono organizzate in un monostrato confluente, che assomiglia all'organizzazione dello strato cellulare RPE fisiologico e consente alle cellule RPE trapiantate di svolgere le loro funzioni fisiologiche. Ciò consente parametri di dosaggio più precisi rispetto alle sospensioni cellulari, il che è molto rilevante per il lavoro normativo e lo scale-up industriale.
La consegna dell'innesto di cerotto RPE nello spazio subretinico richiede un'attenta manipolazione della macula e un accurato inserimento dell'innesto nello spazio subretinico. I progressi tecnologici nella microchirurgia, come il miOCT, e una migliore comprensione delle dinamiche intraoperatorie del tessuto retinico hanno ridotto la curva di apprendimento di questa procedura. In questa discussione verranno spiegati i razionali dei seguenti aspetti: i) iniezione pre-operatoria di plasminogeno; ii) l'uso di miOCT intraoperatori; iii) l'uso di una cannula a doppio foro personalizzata da 41 G, impostazioni IOP basse e PFCL per la creazione di bleb subretinici; iv) raschiatura dello strato cellulare RPE nativo prima del trapianto; v) l'uso di sirolimus, triamcinolone, doxiciclina e minociclina per ridurre il rigetto immunogenico dell'innesto.
Le iniezioni preoperatorie di plasminogeno rilasciano aderenze retiniche parafoveali Negli esperimenti iniziali, era difficile staccare la fovea con una singola onda fluida. Sulla valutazione con miOCT, le immagini hanno rivelato la presenza di aderenze retiniche esterne parafoveali all'RPE nativo insieme a prove di trauma intraretinico20. Queste aderenze possono aver portato a un'espansione verticale del bleb piuttosto che all'onda fluida sottoretinica che si diffonde attraverso il contorno retinico, con conseguente trauma foveale. Il plasminogeno è il precursore inattivo della plasmina, una proteasi che prende di mira la fibronectina e la laminina. L'ocriplasmina è una variante bioingegnerizzata della plasmina umana, approvata dalla Food and Drug Administration (FDA) e dall'Agenzia europea per i medicinali (EMA) per il trattamento della trazione vitreomaculare sintomatica con o senza un foro maculare concomitante. Tuttavia, i rapporti post-approvazione dello sviluppo di edema della macula cistoide dopo l'iniezione di ocriplasmina hanno suggerito un effetto più esteso dell'enzima sulla retina23.
Sebbene i meccanismi esatti non siano stati identificati, è stato suggerito che la plasmina potrebbe indebolire l'adesione retinica attraverso la degradazione degli elementi della matrice interfotorecettore responsabili dell'adesione fotorecettore-RPE24. In questo protocollo, gli occhi NHP sono stati trattati con plasminogeno intravitreale 1 settimana prima dell'intervento chirurgico per rilasciare le aderenze retiniche esterne parafoveali. Nell'ipotesi che l'adesione fotorecettore-RPE sia indebolita, è necessaria una forza inferiore per staccare la retina neurosensoriale, incluso l'anello parafoveale distale, che in genere resiste all'onda fluida sottoretinica20. Pertanto, la forza somministrata durante il distacco del bleb retinico provoca l'espansione del bleb attraverso il contorno retinico piuttosto che allungare la retina tangenzialmente. Questo riduce il rischio di lacrime foveali. Tuttavia, va notato che l'effetto del plasminogeno sulla sopravvivenza a lungo termine del trapianto non è stato studiato in questo protocollo. Studi futuri dovrebbero tentare di determinare questo effetto.
miOCT fornisce un feedback anatomico per guidare la creazione di bleb subretinici, l'impianto di innesto e il drenaggio del fluido subretinico La manipolazione intraoperatoria e atraumatica della macula è la chiave per ottenere buoni risultati di trapianto. Tuttavia, i cambiamenti microstrutturali della macula legati alla manipolazione potrebbero non essere sempre evidenti sul microscopio operatorio. In tali procedure, il miOCT è uno strumento importante che fornisce un feedback intraoperatorio in tempo reale, tridimensionale, della struttura maculare. miOCT è particolarmente utile durante le fasi di distacco foveale, impianto di innesto e drenaggio del fluido subretinico utilizzando uno scambio fluido-aria. Durante il distacco foveale, miOCT può determinare le dimensioni verticali e orizzontali del bleb. Le microtestaine foveali, che potrebbero non essere visualizzate chiaramente al microscopio chirurgico, possono essere confermate da miOCT (Figura 3). Durante l'impianto dell'innesto, le immagini miOCT guidano mostrando la posizione dell'innesto o la vicinanza alla fovea, attraverso la retina spesso meno trasparente e distaccata. miOCT può anche evidenziare possibili aree di adesione retinica durante un difficile processo di trapianto25. Infine, nel processo di drenaggio del fluido subretinico, miOCT può guidare in modo affidabile il drenaggio del fluido subretinico fino al raggiungimento del completo contatto dell'innesto retinale-RPE.
