Name: retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases
Uploaded: 2021-06-14T13:45:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases at JoVE.com

Este estudo foi apoiado pelo IAF-PP (Domínio HMBS) (OrBID): OculaR BIomaterials and Device, A*STAR, Cingapura (H17/01/a0/013), a concessão nus start-up NUHSRO/2016/100/SU/01, Nuhs Clinical Scientist Program (NCSP) grant and National Research Foundation Competitive Research Program, Cingapura (NRF-CRP21-2018-0008) para X.S., Hong Leong dotado fundos de professor para G.E.H. e B.V.S. Gostaríamos de reconhecer a equipe veterinária da Plataforma de Modelo Pré-Clínico Translacional (Singapore Eye Research Institute, Cingapura) por fornecer suporte na preparação da cirurgia nhp e acompanhamento animal. Gostaríamos de estender nossa apreciação a Jill Teo e colegas da C. Zeiss Meditec Singapura por suporte técnico para o OPMI-Lumera 700 com dispositivo DEV intraoperatório integrado.

Boris Stanzel possui um 9980851 de Patentes dos EUA sobre um instrumento (raspador RPE) usado neste estudo. Palestrante honoraria de C. Zeiss Meditec e Geuder para Boris Stanzel. Os outros autores não têm conflito de interesses para declarar.

