Name: retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases
Uploaded: 2021-06-14T13:45:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases at JoVE.com

Denne studien ble støttet av IAF-PP (HMBS Domain) (OrBID): OculaR BIomaterials and Device, A*STAR, Singapore (H17/01/a0/013), NUS Start-up grant NUHSRO/2016/100/SU/01, NUHS Clinical Scientist Program (NCSP) stipend og National Research Foundation Competitive Research Programme, Singapore (NRF-CRP21-2018-0008) til X.S., Hong Leong Endowed Professorship midler til G.E.H. og B.V.S. Vi vil gjerne anerkjenne veterinærteamet ved Translational Pre-Clinical Model Platform (Singapore Eye Research Institute, Singapore) for å gi støtte i NHP-kirurgiforberedelse og dyreoppfølging. Vi ønsker å utvide vår takknemlighet til Jill Teo og kolleger fra C. Zeiss Meditec Singapore for teknisk støtte for OPMI-Lumera 700 med integrert intraoperativ OCT-enhet.

MERK: Alle dyreforsøk ble utført i samsvar med Forskerforeningen i visjon og oftalmologi (ARVO) for bruk av dyr i oftalmisk og visjonsforskning. Etikkgodkjenning ble innhentet fra Institutional Animal Care and Use Committee, SingHealth, Singapore. Dyr ble plassert på SingHealth Experimental Medicine Centre godkjent av Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC). Denne godkjenningen fremhever at alle dyreforsøk overholder standardene i National Advisory Committee for Laboratory Animal Research retningslinjer fastsatt av Agri-Food and Veterinary Authority of Singapore. Følgende eksperimentelle protokoll ble etablert basert på eksperimenter utført i 6 øyne på 6 Macaca fascicularis (4 mann og 2 kvinner, 4 til 6 år, 2,8 til 4,0 kg) .
1. Oppnå immunsuppresjon i NHP-modellen
<ol><li>Start immunsuppresjon 7 dager før operasjonen og fortsett immunsuppresjon gjennom oppfølgingsperioden.</li>
	<li>Vei NHP før administrering av systemisk immunsuppresjon for å sikre nøyaktig legemiddeldosering. Dyret veies ved baseline og ukentlig deretter.</li>
	<li>Bruk oral sirolimus, doxycyklin og minocyklin for å oppnå systemisk immunsuppresjon.<ol>
<li>Administrer en lastedose på 2 mg oral sirolimus etterfulgt av en daglig vedlikeholdsdose på 1 mg. Få baseline blod sirolimus nivå før administrering og overvåke dette gjennom oppfølgingsperioden. Sørg for en konsentrasjon på minst 5 μg/l for tilstrekkelig immunsuppresjon. MERK: Sirolimus-dosen er ikke vekttilpasset.</li>
		<li>Administrer en dose på 7,5 mg/kg oral doksycyklin per dag, to ganger per dag.</li>
		<li>Administrer en dose på 7,5 mg/kg oral minocyklin per dag, to ganger per dag.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Under immunsuppresjon må du overvåke alle NHPer for bivirkninger av systemet. Se etter betydelig vekttap (>10%), redusert appetitt og vannforbruk, ubetjent hårtap og unormal oppførsel som aggresjon og sløvhet. Vurderinger vil bli gjort på dag 3, 14 og 1 måned, etterfulgt av månedlige vurderinger.</li>
</ol>2. Sterilisering av instrumenter
<ol><li>Skyll de kirurgiske instrumentene med destillert vann.</li>
	<li>Plasser instrumentene i et ultralydbad fylt med 500 ml destillert vann og 2 ml instrumentdesinfeksjonsmiddel. Rengjør instrumentene ved hjelp av feiefunksjonen til ultralydbadet i 15 min.</li>
	<li>Fjern instrumentene fra ultralydbadet. Skyll grundig med destillert vann i 5 minutter hver skylling. Lufttørk instrumentene etter skyllingen.</li>
	<li>Plasser instrumentene i en instrumentboks. Autoklaver esken ved hjelp av den universelle programinnstillingen (sterilisering av instrumenter ved 134 °C i 50 min: 30 min for autoklavering, 20 min for tørking).</li>
</ol>3. Tilberedning av konserveringsmiddelfritt triamcinolon (40 mg/ml)
<ol><li>Bruk en 1 ml sprøyte og trekk ut 1 ml triamcinolonoppløsning (10 mg/ml). Overfør det til et 15 ml konisk rør og bland det med 4 ml steril balansert saltoppløsning (BSS).</li>
	<li>Sentrifuger løsningen ved 120 × g i 5 min. Sørg for at alle triamcinolonpartiklene er på bunnen av det koniske røret. Kast supernatanten (BSS) fra det koniske røret.</li>
	<li>Re-suspendere triamcinolonpartiklene med 5 ml steril BSS i det koniske røret. Sentrifuger løsningen ved 120 × g i 5 min. Kast supernatanten igjen.</li>
	<li>Gjenta trinn 3.3 for å fullføre vaskingen av triamcinolonpartiklene med BSS (3x).</li>
	<li>Re-suspendere triamcinolonpartiklene med 0,25 ml steril BSS for å oppnå en konsentrasjon på 40 mg / ml.</li>
	<li>Aspirer det re-suspenderte triamcinolonet (40 mg/ml) med en ny 1 ml sprøyte. Fest en 25 G stumspissfløytekanyle, og hold sprøyten med triamcinolonoppløsningen klar til intraoperativ bruk.</li>
</ol>4. Forbehandling av NHP-øyne med intravitreal plasminogen (0,25 μg/μL)
<ol><li>En uke før operasjonen, administrere en intravitreal injeksjon (20 μL) av ape plasminogen (0,25 μg / μL).</li>
	<li>Sedate NHP før prosedyren med en intramuskulær injeksjon av ketamin (10-20 mg/kg BW) og en subkutan injeksjon av atropin (0,05 mg/kg kroppsvekt). Administrer tetrakain øyedråper for lokalbedøvelse.</li>
	<li>Før intravitreal injeksjon desinfiserer periorbitalområdet med 10% povidon-jod. Desinfiser øyet ved å administrere 5% povidon-jod til konjunktivale i NHP. Sørg for at oppløsningen forblir i i minst 1 min før du skyller grundig med steril BSS.</li>
	<li>Bruk en 250 μL sprøyte for å aspirere den pre fortynnede apeplasminogen (0,25 μg / μL) fra hetteglasset. Fest en 30 G nål til sprøyten, og hold apen plasminogen klar for intravitreal administrering.</li>
	<li>Bruk et par kalipere for å identifisere injeksjonsstedet på øyet. Administrer intravitreal injeksjon 3 mm fra limbussen.</li>
	<li>Fortsett med injeksjonen med nålen rettet mot midten av kloden. Ved fjerning av nålen fra kloden, bruk en bomullsapplikatorpinne for å tamponade injeksjonsstedet og forhindre refluks av det intraokulære innholdet.</li>
	<li>Administrer en smøremiddelgel eller salve for å redusere umiddelbar postoperativ okulær overflateirritasjon.</li>
</ol>5. Kirurgisk bord- og utstyrsoppsett
<ol><li>Etabler et sterilt felt. Når du er i det sterile feltet, bruk kirurgiske skrubber, maske og hårdeksel til enhver tid.</li>
	<li>Forbered konserveringsmiddelfritt triamcinolon (40 mg/ml) for intraoperativ visualisering av glasslegemet (se avsnitt 3). Forbered den sterile BSS i en 10 ml sprøyte og smøremiddel i en 5 ml sprøyte. Legg dem på en gardin.</li>
	<li>Hold andre instrumenter klare på en gardin, inkludert 3-0 silke, 7-0 vicryl suturer, bomull applikator pinner, sår lukking strimler, og lysekrone endoillumination fiber wire.</li>
	<li>Koble vitrektomisettet, inkludert høyhastighets vitrektor, Venturi-kassett og 25 G lysekrone endoilluminator til vitrektomimaskinen ved hjelp av steril teknikk.</li>
	<li>Åpne en BSS-flaske av 500 ml oftalmisk kvalitet og koble den til Venturi-kassetten i henhold til produsentens anvisninger. Fortsett med å grunne systemet.</li>
	<li>Slå på miOCT/kirurgisk mikroskop. Velg forhåndsinnstilte konfigurasjoner av det kirurgiske mikroskopet for bakre segmentkirurgi og belysning. Skriv inn detaljene for prosedyren, inkludert ID, kjønn, lateralitet av dyreøyet og navnet på prosedyren.</li>
	<li>Monter en ikke-kontakt, vidvinklet, 128-graders funduslinse.</li>
	<li>Fest sterile håndstykkedeksler til engangsbruk på det kirurgiske mikroskopet/miOCT. Juster mikroskopposisjonen og fokuser ved hjelp av fotpedalen. Fortsett med operasjonen.</li>
</ol>6. Forberedelse av anestesi og posisjonering av dyret (helst utført av veterinærteam)
<ol><li>Sørg for at NHP er fastet i minst 8 timer før induksjon av anestesi for å forhindre oppblåsthet og oppkast. Forseøv NHP før anduksjon av anestesi (se trinn 4.2 for sedasjonsinstruksjoner).</li>
	<li>Påfør 1% tropicamid og 2,5% fenylefrin øyedråper minst 3x med 5 min intervaller for å oppnå pupill utvidelse.</li>
	<li>Administrer en intramuskulær injeksjon av buprenorfin (0,005-0,03 mg/kg kroppsvekt) 30 min før operasjonen for å oppnå smertestillende midler.</li>
	<li>Intuber NHP med et endotrakealrør, vanligvis 3-5 mm i størrelse. Når du prøver intubasjon, må du sørge for at flere størrelser er tilgjengelige. Bruk den største størrelsen som kan passeres gjennom strupehodet uten å forårsake traumer. Mål endet tidevanns-CO2 for å sikre riktig plassering av endotrakealrør.</li>
	<li>Lever 2% isofluoranegass via endotrakealrøret for å indusere generell anestesi. Bekreft tilstanden til generell anestesi (mangel på respons på berøring) ved å vurdere NHPs respons på omkringliggende stimuli, inkludert lyder og berøring. Bruk 0,5-2% isofluoranegass for å opprettholde tilstanden til generell anestesi.</li>
	<li>Overvåk kontinuerlig NHP-elektrokardiogrammet, luftveiene, blodtrykket og oksygenmetningen under hele operasjonen.</li>
	<li>Plasser NHP på det kirurgiske bordet slik at øyet er vinkelrett på det kirurgiske mikroskopet. Administrer en smøremiddelgel eller salve til øyet, som ikke brukes på for å redusere okulær overflateirritasjon under anestesi.</li>
	<li>Klipp øyevippene ved hjelp av saks for å redusere sjansen for infeksjoner.</li>
	<li>Desinfiser periorbitalområdet med 10% povidon-jod. Desinfiser øyet ved å administrere 5% povidon-jod til konjunktivale i NHP. Sørg for at oppløsningen forblir i i minst 1 min før du skyller grundig med steril BSS.</li>
	<li>Plasser en steril gardin slik at den forhåndskuttede åpningen er sentrert over øyet for å gjennomgå kirurgi. Dekk øyet med en selvklebende kirurgisk snittgardin.</li>
	<li>Utfør en lateral kantomy på øyet for å gjennomgå kirurgi.</li>
	<li>Sett inn Lieberman-spekulumet for å sikre tilstrekkelig åpning av øyelokkene for visualisering av øyet.</li>
</ol>7. Vitrektomi