La combinazione di una cannula a doppio foro, impostazioni IOP basse e tamponamento vitreo PFCL riduce sinergicamente il trauma maculare durante la creazione di bleb subretinici Lo stiramento retinico tangenziale e la turbolenza del fluido possono verificarsi durante l'iniezione di BSS subretinica per il distacco foveale che porta a lacrime foveali indesiderate. Per contrastare questi fenomeni, fattori come la posizione relativa e la distanza dal centro foveale in cui viene avviata l'iniezione, il volume e la velocità dell'iniezione, il tamponamento vitreo, la scelta della strumentazione subretinica e la IOP hanno tutti dimostrato di essere rilevanti20,26,27. Il bleb subretinico per il distacco foveale deve essere situato in una posizione adeguatamente distante dalla fovea, poiché lo stiramento retinico può essere più elevato nel sito di inizio del bleb27. La IOP dovrebbe anche essere mantenuta bassa durante la creazione del bleb subretinico. Quando la IOP dell'occhio è alta, si osserva un aumento verticale più elevato delle dimensioni del bleb piuttosto che l'espansione lungo il contorno della retina, mentre i bleb sono meno profondi a pressioni più basse20. Inoltre, sebbene un'iniezione intravitreale di 50 μL raddoppierà efficacemente la IOP nell'uomo28, data la lunghezza dell'occhio più breve nelle NHP, l'aumento della IOP durante l'iniezione subretinica sarà probabilmente più alto e più rapido che negli esseri umani. Mentre la maggior parte delle macchine per vitrectomia si adattano alla fluttuazione della IOP, la regolazione non è un processo simultaneo ma piuttosto reattivo che si verifica mentre l'iniezione subretinica procede. Quindi, maggiore è la IOP, maggiore è il rischio di sovraccarico retinico e conseguente trauma foveale. Pertanto, è essenziale mantenere una IOP bassa stabile durante l'iniezione subretinica.
Per l'iniezione subretinica è raccomandata una cannula subretinica commerciale da 20/41 G (DORC) o una cannula subretinica da 25/41 G su misura. La cannula consente al fluido di uscire dalla cavità vitrea in cambio di BSS iniettato nello spazio subretinico. Ciò garantisce la regolazione "simultanea" della IOP durante l'iniezione subretinica. Uno schema della cannula a doppio foro è visibile nella Figura 2. Infine, PFCL viene utilizzato per ridurre il rischio di lacrime foveali20,26,27. Poiché le PUCL, come l'ottalina, hanno un peso specifico più elevato, esercitano una forza verso il basso sulla retina durante il distacco foveale29. Ciò stabilizza ulteriormente il processo di creazione del bleb di distacco foveale e migliora l'espansione del bleb lungo il contorno retinico. Questa tecnica è stata utilizzata con successo per l'iniezione subretinica di rtPA nell'ambito di una massiccia emorragia submaculare dovuta a nAMD30.
La rimozione pre-trapianto di RPE nativo consente il ripristino del complesso RPE-fotorecettore L'RPE dell'ospite deve essere rimosso prima del trapianto di innesto. Questo perché il ripristino del complesso RPE-fotorecettore è necessario per consentire al trapianto di RPE di svolgere le sue funzioni fisiologiche di supporto ai fotorecettori21. L'RPE host, se non rimosso, può porsi come una barriera meccanica, che impedisce il ripristino di questo complesso. Può essere rimosso attraverso la somministrazione di sostanze chimiche tossiche RPE o utilizzando mezzi fisici di rimozione. I metodi di rimozione chimica comprendono la somministrazione sistemica o subretinica di iodato di sodio31,32. Poiché lo iodato di sodio provoca una degenerazione diffusa dei fotorecettori, delle cellule RPE e della coriocapillare quando somministrato, la sua tossicità retinica e sistemica ne preclude l'uso per studi sull'uomo32,33. Quindi, le tecniche intraoperatorie fisiche sono preferite. Sono stati concettualizzati vari metodi fisici. Quando vengono utilizzati metodi fisici, è fondamentale che la membrana di Bruch rimanga intatta. Molti studi in vitro hanno dimostrato la dipendenza della sopravvivenza dell'innesto di RPE da una membrana di Bruch intatta34,35,36.
I tentativi di debridement idraulico sono stati associati a rotture nella membrana di Bruch, un aumento del tasso di sviluppo della membrana epiretinica e vitreoretinopatia proliferativa, con conseguente distacco della retina da trazione37. Una spatola spolverata di diamanti proposta per lo sbrigliamento dell'RPE ha anche portato a rotture nella membrana di Bruch, con conseguente proliferazione cellulare dalla coroide nello spazio subretinico38. È interessante notare che uno strumento ad anello estensibile su misura potrebbe rimuovere l'RPE sovrastante con la conservazione della membrana di Bruch agli occhi di conigli e maiali11,39. La rimozione dell'RPE sottostante è utile anche per stabilire modelli animali con RPE e atrofia retinica esterna, simile alla forma atrofica avanzata di AMD. Quando un'area focale di RPE viene rimossa dalla macula, la ferita RPE si chiude attraverso l'ipertrofia delle cellule RPE rimanenti. Tuttavia, questa risposta di guarigione delle ferite è associata all'atrofia dello strato nucleare esterno40. Mentre la creazione di un modello animale esula dallo scopo di questo manoscritto, una procedura simile può creare un modello animale di un fenotipo AMD atrofico avanzato per la sperimentazione di terapie cellulari derivate da RPE.
