Name: retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases
Uploaded: 2021-06-14T13:45:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases at JoVE.com

Este estudio fue apoyado por IAF-PP (HMBS Domain) (OrBID): OculaR BIomaterials and Device, A*STAR, Singapur (H17/01/a0/013), la subvención NUS Start-up NUHSRO/2016/100/SU/01, la subvención del Programa de Científicos Clínicos de NUHS (NCSP) y el Programa de Investigación Competitiva de la Fundación Nacional de Investigación, Singapur (NRF-CRP21-2018-0008) a X.S., Hong Leong Fondos de Cátedra Dotada a G.E.H. y B.V.S. Nos gustaría agradecer al equipo veterinario de la Plataforma de Modelos Preclínicos Traslacionales (Instituto de Investigación Ocular de Singapur, Singapur) por brindar apoyo en la preparación de la cirugía NHP y el seguimiento de animales. Nos gustaría extender nuestro agradecimiento a Jill Teo y sus colegas de C. Zeiss Meditec Singapur por el soporte técnico para el OPMI-Lumera 700 con dispositivo OCT intraoperatorio integrado.

Boris Stanzel tiene una patente estadounidense 9980851 sobre un instrumento (raspador de RPE) utilizado en este estudio. Conferencista honorarios de C. Zeiss Meditec y Geuder a Boris Stanzel. Los otros autores no tienen ningún conflicto de intereses que declarar.

Hay dos enfoques principales que se están evaluando para el trasplante de EPR submacular: la inyección de una suspensión de EPR y el trasplante de un injerto de EPR monocapa. Una comparación detallada entre los dos métodos está más allá del alcance de este manuscrito. Sin embargo, el trasplante de un injerto de EPR monocapa puede ser ventajoso ya que las células de EPR están más organizadas en una monocapa que en una suspensión. Las células RPE en el injerto están organizadas en una monocapa confluente, que se asemeja a la organización de la capa celular fisiológica de RPE y permite que las células RPE trasplantadas realicen sus funciones fisiológicas. Esto permite parámetros de dosificación más precisos en comparación con las suspensiones celulares, lo que es muy relevante para el trabajo regulatorio y la ampliación industrial.
La entrega del injerto de parche RPE en el espacio subretiniano requiere una manipulación cuidadosa de la mácula y una inserción precisa del injerto en el espacio subretiniano. Los avances tecnológicos en microcirugía, como miOCT, y una mejor comprensión de la dinámica del tejido retiniano intraoperatorio han reducido la curva de aprendizaje de este procedimiento. En esta discusión, se explicarán los fundamentos de los siguientes aspectos: i) inyección preoperatoria de plasminógeno; ii) el uso de miOCT intraoperatorio; iii) el uso de una cánula personalizada de doble orificio de 41 G, ajustes de PIO baja y PFCL para la creación de ampollas subretinianas; iv) raspado de la capa celular nativa de EPR antes del trasplante; v) el uso de sirolimus, triamcinolona, doxiciclina y minociclina para reducir el rechazo del injerto inmunogénico.
Las inyecciones preoperatorias de plasminógeno liberan adherencias retinianas parafoveales En los experimentos iniciales, fue difícil separar la fóvea con una sola onda fluida. En la evaluación con miOCT, las imágenes revelaron la presencia de adherencias retinianas externas parafoveales al EPR nativo junto con evidencia de trauma intrarretiniano20. Estas adherencias pueden haber llevado a una expansión vertical de la ampolla en lugar de la onda de líquido subretiniano que se extiende a través del contorno de la retina, lo que resulta en un traumatismo foveal. El plasminógeno es el precursor inactivo de la plasmina, una proteasa dirigida a la fibronectina y la laminina. La ocriplasmina es una variante de bioingeniería de la plasmina humana, aprobada por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) y la Agencia Europea de Medicamentos (EMA) para el tratamiento de la tracción vitreomacular sintomática con o sin un agujero macular concomitante. Sin embargo, los informes posteriores a la aprobación del desarrollo de edema de mácula cistoide después de la inyección de ocriplasmina han sugerido un efecto más extenso de la enzima sobre la retina23.