Existem duas abordagens principais sendo avaliadas para transplante de RPE submacular - a injeção de uma suspensão de RPE e o transplante de um enxerto RPE monocamada. Uma comparação detalhada entre os dois métodos está além do escopo deste manuscrito. No entanto, o transplante de um enxerto RPE de monocamada pode ser vantajoso, pois as células RPE são mais organizadas em uma monocamada do que em uma suspensão. As células RPE no enxerto são organizadas em uma monocamada confluente, que se assemelha à organização da camada fisiológica da célula RPE e permite que as células RPE transplantadas realizem suas funções fisiológicas. Isso permite parâmetros de dosagem mais precisos em comparação com as suspensões celulares, o que é altamente relevante para o trabalho regulatório e a escala industrial.
A entrega do enxerto de remendo RPE no espaço subretinal requer uma manipulação cuidadosa da mácula e a inserção precisa do enxerto no espaço subretinal. Os avanços tecnológicos na microcirurgia, como o miOCT, e uma melhor compreensão da dinâmica intraoperatória do tecido retiniano reduziram a curva de aprendizado desse procedimento. Nesta discussão, as razões dos seguintes aspectos serão explicadas: i) injeção pré-operatória de plasmininogen; ii) o uso de miOCT intraoperatória; iii) o uso de uma cânula personalizada de 41 G de duplo furo, configurações de IOP baixas e PFCL para criação de bleb subretinar; iv) raspagem da camada celular RPE nativa antes do transplante; v) o uso de sirolimus, triamcinolone, doxiciclina e minocíciclina para reduzir a rejeição do enxerto imunogênico.
Injeções de plasminogênio pré-operatórias liberam aderências parafoveais de retina Nos experimentos iniciais, foi desafiador separar a fovea com uma única onda fluida. Na avaliação com o MIOCT, as imagens revelaram a presença de aderências parafoveais externas da retina ao RPE nativo, juntamente com evidências de trauma intraretinal20. Essas aderências podem ter levado a uma expansão vertical do bleb em vez da onda de fluido subretinal que se espalha pelo contorno da retina, resultando em trauma foveal. Plasminogênio é o precursor inativo de plasmin, um protease voltado para fibronectina e laminina. Ocriplasmin é uma variante bioengenheira de plasmin humana, aprovada pela Food and Drug Administration (FDA) e pela European Medicines Agency (EMA) para o tratamento de tração vitreomacular sintomática com ou sem um orifício macular concomitante. No entanto, relatos pós-aprovação do desenvolvimento de edema de mácula cistoide após a injeção de ocriplasmina sugeriram um efeito mais extenso da enzima na retina23.
Embora os mecanismos exatos não tenham sido identificados, foi sugerido que plasmin poderia enfraquecer a adesão da retina através da degradação dos elementos da matriz interfotorreceptora responsável pela adesão fotoreceptor-RPE24. Neste protocolo, os olhos de PNS foram tratados com plasminênio intravitreal 1 semana antes da cirurgia para liberar as aderências parafoveais externas da retina. Sob a suposição de que a adesão fotoreceptor-RPE está enfraquecida, uma força inferior é necessária para desprender a retina neurossensorial, incluindo o anel parafoveal distal, que normalmente resiste à onda de fluido subretinal20. Assim, a força administrada durante o descolamento bleb da retina resulta na expansão do bleb através do contorno da retina em vez de esticar a retina tangencialmente. Isso reduz o risco de lágrimas de potro. No entanto, deve-se notar que o efeito do plasminênio na sobrevivência do enxerto a longo prazo não foi estudado neste protocolo. Estudos futuros devem tentar determinar esse efeito.
miOCT fornece feedback anatômico para orientar a criação de bleb subretinar, implantação de enxerto e drenagem de fluidos subretinar A manipulação intraoperatória e atraumática da mácula é a chave para alcançar bons resultados de transplante. No entanto, alterações microestruturais da mácula relacionadas à manipulação podem nem sempre ser evidentes no microscópio operacional. Nesses procedimentos, o miOCT é uma ferramenta importante que fornece feedback intraoperatório em tempo real, tridimensional e intraoperatório da estrutura macular. miOCT é especialmente útil durante as etapas do descolamento foveal, implantação de enxerto e drenagem do fluido subretinal usando uma troca de fluido-ar. Durante o descolamento foveal, o miOCT pode determinar as dimensões verticais e horizontais do bleb. Os micrários foveal, que podem não ser visualizados claramente no microscópio cirúrgico, podem ser confirmados por miOCT (Figura 3). Durante a implantação do enxerto, as imagens miOCT guiam mostrando a localização ou proximidade do enxerto com a fovea, através da retina, muitas vezes menos transparente e descolada. o miOCT também pode destacar possíveis áreas de adesão da retina durante um difícil processo de transplante25. Finalmente, no processo de drenagem de fluidos subretinar, o miOCT pode orientar de forma confiável a drenagem de fluidos subretinar até que o contato completo do enxerto retina-RPE seja alcançado.
A combinação de uma cânula de duplo furo, configurações de IOP baixas e tamponade vitreous PFCL reduz sinergicamente o trauma macular durante a criação de bleb subretinar O alongamento da retina tangencial e a turbulência do fluido podem ocorrer durante a injeção de BSS subretinal para descolamento foveal que leva a lágrimas foveais indesejadas. Para neutralizar esses fenômenos, fatores como a posição relativa e a distância do centro foveal onde a injeção é iniciada, volume de injeção e velocidade, tampão vítreo, escolha de instrumentação subretinal e IOP têm se mostrado relevantes20,26,27. O bleb subretinal para descolamento foveal deve estar situado em um local adequadamente distante da fovea, pois o alongamento da retina pode ser mais alto no local de iniciação bleb27. O IOP também deve ser mantido baixo durante toda a criação do bleb subretinal. Quando o IOP do olho é alto, um aumento vertical maior no tamanho do bleb em vez de expansão ao longo do contorno da retina é observado, enquanto as manchas são mais rasas em pressões mais baixas20. Além disso, embora uma injeção intravitreal de 50 μL efetivamente dobre o IOP em humanos28, dado o menor comprimento dos olhos em NHPs, o aumento do IOP durante a injeção subretinal provavelmente será maior e mais rápido do que em humanos. Enquanto a maioria das máquinas de vitrectomia ajustam-se para a flutuação IOP, o ajuste não é um processo simultâneo, mas sim um processo reativo que ocorre à medida que a injeção subretinal prossegue. Assim, quanto maior o IOP, maior o risco de alongamento excessivo da retina e trauma foveal resultante. Assim, é essencial manter um IOP baixo estável durante a injeção subretinal.
Recomenda-se um comercial 20/41 G (DORC) ou uma cânula subretinal de 25/41 G de furo duplo sob medida para injeção subretinal. A cânula permite que o fluido saia da cavidade vítrea em troca de BSS injetado no espaço subretinal. Isso garante a regulação "simultânea" do IOP durante a injeção subretinal. Um esquema da cânula de duplo furo é visto na Figura 2. Por fim, o PFCL é utilizado para reduzir o risco de lágrimas de potro20,26,27. Como os PFCLs, como a octalina, têm maior gravidade específica, eles exercem uma força descendente na retina durante o descolamento foveal29. Isso estabiliza ainda mais o processo de criação de descolamento foveal bleb e aumenta a expansão do bleb ao longo do contorno da retina. Esta técnica tem sido usada com sucesso para a injeção subretinal de rtPA na configuração de hemorragia submacular maciça devido ao nAMD30.