MERK: For å få tilgang til subretinal plass for levering av PET-stillas RPE graft, anbefaler denne protokollen en 4-port (valved) 25 G vitrectomy som skal utføres ved hjelp av en standard vitreoretinal kirurgisk oppsett og en ikke-kontakt, vidvinklet, 128 ° fundus linse. Protokollen anbefaler også bruk av et kirurgisk mikroskop utstyrt med miOCT for å lede flere kritiske kirurgiske trinn, inkludert induksjon av føveal løsrivelse, implantasjon av RPE-transplantatet og subretinal væskedrenering.
<ol><li>Utfør en 360° konjunktiv peritomy ved å incizing konjunktivene nær limbus ved hjelp av et par vannas saks. Forstørr peritomyen ved å utføre en stump disseksjon.</li>
	<li>Bruk et 25 G mikrovitreoretinalt blad til å utføre en sclerotomi klokken 8 for høyre øye eller klokken 4 for venstre øye. Utfør sclerotomy 3 mm fra øyets limbuss.</li>
	<li>Sett inn og suturer en 25 G tilpasset sideportinfusjonskanyle ved hjelp av 7-0 vicryl sutur. Etter å ha bekreftet den intravitreale plasseringen, start BSS-infusjonen og sett systemet til å opprettholde en IOP på 20 mmHg.</li>
	<li>Bruk en 25 G flat hodetropp, utfør en sclerotomi klokken 2 for høyre øye eller klokken 10 for venstre øye, som i trinn 7.2.</li>
	<li>Sett 25 G lysekronelyset inn i flathodetroppen og fest det med klebrig tape. Juster lyskilden til ca. 60 %.</li>
	<li>Utfør en annen sclerotomi, lik trinn 7.2, klokken 10 for høyre øye eller klokken 2 for venstre øye. Plasser U-formet vicryl 7-0 suturer rundt sclerotomy uten å binde knutene. Sett vitrectomy cutter spissen gjennom denne sclerotomy.</li>
	<li>Start vitrektomien rundt inngangsportene, etterfulgt av en kort kjerne vitrektomi med følgende innstillinger: maksimalt 5000 kutt per minutt, maksimal aspirasjon ved 400 mmHg.</li>
	<li>Injiser 20-50 μL triamcinolon (40 mg/ml) for bedre glasslegemet visualisering.</li>
	<li>Induser en bakre glasslegemeavløsning (PVD) ved å skille glasslegemet fra netthinnen.<ol>
<li>Plasser glasstrektoren over den optiske platen for å tillate skånsom induksjon av PVD. Hold glasstrektoren kun på aspirasjon ved maksimal innstilling på 400 mmHg uten kutting involvert.</li>
		<li>Bruk om nødvendig 25 G intraokulære tang for å manipulere glasslegemet ved skivemarginen for å skape en tåre i glasslegemet cortex for å lette løsningen. MERK: PVD anses som vellykket hvis triamcinolone krystaller glir uhindret over netthinnen overflaten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Åpne den bakre hyaloidmembranen med kutteren, og fjern det frittliggende glasslegemet opp til glasslegemet (ved retinal ekvator). Aspirer eventuelt gjenværende triamcinolon på retinaloverflaten.</li>
</ol>8. miOCT-guidet foveal løsrivelse
<ol><li>Injiser 1-2 ml PFCL for å dekke bakre pol opp til fremre, middels perifer netthinne.</li>
	<li>Gå inn i øyet med en subretinal injeksjonskanyle. Sett IOP til 0-4 mmHg på vitrektomimaskinen (sørg for perfekt vanntett system; om nødvendig, bind suturer rundt portene).</li>
	<li>Bruk enten den 25/41 G tilpassede subretinale injeksjonskanylen med dobbel boring eller 25/38 G subretinal injeksjonskanyle koblet til en 250 μL sprøyte, utfør forsiktig en subretinal injeksjon av BSS for å indusere en lokalisert netthinneavløsning. Når blebben bare krysser fovea, stopp injeksjonen. Lag en ny bleb fra en egen retning. Slå sammen begge blebene for å løsne foveaen helt.</li>
	<li>Aktiver miOCT-funksjonen for å visualisere blebformasjon. Forsikre deg om at linje- og kubeskanningene er i HD-modus med innstillingene (512 x 128 piksler, skannebredde 4 mm) for å skaffe et bilde ved fovea. Vær oppmerksom på miOCT-bildet for en fullstendig løsrivelse av nevral netthinnen fra RPE-laget ved fovea.</li>
	<li>Forstørr retinotomien til 1,5 mm med et par vertikale 25 G vitreoretinal saks for å gi tilgang til det subretinaale rommet for transplantasjon.</li>
</ol>9. Fjerning av innfødt RPE
<ol><li>Sett IOP til 50 mmHg på vitrektomimaskinen.</li>
	<li>Fjern PFCL via aktiv ekstrudering ved hjelp av en børstet silikonspisskanyle.</li>
	<li>Utvid sclerotomien med en 1,4 mm snittkniv for å tillate inngangen til et 20 G instrument.</li>
	<li>Bruk et egendefinert 20 G utvidbart sløyfeinstrument til å skrape den submaculære verten RPE for fjerning. Skrap et område som måler minst 2 x 3 mm.</li>
</ol>10. Lasting av skytteren for levering av RPE celle monolayer transplantasjon
<ol><li>For generelle instruksjoner om lasting av en kuleformet graft kuttet fra RPE-kulturer på PET-cellebærere, se en tidligere publikasjon22.</li>
</ol>11. miOCT-guidet graftimplantasjon og posisjonsjustering
<ol><li>Sett spissen på skyteapparatet gjennom sclerotomien ved en IOP på 20 mmHg. Injiser implantatet mot subretinalrommet via retinotomykanten som er opprettet fra netthinnen.</li>
	<li>Injiser implantatet med cellebærersiden vendt mot Bruchs membran og RPE xenograft-siden vendt mot fotoreseptorene.</li>
	<li>Aktiver miOCT-funksjonen for å visualisere implantatplasseringen. Forsikre deg om at implantatet hviler flatt på Bruchs membran i subretinalrommet, med en intakt overliggende netthinne. Forsikre deg om at den ligger en rimelig avstand fra den opprettede retinotomien og ikke hindrer retinotomistedet.</li>
	<li>Juster implantatposisjonen med den subretinaale injeksjonskaylen eller en 25 G buet intraokulær saks for å sikre at den er godt plassert under makulaen.</li>
</ol>12. miOCT-styrt drenering av subretinalvæske
<ol><li>Bruk en børstet silikonspisskanyle, utfør en væske-luftutveksling og forsiktig subretinal væskedrenering. Forsøk skånsom subretinal væskeaspirasjon fra bleb retinal avløsning og retinotomi kant apposition.</li>
	<li>Aktiver miOCT-funksjonen for sanntidsvisualisering av tilstrekkelig subretinal væskedrenering til netthinnen er festet over implantatet.</li>
</ol>13. Avslutte operasjonen
<ol><li>Lukk arbeidsportskalerotomien ved hjelp av den forplasserte 7-0 vicryl suturen. Fjern 25 G lysekrone og 25 G infusjonskanyle. Lukk disse sklerotomiene med 7-0 vicryl suturer.</li>
	<li>Administrer 2 mg i 0,05 ml intravitreal konserveringsmiddelfritt triamcinolon (40 mg/ml) ved 8-tiden sclerotomi før suturering.</li>
	<li>Palpate øyet for å sikre at IOP er innenfor det akseptable området. Injiser filtrert luft (eller BSS) via en 30 G kanyle om nødvendig.</li>
	<li>Suturer konjunktivene med 7-0 vicryl suturer og kantomy med 5-0 prolen (fjern etter 10-14 dager).</li>
</ol>14. Postoperativ dyrepleie
<ol><li>Plasser NHP med forsiden ned for 1 time etter operasjonen. Ikke la dyret være uten tilsyn før bevisstheten er gjenvunnet. Forsikre deg om at en veterinær og dyrepleietekniker er tilgjengelig for observasjon og støtte under den postoperative prosessen.</li>
	<li>Påfør aktuell antibiotika (tobramycin), steroid (deksametason) salve, og homatropin øyedråper to ganger om dagen i 5 dager postoperativt.</li>
	<li>Administrer en annen subkutan buprenorfinin (0,005-0,03 mg/kg kroppsvekt) injeksjon 6 timer etter operasjonen for tilstrekkelig smertekontroll.</li>
	<li>Returner NHP til selskap av andre dyr bare når det har fullt ut gjenvunnet bevissthet.</li>
	<li>Utfør multimodale bildebehandlingsoppfølginger på dag 3, 14 og måned 1 etter prosedyren, etterfulgt av månedlige kontroller. Utfør FEIL hver måned etter prosedyren. Fjern 5-0 prolen suturer for kantomy på dag 14 samtidig med sedasjonsperioden som brukes til multimodal avbildning. De resterende suturene er resorberbare, 7-0 vicryl suturer, som ikke krever fjerning.</li>
</ol>15. Postoperative overvåkingsmetoder for multimodal avbildning
<ol><li>Rask NHP over natten. Sedate NHP like før avbildning (se trinn 4.2 for medikament og konsentrasjon for sedasjon). Hvis sedasjon ikke er tilstrekkelig til å stoppe øyebevegelsen, bør du vurdere bruk av generell anestesi.</li>
	<li>Påfør 1% tropicamid og 2,5% fenylefrin øyedråper for å oppnå pupill utvidelse før avbildning (se trinn 6.2).</li>
	<li>Utfør autofluorescence (AF), fundus fluorescein angiografi (FFA) og optisk koherenstomografi (OCT) ved hjelp av en høyoppløselig OCT-maskin med en 55° feltlinse og 30 ° feltlinse.<ol>
<li>Administrer intravenøs 10 % fluorescein (0,1 ml/kg kroppsvekt) for FFA. Hvis du vil ha et bilde i tidlig fase, tar du et bilde innen 30 s etter injeksjon. For en senfaset bilde, ta et bilde 5-10 min etter injeksjonen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Utfør fundusfotografering ved hjelp av et funduskamera mellom tidlig og sen fase av FFA.</li>
</ol>16. Postoperative overvåkingsmetoder for fullfelts elektroretinogramstudier (ERG)
<ol><li>Rask NHP-ene over natten. Sedate NHP før ERG-studier (se trinn 4.2 for medikament og konsentrasjon for sedasjon). Gjennom ERG-opptakene administreres sedasjon på nytt når det er hensiktsmessig.</li>
	<li>Separate multimodale avbildninger og ERG-opptak med et intervall på minst 2-3 dager.</li>
	<li>Når den er bedøvet, må du sørge for at NHP er mørktilpasset i 30 minutter før ERG-opptaket.</li>
	<li>Plasser de subdermale nåleelektrodene i rustfritt stål på venstre og høyre laterale kant (referanseelektroder) og baksiden av NHP-kroppen (bakkeelektrode). Plasser ERG-kontaktlinselektrodene på NHP-hornhinnen ved hjelp av vidisisk gel for å hjelpe til med kontakt og vedheft.</li>
	<li>Baser all ERG-testing på de menneskelige protokollene som anbefales av International Society for Clinical Electrophysiology of Vision (ISCEV)14. Start ERG-opptak under scotopic forhold og start med dimmer blinker. Følg ISCEV-anbefalingene for anbefalte interstimulusintervaller.</li>
	<li>Forsikre deg om at NHP er lett tilpasset i 10 minutter før fotopisk testing, igjen ved hjelp av standard ISCEV-anbefalinger for bakgrunnsstyrke.</li>
</ol>17. Eutanasi av NHP
<ol><li>For å avlive NHP for enukleasjon, administrer intravenøs natrium pentobarbital (75 mg /kg), som anbefalt av panelet om eutanasi av American Veterinary Medical Association.</li>
</ol>