L'uso di sirolimus, triamcinolone, doxiciclina e minociclina per ridurre il rigetto dell'innesto immunogenico Si ritiene che lo spazio subretinico sia un sito immuno-privilegiato, mantenuto da una barriera emato-retinica intatta e da altri fattori41. In molti studi che coinvolgono il trapianto subretinico di derivati di cellule staminali con una barriera emato-retinica intatta, i farmaci immunosoppressori svolgono un ruolo trascurabile nella sopravvivenza del trapianto42. Si pensa che la barriera emato-retinica esterna sia formata dallo strato nativo di RPE e dalle giunzioni strette tra le cellule RPE. Mentre la rimozione nativa dell'RPE consente una migliore integrazione dell'RPE trapiantato e dei fotorecettori dell'ospite, la barriera emato-retinica viene interrotta nel processo, aumentando la probabilità di un rigetto immunitario. Classicamente, le cellule T sono fondamentali per il processo di rigetto del trapianto di altri organi come il rene e il fegato43. Quindi, i regimi immunosoppressivi iniziali per il trapianto di tessuto retinico erano mirati a ridurre queste risposte immunitarie adattative.
Sirolimus, un bersaglio meccanicistico dell'inibitore della rapamicina, e tacrolimus, un inibitore della calcineurina, sono esempi di farmaci immunosoppressori che mirano alle risposte immunitarie adattative. Tuttavia, nonostante un'adeguata soppressione delle cellule T, i tassi di sopravvivenza del trapianto rimangono bassi. Inoltre, le cellule RPE sono note per sopprimere l'attivazione delle cellule T attraverso il rilascio di fattori inibitori e promuovere la generazione di cellule T regolatorie44. Pertanto, è diventato sempre più evidente che l'immunità adattativa potrebbe non essere l'unico fattore che contribuisce al rigetto dell'innesto42. Il trapianto subretinico di prodotti cellulari può provocare l'accumulo e l'attivazione di microglia45.
Le microglia sono i macrofagi della retina. Sono costituiti da due popolazioni principali: 1) la microglia perivascolare della vascolarizzazione retinica interna e 2) la microglia all'interno del parenchima del tessuto retinico. Poiché le microglia fanno parte della risposta immunitaria innata, i glucocorticoidi intravitreali, come il triamcinolone, possono sopprimere la proliferazione mediata dalle citochine46. Doxiciclina e minociclina possono anche sopprimere l'attivazione microgliale e devono essere considerate47,48. Infine, le differenze nel rigetto immunitario degli alloinnesti RPE rispetto agli xenotrapianti non sono completamente comprese49. Ad esempio, alloanticorpi contro cellule RPE derivate da cellule staminali pluripotenti indotte sono stati riportati nel siero di modelli di rigetto immunitario in vivo. Tuttavia, il ruolo di questi anticorpi e l'importanza del rigetto mediato da anticorpi nella sopravvivenza del trapianto rimangono sconosciuti50. Quindi, viene proposto un regime multifarmaco che utilizza sirolimus per la soppressione dell'immunità adattativa e una combinazione di triamcinolone, doxiciclina e minociclina per la soppressione dell'immunità innata. Questo regime è stato utilizzato con successo nei conigli con buoni risultati di sopravvivenza dell'innesto e effetti sistemici minimi11.
Limitazioni di questa tecnica chirurgica Questo documento descrive un possibile metodo chirurgico per consegnare un foglio di innesto RPE nello spazio subretinico di NHP; tuttavia, questo non significa che questo sia l'unico modo ottimizzato. Diversi chirurghi vitreo-retinici possono avere altre preferenze per la strumentazione e la tecnica. Ad esempio, questo design del dispositivo di impianto può fornire solo impianti piatti supportati da un supporto cellulare più rigido e quindi potrebbe non essere adatto per impianti relativamente flessibili (o laminati). I trapianti in sospensione RPE possono omettere gran parte di questa tecnica. Di conseguenza, i dettagli chirurgici richiederanno modifiche in base a ciascuna strategia di consegna.
Poiché l'interesse per le terapie cellulari per il trattamento delle malattie degenerative della retina continua a crescere, il modello animale NHP sarà essenziale negli studi preclinici per studiare i fattori che influenzano la sopravvivenza del trapianto di RPE. In questo manoscritto, vengono proposte strategie per consentire la consegna più fluida di un innesto RPE monostrato submaculare nell'occhio NHP. Si raccomandano anche metodi per una migliore visualizzazione delle complicanze intraoperatorie. Si prevede che questi metodi continueranno a migliorare man mano che l'uso di terapie cellulari si espande. I futuri documenti di metodo dovrebbero anche prendere in considerazione la proposta di un elenco completo di indagini per valutare vari aspetti strutturali e funzionali dell'innesto.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.