Aunque no se han identificado los mecanismos exactos, se sugirió que la plasmina podría debilitar la adhesión retiniana a través de la degradación de los elementos de la matriz interfotorreceptora responsables de la adhesión fotorreceptor-EPR24. En este protocolo, los ojos NHP fueron tratados con plasminógeno intravítreo 1 semana antes de la cirugía para liberar las adherencias externas parafoveales de la retina. Bajo el supuesto de que la adhesión fotorreceptor-EPR está debilitada, se requiere una fuerza menor para separar la retina neurosensorial, incluido el anillo parafoveal distal, que típicamente resiste la onda del líquido subretiniano20. Por lo tanto, la fuerza administrada durante el desprendimiento de la ampolla retiniana da como resultado la expansión de la ampolla a través del contorno de la retina en lugar de estirar la retina tangencialmente. Esto reduce el riesgo de desgarros foveales. Sin embargo, cabe señalar que el efecto del plasminógeno sobre la supervivencia del injerto a largo plazo no se estudió en este protocolo. Los estudios futuros deben intentar determinar este efecto.
miOCT proporciona retroalimentación anatómica para guiar la creación de ampollas subretinianas, la implantación de injertos y el drenaje de líquido subretiniano La manipulación intraoperatoria y atraumática de la mácula es clave para lograr buenos resultados de trasplante. Sin embargo, los cambios microestructurales de la mácula relacionados con la manipulación pueden no ser siempre evidentes en el microscopio operativo. En tales procedimientos, el miOCT es una herramienta importante que proporciona retroalimentación intraoperatoria tridimensional en tiempo real de la estructura macular. miOCT es especialmente útil durante los pasos de desprendimiento de foveal, implantación de injertos y drenaje del líquido subretiniano mediante un intercambio fluido-aire. Durante el desprendimiento foveal, miOCT puede determinar las dimensiones verticales y horizontales de la ampolla. Los microdesgarros foveales, que pueden no visualizarse claramente en el microscopio quirúrgico, pueden confirmarse mediante miOCT (Figura 3). Durante la implantación del injerto, las imágenes miOCT guían mostrando la ubicación o proximidad del injerto a la fóvea, a través de la retina desprendida, a menudo menos transparente. miOCT también puede resaltar posibles áreas de adhesión retiniana durante un difícil proceso de trasplante25. Finalmente, en el proceso de drenaje de líquido subretiniano, miOCT puede guiar de manera confiable el drenaje de líquido subretiniano hasta que se logre un contacto completo entre el injerto retinal-RPE.
La combinación de una cánula de doble orificio, ajustes de PIO baja y taponamiento vítreo PFCL reduce sinérgicamente el trauma macular durante la creación de ampollas subretinianas El estiramiento tangencial de la retina y la turbulencia de líquidos pueden ocurrir durante la inyección subretiniana de BSS para el desprendimiento de foveal que conduce a desgarros foveales no deseados. Para contrarrestar estos fenómenos, factores como la posición relativa y la distancia desde el centro foveal donde se inicia la inyección, el volumen y la velocidad de la inyección, el taponamiento vítreo, la elección de la instrumentación subretiniana y la PIO han demostrado ser relevantes20,26,27. La ampolla subretiniana para el desprendimiento de foveal debe situarse en un lugar adecuadamente distante de la fóvea, ya que el estiramiento de la retina puede ser mayor en el sitio de inicio de la ampolla27. La PIO también debe mantenerse baja durante toda la creación de la ampolla subretiniana. Cuando la PIO del ojo es alta, se observa un mayor aumento vertical en el tamaño de la ampolla en lugar de expansión a lo largo del contorno de la retina, mientras que las ampollas son menos profundas a presiones más bajas20. Además, aunque una inyección intravítrea de 50 μL duplicará efectivamente la PIO en humanos28, dada la longitud ocular más corta en los NHP, el aumento de la PIO durante la inyección subretiniana probablemente será mayor y más rápido que en humanos. Si bien la mayoría de las máquinas de vitrectomía se ajustan a la fluctuación de la PIO, el ajuste no es simultáneo, sino más bien un proceso reactivo que ocurre a medida que avanza la inyección subretiniana. Por lo tanto, cuanto mayor sea la PIO, mayor será el riesgo de estiramiento excesivo de la retina y el trauma foveal resultante. Por lo tanto, es esencial mantener una PIO baja estable durante la inyección subretiniana.