Remoção de pré-transplante de RPE nativo permite a restauração do complexo RPE-fotoreceptor O RPE do hospedeiro deve ser removido antes do transplante de enxerto. Isso porque a restauração do complexo fotorreceptor RPE é necessária para permitir que o transplante RPE realize suas funções fisiológicas de suporte aos fotorreceptores21. O RPE hospedeiro, se não for removido, pode representar uma barreira mecânica, o que impede a restauração deste complexo. Pode ser removido através da administração de produtos químicos tóxicos RPE ou usando meios físicos de remoção. Os métodos de remoção química incluem a administração sistêmica ou subretinal de iodate de sódio31,32. Como o iodato de sódio causa degeneração generalizada de fotorreceptores, células RPE e Choriocapillaris quando administrado, sua toxicidade retinal e sistêmica impede seu uso para testes em humanos32,33. Por isso, são preferidas técnicas físicas intraoperatórias. Vários métodos físicos foram conceituados. Quando os métodos físicos são utilizados, é crucial que a membrana do Bruch permaneça intacta. Muitos estudos in vitro demonstraram a dependência da sobrevivência do enxerto de RPE na membrana de Bruch intacta34,35,36.
Tentativas de desbridamento hidráulico foram associadas a quebras na membrana de Bruch, aumento da taxa de desenvolvimento de membrana epiretinal e vitreoretinopatia proliferativa, resultando em descolamento da retina tração37. Uma espátula empoeirada de diamante proposta para o debridamento RPE também levou a quebras na membrana de Bruch, resultando em proliferação celular do coroide para o espaço subretinal38. Curiosamente, um instrumento de loop extensível feito sob medida poderia remover o RPE sobrelada com a preservação da membrana de Bruch nos olhos de coelhos e porcos11,39. A remoção do RPE subjacente também é útil para estabelecer modelos animais com RPE e atrofia de retina externa, semelhante à forma atrofífica avançada da AMD. Quando uma área focal de RPE é removida da mácula, a ferida RPE fecha através da hipertrofia das células RPE restantes. No entanto, esta resposta de cura da ferida está associada à atrofia da camada nuclear externa40. Embora a criação de um modelo animal esteja além do escopo deste manuscrito, um procedimento semelhante pode criar um modelo animal de um fenótipo atroférico avançado de AMD para o teste de terapêutica celular derivada de RPE.
O uso de sirolimus, triamcinolone, doxiciclina e minocíciclina para reduzir a rejeição do enxerto imunogênico Acredita-se que o espaço subretral seja um local imuno-privilegiado, mantido por uma barreira sangue-retina intacta e outros fatores41. Em muitos estudos envolvendo o transplante subretinal de derivados de células-tronco com uma barreira sangue-retina intacta, as drogas imunossupressores desempenham um papel insignificante na sobrevivência do enxerto42. Acredita-se que a barreira sanguínea-retina externa seja formada pela camada RPE nativa e pelas junções apertadas entre as células RPE. Enquanto a remoção nativa de RPE permite uma melhor integração do RPE transplantado e fotorreceptores de host, a barreira hemorrânea é interrompida no processo, aumentando a probabilidade de uma rejeição imunológica. Classicamente, as células T são centrais para o processo de rejeição do transplante de outros órgãos, como o rim e o fígado43. Assim, os regimes imunossupressores iniciais para transplante de tecido retiniano foram direcionados para reduzir essas respostas imunes adaptativas.
Sirolimus, um alvo mecanicista do inibidor da rapamicina, e tacrolimus, um inibidor de calcineurina, são exemplos de drogas imunossupressoras que visam respostas imunes adaptativas. No entanto, apesar da supressão adequada das células T, as taxas de sobrevivência dos enxertos permanecem baixas. Além disso, as células RPE são conhecidas por suprimir a ativação de células T através da liberação de fatores inibitórios e promover a geração de células T regulatórias44. Assim, tornou-se cada vez mais evidente que a imunidade adaptativa pode não ser o único contribuinte para a rejeição do enxerto42. O transplante subretinal de produtos celulares pode resultar no acúmulo e ativação da microglia45.
Microglia são os macrófagos da retina. Eles consistem em duas populações principais: 1) a microglia perivascular da vasculatura da retina interna e 2) a microglia dentro do parênquim do tecido retiniano. Como a microglia faz parte da resposta imune inata, glicocorticoides intravitreal, como a triamcinolone, podem suprimir a proliferação mediada por citocinas46. Doxiciclina e minocíciclina também podem suprimir a ativação microglial e devem ser consideradas47,48. Por fim, as diferenças na rejeição imunológica das alusões RPE versus xenoenxertos são incompletamente compreendidas49. Por exemplo, alusões contra células RPE derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas foram relatadas no soro de modelos de rejeição imunológica in vivo. No entanto, o papel desses anticorpos e a importância da rejeição mediada por anticorpos na sobrevivência do enxerto permanece desconhecido50. Assim, propõe-se um regime multidrogas utilizando sirolimus para a supressão da imunidade adaptativa e uma combinação de triamcinolone, doxiciclina e minocíclina para supressão de imunidade inata. Este regime tem sido usado com sucesso em coelhos com bons resultados de sobrevivência de enxerto e efeitos sistêmicos mínimos11.
Limitações desta técnica cirúrgica Este artigo descreve um possível método cirúrgico para entregar uma folha de enxerto RPE no espaço subretinal de NHP; no entanto, isso não significa que esta seja a única maneira otimizada. Diferentes cirurgiões vitreo-retinais podem ter outras preferências de instrumentação e técnica. Por exemplo, este design de dispositivo de implantação só pode fornecer implantes planos suportados com um portador de células mais rígido e, portanto, pode não ser adequado para implantes relativamente flexíveis (ou enrolados). Transplantes de suspensão RPE podem omitir grande parte dessa técnica. Assim, os detalhes cirúrgicos exigirão modificações com base em cada estratégia de entrega.
À medida que o interesse pela terapêutica celular para o tratamento de doenças degenerativas da retina continua a crescer, o modelo animal NHP será essencial em estudos pré-clínicos para estudar os fatores que afetam a sobrevivência do enxerto de RPE. Neste manuscrito, são propostas estratégias para permitir a entrega mais suave de um enxerto monocamada submacular RPE no olho NHP. Métodos para melhor visualização de complicações intraoperatórias também são recomendados. Espera-se que esses métodos continuem a melhorar à medida que o uso da terapêutica celular se expande. Os trabalhos futuros também devem considerar a proposta de uma lista abrangente de investigações para avaliar vários aspectos estruturais e funcionais do enxerto.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.
The Authors section was updated from:
Ivan Seah*1, Zengping Liu*2,3,4, Daniel Soo Lin Wong3, Wendy Wong1, Graham E. Holder1,3,5, Veluchamy Amutha Barathi3,4,6, Gopal Lingam1,3,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
2Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), 
3Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally
to:
Ivan Seah*1,2, Zengping Liu*1,3,4, Daniel Soo Lin Wong1, Wendy Wong2, Graham E. Holder1,2,5, Veluchamy Amutha Barathi1,4,6, Gopal Lingam1,2,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore 
2Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
3Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR) 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