Boris Stanzel har et amerikansk patent 9980851 på et instrument (RPE scraper) som brukes i denne studien. Foredragsholder æresbelønning fra C. Zeiss Meditec og Geuder til Boris Stanzel. De andre forfatterne har ingen interessekonflikt å erklære.

Det er to hovedtilnærminger som evalueres for submaculær RPE-transplantasjon - injeksjon av en RPE-suspensjon og transplantasjon av en monolayer RPE-graft. En detaljert sammenligning mellom de to metodene er utenfor omfanget av dette manuskriptet. Imidlertid kan transplantasjonen av en monolayer RPE-graft være fordelaktig ettersom RPE-cellene er mer organisert i et monolayer enn i en suspensjon. RPE-celler i transplantatet er organisert i en konfluent monolayer, som ligner organiseringen av det fysiologiske RPE-cellelaget og gjør det mulig for de transplanterte RPE-cellene å utføre sine fysiologiske funksjoner. Dette muliggjør mer presise doseringsparametere sammenlignet med cellefjæringer, noe som er svært relevant for regulatorisk arbeid og industriell oppskalering.
Levering av RPE patch graft inn i subretinal plass krever forsiktig manipulering av makula og nøyaktig innsetting av graft i subretinal plass. Teknologiske fremskritt innen mikrokirurgi, som miOCT, og en bedre forståelse av intraoperativ retinal vevsdynamikk har redusert læringskurven i denne prosedyren. I denne diskusjonen vil begrunnelsen for følgende aspekter bli forklart: i) preoperativ plasminogeninjeksjon; ii) bruk av intraoperativ miOCT; iii) bruk av en tilpasset 41 G dual-bore kanyle, lave IOP-innstillinger og PFCL for subretinal bleb opprettelse; iv) skraping av det opprinnelige RPE-cellelaget før transplantasjon; v) bruk av sirolimus, triamcinolon, doxycyklin og minocyklin for å redusere immunogen graftavvisning.
Preoperative plasminogeninjeksjoner frigjør parafoveale retinal adhesjoner I de første eksperimentene var det utfordrende å løsne fovea med en enkelt væskebølge. Ved vurdering med miOCT avslørte bildene tilstedeværelsen av parafoveale ytre retinal adhesjoner til den innfødte RPE sammen med bevis på intraretinale traumer20. Disse adhesjonene kan ha ført til en vertikal utvidelse av bleb i stedet for den subretinale væskebølgen som sprer seg over retinal konturen, noe som resulterer i føveal traumer. Plasminogen er den inaktive forløperen til plasmin, en protease rettet mot fibronectin og laminin. Ocriplasmin er en bioengineered variant av humant plasmin, godkjent av Food and Drug Administration (FDA) og European Medicines Agency (EMA) for behandling av symptomatisk vitreomakulær trekkraft med eller uten samtidig makulade hull. Imidlertid har postapproval rapporter om cystoid makula ødem utvikling etter ocriplasmin injeksjon antydet en mer omfattende effekt av enzymet på netthinnen23.
Selv om de eksakte mekanismene ikke er identifisert, ble det antydet at plasmin kunne svekke retinal vedheft gjennom nedbrytning av interphotoreceptormatriseelementene som er ansvarlige for fotoreseptor-RPE-adhesjon24. I denne protokollen ble NHP-øyne behandlet med intravitreal plasminogen 1 uke før operasjonen for å frigjøre parafoveale ytre retinal adhesjoner. Under forutsetning av at fotoreseptoren-RPE-adhesjonen er svekket, er det nødvendig med en lavere kraft for å løsne den nevrosensoriske netthinnen, inkludert den distale parafoveale ringen, som vanligvis motstår den subretinaale væskebølgen20. Dermed resulterer kraften som administreres under retinal blebavløsning, i utvidelsen av bleb over netthinnekonturen i stedet for å strekke netthinnen tangentielt. Dette reduserer risikoen for føveale tårer. Det skal imidlertid bemerkes at effekten av plasminogen på langsiktig graftoverlevelse ikke ble studert i denne protokollen. Fremtidige studier bør forsøke å fastslå denne effekten.
miOCT gir anatomisk tilbakemelding for å veilede subretinal bleb-opprettelse, graftimplantasjon og subretinal væskedrenering Intraoperativ, atraaumatisk manipulering av makula er nøkkelen til å oppnå gode transplantasjonsresultater. Imidlertid kan mikrostrukturelle endringer i makula relatert til manipulering ikke alltid være tydelige på operasjonsmikroskopet. I slike prosedyrer er miOCT et viktig verktøy som gir sanntids, tredimensjonal, intraoperativ tilbakemelding av den makulære strukturen. miOCT er spesielt nyttig i løpet av trinnene for føveal løsrivelse, graftimplantasjon og drenering av subretinalvæsken ved hjelp av en væske-luftutveksling. Under føveal løsrivelse kan miOCT bestemme blebens vertikale og horisontale dimensjoner. Foveale mikrotearer, som kanskje ikke visualiseres tydelig på det kirurgiske mikroskopet, kan bekreftes av miOCT (figur 3). Under graftimplantasjonen veileder miOCT-bilder ved å vise graftets plassering eller nærhet til fovea, gjennom den ofte mindre gjennomsiktige, frittliggende netthinnen. miOCT kan også fremheve mulige områder med retinal vedheft under en vanskelig transplantasjonsprosess25. Til slutt, i den subretinaale væskedreneringsprosessen, kan miOCT pålitelig lede subretinal væskedrenering til fullstendig retinal-RPE graft kontakt oppnås.
Kombinasjonen av en dobbelboret kanyle, lave IOP-innstillinger og PFCL glasslegemet tamponade reduserer synergistisk makulatraumer under subretinal bleb-opprettelse Tangentiell retinal strekk og væsketurbulens kan oppstå under subretinal BSS injeksjon for føveal løsrivelse fører til uønskede foveal tårer. For å motvirke disse fenomenene har faktorer som relativ posisjon og avstand fra føvesenteret der injeksjonen er initiert, injeksjonsvolum og hastighet, glasslegemet tamponade, valg av subretinal instrumentering og IOP vist seg å være relevant20,26,27. Den subretinale bleb for føveal løsrivelse bør ligge på et sted tilstrekkelig fjernt fra fovea, da retinal strekk kan være høyest på bleb initieringsstedet27. IOP bør også holdes lavt gjennom opprettelsen av subretinal bleb. Når øyets IOP er høy, observeres en høyere vertikal økning i blebstørrelse i stedet for ekspansjon langs netthinnens kontur, mens blebene er grunnere ved lavere trykk20. Videre, selv om en intravitreal injeksjon på 50 μL effektivt vil doble IOP hos mennesker28, gitt kortere øyelengde i NHPer, vil IOP-økningen under subretinal injeksjon sannsynligvis være høyere og raskere enn hos mennesker. Mens de fleste vitrektomimaskiner justerer for IOP-svingninger, er justeringen ikke en samtidig, men snarere en reaktiv prosess som oppstår som subretinal injeksjon fortsetter. Jo høyere IOP er, jo høyere er risikoen for retinal overstretching og resulterende føveal traumer. Dermed er det viktig å opprettholde en stabil lav IOP under subretinal injeksjon.
En kommersiell 20/41 G (DORC) eller en skreddersydd 25/41 G toboret subretinal kanyle anbefales for subretinal injeksjon. Kanylen gjør det mulig for væske å gå ut av glasslegemet i bytte mot BSS injisert i subretinale rommet. Dette sikrer "samtidig" regulering av IOP under subretinal injeksjon. En skjematisk av den doble borekanylen er sett i figur 2. Til slutt brukes PFCL for å redusere risikoen for foveale tårer20,26,27. Ettersom PFCLer, som oktalin, har høyere spesifikk tyngdekraft, utøver de en nedadgående kraft på netthinnen under føveal løsrivelse29. Dette stabiliserer ytterligere føveal løsrivelse bleb opprettelsesprosessen og forbedrer utvidelsen av bleb langs retinal konturen. Denne teknikken har blitt brukt til subretinal injeksjon av rtPA i innstillingen av massiv submacular blødning på grunn av nAMD30.