The Authors section was updated from:
Ivan Seah*1, Zengping Liu*2,3,4, Daniel Soo Lin Wong3, Wendy Wong1, Graham E. Holder1,3,5, Veluchamy Amutha Barathi3,4,6, Gopal Lingam1,3,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
2Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), 
3Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally
to:
Ivan Seah*1,2, Zengping Liu*1,3,4, Daniel Soo Lin Wong1, Wendy Wong2, Graham E. Holder1,2,5, Veluchamy Amutha Barathi1,4,6, Gopal Lingam1,2,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore 
2Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
3Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR) 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Il trapianto di RPE è molto promettente per il trattamento delle malattie degenerative della retina ereditarie e acquisite. Queste condizioni includono la retinite pigmentosa (RP, distrofia rod-cono) e forme avanzate di AMD come GA. Collettivamente, questi disturbi rappresentano una percentuale significativa della cecità attualmente non curabile a livello globale1,2. Gli stadi avanzati di AMD sono classificati in AMD neovascolare (nAMD) e GA. Mentre ci sono opzioni di trattamento efficaci per nAMD, come iniezioni di fattore di crescita endoteliale anti-vascolare (anti-VEGF), i pazienti con GA hanno opzioni di trattamento limitate. La RP è un gruppo altamente eterogeneo di disturbi ereditari della retina caratterizzati da progressiva degenerazione dei fotorecettori retinici. In alcuni pazienti, il difetto genetico causale si trova all'interno dell'RPE piuttosto che dei fotorecettori; quindi, la terapia sostitutiva RPE può essere una strategia alternativa se la terapia genica non è fattibile.
C'è un interesse significativo nello sviluppo di trattamenti efficaci per queste condizioni. In particolare, il trapianto di RPE sta guadagnando terreno come potenziale approccio terapeutico3,4,5,6,7,8. Da quando i primi rapporti sul trapianto di RPE sono apparsi nel 19809, il campo si è ampliato per includere varie fonti di cellule RPE, strategie di consegna e modelli sperimentali di malattia e trapianto10,11,12,13,14. Tra i vari modelli animali, solo l'NHP ha una "macula lutea" con una "fovea centralis", una specializzazione anatomica al polo posteriore della retina condivisa con l'uomo. La fovea contiene una densità molto elevata di fotorecettori a cono che consentono una visione centrale ad alta risoluzione15. L'NHP ha anche una composizione genomica e proteomica simile16 rispetto agli esseri umani. Queste somiglianze lo rendono un modello animale importante e appropriato per lo studio delle malattie oculari che colpiscono la retina umana17,18.
Questo manoscritto descrive un metodo per il trapianto submaculare di uno xenotrapianto RPE, supportato da un vettore di cellule PET, in NHP immunodepressi. Una tecnica transvitreale per il trapianto subretinico di RPE nei conigli è stata descritta in un precedente manoscritto19. Tuttavia, negli NHP, la presenza della fovea richiede particolare attenzione durante la manipolazione intraoperatoria20. In particolare, vi è un alto rischio di lacerazione foveale se i metodi di iniezione di liquido subretinico generano una forza eccessiva sulla retina20. Il focus di questo manoscritto è, quindi, sulle strategie per ridurre il rischio di traumi foveali involontari in NHP.
Questi includono l'uso dell'iniezione preoperatoria intravitreale di plasminogeno per il rilascio di aderenze parafoveali e la tomografia a coerenza ottica integrata nel microscopio chirurgico (miOCT) intraoperatoriamente per la visualizzazione in tempo reale dell'anatomia foveale. Viene proposta una cannula subretinica a doppio foro 25/41 G su misura con tamponamento intraoculare PFCL con basse impostazioni IOP per consentire un processo più controllato di distacco foveale. Inoltre, si raccomanda la rimozione chirurgica dell'RPE nativo prima dell'impianto per consentire una migliore integrazione tra le cellule RPE trapiantate e i fotorecettori dell'ospite. Infine, viene descritto un protocollo di immunosoppressione sistemica peri- e postoperatoria per modelli NHP per migliorare la sopravvivenza dello xenotrapianto RPE post-trapianto11,21.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Mydriacyl (Tropicamide 1.0%) Sterile Ophthalmic preparation</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>SIN 4715P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3800598</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% Mydfrin (Phenylephrine hydrochloride) Ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01785</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G AWH Vivid Chandelier</td>
			<td>Synergetics</td>
			<td>56.54.25P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 Ga Bi-Blade Vitreous Cutter Combined Wide-Field Stellaris Elite Pack</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>SE5525WVB</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMO ENDOSOL Balanced Salt Solution for ophthalmic irrigation</td>
			<td>Abbott Medical Optics</td>
			<td>15020</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apo-minocycline</td>
			<td>Apotex Inc</td>
			<td>2084104</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUROVISC - Hypromellose Ophthalmic Solution USP 2% w/v</td>
			<td>Aurolab</td>
			<td>TN 00002387</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave MELAG, Vacuklav</td>
			<td>MELAG</td>
			<td>1131-B2300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer XL (ST5010)</td>
			<td>Leica</td>
			<td>2433</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced Saline Solution</td>
			<td>Beaver Visitec</td>
			<td>581732</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Bud</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NA6-100</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnosys Espion E3 Console</td>
			<td>Diagnosys</td>
			<td>272</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>MAL 19950403AEZ</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0100</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet contact lens electrodes</td>
			<td>Fabrinal</td>
			<td>F-06</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extendable PolyTip Cannula 25 G/38 G</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3247</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexTip Brush (25 g) 1.5 mm</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3222</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine 10% Faure</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Swab</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NP3275</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton gas tight syringe 250 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81101</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis HRA + OCT Computer System</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td>N.A.</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Gill II</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>3801520</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope eclipse Ti-E main body (100-240V)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>33131</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin injection</td>
			<td>Ceva</td>
			<td>37711/58317</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium carbonate</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.05680.0250</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monkey plasminogen</td>