O transplante de RPE é uma grande promessa para o tratamento de doenças degenerativas da retina herdadas e adquiridas. Essas condições incluem retinite pigmentosa (RP, distrofia de rod-cone) e formas avançadas de DPA, como GA. Coletivamente, esses distúrbios representam uma proporção significativa da cegueira atualmente intratável globalmente1,2. Os estágios avançados da AMD são categorizados em AMD neovascular (nAMD) e GA. Embora existam opções eficazes de tratamento para nAMD, como injeções de fator de crescimento endotelial anti-vascular (anti-VEGF), pacientes com GA têm opções limitadas de tratamento. RP é um grupo altamente heterogêneo de distúrbios herdados da retina caracterizado pela degeneração progressiva do fotorreceptor da retina. Em alguns pacientes, o defeito genético causador está localizado dentro do RPE e não nos fotorreceptores; portanto, a terapia de substituição de RPE pode ser uma estratégia alternativa se a terapia genética não for viável.
Há um interesse significativo em desenvolver tratamentos eficazes para essas condições. Em particular, o transplante de RPE vem ganhando força como uma abordagem terapêutica potencial3,4,5,6,7,8. Desde que os primeiros relatos sobre transplante de RPE surgiram na década de 1980, o campo expandiu-se para incluir várias fontes celulares RPE, estratégias de parto e modelos experimentais de doenças e transplantes10,11,12,13,14. Entre os vários modelos animais, apenas o NHP possui uma 'mula lutea' com um 'fovea centralis', uma especialização anatômica no polo posterior da retina compartilhada com os humanos. O fovea contém uma densidade muito alta de fotorreceptores de cone que permitem visão central de alta resolução15. O NHP também tem uma maquiagem genômica e proteômica semelhante16 quando comparada com os humanos. Essas semelhanças fazem dele um importante e adequado modelo animal para o estudo de doenças oculares que afetam a retina humana17,18.
Este manuscrito descreve um método para o transplante submacular de um xenoenxerto RPE, apoiado por um portador de células PET, em NHPs imunossupressores. Uma técnica transvitreal para transplante de RPE subretinal em coelhos foi descrita em um manuscrito anterior19. No entanto, nas NHPs, a presença da fovea requer cuidados particulares durante a manipulação intraoperatória20. Em particular, há um alto risco de uma ruptura de potro se métodos de injeção de fluidos subretinar geram uma força excessiva na retina20. O foco deste manuscrito está, portanto, em estratégias para reduzir o risco de trauma foveal inadvertido no PSN.
Estes incluem o uso de injeção de plasminogen intraconoperatório pré-operatório para a liberação de aderências parafoveais e tomografia de coerência óptica integrada por microscópio cirúrgico (miOCT) intraoperatória para visualização em tempo real da anatomia foveal. Uma cânula subretinal de duplo furo 25/41 G com tamponade PFCL intraocular em configurações de IOP baixas é proposta para permitir um processo mais controlado de descolamento foveal. Além disso, recomenda-se a remoção cirúrgica de RPE nativo antes da implantação para permitir uma melhor integração entre as células RPE transplantadas e os fotorreceptores do hospedeiro. Finalmente, um protocolo de imunossupressão sistêmica peri e pós-operatória para modelos de NHP é descrito para melhorar a sobrevivência do xenerto RPE pós-transplante11,21.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Mydriacyl (Tropicamide 1.0%) Sterile Ophthalmic preparation</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>SIN 4715P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3800598</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% Mydfrin (Phenylephrine hydrochloride) Ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01785</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G AWH Vivid Chandelier</td>
			<td>Synergetics</td>
			<td>56.54.25P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 Ga Bi-Blade Vitreous Cutter Combined Wide-Field Stellaris Elite Pack</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>SE5525WVB</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMO ENDOSOL Balanced Salt Solution for ophthalmic irrigation</td>
			<td>Abbott Medical Optics</td>
			<td>15020</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apo-minocycline</td>
			<td>Apotex Inc</td>
			<td>2084104</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUROVISC - Hypromellose Ophthalmic Solution USP 2% w/v</td>
			<td>Aurolab</td>
			<td>TN 00002387</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave MELAG, Vacuklav</td>
			<td>MELAG</td>
			<td>1131-B2300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer XL (ST5010)</td>
			<td>Leica</td>
			<td>2433</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced Saline Solution</td>
			<td>Beaver Visitec</td>
			<td>581732</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Bud</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NA6-100</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnosys Espion E3 Console</td>
			<td>Diagnosys</td>
			<td>272</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>MAL 19950403AEZ</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0100</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet contact lens electrodes</td>
			<td>Fabrinal</td>
			<td>F-06</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extendable PolyTip Cannula 25 G/38 G</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3247</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexTip Brush (25 g) 1.5 mm</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3222</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine 10% Faure</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Swab</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NP3275</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton gas tight syringe 250 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81101</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis HRA + OCT Computer System</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td>N.A.</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Gill II</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>3801520</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope eclipse Ti-E main body (100-240V)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>33131</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin injection</td>
			<td>Ceva</td>
			<td>37711/58317</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium carbonate</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.05680.0250</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monkey plasminogen</td>
			<td>Molecular Innovations</td>
			<td>SKU-CYPLG</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-contact wide angled 128 degree fundus lens</td>
			<td>C. Zeiss Medtech</td>
			<td>Resight 700</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven Ophthalmic Drape</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065103120</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Corneal/Scleral V-Lance Knife 20 G</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065912001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding Station</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EG1150 H</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast High Melt Paraffin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>39601095</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0025</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prepowdered Surgical Gloves</td>
			<td>MAXITEX</td>
			<td>85-173-2/85-173-3/85-173-4</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRODINE Povidone-Iodine Solution BP</td>
			<td>ICM PHARMA</td>
			<td>PMLBLP20-01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Righton Slit Lamp Model MW50D (RAA133CB)</td>
			<td>Righton-Oph</td>
			<td>5200162</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2255</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safil Polyglycolic acid, braided, coated, absorbable surgical suture 7/0</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>G1048711</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHINCORT I.M. INJ. Triamcinolone Acetonide 40 mg/mL</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>SHI40 SGP-2610015-001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 21 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657527</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 23 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657667</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirolimus</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>SIN12034P</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel subdermal needle electrode</td>
			<td>OcuScience</td>
			<td>F-E2</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stellaris Elite vision enhancement system</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>BL15455</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 27 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4665406</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 30 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4656300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gown + 2 Hand Towels</td>
			<td>STERIL</td>
			<td>APP10 00 01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626W</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 1 cc/mL Luer SlipTip with needle 26 G</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-01S</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 3 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-03L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 5 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-05L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TobraDex (Tobramycin, Dexamethasone) Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01577</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Topcon Retinal Camera TRC-50DX</td>
			<td>Topcon</td>
			<td>948605</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vidisic Gel</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>GB41789155517</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazil-20</td>
			<td>Ilium</td>
			<td>38653/50276</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Opmi Rescan 700</td>
			<td>Carl Zeiss Meditec AG</td>
			<td>7210</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases

O transplante epitelial de pigmento retiniano (RPE) é uma grande promessa para o tratamento de doenças degenerativas da retina herdadas e adquiridas. Essas condições incluem retinite pigmentosa (RP) e formas avançadas de degeneração macular relacionada à idade (AMD), como atrofia geográfica (GA). Juntos, esses transtornos representam uma proporção significativa da cegueira atualmente intratável globalmente. Essas necessidades médicas não atendidas têm gerado maior interesse acadêmico no desenvolvimento de métodos de substituição de RPE. Entre os modelos animais comumente utilizados para testes pré-clínicos de terapêutica, o primata não humano (NHP) é o único modelo animal que possui uma mácula. Como compartilha essa semelhança anatômica com o olho humano, o olho NHP é um importante e apropriado modelo animal pré-clínico para o desenvolvimento de medicamentos de terapia avançada (ATMPs) como a terapia celular RPE.
Este manuscrito descreve um método para o transplante submacular de uma monocamada RPE, cultivada em um portador de células de tereftalato de polietileno (PET), sob a mácula em uma ferida RPE cirurgicamente criada em NHPs imunossupressores. A parte avascular central da mácula é o local da maior fraqueza mecânica durante o transplante. O trauma foveal ocorrerá se a injeção inicial de fluido subretinal gerar uma força excessiva na retina. Assim, a injeção lenta sob o tampão vítreo de líquido perfluorocarbono (PFCL) é recomendada com uma cânula de injeção subretinal de duplo furo em configurações de baixa pressão intraocular (IOP) para criar uma bleb de retina. 
O pré-tratamento com uma injeção de plasminogênio intravitreal para liberar aderências parafoveais de fotorreceptor RPE também é aconselhado. Essas estratégias combinadas podem reduzir a probabilidade de lágrimas de potro quando comparadas às técnicas convencionais. O NHP é um modelo animal chave na fase pré-plínica do desenvolvimento da terapia celular RPE. Este protocolo aborda os desafios técnicos associados à entrega da terapia celular RPE no olho NHP.