Fjerning av pretransplantasjon av opprinnelig RPE tillater restaurering av RPE-fotoreseptorkompleks Vert RPE bør fjernes før grafttransplantasjon. Dette skyldes at restaureringen av RPE-fotoreseptorkomplekset er nødvendig for at RPE-transplantasjonen skal kunne utføre sine fysiologiske funksjoner for å støtte fotoreseptorene21. Verten RPE, hvis den ikke fjernes, kan utgjøre en mekanisk barriere, noe som forhindrer restaurering av dette komplekset. Det kan fjernes enten gjennom administrering av RPE-giftige kjemikalier eller ved å bruke fysiske metoder for fjerning. Kjemiske fjerningsmetoder inkluderer systemisk eller subretinal administrering av natrium iodate31,32. Ettersom natrium iodate forårsaker utbredt degenerasjon av fotoreseptorer, RPE celler, og Choriocapillaris når administreres, dens retinal og systemisk toksisitet utelukker bruk for menneskelige studier32,33. Derfor foretrekkes fysiske intraoperative teknikker. Ulike fysiske metoder har blitt konseptualisert. Når fysiske metoder benyttes, er det avgjørende at Bruchs membran forblir uskadd. Mange in vitro-studier har vist avhengigheten av RPE-graftoverlevelse på en intakt Bruchs membran34,35,36.
Forsøk på hydraulisk debridering var forbundet med brudd i Bruchs membran, økt grad av epiretinal membranutvikling og proliferativ vitreoretinopati, noe som resulterte i trekkraft retinal løsrivelse37. En diamant-støvet spatel foreslått for RPE debridement førte også til brudd i Bruch membran, noe som resulterte i cellulær spredning fra choroid inn i subretinal plass38. Interessant nok kan et skreddersydd uttrekkbart sløyfeinstrument fjerne den overdrevne RPE med bevaring av Bruchs membran i øynene til kaniner og griser11,39. Fjerningen av den underliggende RPE er også nyttig for å etablere dyremodeller med RPE og ytre retinal atrofi, som ligner den avanserte atrofiske formen for AMD. Når et fokusområde av RPE fjernes fra makula, lukkes RPE-såret via hypertrofien til de resterende RPE-cellene. Imidlertid er denne sårhelingsresponsen forbundet med atrofi av det ytre kjernefysiske laget40. Mens opprettelsen av en dyremodell er utenfor omfanget av dette manuskriptet, kan en lignende prosedyre skape en dyremodell av en avansert atrofisk AMD-fenotype for testing av RPE-avledede celleterapeutiske.
Bruk av sirolimus, triamcinolon, doxycyklin og minocyklin for å redusere immunogen graftavvisning Det subretinale rommet antas å være et immunprivilegert sted, vedlikeholdt av en intakt blodretinal barriere og andre faktorer41. I mange studier som involverer subretinal transplantasjon av stamcellederivater med en intakt blodretinal barriere, spiller immundempende medikamenter en ubetydelig rolle i graftoverlevelse42. Den ytre blod-retinal barrieren antas å være dannet av det opprinnelige RPE-laget og de tette kryssene mellom RPE-cellene. Mens innfødt RPE-fjerning gir bedre integrasjon av transplanterte RPE og vert fotoreseptorer, blir blod-retinal barrieren forstyrret i prosessen, noe som øker sannsynligheten for immunavvisning. Klassisk er T-celler sentrale i prosessen med transplantasjonsavvisning av andre organer som nyre og lever43. Derfor ble innledende immundempende regimer for retinal vevstransplantasjon rettet mot å redusere disse adaptive immunresponsene.
Sirolimus, et mekanistisk mål for rapamycinhemmer, og takrolimus, en kalsineurinhemmer, er eksempler på immundempende medikamenter rettet mot adaptive immunresponser. Til tross for tilstrekkelig T-celleundertrykking forblir imidlertid graftoverlevelsesraten lav. I tillegg er RPE-celler kjent for å undertrykke T-celleaktivering gjennom frigjøring av hemmende faktorer og fremme generering av regulatoriske T-celler44. Derfor har det blitt stadig tydeligere at adaptiv immunitet kanskje ikke er den eneste bidragsyteren til graftavvisning42. Subretinal transplantasjon av cellulære produkter kan føre til akkumulering og aktivering av mikroglia45.
Mikroglia er makrofagene i netthinnen. De består av to hovedpopulasjoner: 1) perivascular mikroglia av den indre retinal vaskulaturen og 2) mikroglia i retinal vev parenchyma. Siden mikroglia er en del av den medfødte immunresponsen, kan intravitreale glukokortikoider, som triamcinolon, undertrykke cytokinmediert spredning46. Doxycyklin og minocyklin kan også undertrykke mikroglial aktivering og bør betraktes som47,48. Til slutt er forskjeller i immunavvisning av RPE-allografter versus xenografter ufullstendig forstått49. For eksempel har alloantistoffer mot induserte pluripotente stamcelleavledede RPE-celler blitt rapportert i serumet til in vivo immunavvisningsmodeller. Imidlertid er rollen til disse antistoffene og betydningen av antistoffmediert avvisning i graftoverlevelse fortsatt ukjent50. Derfor foreslås det en kombinasjon av triamcinolon, doxycyklin og minocyklin for medfødt immunitetsundertrykking. Dette regimet har blitt vellykket brukt hos kaniner med gode graftoverlevelsesresultater og minimale systemiske effekter11.
Begrensninger ved denne kirurgiske teknikken Dette dokumentet beskriver en mulig kirurgisk metode for å levere et RPE-graftark i det subretinale rommet til NHP; Dette betyr imidlertid ikke at dette er den eneste optimaliserte måten. Ulike vitreo-retinal kirurger kan ha andre preferanser for instrumentering og teknikk. For eksempel kan denne implantasjonsenhetsdesignen bare levere flate implantater som støttes med en stivere cellebærer og kan derfor ikke være egnet for relativt fleksible (eller rullede) implantater. RPE suspensjon transplantasjoner kan utelate mye av denne teknikken. Følgelig vil kirurgiske detaljer kreve modifikasjon basert på hver leveringsstrategi.
Ettersom interessen for cellulære terapeutiske behandlinger for behandling av degenerative netthinnesykdommer fortsetter å vokse, vil NHP-dyremodellen være avgjørende i prekliniske studier for å studere faktorene som påvirker RPE-graftoverlevelse. I dette manuskriptet foreslås strategier for å muliggjøre jevnere levering av en submaculær monolayer RPE-graft i NHP-øyet. Metoder for bedre visualisering av intraoperative komplikasjoner anbefales også. Det forventes at disse metodene vil fortsette å forbedre seg etter hvert som bruken av cellulære terapeutiske midler utvides. Fremtidige metodepapirer bør også vurdere å foreslå en omfattende liste over undersøkelser for å vurdere ulike strukturelle og funksjonelle aspekter ved transplantatet.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.
The Authors section was updated from:
Ivan Seah*1, Zengping Liu*2,3,4, Daniel Soo Lin Wong3, Wendy Wong1, Graham E. Holder1,3,5, Veluchamy Amutha Barathi3,4,6, Gopal Lingam1,3,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
2Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), 
3Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally
to:
Ivan Seah*1,2, Zengping Liu*1,3,4, Daniel Soo Lin Wong1, Wendy Wong2, Graham E. Holder1,2,5, Veluchamy Amutha Barathi1,4,6, Gopal Lingam1,2,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore 
2Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
3Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR) 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