			<td>Molecular Innovations</td>
			<td>SKU-CYPLG</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-contact wide angled 128 degree fundus lens</td>
			<td>C. Zeiss Medtech</td>
			<td>Resight 700</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven Ophthalmic Drape</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065103120</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Corneal/Scleral V-Lance Knife 20 G</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065912001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding Station</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EG1150 H</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast High Melt Paraffin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>39601095</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0025</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prepowdered Surgical Gloves</td>
			<td>MAXITEX</td>
			<td>85-173-2/85-173-3/85-173-4</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRODINE Povidone-Iodine Solution BP</td>
			<td>ICM PHARMA</td>
			<td>PMLBLP20-01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Righton Slit Lamp Model MW50D (RAA133CB)</td>
			<td>Righton-Oph</td>
			<td>5200162</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2255</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safil Polyglycolic acid, braided, coated, absorbable surgical suture 7/0</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>G1048711</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHINCORT I.M. INJ. Triamcinolone Acetonide 40 mg/mL</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>SHI40 SGP-2610015-001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 21 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657527</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 23 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657667</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirolimus</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>SIN12034P</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel subdermal needle electrode</td>
			<td>OcuScience</td>
			<td>F-E2</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stellaris Elite vision enhancement system</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>BL15455</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 27 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4665406</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 30 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4656300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gown + 2 Hand Towels</td>
			<td>STERIL</td>
			<td>APP10 00 01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626W</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 1 cc/mL Luer SlipTip with needle 26 G</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-01S</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 3 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-03L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 5 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-05L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TobraDex (Tobramycin, Dexamethasone) Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01577</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Topcon Retinal Camera TRC-50DX</td>
			<td>Topcon</td>
			<td>948605</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vidisic Gel</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>GB41789155517</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazil-20</td>
			<td>Ilium</td>
			<td>38653/50276</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Opmi Rescan 700</td>
			<td>Carl Zeiss Meditec AG</td>
			<td>7210</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases

Il trapianto di epitelio pigmentato retinico (RPE) è molto promettente per il trattamento delle malattie degenerative della retina ereditarie e acquisite. Queste condizioni includono la retinite pigmentosa (RP) e forme avanzate di degenerazione maculare legata all'età (AMD), come l'atrofia geografica (GA). Insieme, questi disturbi rappresentano una percentuale significativa della cecità attualmente incurabile a livello globale. Queste esigenze mediche insoddisfatte hanno generato un maggiore interesse accademico nello sviluppo di metodi di sostituzione dell'RPE. Tra i modelli animali comunemente utilizzati per i test preclinici delle terapie, il primate non umano (NHP) è l'unico modello animale che ha una macula. Poiché condivide questa somiglianza anatomica con l'occhio umano, l'occhio NHP è un modello animale preclinico importante e appropriato per lo sviluppo di medicinali per terapie avanzate (ATMP) come la terapia cellulare RPE.
Questo manoscritto descrive un metodo per il trapianto submaculare di un monostrato RPE, coltivato su un vettore cellulare di polietilene tereftalato (PET), sotto la macula su una ferita RPE creata chirurgicamente in NHP immunosoppressi. La fovea - la porzione avascolare centrale della macula - è il sito della maggiore debolezza meccanica durante il trapianto. Il trauma foveale si verifica se l'iniezione iniziale di liquido subretinico genera una forza eccessiva sulla retina. Pertanto, l'iniezione lenta sotto tamponamento vitreo liquido perfluorocarburo (PFCL) è raccomandata con una cannula di iniezione subretinica a doppio foro a basse impostazioni di pressione intraoculare (IOP) per creare un bleb retinico. 
Si consiglia inoltre il pretrattamento con un'iniezione intravitreale di plasminogeno per rilasciare aderenze parafoveali RPE-fotorecettore. Queste strategie combinate possono ridurre la probabilità di strappi foveali rispetto alle tecniche convenzionali. L'NHP è un modello animale chiave nella fase preclinica dello sviluppo della terapia cellulare RPE. Questo protocollo affronta le sfide tecniche associate alla somministrazione della terapia cellulare RPE nell'occhio NHP.

Le modalità di imaging multimodale (fotografia del fondo, imaging a autofluorescenza del fondo (FAF), angiografia con fluoresceina del fondo (FFA) in fase iniziale e in fase avanzata e tomografia a coerenza ottica (OCT)) evidenziano le caratteristiche di un trapianto di innesto rpE submaculare di successo (Figura 1). La fotografia del fondo oculare mostra il posizionamento del trapianto di innesto RPE alla fovea senza migrazione nel tempo. L'imaging FAF mostra cambiamenti minimi nell'iper-autofluorescenza (dimostrata da aree bianche ad alta intensità) che si sovrappongono all'innesto RPE. L'FFA in fase iniziale e tardiva non mostra alcuna perdita evidente (dimostrata da aree bianche ad alta intensità che si ingrandiscono con il tempo) che circondano l'innesto RPE. Le immagini iniziali al giorno 3 mostrano un difetto della finestra dovuto alla rimozione dell'RPE nativo prima dell'impianto dell'innesto. Le immagini OCT maculari mostrano la conservazione degli strati retinici esterni (in particolare, lo strato di fotorecettore) sopra l'innesto RPE con il passare del tempo. La colorazione di ematossilina ed eosina mostra strati retinici intatti senza evidenza di microtesti. La conservazione dello strato nucleare esterno sopra le periferie dell'innesto suggerisce che le cellule RPE stanno svolgendo le loro funzioni fisiologiche di mantenimento della salute dei fotorecettori.