As modalidades de imagem multimodal (fotografia fundus, fundus autofluorescence imaging (FAF), angiografia de fluoresceína fundus (FFA)-fase inicial e tardia, e tomografia de coerência óptica (OCT)) destacam as características de um transplante de enxerto de RPE submacular bem sucedido (Figura 1). A fotografia da Fundus mostra o posicionamento do transplante de enxerto RPE no fovea sem migração ao longo do tempo. A imagem faf mostra mudanças mínimas na hiperfluorescência (demonstrada por áreas brancas e de alta intensidade) sobrepondo o enxerto RPE. A FFA de fase inicial e tardia não mostra nenhum vazamento óbvio (demonstrado por áreas brancas e de alta intensidade que aumentam com o tempo) em torno do enxerto RPE. As imagens iniciais do dia 3 mostram defeito na janela devido à remoção do RPE nativo antes da implantação do enxerto. As imagens de OCT macular mostram a preservação das camadas externas da retina (em particular, a camada fotorreceptora) sobre o enxerto RPE à medida que o tempo avança. A hematoxilina e a coloração de eosina mostram camadas intactas da retina sem evidência de microtears. A preservação da camada nuclear externa acima das periferias do enxerto sugere que as células RPE estão realizando suas funções fisiológicas de manter a saúde do fotorreceptor.
As visões intraoculares e externas da cânula de 25/41 G de duplo furo destacam o mecanismo pelo qual o IOP é controlado durante a injeção subretinal (Figura 2). A BSS entra no espaço subretinal durante a injeção de fluido subretinal através da cânula central mais longa. Aumentos significativos na pressão intraocular fazem com que o BSS dentro da cavidade vítrea saia do olho através do maior furo metálico da cânula. A BSS então viaja ao longo da cânula e eventualmente é ejetada do porto de saída perto do hub de cânula. Para avaliar se a cânula está funcionando como esperado, certifique-se de que o fluido flua do porto de egresso perto do centro de cânula.
O miOCT permite a visualização das dimensões bleb e uma ruptura foveal potencial intraoperatória durante o descolamento foveal (Figura 3). Figura 3A1-A3 destaca um caso de bleb com uma lágrima de potro. Na Figura 3A1, enquanto o bleb inferior é visível sob o microscópio cirúrgico, a visualização da lágrima é difícil. A Figura 3A2 mostra a seção longitudinal de um bleb sem lágrimas. A figura 3A3 mostra uma ruptura de potro ao avaliar a seção vertical do bleb. Figura 3B1-B3 mostram um bleb criado com sucesso sem a presença de quaisquer lágrimas.
A ausência de deterioração significativa nas formas de onda ERG sugere que a função global dos fotorreceptores de vara e cone é mantida com xenoenxertos RPE subretinar (Figura 4). As formas de onda ERG mostram a função geral da retina. Em particular, deve-se prestar atenção às ondas A para determinar qualquer perda da função fotorreceptora.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig01.jpg"> Figura 1: Análise in vivo pós-operatória com imagem multimodal. (A) Imagem in vivo do transplante de enxerto RPE submacular do olho esquerdo (amarelo na fotografia fundus) em várias modalidades de imagem (colunas da esquerda para a direita: fotografia fundus, autofluorescência, fundus fluoresceína-fase inicial, fase de angiografia-tardia fundus fluoresceína, tomografia de coerência óptica) para pontos de tempo até 3 meses (linhas superiores a inferior: Dias 3, 14; Meses 1, 3). O asterisco na fotografia do fundus indica o local da retinotomia; a seta branca tracejada indica a direção da varredura da linha. A forma amarela desenhada na imagem de autofluorescência do Fundus destaca a localização do transplante. Os triângulos brancos nas imagens oct indicam as respectivas bordas laterais do enxerto (de acordo com a varredura de linha na imagem fundus de cor). (B) Mancha de hematoxilina e eosina do transplante sob fovea atrófica (devido à ruptura intraoperatória) com camadas rotuladas. Barras de escala = 1 mm em A (autofluorescência e imagens FA), 200 μm em A (imagens OCT) e 100 μm em B. Abreviaturas: FA = angiografia fundus; OCT = tomografia de coerência óptica; RGC = camada celular gânglio da retina; INL = camada nuclear interna; ONL = camada nuclear externa; RPE = pigmento de retina epitélio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig02.jpg"> Figura 2: Visões intraoculares e externas da cânula de 25/41 G de duplo furo. (A) Visão intraocular da cânula de 25/41 G de duplo furo durante a criação de bleb subretinar. A seta branca aponta para a cânula central mais longa para injeção subretinal. A seta tracejada aponta para a abertura da cânula de saída através da qual o BSS passa para sair do olho. (B) Visão externa da cânula de 25/41 G de duplo furo. O asterisco marca a porta de saída perto do cubo de cânula de onde o BSS intraocular é drenado. Abreviação: BSS = solução de sal balanceada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig03.jpg"> Figura 3: Imagens de microscópio intraoperatório e imagens de miOCT de bleb subretinal complicadas por uma ruptura foveal. (A1) Uma imagem de microscópio intraoperatório mostrando a posição de varreduras longitudinais (azul) e transversais (vermelhas) em um bleb com uma ruptura de potro. (A2) Varredura longitudinal miOCT mostrando um bleb subretinal na região do potro (seta amarela). (A3) Escaneamento miOCT transversal capturando uma lágrima de potro (ponta de flecha branca), juntamente com uma retinotomia (asterisco e um bleb subretinal (seta amarela). (B1) Uma imagem microscópica intraoperatória mostrando a posição de varreduras longitudinais (azul) e transversais (vermelhas) em um bleb formado com sucesso. (B2) Varredura longitudinal miOCT mostrando um bleb subretinal na região do potro (seta amarela). (B3) Varredura miOCT transversal mostrando um bleb subretinal criado com sucesso com uma fovea intacta superiormente (diamante branco). Abreviação: miOCT = tomografia de coerência óptica integrada ao microscópio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig04.jpg"> Figura 4: ERG do olho transplantado de xenoenxerto RPE. Para a avaliação funcional da retina, as avaliações de ERG em campo integral do olho RPE-xenoenerted realizadas na linha de base (linha superior) e 3 meses após o transplante (linha inferior) não mostram nenhum efeito significativo do transplante de xenoenxerto RPE em qualquer amplitude de resposta, tempo ou forma de onda em condições adaptadas à escuridão ou adaptadas à luz. Abreviaturas: RPE = epitélio pigmento da retina; ERG = eletroretinograma; DA = adaptado à escuridão; LA = adaptado à luz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