RPE-transplantasjon holder stort løfte om behandling av arvelige og oppkjøpte retinal degenerative sykdommer. Disse forholdene inkluderer retinitis pigmentosa (RP, rod-cone dystrofi) og avanserte former for AMD som GA. Samlet representerer disse lidelsene en betydelig andel av for tiden ubehandlet blindhet globalt1,2. De avanserte stadiene av AMD er kategorisert i neovascular AMD (nAMD) og GA. Selv om det finnes effektive behandlingsalternativer for nAMD, for eksempel antivaskulær endotelial vekstfaktor (anti-VEGF) injeksjoner, har pasienter med GA begrensede behandlingsalternativer. RP er en svært heterogen gruppe arvelige retinal lidelser preget av progressiv retinal fotoreseptor degenerasjon. Hos noen pasienter er den forårsakende genetiske defekten plassert i RPE i stedet for fotoreseptorene; Derfor kan RPE-erstatningsterapi være en alternativ strategi hvis genterapi ikke er mulig.
Det er stor interesse for å utvikle effektive behandlinger for disse forholdene. Spesielt har RPE-transplantasjon fått trekkraft som en potensiell terapeutisk tilnærming3,4,5,6,7,8. Siden de første rapportene om RPE-transplantasjon dukket opp på 1980-tallet, har feltet utvidet seg til å omfatte ulike RPE-cellekilder, leveringsstrategier og eksperimentelle modeller for sykdom og transplantasjon10,11,12,13,14. Blant de ulike dyremodellene er det bare Helsingforskomiteen som har en "makula lutea" med en "fovea centralis", en anatomisk spesialisering på den bakre polen av netthinnen som deles med mennesker. Fovea inneholder en svært høy tetthet av kjegle fotoreseptorer som muliggjør høyoppløselig sentral visjon15. NHP har også en lignende genomisk og proteomisk sminke16 sammenlignet med mennesker. Disse likhetene gjør det til en viktig og hensiktsmessig dyremodell for studiet av okulære sykdommer som påvirker den menneskelige netthinnen17,18.
Dette manuskriptet beskriver en metode for submaculær transplantasjon av en RPE xenograft, støttet av en PET-cellebærer, i immunsupprimerte NHPer. En transvitreal teknikk for subretinal RPE-transplantasjon hos kaniner har blitt beskrevet i et tidligere manuskript19. Men i NHPer krever tilstedeværelsen av fovea spesiell forsiktighet under intraoperativ manipulasjon20. Spesielt er det stor risiko for foveal tåre hvis subretinal væske injeksjon metoder generere en overdreven kraft på netthinnen20. Fokuset i dette manuskriptet er derfor på strategier for å redusere risikoen for utilsiktet fostertraume i NHP.
Disse inkluderer bruk av preoperativ intravitreal plasminogen injeksjon for frigjøring av parafoveale adhesjoner og kirurgisk mikroskopintegrert optisk koherenstomografi (miOCT) intraoperativt for sanntidsvisualisering av foveal anatomien. En skreddersydd 25/41 G toboret subretinal kanyle med intraokulær PFCL tamponade under lave IOP-innstillinger foreslås for å tillate en mer kontrollert prosess med føveal løsrivelse. Videre anbefales kirurgisk fjerning av innfødt RPE før implantasjon for å muliggjøre bedre integrasjon mellom transplanterte RPE-celler og vertsfotoreseptorer. Til slutt beskrives en peri- og postoperativ systemisk immunsuppresjonsprotokoll for NHP-modeller for å forbedre overlevelsen til RPE xenograft etter transplantasjon11,21.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Mydriacyl (Tropicamide 1.0%) Sterile Ophthalmic preparation</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>SIN 4715P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3800598</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% Mydfrin (Phenylephrine hydrochloride) Ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01785</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G AWH Vivid Chandelier</td>
			<td>Synergetics</td>
			<td>56.54.25P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 Ga Bi-Blade Vitreous Cutter Combined Wide-Field Stellaris Elite Pack</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>SE5525WVB</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMO ENDOSOL Balanced Salt Solution for ophthalmic irrigation</td>
			<td>Abbott Medical Optics</td>
			<td>15020</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apo-minocycline</td>
			<td>Apotex Inc</td>
			<td>2084104</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUROVISC - Hypromellose Ophthalmic Solution USP 2% w/v</td>
			<td>Aurolab</td>
			<td>TN 00002387</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave MELAG, Vacuklav</td>
			<td>MELAG</td>
			<td>1131-B2300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer XL (ST5010)</td>
			<td>Leica</td>
			<td>2433</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced Saline Solution</td>
			<td>Beaver Visitec</td>
			<td>581732</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Bud</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NA6-100</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnosys Espion E3 Console</td>
			<td>Diagnosys</td>
			<td>272</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>MAL 19950403AEZ</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0100</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet contact lens electrodes</td>
			<td>Fabrinal</td>
			<td>F-06</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extendable PolyTip Cannula 25 G/38 G</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3247</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexTip Brush (25 g) 1.5 mm</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3222</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine 10% Faure</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Swab</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NP3275</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton gas tight syringe 250 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81101</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis HRA + OCT Computer System</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td>N.A.</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Gill II</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>3801520</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope eclipse Ti-E main body (100-240V)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>33131</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin injection</td>
			<td>Ceva</td>
			<td>37711/58317</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium carbonate</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.05680.0250</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monkey plasminogen</td>
			<td>Molecular Innovations</td>
			<td>SKU-CYPLG</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-contact wide angled 128 degree fundus lens</td>
			<td>C. Zeiss Medtech</td>
			<td>Resight 700</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven Ophthalmic Drape</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065103120</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Corneal/Scleral V-Lance Knife 20 G</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065912001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding Station</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EG1150 H</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast High Melt Paraffin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>39601095</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0025</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prepowdered Surgical Gloves</td>
			<td>MAXITEX</td>
			<td>85-173-2/85-173-3/85-173-4</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRODINE Povidone-Iodine Solution BP</td>
			<td>ICM PHARMA</td>
			<td>PMLBLP20-01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Righton Slit Lamp Model MW50D (RAA133CB)</td>
			<td>Righton-Oph</td>
			<td>5200162</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2255</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safil Polyglycolic acid, braided, coated, absorbable surgical suture 7/0</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>G1048711</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHINCORT I.M. INJ. Triamcinolone Acetonide 40 mg/mL</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>SHI40 SGP-2610015-001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 21 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657527</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 23 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657667</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirolimus</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>SIN12034P</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel subdermal needle electrode</td>
			<td>OcuScience</td>
			<td>F-E2</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stellaris Elite vision enhancement system</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>BL15455</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 27 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4665406</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 30 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4656300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gown + 2 Hand Towels</td>
			<td>STERIL</td>
			<td>APP10 00 01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626W</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 1 cc/mL Luer SlipTip with needle 26 G</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-01S</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 3 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-03L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 5 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-05L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TobraDex (Tobramycin, Dexamethasone) Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01577</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Topcon Retinal Camera TRC-50DX</td>
			<td>Topcon</td>
			<td>948605</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vidisic Gel</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>GB41789155517</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazil-20</td>
			<td>Ilium</td>
			<td>38653/50276</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Opmi Rescan 700</td>
			<td>Carl Zeiss Meditec AG</td>
			<td>7210</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases

Retinal pigment epitel (RPE) transplantasjon holder stort løfte for behandling av arvelige og ervervede retinal degenerative sykdommer. Disse forholdene inkluderer retinitis pigmentosa (RP) og avanserte former for aldersrelatert makuladegenerasjon (AMD), for eksempel geografisk atrofi (GA). Sammen representerer disse lidelsene en betydelig andel av for tiden ubehandlet blindhet globalt. Disse udekkede medisinske behovene har skapt økt faglig interesse for å utvikle metoder for RPE-erstatning. Blant dyremodellene som vanligvis brukes til preklinisk testing av terapeutiske behandlinger, er den ikke-menneskelige primaten (NHP) den eneste dyremodellen som har en makula. Ettersom det deler denne anatomiske likheten med det menneskelige øye, er NHP-øyet en viktig og passende preklinisk dyremodell for utvikling av avanserte terapipreparater (ATMPer) som RPE-celleterapi.
Dette manuskriptet beskriver en metode for submaculær transplantasjon av en RPE monolayer, dyrket på en polyetylentereftalat (PET) cellebærer, under makula på en kirurgisk opprettet RPE sår i immunsupprimerte NHPs. Fovea-den sentrale avaskulære delen av makula-er stedet for den største mekaniske svakheten under transplantasjonen. Foveal traumer vil oppstå hvis den første subretinal væskeinjeksjonen genererer en overdreven kraft på netthinnen. Derfor anbefales langsom injeksjon under perfluorokarbonvæske (PFCL) glasslegemet tamponade med en dobbelboret subretinal injeksjonskanyle ved lavt intraokulært trykk (IOP) for å skape en retinal bleb. 
Forbehandling med en intravitreal plasminogen injeksjon for å frigjøre parafoveal RPE-fotoreseptor adhesjoner anbefales også. Disse kombinerte strategiene kan redusere sannsynligheten for foveale tårer sammenlignet med konvensjonelle teknikker. NHP er en viktig dyremodell i den prekliniske fasen av RPE celleterapiutvikling. Denne protokollen tar for seg de tekniske utfordringene knyttet til levering av RPE cellulær terapi i NHP-øyet.