Se recomienda una cánula subretiniana comercial de 20/41 G (DORC) o una cánula subretiniana de doble orificio de 25/41 G hecha a medida para la inyección subretiniana. La cánula permite que el líquido salga de la cavidad vítrea a cambio de BSS inyectado en el espacio subretiniano. Esto asegura la regulación "simultánea" de la PIO durante la inyección subretiniana. Un esquema de la cánula de doble orificio se ve en la Figura 2. Finalmente, pfCL se utiliza para reducir el riesgo de desgarros foveales20,26,27. Como los PFCL, como la octalina, tienen una mayor gravedad específica, ejercen una fuerza descendente sobre la retina durante el desprendimiento de foveal29. Esto estabiliza aún más el proceso de creación de ampollas por desprendimiento foveal y mejora la expansión de la ampolla a lo largo del contorno de la retina. Esta técnica se ha utilizado con éxito para la inyección subretiniana de rtPA en el contexto de hemorragia submacular masiva debido a nAMD30.
La eliminación previa al trasplante de EPR nativo permite la restauración del complejo RPE-fotorreceptor El EPR del huésped debe extraerse antes del trasplante de injerto. Esto se debe a que se requiere la restauración del complejo RPE-fotorreceptor para permitir que el trasplante de RPE realice sus funciones fisiológicas de soporte de los fotorreceptores21. El RPE huésped, si no se elimina, puede presentarse como una barrera mecánica, lo que impide la restauración de este complejo. Se puede eliminar mediante la administración de productos químicos tóxicos para RPE o mediante el uso de medios físicos de eliminación. Los métodos de eliminación química incluyen la administración sistémica o subretiniana de yodato de sodio31,32. Como el yodato de sodio causa una degeneración generalizada de fotorreceptores, células RPE y Coriocapillaris cuando se administra, su toxicidad retiniana y sistémica impide su uso en ensayos en humanos32,33. Por lo tanto, se prefieren las técnicas físicas intraoperatorias. Se han conceptualizado varios métodos físicos. Cuando se utilizan métodos físicos, es crucial que la membrana de Bruch permanezca intacta. Muchos estudios in vitro han demostrado la dependencia de la supervivencia del injerto de EPR en una membrana de Bruch intacta34,35,36.
Los intentos de desbridamiento hidráulico se asociaron con roturas en la membrana de Bruch, un aumento de la tasa de desarrollo de la membrana epirretiniana y vitreorretinopatía proliferativa, lo que resultó en desprendimiento de retina por tracción37. Una espátula espolvoreada de diamante propuesta para el desbridamiento de RPE también provocó roturas en la membrana de Bruch, lo que resultó en la proliferación celular de la coroides al espacio subretiniano38. Curiosamente, un instrumento de bucle extensible hecho a medida podría eliminar el RPE suprayacente con la preservación de la membrana de Bruch a los ojos de conejos y cerdos11,39. La eliminación del EPR subyacente también es útil para establecer modelos animales con EPR y atrofia externa de la retina, similar a la forma atrófica avanzada de la DMAE. Cuando se elimina un área focal de RPE de la mácula, la herida de RPE se cierra a través de la hipertrofia de las células de RPE restantes. Sin embargo, esta respuesta de cicatrización de heridas se asocia con la atrofia de la capa nuclear externa40. Si bien la creación de un modelo animal está más allá del alcance de este manuscrito, un procedimiento similar puede crear un modelo animal de un fenotipo avanzado de DMAE atrófica para la prueba de terapias celulares derivadas de RPE.
El uso de sirolimus, triamcinolona, doxiciclina y minociclina para reducir el rechazo del injerto inmunogénico Se cree que el espacio subretiniano es un sitio inmuno-privilegiado, mantenido por una barrera sangre-retina intacta y otros factores41. En muchos estudios relacionados con el trasplante subretiniano de derivados de células madre con una barrera hematoencefaliana intacta, los fármacos inmunosupresores desempeñan un papel insignificante en la supervivencia del injerto42. Se cree que la barrera externa sangre-retina está formada por la capa nativa de EPR y las uniones estrechas entre las células de EPR. Mientras que la eliminación nativa de RPE permite una mejor integración del RPE trasplantado y los fotorreceptores del huésped, la barrera sangre-retina se interrumpe en el proceso, lo que aumenta la probabilidad de un rechazo inmunológico. Clásicamente, las células T son fundamentales para el proceso de rechazo del trasplante de otros órganos como el riñón y el hígado43. Por lo tanto, los regímenes inmunosupresores iniciales para el trasplante de tejido retiniano se dirigieron a reducir estas respuestas inmunes adaptativas.