O primata não humano (NHP) é um modelo ideal para estudar a terapêutica celular da retina humana devido às semelhanças anatômicas e genéticas. Este manuscrito descreve um método de transplante submacular de células epiteliais de pigmento retiniano no olho nHP e estratégias para prevenir complicações intraoperatórias associadas à manipulação macular.

Transplante de Epitélio de Pigmento De Retina em um modelo de primata não humano para doenças degenerativas da retina

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Trauma foveal durante o transplante de pigmento epitelial do pigmento da retina pode resultar em resultados visuais ruins. Este método proposto pode reduzir a probabilidade de lágrimas de potro quando comparado com técnicas convencionais. O método proposto aborda múltiplos fatores que contribuem para o trauma foveal, incluindo a liberação de aderências subretinas, melhor visualização de camadas de retina e forças de tesoura tangencial durante a formação de bleb.Esta técnica, que envolve o pré-tratamento de plasminogênio intravitreal, a formação de bleb de retina orientada por MICROSCÓPIO, e o tamponade vítreo líquido perfluorocarbono usando uma cânula de furo duplo produz a probabilidade de trauma foveal com um procedimento mais suave. Demonstrando o procedimento estarão o Dr. Zenping Liu, um pesquisador sênior, e o Sr. Daniel, então Lin Wong, um assistente de pesquisa, ambos de um laboratório. O professor Gopal Lingam, consultor sênior, também demonstrará os procedimentos de operação.Para começar, use a tesoura Vannas para incisiva a conjuntiva perto do limbus para uma peritomia conjuntiva de 360 graus e realize uma dissecção contundente para ampliar a peritomia. Use uma lâmina micro vitreoretinal calibre 25 para fazer uma incisão de três milímetros na esclera às oito horas no olho direito ou quatro horas no olho esquerdo. Insira uma cânula de infusão de porta lateral personalizada de 25 bitola e sutura usando uma sutura vicryl 7-0.Após confirmar a localização intravitreal, inicie a infusão de solução de sal balanceada e defina o sistema para manter a pressão intraocular de 20 mililitros de mercúrio. Use um trocarte de cabeça plana de 25 bitolas para incisar a esclera às duas horas no olho direito ou 10 horas no olho esquerdo. Insira uma luz de lustre de 25 bitolas no trocarte e fixe a luz com fita adesiva.Ajuste a fonte de luz para aproximadamente 60% Realize outra esclerotomia às 10 horas para o olho direito ou duas horas para o olho esquerdo como demonstrado. Coloque uma sutura Vicryl 7-0 em forma de U ao redor da esclerotomia sem amarrar os nós. Insira o trocarte de vitrectomia através da esclerotomia.Realize a vitrectomia ao redor da porta de entrada, seguida de uma vitrectomia de núcleo curto com um máximo de 5.000 cortes por minuto e aspiração máxima a 400 milímetros de mercúrio. Injete de 20 a 50 microliters de triamcinolone para melhor visualização vítrea. Separe o corpo vítreo da retina para induzir um descolamento vítreo posterior.Posicione o vitrector acima do disco óptico para permitir a indução suave do desprendimento vítreo posterior. Mantenha o vitrector apenas na aspiração em um máximo de 400 milímetros de mercúrio sem envolver qualquer corte. Se necessário, use os fórceps intraoculares de calibre 25 para rasgar o córtex vítreo para facilitar o desprendimento.Abra a membrana hialoide posterior com o cortador e remova a saia vítrea destacada até a base vítrea. Aspire qualquer triamcinolone restante na superfície da retina. Injete de um a dois mililitros de líquido perfluorocarboneto para cobrir o polo posterior até a retina periférica anterior e média.Entre no olho com uma cânula de injeção subretinal. Use a cânula de injeção subretinal personalizada de 25 por 41 bitola ou 25 por 38 bitola de injeção subretinal conectada a uma seringa de 250 microliter para injeção subretinal. Coloque a pressão intraocular de zero a quatro milímetros de mercúrio.Realize suavemente uma injeção subretinal de BSS para induzir um descolamento de retina localizado. Uma vez que o bleb cruze a fovea, pare de injetar BSS. Crie uma segunda bleb de uma direção separada.Mescle ambos os blebs para desprender totalmente a fovea. Habilite a função de tomografia de coerência óptica intraoperatória visualize a formação de bleb, garantindo que as varreduras de linha e cubo estejam em modo de alta definição para adquirir uma imagem na fovea. Amplie a incisão da retina para 1,5 milímetros com um par de tesouras vitreoretinais de calibre 25 para permitir o acesso ao espaço subretinal para transplante.Coloque a pressão intraocular em 50 milímetros de mercúrio. Use uma cânula de ponta de silicone escovada para remover o líquido perfluorocarbono. Use uma faca de incisão de 1,4 milímetros para estender a esclerotomia.Digite um instrumento de loop extensível de 20 bitolas e remova a epitélia do pigmento de retina submacular hospedeiro raspando. Insira a ponta do dispositivo atirador através da esclerotomia e passe pela cavidade vítrea a uma pressão intraocular de 20 milímetros de mercúrio. Injete o implante em direção ao espaço subretinal através da borda da retinotomia criada a partir da superfície da retina com o lado portador da célula voltado para a membrana Brooks e o xenoenxerto voltado para os fotorreceptores.Visualize a localização do implante ativando a função de tomografia de coerência óptica intraoperatória. Ajuste a posição do implante com a cânula de injeção subretinal ou uma tesoura intraocular curva de 25 bitola para garantir que o implante esteja descansando plano na membrana Brooks no espaço subretinal com uma retina intacta, bem como localizada distante da retinotomia criada e não impingida no local da retinotomia. Use uma cânula de silicone escovada para a troca de líquido-ar e aspire suavemente o fluido subretinal do descolamento da retina bleb e a apposição da borda da retinotomia até que a retina seja recolocado sobre o implante.Em seguida, para terminar a cirurgia, feche a sclerotomia da porta de trabalho usando a sutura vicryl 7-0 pré-colocada. Administre 0,05 mililitro por dois miligramas de triamcinolone sem conservantes intravitreal na esclerotomia das oito horas. Remova o lustre e a cânula de infusão.Feche essas escleromias com suturas vicryl. Palpa o olho para garantir que a pressão intraocular esteja dentro do alcance aceitável. Injete ar filtrado ou BSS através de uma agulha de calibre 30, se necessário.Foi realizada uma imagem in vivo do pigmento epitelial de pigmento epitelial submacular do olho esquerdo em várias modalidades de imagem por até três meses. A fotografia do fundus indicou que o enxerto transplantado na fovea não migrou ao longo do tempo. A imagem de auto-fluorescência fundus mostrou alterações mínimas na hiper-fluorescência sobrepondo-se ao enxerto epitelial do pigmento da retina.A angiografia fundus fluoresceína de fase inicial e tardia não mostrou nenhum vazamento em torno do enxerto. As imagens da tomografia de coerência óptica macular mostraram a preservação das camadas externas da retina sobre o enxerto à medida que o tempo progredia, sugerindo a funcionalidade das células epiteliais do pigmento da retina. A coloração do HE mostrou camadas intactas de retina sem evidência de micro lágrimas.A tomografia de coerência óptica intraoperatória permite a visualização das dimensões bleb e o potencial rasgo foveal intraoperacional durante o descolamento foveal. A presença de lágrimas pode interferir na formação bleb. O sucesso da correta formação bleb foi indicado pela ausência de lágrimas.Para a avaliação funcional da retina, foram realizadas avaliações de eletroretinograma de campo completo do pigmento da retina, olho epitelial xenoenxerto. A ausência de deterioração significativa nas formas de onda eletroretinograma sugere que a função dos fotorreceptores de vara e cone foi mantida com os xenoenxertos. Durante a criação do bleb de retina localizado, faça-o muito suavemente, pois qualquer mudança repentina na velocidade do jato pode levar a lágrimas de potro.Realizar este passo lentamente é fundamental para reduzir a lesão do potro. Imagens multimodais, incluindo auto-fluorescência fundus, angiografia fluoresceína e tomografia de coerência óptica, juntamente com estudos de eletrofisiologia, podem fornecer maior percepção sobre a sobrevivência do enxerto e fatores que o afetam.