De multimodale avbildningsmodalitetene (fundusfotografering, fundus autofluorescence imaging (FAF), fundus fluorescein angiography (FFA)-early-phase and late-phase, and optical coherence tomography (OCT)) fremhever funksjonene i en vellykket submaculær RPE-grafttransplantasjon (figur 1). Fundusfotografering viser plasseringen av RPE-grafttransplantasjonen ved fovea uten migrasjon over tid. FAF-avbildning viser minimale endringer i hyper-autofluorescens (demonstrert av hvite områder med høy intensitet) som overlapper RPE-transplantatet. Tidlig- og senfase FFA viser ingen åpenbar lekkasje (demonstrert av hvite områder med høy intensitet som forstørres med tiden) rundt RPE-transplantatet. Innledende bilder på dag 3 viser vindusfeil på grunn av fjerning av innfødt RPE før graftimplantasjon. Macular OCT-bilder viser bevaring av ytre netthinnelag (spesielt fotoreseptorlaget) over RPE-transplantatet etter hvert som tiden skrider frem. Hematoksylin og eosinfarging viser intakte netthinnelag uten tegn på mikrotearer. Bevaringen av det ytre kjernefysiske laget over periferiene av transplantatet antyder at RPE-cellene utfører sine fysiologiske funksjoner for å opprettholde fotoreseptorhelsen.
De intraokulære og eksterne visningene av den doble borekanylen 25/41 G fremhever mekanismen som IOP styres av under subretinal injeksjon (figur 2). BSS kommer inn i subretinal plass under subretinal væskeinjeksjon via den sentrale lengre kanylen. Betydelige økninger i intraokulært trykk fører til at BSS i glasslegemet kommer ut av øyet via kanylens større metallboring. BSS reiser deretter langs kanylen og blir til slutt kastet ut fra utgående port nær kanyleknutepunktet. For å vurdere om kanylen fungerer som forventet, må du sørge for at væske strømmer fra utgående port nær kanylenavet.
MiOCT tillater visualisering av bleb-dimensjonene og en potensiell foveal tåre intraoperativt under føveal løsrivelse (figur 3). Figur 3A1-A3 fremhever et tilfelle av bleb med foveal tåre. I figur 3A1, mens den dårligere bleb er synlig under det kirurgiske mikroskopet, er visualisering av tåren vanskelig. Figur 3A2 viser langsgående del av en bleb uten tårer. Figur 3A3 viser en foveal tåre ved vurdering av den vertikale delen av blebben. Figur 3B1-B3 viser en vellykket skapte bleb uten tilstedeværelse av tårer.
Fraværet av betydelig forverring i ERG-bølgeformene tyder på at den globale funksjonen til både stang- og kjeglefotoreseptorer opprettholdes med subretinale RPE xenografts (figur 4). ERG-bølgeformene viser netthinnens generelle funksjon. Spesielt bør det tas hensyn til A-bølgene for å bestemme tap av fotoreseptorfunksjon.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig01.jpg"> Figur 1: Postoperativ in vivo-analyse med multimodal avbildning. (A) In vivo avbildning av venstre øye submacular RPE graft transplantasjon (gul på fundus fotografering) på ulike bildemodaliteter (venstre til høyre kolonner: fundus fotografering, autofluorescence, fundus fluorescein angiografi-tidlig fase, fundus fluorescein angiografi-sen fase, optisk koherens tomografi) for tidspoeng opptil 3 måneder (topp til bunn rader: Dager 3, 14; Måned 1, 3). Stjernen på fundusfotografiet indikerer stedet for retinotomien; Den hvite stiplede pilen angir retningen på linjeskanningen. Den gule tegnede formen på fundus autofluorescence imaging fremhever plasseringen av transplantasjonen. De hvite trekantene på OCT-bildene angir de respektive sidekantene på transplantatet (i henhold til linjeskanningen på fargefondet). (B) Hematoksylin og eosinfarging av transplantasjonen under atrofisk fovea (på grunn av intraoperativ tåre) med lag merket. Skalalinjer = 1 mm i A (autofluorescence- og FA-bilder), 200 μm i A (OCT-bilder) og 100 μm i B. Forkortelser: FA = fundus angiografi; OKT = optisk koherenstomografi; RGC = retinal ganglion cellelag; INL = indre kjernefysisk lag; ONL = ytre kjernefysisk lag; RPE = retinal pigment epitel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig01large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig02.jpg"> Figur 2: Intraokulære og eksterne visninger av den 25/41 G dobbeltborede kanylen. (A) Intraokulær visning av den 25/41 G dobbeltborede kanylen under subretinal bleboppretting. Den hvite pilen peker på den lengre sentrale kanylen for subretinal injeksjon. Den stiplede pilen peker på åpningen av utgående kanyle som BSS passerer gjennom for å gå ut av øyet. (B) Ekstern visning av 25/41 G kanyle med dobbel boring. Stjernen markerer utgående port nær kanylenavet som den intraokulære BSS dreneres fra. Forkortelse: BSS = balansert saltoppløsning. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig02large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig03.jpg"> Figur 3: Intraoperative mikroskopbilder og miOCT-bilder av subretinal bleb komplisert av en foveal tåre. (A1) Et intraoperativt mikroskopbilde som viser posisjonen til langsgående (blå) og tverrgående (rød) skanninger i en bleb med foveal tåre. (A2) Langsgående miOCT-skanning som viser en subretinal bleb i fovealområdet (gul pil). (A3) Tverrgående miOCT-skanning som fanger en foveal tåre (hvit pilspiss), sammen med en retinotomi (stjerne og en subretinal bleb (gul pil). (B1) Et intraoperativt mikroskopisk bilde som viser posisjonen til langsgående (blå) og tverrgående (røde) skanninger i en vellykket dannet bleb. (B2) Langsgående miOCT-skanning som viser en subretinal bleb i fovealområdet (gul pil). (B3) Tverrgående miOCT-skanning som viser en vellykket opprettet subretinal bleb med en intakt fovea overlegent (hvit diamant). Forkortelse: miOCT = mikroskopintegrert optisk koherenstomografi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig03large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig04.jpg"> Figur 4: ERG av RPE xenograft-transplantert øye. For den funksjonelle vurderingen av netthinnen viser fullfelts ERG-vurderinger av RPE-xenografted øyet utført ved baseline (øverste rad) og 3 måneder etter transplantasjon (nederste rad) ingen signifikant effekt av RPE xenografttransplantasjon på responsamplituder, timing eller bølgeform under enten mørktilpassede eller lystilpassede forhold. Forkortelser: RPE = retinal pigment epitel; ERG = elektroretinogram; DA = mørktilpasset; LA = letttilpasset. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig04large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases at JoVE.com

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Den ikke-menneskelige primaten (NHP) er en ideell modell for å studere humane retinal cellulære terapeutiske behandlinger på grunn av de anatomiske og genetiske likhetene. Dette manuskriptet beskriver en metode for submaculær transplantasjon av retinal pigment epitelceller i NHP øye og strategier for å forhindre intraoperative komplikasjoner forbundet med makula manipulasjon.

Retinal pigment epiteltransplantasjon i en ikke-menneskelig primatmodell for degenerative netthinnesykdommer