Sirolimus, un objetivo mecanicista del inhibidor de la rapamicina, y tacrolimus, un inhibidor de la calcineurina, son ejemplos de fármacos inmunosupresores dirigidos a las respuestas inmunitarias adaptativas. Sin embargo, a pesar de la supresión adecuada de las células T, las tasas de supervivencia del injerto siguen siendo bajas. Además, se sabe que las células RPE suprimen la activación de las células T a través de la liberación de factores inhibitorios y promueven la generación de células T reguladoras44. Por lo tanto, se ha vuelto cada vez más evidente que la inmunidad adaptativa puede no ser el único contribuyente al rechazo del injerto42. El trasplante subretiniano de productos celulares puede dar lugar a la acumulación y activación de microglia45.
La microglía son los macrófagos de la retina. Consisten en dos poblaciones principales: 1) la microglía perivascular de la vasculatura interna de la retina y 2) la microglía dentro del parénquima del tejido retiniano. Como la microglía forma parte de la respuesta inmune innata, los glucocorticoides intravítreos, como la triamcinolona, pueden suprimir la proliferación mediada por citoquinas46. La doxiciclina y la minociclina también pueden suprimir la activación microglial y deben considerarse47,48. Por último, las diferencias en el rechazo inmune de los aloinjertos de EPR frente a los xenoinjertos no se comprenden íntegramente49. Por ejemplo, se han notificado aloanticuerpos contra células RPE derivadas de células madre pluripotentes inducidas en el suero de modelos de rechazo inmunitario in vivo. Sin embargo, sigue siendo desconocido el papel de estos anticuerpos y la importancia del rechazo mediado por anticuerpos en la supervivencia del injerto50. Por lo tanto, se propone un régimen multifarmacológico que utiliza sirolimus para la supresión de la inmunidad adaptativa y una combinación de triamcinolona, doxiciclina y minociclina para la supresión de la inmunidad innata. Este régimen se ha utilizado con éxito en conejos con buenos resultados de supervivencia del injerto y efectos sistémicos mínimos11.
Limitaciones de esta técnica quirúrgica Este artículo describe un posible método quirúrgico para administrar una hoja de injerto de EPR en el espacio subretiniano de nhp; sin embargo, esto no significa que esta sea la única forma optimizada. Diferentes cirujanos vítreo-retinianos pueden tener otras preferencias por la instrumentación y la técnica. Por ejemplo, este diseño de dispositivo de implantación solo puede entregar implantes planos soportados con un portador de células más rígido y, por lo tanto, puede no ser adecuado para implantes relativamente flexibles (o enrollados). Los trasplantes en suspensión de EPR pueden omitir gran parte de esta técnica. En consecuencia, los detalles quirúrgicos requerirán modificaciones en función de cada estrategia de entrega.
A medida que el interés en la terapéutica celular para el tratamiento de enfermedades degenerativas de la retina continúa creciendo, el modelo animal NHP será esencial en estudios preclínicos para estudiar los factores que afectan la supervivencia del injerto de EPR. En este manuscrito, se proponen estrategias para permitir la entrega más suave de un injerto de EPR monocapa submacular en el ojo NHP. También se recomiendan métodos para una mejor visualización de las complicaciones intraoperatorias. Se anticipa que estos métodos continuarán mejorando a medida que se expanda el uso de la terapéutica celular. Los futuros documentos de métodos también deben considerar la propuesta de una lista completa de investigaciones para evaluar varios aspectos estructurales y funcionales del injerto.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.
The Authors section was updated from:
Ivan Seah*1, Zengping Liu*2,3,4, Daniel Soo Lin Wong3, Wendy Wong1, Graham E. Holder1,3,5, Veluchamy Amutha Barathi3,4,6, Gopal Lingam1,3,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
2Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), 
3Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally
to:
Ivan Seah*1,2, Zengping Liu*1,3,4, Daniel Soo Lin Wong1, Wendy Wong2, Graham E. Holder1,2,5, Veluchamy Amutha Barathi1,4,6, Gopal Lingam1,2,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore 
2Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
3Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR) 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

El trasplante de EPR es muy prometedor para el tratamiento de enfermedades degenerativas de la retina hereditarias y adquiridas. Estas condiciones incluyen retinosis pigmentaria (RP, distrofia de cono de bastón) y formas avanzadas de DMAE como la AG. En conjunto, estos trastornos representan una proporción significativa de la ceguera actualmente intratable a nivel mundial1,2. Las etapas avanzadas de la DMAE se clasifican en DMAE neovascular (nAMD) y AG. Si bien existen opciones de tratamiento efectivas para la nAMD, como las inyecciones de factor de crecimiento endotelial antivascular (anti-VEGF), los pacientes con AG tienen opciones de tratamiento limitadas. La RP es un grupo muy heterogéneo de trastornos retinianos hereditarios caracterizados por degeneración progresiva de los fotorreceptores retinianos. En algunos pacientes, el defecto genético causal se encuentra dentro del EPR en lugar de los fotorreceptores; por lo tanto, la terapia de reemplazo de EPR puede ser una estrategia alternativa si la terapia génica no es factible.