Le viste intraoculari ed esterne della cannula a doppio foro 25/41 G evidenziano il meccanismo con cui la IOP è controllata durante l'iniezione subretinica (Figura 2). La BSS entra nello spazio subretinico durante l'iniezione di liquido subretinico attraverso la cannula centrale più lunga. Aumenti significativi della pressione intraoculare fanno sì che la BSS all'interno della cavità vitrea esca dall'occhio attraverso il foro metallico più grande della cannula. BSS viaggia quindi lungo la cannula e alla fine viene espulso dalla porta di uscita vicino all'hub della cannula. Per valutare se la cannula funziona come previsto, assicurarsi che il fluido scorra dalla porta di uscita vicino all'hub della cannula.
Il miOCT permette la visualizzazione delle dimensioni bleb e di una potenziale lacrima foveale intraoperatoria durante il distacco foveale (Figura 3). La Figura 3A1-A3 evidenzia un caso di bleb con una lacerazione foveale. Nella Figura 3A1, mentre il bleb inferiore è visibile al microscopio chirurgico, la visualizzazione della lacrima è difficile. La Figura 3A2 mostra la sezione longitudinale di un bleb senza strappi. La Figura 3A3 mostra una lacerazione foveale quando si valuta la sezione verticale del bleb. La Figura 3B1-B3 mostra un bleb creato con successo senza la presenza di lacrime.
L'assenza di un deterioramento significativo delle forme d'onda ERG suggerisce che la funzione globale dei fotorecettori sia a bastoncello che a cono è mantenuta con xenotrapianti RPE subretinici (Figura 4). Le forme d'onda ERG mostrano la funzione complessiva della retina. In particolare, si dovrebbe prestare attenzione alle onde A per determinare qualsiasi perdita della funzione dei fotorecettori.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig01.jpg"> Figura 1: Analisi postoperatoria in vivo con imaging multimodale. (A) Imaging in vivo del trapianto di innesto di RPE submaculare dell'occhio sinistro (giallo sulla fotografia del fondo) su varie modalità di imaging (colonne da sinistra a destra: fotografia del fondo, autofluorescenza, angiografia del fondo fluoresceina-fase iniziale, angiografia del fondo fluoresceina-fase tardiva, tomografia a coerenza ottica) per punti temporali fino a 3 mesi (righe dall'alto verso il basso: giorni 3, 14; Mesi 1, 3). L'asterisco sulla fotografia del fondo indica il sito della retinotomia; la freccia bianca tratteggiata indica la direzione della scansione della linea. La forma disegnata in giallo sull'imaging ad autofluorescenza del fondo oculare evidenzia la posizione del trapianto. I triangoli bianchi sulle immagini dello Strumento di personalizzazione di Office indicano i rispettivi bordi laterali dell'innesto (come da scansione della linea sull'immagine del fondo a colori). (B) Colorazione di ematossilina ed eosina del trapianto sotto fovea atrofica (a causa di lacerazione intraoperatoria) con strati etichettati. Barre di scala = 1 mm in A (autofluorescenza e immagini FA), 200 μm in A (immagini OCT) e 100 μm in B. Abbreviazioni: FA = angiografia del fondo; OCT = tomografia a coerenza ottica; RGC = strato di cellule gangliari retiniche; INL = strato nucleare interno; ONL = strato nucleare esterno; RPE = epitelio pigmentato retinico. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig02.jpg"> Figura 2: Viste intraoculari ed esterne della cannula a doppio foro 25/41 G. (A) Vista intraoculare della cannula a doppio alesaggio 25/41 G durante la creazione di bleb subretinici. La freccia bianca indica la cannula centrale più lunga per l'iniezione subretinica. La freccia tratteggiata indica l'apertura della cannula in uscita attraverso la quale passa il BSS per uscire dall'occhio. (B) Vista esterna della cannula a doppio alesaggio 25/41 G. L'asterisco segna la porta di uscita vicino al mozzo della cannula da cui viene drenato il BSS intraoculare. Abbreviazione: BSS = soluzione salina bilanciata. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig02large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig03.jpg"> Figura 3: Immagini al microscopio intraoperatorio e immagini miOCT di bleb subretinico complicato da una lacerazione foveale. (A1) Un'immagine al microscopio intraoperatorio che mostra la posizione delle scansioni longitudinali (blu) e trasversali (rosse) in un bleb con una lacerazione foveale. (A2) Scansione longitudinale miOCT che mostra un bleb subretinico nella regione foveale (freccia gialla). (A3) Scansione miOCT trasversale che cattura una lacrima foveale (punta di freccia bianca), insieme a una retinotomia (asterisco e un bleb subretinico (freccia gialla). (B1) Un'immagine microscopica intraoperatoria che mostra la posizione delle scansioni longitudinali (blu) e trasversali (rosse) in una bleb formata con successo. (B2) Scansione longitudinale miOCT che mostra un bleb subretinico nella regione foveale (freccia gialla). (B3) Scansione miOCT trasversale che mostra un bleb subretinico creato con successo con una fovea intatta superiore (diamante bianco). Abbreviazione: miOCT = tomografia a coerenza ottica integrata al microscopio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig03large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig04.jpg"> Figura 4: ERG dell'occhio trapiantato con xenotrapianto RPE. Per la valutazione funzionale della retina, le valutazioni ERG a pieno campo dell'occhio xenotrapiantato RPE eseguite al basale (riga superiore) e 3 mesi dopo il trapianto (riga inferiore) non mostrano alcun effetto significativo del trapianto di xenotrapianto RPE su qualsiasi ampiezza di risposta, temporizzazione o forma d'onda in condizioni adattate al buio o adattate alla luce. Abbreviazioni: RPE = epitelio pigmentato retinico; ERG = elettroretinogramma; DA = adattato al buio; LA = adattato alla luce. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig04large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

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Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Il primate non umano (NHP) è un modello ideale per lo studio delle terapie cellulari retiniche umane a causa delle somiglianze anatomiche e genetiche. Questo manoscritto descrive un metodo per il trapianto submaculare di cellule epiteliali pigmentate retiniche nell'occhio NHP e strategie per prevenire le complicanze intraoperatorie associate alla manipolazione maculare.