Research

JoVE Journal

Medicine

Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis

Técnicas de Processamento de Olhos implantados com uma prótese de retina para análise histopatológica localizada

With  the recent development of retinal prostheses, it is important to develop  reliable techniques for assessing the safety of these devices in ...

Medicina

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Realizando Subretinal Injeções em roedores para entregar epitélio pigmentar da retina células em suspensão

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Técnicas de processamento Olhos implantados com uma Retinal Prosthesis para localizada análise histopatológica: Parte 2 Epirretiniana implantes com tachas da retina

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

Quantitativa de autofluorescência de Avaliação de Doenças da retina

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

A Passo a Passo Protocolo de Cirurgia sub-retiniana em Coelhos

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Um modelo de mouse Retinal isquemia-reperfusão Através elevação da pressão intra-ocular

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

Um Modelo aguda da retina para a Avaliação sanguíneos da retina barreira Descumprimento e potenciais fármacos para o tratamento

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset (Callithrix jacchus)

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset Callithrix jacchus

Um procedimento cirúrgico para a administração de drogas para o ouvido interno em um Non-Human primatas Sagui (Callithrix jacchus)

Hearing research has long been facilitated by rodent models, although in some diseases, human symptoms cannot be recapitulated. The common marmoset ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

Modelo de Retinopatia Induzida por Oxigênio para Doenças Isquêmicas da Retina em Roedores

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...