Existe un interés significativo en el desarrollo de tratamientos efectivos para estas afecciones. En particular, el trasplante de EPR ha ido ganando terreno como un potencial abordaje terapéutico3,4,5,6,7,8. Desde que aparecieron los primeros informes sobre el trasplante de EPR en la década de 19809, el campo se ha ampliado para incluir varias fuentes de células de EPR, estrategias de administración y modelos experimentales de enfermedad y trasplante10,11,12,13,14. Entre los diversos modelos animales, solo el NHP tiene una 'mácula lútea' con una 'fóvea central', una especialización anatómica en el polo posterior de la retina compartida con los humanos. La fóvea contiene una densidad muy alta de fotorreceptores de cono que permiten una visión central de alta resolución15. El NHP también tiene una composición genómica y proteómica similar16 en comparación con los humanos. Estas similitudes lo convierten en un modelo animal importante y apropiado para el estudio de las enfermedades oculares que afectan a la retina humana17,18.
Este manuscrito describe un método para el trasplante submacular de un xenoinjerto de EPR, apoyado por un portador de células PET, en NHP inmunodeprimidos. En un manuscrito anterior se ha descrito una técnica transvítrea para el trasplante subretiniano de EPR en conejos19. Sin embargo, en los PNH, la presencia de la fóvea requiere un cuidado especial durante la manipulación intraoperatoria20. En particular, existe un alto riesgo de desgarro foveal si los métodos de inyección de líquido subretiniano generan una fuerza excesiva en la retina20. El enfoque de este manuscrito es, por lo tanto, en las estrategias para reducir el riesgo de trauma foveal inadvertido en nhP.
Estos incluyen el uso de la inyección preoperatoria de plasminógeno intravítreo para la liberación de adherencias parafoveales y la tomografía de coherencia óptica integrada con microscopio quirúrgico (miOCT) intraoperatoria para la visualización en tiempo real de la anatomía foveal. Se propone una cánula subretiniana de doble orificio de 25/41 G hecha a medida con taponamiento intraocular PFCL en configuraciones de PIO baja para permitir un proceso más controlado de desprendimiento foveal. Además, se recomienda la extirpación quirúrgica del EPR nativo antes de la implantación para permitir una mejor integración entre las células EPR trasplantadas y los fotorreceptores del huésped. Finalmente, se describe un protocolo de inmunosupresión sistémica peri y postoperatoria para modelos nhP para mejorar la supervivencia del xenoinjerto de EPR post-trasplante11,21.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Mydriacyl (Tropicamide 1.0%) Sterile Ophthalmic preparation</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>SIN 4715P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3800598</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% Mydfrin (Phenylephrine hydrochloride) Ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01785</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G AWH Vivid Chandelier</td>
			<td>Synergetics</td>
			<td>56.54.25P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 Ga Bi-Blade Vitreous Cutter Combined Wide-Field Stellaris Elite Pack</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>SE5525WVB</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMO ENDOSOL Balanced Salt Solution for ophthalmic irrigation</td>
			<td>Abbott Medical Optics</td>
			<td>15020</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apo-minocycline</td>
			<td>Apotex Inc</td>
			<td>2084104</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUROVISC - Hypromellose Ophthalmic Solution USP 2% w/v</td>
			<td>Aurolab</td>
			<td>TN 00002387</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave MELAG, Vacuklav</td>
			<td>MELAG</td>
			<td>1131-B2300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer XL (ST5010)</td>
			<td>Leica</td>
			<td>2433</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced Saline Solution</td>
			<td>Beaver Visitec</td>
			<td>581732</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Bud</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NA6-100</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnosys Espion E3 Console</td>
			<td>Diagnosys</td>
			<td>272</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>MAL 19950403AEZ</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0100</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet contact lens electrodes</td>
			<td>Fabrinal</td>
			<td>F-06</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extendable PolyTip Cannula 25 G/38 G</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3247</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexTip Brush (25 g) 1.5 mm</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3222</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine 10% Faure</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Swab</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NP3275</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton gas tight syringe 250 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81101</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis HRA + OCT Computer System</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td>N.A.</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Gill II</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>3801520</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope eclipse Ti-E main body (100-240V)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>33131</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin injection</td>
			<td>Ceva</td>