Trapianto di epitelio pigmentato retinico in un modello di primati non umani per malattie degenerative della retina

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Il trauma foveale durante il trapianto di innesto epiteliale pigmentato retinico può causare scarsi risultati visivi. Questo metodo proposto può ridurre la probabilità di strappi foveali rispetto alle tecniche convenzionali. Il metodo proposto affronta molteplici fattori che contribuiscono al trauma foveale, tra cui il rilascio di aderenze subretiniche, una migliore visualizzazione degli strati retinici e forze di taglio tangenziali durante la formazione di bleb.Questa tecnica, che prevede il pretrattamento intravitreale del plasminogeno, la formazione di bleb retinici guidati da OCT integrati al microscopio e il tamponamento vitreo liquido perfluorocarburo utilizzando una cannula a doppio foro produce la probabilità di trauma foveale con una procedura più delicata. A dimostrare la procedura saranno il Dr.Zenping Liu, un ricercatore senior, e il Sig.Daniel Soo Lin Wong, un assistente di ricerca, entrambi provenienti da un laboratorio. Il professor Gopal Lingam, consulente senior, dimostrerà anche le procedure operative.Per iniziare, utilizzare le forbici Vannas per incidere la congiuntiva vicino al limbus per una peritomia congiuntivale a 360 gradi ed eseguire una dissezione smussata per ingrandire la peritomia. Utilizzare una lama micro vitreoretinica calibro 25 per eseguire un'incisione di tre millimetri nella sclera a ore otto nell'occhio destro o alle quattro nell'occhio sinistro. Inserire una cannula di infusione laterale personalizzata a 25 gauge e sutura utilizzando una sutura Vicryl 7-0.Dopo aver confermato la posizione intravitreale, avviare l'infusione bilanciata della soluzione salina e impostare il sistema per mantenere la pressione intraoculare di 20 millilitri di mercurio. Usa un trocar a testa piatta calibro 25 per incidere la sclera alle due nell'occhio destro o alle 10 nell'occhio sinistro. Inserire una luce lampadario calibro 25 nel trocar a testa piatta e fissare la luce con nastro adesivo.Regolare la sorgente luminosa a circa il 60% Eseguire un'altra sclerotomia a ore 10 per l'occhio destro o alle due per l'occhio sinistro come dimostrato. Posiziona una sutura Vicryl 7-0 a forma di U attorno alla sclerotomia senza legare i nodi. Inserire il trocar vitrectomia attraverso la sclerotomia.Eseguire la vitrectomia intorno alla porta di ingresso, seguita da una vitrectomia a nucleo corto con un massimo di 5.000 tagli al minuto e massima aspirazione a 400 millimetri di mercurio. Iniettare da 20 a 50 microlitri di triamcinolone per una migliore visualizzazione vitrea. Separare il corpo vitreo dalla retina per indurre un distacco vitreo posteriore.Posizionare il vitrettore sopra il disco ottico per consentire una delicata induzione del distacco vitreo posteriore. Mantenere il vitrettore solo su aspirazione ad un massimo di 400 millimetri di mercurio senza comportare alcun taglio. Se necessario, utilizzare la pinza intraoculare calibro 25 per strappare la corteccia vitrea per facilitare il distacco.Aprire la membrana ialoide posteriore con la fresa e rimuovere la gonna vitrea staccata fino alla base vitrea. Aspirare l'eventuale triamcinolone residuo sulla superficie retinica. Iniettare da uno a due millilitri di liquido perfluorocarburo per coprire il polo posteriore fino alla retina periferica anteriore e media.Entra nell'occhio con una cannula di iniezione subretinica. Utilizzare la cannula di iniezione subretinica a doppio foro personalizzata con calibro 25 x 41 o la cannula di iniezione subretinica calibro 25 x 38 collegata a una siringa da 250 microlitri per l'iniezione subretinica. Impostare la pressione intraoculare da zero a quattro millimetri di mercurio.Eseguire delicatamente un'iniezione subretinica di BSS per indurre un distacco di retina localizzato. Una volta che il bleb attraversa la fovea, interrompere l'iniezione di BSS. Create una seconda soffusa da una direzione separata.Unire entrambi i blebs per staccare completamente la fovea. Abilita la funzione di tomografia a coerenza ottica intraoperatoria per visualizzare la formazione di bleb, assicurando che le scansioni della linea e del cubo siano in modalità ad alta definizione per acquisire un'immagine sulla fovea. Ingrandire l'incisione della retina a 1,5 millimetri con una coppia di forbici