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Foveal traumer under retinal pigment epiteltransplantasjon kan føre til dårlige visuelle resultater. Denne foreslåtte metoden kan redusere sannsynligheten for foveale tårer sammenlignet med konvensjonelle teknikker. Den foreslåtte metoden tar for seg flere faktorer som bidrar til føveal traumer, inkludert frigjøring av subretinale adhesjoner, bedre visualisering av netthinnelag og tangentielle skjærkrefter under blebdannelse.Denne teknikken, som innebærer intravitreal plasminogen forbehandling, mikroskop integrert OCT-guidet retinal bleb formasjon, og perfluorokarbon flytende glasslegemet tamponade ved hjelp av en dobbel borekanyle gir sannsynligheten for føveal traumer med en mildere prosedyre. Å demonstrere prosedyren vil være Dr.Zenping Liu, en seniorforsker, og Mr.Daniel Solo Lin Wong, en forskningsassistent, begge fra et laboratorium. Professor Gopal Lingam, seniorkonsulent, vil også demonstrere operasjonsprosedyrene.Til å begynne med, bruk Vannas-saksen for å incising konjunktivene nær limbusen for en 360 graders konjunktiv peritomy og utfør en stump disseksjon for å forstørre peritomyen. Bruk et 25 gauge mikro vitreoretinal blad for å lage et tre millimeter snitt i sclera klokken åtte i høyre øye eller fire i venstre øye. Sett inn en 25 gauge tilpasset sideport infusjonskanyle og sutur ved hjelp av en 7-0 Vicryl sutur.Etter å ha bekreftet den intravitreale plasseringen, start den balanserte saltoppløsningsinfusjonen og sett systemet for å opprettholde det intraokulære trykket på 20 milliliter kvikksølv. Bruk en 25 gauge flathead trokar for å øke sclera klokken to i høyre øye eller klokken 10 i venstre øye. Sett inn et 25 gauge lysekronelys i den flate trokaren og fest lyset med klebrig tape.Juster lyskilden til ca. 60 %Utfør enda en sclerotomi klokken 10 for høyre øye eller to for venstre øye som vist. Plasser en U-formet Vicryl 7-0 sutur rundt sclerotomy uten å binde knutene. Sett vitrectomy trocar gjennom sclerotomy.Utfør vitrektomien rundt inngangsporten, etterfulgt av en kort kjerne vitrektomi med maksimalt 5000 kutt per minutt og maksimal aspirasjon ved 400 millimeter kvikksølv. Injiser 20 til 50 mikroliter triamcinolon for bedre glasslegemet visualisering. Skill glasslegemet fra netthinnen for å indusere en bakre glasslegemeavløsning.Plasser glasstrektoren over den optiske platen for å tillate skånsom induksjon av den bakre glasslegemeavløsning. Hold glasstrator bare på aspirasjon på maksimalt 400 millimeter kvikksølv uten å involvere noen kutting. Bruk om nødvendig de 25 gauge intraokulære tangene til å rive glasslegemet cortex for å lette løsningen.Åpne den bakre hyaloidmembranen med kutteren og fjern det frittliggende glasslegemet opp til glasslegemet. Aspirer eventuelt gjenværende triamcinolon på retinaloverflaten. Injiser en til to milliliter perfluorkarbonvæske for å dekke bakre pol opp til fremre og midt perifer netthinne.Gå inn i øyet med en subretinal injeksjonskanyle. Bruk enten den 25 x 41 gauge tilpassede dual bore subretinal injeksjon kanylen eller 25 av 38 gauge subretinal injeksjon kanyle koblet til en 250 mikroliter sprøyte for subretinal injeksjon. Sett det intraokulære trykket til null til fire millimeter kvikksølv.Utfør forsiktig en subretinal injeksjon av BSS for å indusere en lokalisert netthinneavløsning. Når blebben krysser fovea, må du slutte å injisere BSS. Lag en ny bleb fra en egen retning.Slå sammen begge blebene for å løsne foveaen helt. Aktiver den intraoperative optiske koherenstomografifunksjonen for å visualisere blebformasjon, slik at linje- og kubeskanningene er i HD-modus for å skaffe seg et bilde ved fovea. Forstørr snittet av netthinnen til 1,5 millimeter med et par vertikale 25 gauge vitreoretinal saks for å gi tilgang til subretinal plass for transplantasjon.Sett det intraokulære trykket til 50 millimeter kvikksølv. Bruk en børstet silikonspisskanyle for å fjerne perfluorkarbonvæsken. Bruk en 1,4 millimeter snittkniv for å forlenge sclerotomien.Angi et 20 gauge utvidbart sløyfeinstrument og fjern det submacular host retinal pigmentepisi ved å skrape. Sett spissen av skyteapparatet gjennom sclerotomien og passere gjennom glasslegemet i et intraokulært trykk på 20 millimeter kvikksølv. Injiser implantatet mot det subretinaale rommet via retinotomykanten som er opprettet fra netthinnen med cellebærersiden vendt mot Brooks-membranen og xenograften som vender mot fotoreseptorene.Visualiser implantatplasseringen ved å aktivere den intraoperative optiske koherenstomografifunksjonen. Juster implantatposisjonen med den subretinaale injeksjonskanylen eller en 25 gauge buet intraokulær saks for å sikre at implantatet hviler flatt på Brooks-membranen i subretinalrommet med en intakt overliggende netthinne, samt ligger fjernt fra den opprettede retinotomien og ikke impinged på retinotomy stedet. Bruk en børstet silikonspisskanyle for væskeluftutveksling og aspirer forsiktig subretinalvæsken fra bleb retinal avløsning og retinotomi kant apposition til netthinnen er festet over implantatet.For å fullføre operasjonen, lukk arbeidsport sclerotomy ved hjelp av den forhåndsplasserte 7-0 Vicryl suturen. Administrer 0,05 milliliter per to milligram intravitreal konserveringsfri triamcinolon ved klokken åtte. Fjern lysekronen og infusjonskanylen.Lukk disse sklerotomiene med Vicryl suturer. Palpate øyet for å sikre at det intraokulære trykket er innenfor det akseptable området. Injiser filtrert luft eller BSS via en 30 gauge nål om nødvendig.En in vivo avbildning av venstre øye submacular retinal pigment epitelial graft transplantasjon på ulike bildebehandling modaliteter ble utført i opptil tre måneder. Fundusfotograferingen indikerte at den transplanterte graften på fovea ikke migrerte over tid. Fundus auto-fluorescensavbildningen viste minimale endringer i hyper auto-fluorescens som overlapper retinal pigment epiteltransplantatet.Den tidlige og sene fasen fundus fluorescein angiografi viste ingen lekkasje rundt graft. De makulade optiske koherenstomografibildene viste bevaring av ytre netthinnelag over graftet etter hvert som tiden gikk, noe som tyder på funksjonaliteten til retinal pigment epitelceller. HE-fargingen viste intakte netthinnelag uten tegn på mikrotårer.Den intraoperative optiske koherenstomografien tillater visualisering av bleb-dimensjonene og den potensielle foveale tåren intraoperativt under føveal løsrivelse. Tilstedeværelsen av tåre kan forstyrre blebformasjonen. Suksessen med riktig blebformasjon ble indikert ved fravær av tåre.For den funksjonelle vurderingen av netthinnen ble det utført fullfeltelektroretinogramvurderinger av retinal pigment epitelial xenografted øyet. Fraværet av betydelig forverring i elektroretinogrambølgeformene antyder at funksjonen til både stang og kegle fotoreseptorer ble opprettholdt med xenografts. Under opprettelsen av den lokaliserte retinal bleb, gjør det veldig forsiktig som enhver plutselig endring i jethastighet kan føre til foveal tårer.Å utføre dette trinnet sakte er nøkkelen til å redusere foveal skade. Multimodal avbildning inkludert fundus auto-fluorescens, fluorescein angiografi og optisk koherenstomografi sammen med elektrofysiologistudier kan gi større innsikt i overlevelsen av transplantatet og faktorer som påvirker det.

Research

JoVE Journal

Medicine

Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis

Teknikker for Processing Eyes implantert med en retinal protese for Lokalisert Histopatologisk analyse

With  the recent development of retinal prostheses, it is important to develop  reliable techniques for assessing the safety of these devices in ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Netthinneavløsning Model i Gnagere etter subretinal Injeksjon av Natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Utføre subretinal injeksjoner i Gnagere å levere retinal pigment epitelet Cells i Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Teknikker for Processing Eyes implantert med en retinal protese for Lokalisert Histopatologisk analyse: Del 2 Epiretinal Implantater med retina Tacks

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

Kvantitativ Fundus autofluorescence for Evaluering av retinal sykdommer

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

En trinnvis protokoll for subretinal Surgery i kaniner

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

En musemodell av retinal iskemi-reperfusjonsskade Gjennom Heving av intraokulært trykk

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

En akutt retinal modell for evaluering Blood Netthinne Barrier på brudd og mulige narkotika for behandling

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset (Callithrix jacchus)

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset Callithrix jacchus

En kirurgisk prosedyre for administrasjon av narkotika til det indre øret i en ikke-menneskelige primas felles Marmoset (Callithrix jacchus)

Hearing research has long been facilitated by rodent models, although in some diseases, human symptoms cannot be recapitulated. The common marmoset ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

Oksygenindusert retinopati modell for iskemiske retinale sykdommer hos gnagere

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...