			<td>37711/58317</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium carbonate</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.05680.0250</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monkey plasminogen</td>
			<td>Molecular Innovations</td>
			<td>SKU-CYPLG</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-contact wide angled 128 degree fundus lens</td>
			<td>C. Zeiss Medtech</td>
			<td>Resight 700</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven Ophthalmic Drape</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065103120</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Corneal/Scleral V-Lance Knife 20 G</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065912001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding Station</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EG1150 H</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast High Melt Paraffin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>39601095</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0025</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prepowdered Surgical Gloves</td>
			<td>MAXITEX</td>
			<td>85-173-2/85-173-3/85-173-4</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRODINE Povidone-Iodine Solution BP</td>
			<td>ICM PHARMA</td>
			<td>PMLBLP20-01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Righton Slit Lamp Model MW50D (RAA133CB)</td>
			<td>Righton-Oph</td>
			<td>5200162</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2255</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safil Polyglycolic acid, braided, coated, absorbable surgical suture 7/0</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>G1048711</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHINCORT I.M. INJ. Triamcinolone Acetonide 40 mg/mL</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>SHI40 SGP-2610015-001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 21 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657527</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 23 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657667</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirolimus</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>SIN12034P</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel subdermal needle electrode</td>
			<td>OcuScience</td>
			<td>F-E2</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stellaris Elite vision enhancement system</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>BL15455</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 27 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4665406</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 30 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4656300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gown + 2 Hand Towels</td>
			<td>STERIL</td>
			<td>APP10 00 01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626W</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 1 cc/mL Luer SlipTip with needle 26 G</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-01S</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 3 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-03L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 5 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-05L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TobraDex (Tobramycin, Dexamethasone) Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01577</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Topcon Retinal Camera TRC-50DX</td>
			<td>Topcon</td>
			<td>948605</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vidisic Gel</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>GB41789155517</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazil-20</td>
			<td>Ilium</td>
			<td>38653/50276</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Opmi Rescan 700</td>
			<td>Carl Zeiss Meditec AG</td>
			<td>7210</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases

El trasplante epitelial pigmentario de la retina (EPR) es muy prometedor para el tratamiento de enfermedades degenerativas de la retina hereditarias y adquiridas. Estas afecciones incluyen retinitis pigmentosa (RP) y formas avanzadas de degeneración macular relacionada con la edad (DMAE), como la atrofia geográfica (AG). Juntos, estos trastornos representan una proporción significativa de la ceguera actualmente intratable a nivel mundial. Estas necesidades médicas insatisfechas han generado un mayor interés académico en el desarrollo de métodos de reemplazo de EPR. Entre los modelos animales comúnmente utilizados para las pruebas preclínicas de terapias, el primate no humano (NHP) es el único modelo animal que tiene una mácula. Como comparte esta similitud anatómica con el ojo humano, el ojo NHP es un modelo animal preclínico importante y apropiado para el desarrollo de medicamentos de terapia avanzada (ATMP) como la terapia celular RPE.
Este manuscrito describe un método para el trasplante submacular de una monocapa de EPR, cultivada en un portador de células de tereftalato de polietileno (PET), debajo de la mácula en una herida de EPR creada quirúrgicamente en NHP inmunodeprimidos. La fóvea, la porción avascular central de la mácula, es el sitio de la mayor debilidad mecánica durante el trasplante. El traumatismo foveal ocurrirá si la inyección inicial de líquido subretiniano genera una fuerza excesiva sobre la retina. Por lo tanto, se recomienda la inyección lenta bajo el taponamiento vítreo líquido de perfluorocarbono (PFCL) con una cánula de inyección subretiniana de doble orificio en configuraciones de presión intraocular (PIO) baja para crear una ampolla retiniana. 