vitreoretiniche verticali da 25 gauge per consentire l'accesso allo spazio subretinico per il trapianto.Impostare la pressione intraoculare a 50 millimetri di mercurio. Utilizzare una cannula con punta in silicone spazzolato per rimuovere il liquido al perfluorocarburo. Utilizzare un coltello da incisione da 1,4 millimetri per estendere la sclerotomia.Inserisci uno strumento ad anello estensibile calibro 20 e rimuovi gli epiteli pigmentati retinici dell'ospite submaculare raschiando. Inserire la punta del dispositivo sparatutto attraverso la sclerotomia e passare attraverso la cavità vitrea ad una pressione intraoculare di 20 millimetri di mercurio. Iniettare l'impianto verso lo spazio subretinico attraverso il bordo della retinotomia creato dalla superficie retinica con il lato portante cellulare rivolto verso la membrana di Brooks e lo xenotrapianto rivolto verso i fotorecettori.Visualizzare la posizione dell'impianto abilitando la funzione di tomografia a coerenza ottica intraoperatoria. Regolare la posizione dell'impianto con la cannula di iniezione subretinica o una forbice intraoculare curva a 25 gauge per garantire che l'impianto sia appoggiato sulla membrana di Brooks nello spazio subretinico con una retina sovrastante intatta, nonché situato lontano dalla retinotomia creata e non impattato sul sito di retinotomia. Utilizzare una cannula con punta in silicone spazzolato per lo scambio fluido-aria e aspirare delicatamente il fluido subretinico dal distacco della retina bleb e dall'apposizione del bordo della retinotomia fino a quando la retina non viene riattaccata sull'impianto.Quindi, per completare l'intervento chirurgico, chiudere la sclerotomia della porta di lavoro utilizzando la sutura 7-0 Vicryl pre-posizionata. Somministrare 0,05 millilitri per due milligrammi di triamcinolone intravitreale senza conservanti alla sclerotomia delle otto. Rimuovere il lampadario e la cannula di infusione.Chiudere queste sclerotomie con suture di Vicryl. Palpare l'occhio per assicurarsi che la pressione intraoculare rientri nell'intervallo accettabile. Iniettare aria filtrata o BSS tramite un ago calibro 30, se necessario.Un'imaging in vivo del trapianto di innesto epiteliale di pigmento retinico submaculare dell'occhio sinistro su varie modalità di imaging è stato condotto per un massimo di tre mesi. La fotografia del fondo oculare ha indicato che l'innesto trapiantato alla fovea non è migrato nel tempo. L'imaging di auto-fluorescenza del fondo ha mostrato cambiamenti minimi nell'iper-autofluorescenza che si sovrappongono all'innesto epiteliale del pigmento retinico.L'angiografia con fluoresceina del fondo in fase iniziale e tardiva non ha mostrato alcuna perdita che circonda l'innesto. Le immagini della tomografia a coerenza ottica maculare hanno mostrato la conservazione degli strati retinici esterni sopra l'innesto con il passare del tempo, suggerendo la funzionalità delle cellule epiteliali pigmentate retiniche. La colorazione HE ha mostrato strati retinici intatti senza evidenza di micro lacrime.La tomografia a coerenza ottica intraoperatoria consente la visualizzazione delle dimensioni bleb e della potenziale lacrima foveale intraoperatoria durante il distacco foveale. La presenza di lacrime può interferire con la formazione di bleb. Il successo della corretta formazione del bleb è stato indicato dall'assenza di lacrime.Per la valutazione funzionale della retina, sono state eseguite valutazioni elettroretinografiche a pieno campo dell'occhio xenotrapiantato epiteliale pigmentato retinico. L'assenza di un significativo deterioramento delle forme d'onda dell'elettroretinogramma suggerisce che la funzione dei fotorecettori sia dell'asta che del cono è stata mantenuta con gli xenotrapianti. Durante la creazione del bleb retinico localizzato, fallo molto delicatamente poiché qualsiasi improvviso cambiamento nella velocità del getto può portare a lacrime foveali.Eseguire questo passaggio lentamente è la chiave per ridurre le lesioni foveali. L'imaging multimodale, tra cui l'autofluorescenza del fondo, l'angiografia con fluoresceina e la tomografia a coerenza ottica insieme agli studi di elettrofisiologia, possono fornire maggiori informazioni sulla sopravvivenza dell'innesto e sui fattori che lo influenzano.

Research

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Medicine

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