También se recomienda el pretratamiento con una inyección intravítrea de plasminógeno para liberar adherencias parafoveales RPE-fotorreceptores. Estas estrategias combinadas pueden reducir la probabilidad de desgarros foveales en comparación con las técnicas convencionales. El NHP es un modelo animal clave en la fase preclínica del desarrollo de la terapia celular RPE. Este protocolo aborda los desafíos técnicos asociados con la administración de la terapia celular RPE en el ojo NHP.

Las modalidades de imagen multimodal (fotografía de fondo de ojo, imágenes de autofluorescencia de fondo de ojo (FAF), angiografía de fluoresceína de fondo de ojo (FFA)-fase temprana y fase tardía, y tomografía de coherencia óptica (OCT)) destacan las características de un trasplante de injerto de EPR submacular exitoso (Figura 1). La fotografía del fondo de ojo muestra el posicionamiento del trasplante de injerto RPE en la fóvea sin migración a lo largo del tiempo. Las imágenes de FAF muestran cambios mínimos en la hiperautofluorescencia (demostrada por áreas blancas de alta intensidad) que se superponen al injerto de EPR. La FFA de fase temprana y tardía no muestra ninguna fuga obvia (demostrada por áreas blancas de alta intensidad que se agrandan con el tiempo) que rodean el injerto de EPR. Las imágenes iniciales en el día 3 muestran un defecto en la ventana debido a la eliminación de RPE nativo antes de la implantación del injerto. Las imágenes de OCT macular muestran la preservación de las capas externas de la retina (en particular, la capa fotorreceptora) sobre el injerto de EPR a medida que avanza el tiempo. La tinción de hematoxilina y eosina muestra capas retinianas intactas sin evidencia de microdesgarros. La preservación de la capa nuclear externa por encima de las periferias del injerto sugiere que las células RPE están realizando sus funciones fisiológicas de mantener la salud de los fotorreceptores.
Las vistas intraocular y externa de la cánula de doble orificio de 25/41 G resaltan el mecanismo por el cual se controla la PIO durante la inyección subretiniana (Figura 2). BSS entra en el espacio subretiniano durante la inyección de líquido subretiniano a través de la cánula central más larga. Los aumentos significativos en la presión intraocular hacen que el BSS dentro de la cavidad vítrea salga del ojo a través del orificio metálico más grande de la cánula. BSS luego viaja a lo largo de la cánula y finalmente es expulsado del puerto de salida cerca del centro de la cánula. Para evaluar si la cánula está funcionando como se esperaba, asegúrese de que el fluido fluya desde el puerto de salida cerca del centro de la cánula.
El miOCT permite la visualización de las dimensiones de la ampolla y un potencial desgarro foveal intraoperatoriamente durante el desprendimiento foveal (Figura 3). Figura 3A1-A3 resalta un caso de ampolla con un desgarro foveal. En la Figura 3A1, mientras que la ampolla inferior es visible bajo el microscopio quirúrgico, la visualización del desgarro es difícil. La Figura 3A2 muestra la sección longitudinal de una ampolla sin desgarros. La Figura 3A3 muestra un desgarro foveal al evaluar la sección vertical de la ampolla. La figura 3B1-B3 muestra una mancha creada con éxito sin la presencia de lágrimas.
La ausencia de deterioro significativo en las formas de onda ERG sugiere que la función global de los fotorreceptores de bastones y conos se mantiene con xenoinjertos subretinianos de EPR (Figura 4). Las formas de onda ERG muestran la función general de la retina. En particular, se debe prestar atención a las ondas A para determinar cualquier pérdida de la función fotorreceptora.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig01.jpg"> Figura 1: Análisis postoperatorio in vivo con imagen multimodal. (A) Imágenes in vivo del trasplante de injerto de EPR submacular del ojo izquierdo (amarillo en la fotografía del fondo de ojo) en varias modalidades de imagen (columnas de izquierda a derecha: fotografía del fondo de ojo, autofluorescencia, angiografía con fondo de ojo con fluoresceína-fase temprana, angiografía con fondo de ojo fluoresceína-fase tardía, tomografía de coherencia óptica) para puntos de tiempo de hasta 3 meses (filas superiores a inferiores: días 3, 14; Meses 1, 3). El asterisco en la fotografía del fondo de ojo indica el sitio de la retinotomía; la flecha discontinua blanca indica la dirección del escaneo de línea. La forma amarilla dibujada en las imágenes de autofluorescencia del fondo de ojo resalta la ubicación del trasplante. Los triángulos blancos en las imágenes octanuales indican los bordes laterales respectivos del injerto (según el escaneo de línea en la imagen del fondo de ojo en color). (B) Tinción de hematoxilina y eosina del trasplante bajo fóvea atrófica (debido a desgarro intraoperatorio) con capas marcadas. Barras de escala = 1 mm en A (imágenes de autofluorescencia y FA), 200 μm en A (imágenes oct) y 100 μm en B. Abreviaturas: FA = angiografía de fondo de ojo; OCT = tomografía de coherencia óptica; RGC = capa de células ganglionares de la retina; INL = capa nuclear interna; ONL = capa nuclear exterior; EPR = epitelio pigmentario de la retina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig02.jpg"> Figura 2: Vistas intraoculares y externas de la cánula de doble orificio de 25/41 G. (A) Vista intraocular de la cánula de doble orificio de 25/41 G durante la creación de la ampolla subretiniana. La flecha blanca apunta a la cánula central más larga para la inyección subretiniana. La flecha discontinua apunta a la abertura de la cánula de salida a través de la cual pasa el BSS para salir del ojo. (B) Vista externa de la cánula de doble diámetro de 25/41 G. El asterisco marca el puerto de salida cerca del cubo de la cánula desde el que se drena el BSS intraocular. Abreviatura: BSS = solución salina equilibrada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig03.jpg"> Figura 3: Imágenes de microscopio intraoperatorio e imágenes miOCT de ampolla subretiniana complicada por un desgarro foveal. (A1) Imagen de microscopio intraoperatorio que muestra la posición de las exploraciones longitudinales (azules) y transversales (rojas) en una ampolla con un desgarro foveal. (A2) Gammagrafía miOCT longitudinal que muestra una hemorragia subretiniana en la región foveal (flecha amarilla). (A3) Gammagrafía miOCT transversal que captura un desgarro foveal (punta de flecha blanca), junto con una retinotomía (asterisco y una ampolla subretiniana (flecha amarilla). (B1) Una imagen microscópica intraoperatoria que muestra la posición de las exploraciones longitudinales (azules) y transversales (rojas) en una ampolla formada con éxito. (B2) Gammagrafía miOCT longitudinal que muestra una hemorragia subretiniana en la región foveal (flecha amarilla). (B3) La exploración miOCT transversal muestra una ampolla subretiniana creada con éxito con una fóvea intacta superiormente (diamante blanco). Abreviatura: miOCT = tomografía de coherencia óptica integrada con microscopio. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig04.jpg"> Figura 4: ERG del ojo trasplantado con xenoinjerto RPE. Para la evaluación funcional de la retina, las evaluaciones de ERG de campo completo del ojo xenoinjertado con EPR realizadas al inicio (fila superior) y 3 meses después del trasplante (fila inferior) no muestran ningún efecto significativo del trasplante de xenoinjerto de EPR en ninguna amplitud de respuesta, tiempo o forma de onda en condiciones adaptadas a la oscuridad o a la luz. Abreviaturas: RPE = epitelio pigmentario de la retina; ERG = electrorretinograma; DA = adaptado a la oscuridad; LA = adaptado a la luz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

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Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

El primate no humano (NHP) es un modelo ideal para estudiar la terapéutica celular de la retina humana debido a las similitudes anatómicas y genéticas. Este manuscrito describe un método para el trasplante submacular de células epiteliales pigmentarias de la retina en el ojo NHP y estrategias para prevenir las complicaciones intraoperatorias asociadas con la manipulación macular.

Trasplante de epitelio pigmentario retiniano en un modelo de primate no humano para enfermedades degenerativas de la retina

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

El traumatismo foveal durante el trasplante de injerto epitelial pigmentario de retina puede dar lugar a malos resultados visuales. Este método propuesto puede reducir la probabilidad de desgarros foveales en comparación con las técnicas convencionales. El método propuesto aborda múltiples factores que contribuyen al trauma foveal, incluida la liberación de adherencias subretinianas, una mejor visualización de las capas retinianas y las fuerzas de cizallamiento tangenciales durante la formación de ampollas.Esta técnica, que implica el pretratamiento del plasminógeno intravítreo, la formación de ampollas retinianas guiadas por OCT integradas con microscopio y el taponamiento vítreo líquido de perfluorocarbono utilizando una cánula de doble orificio produce la probabilidad de traumatismo foveal con un procedimiento más suave. Demostrando el procedimiento estarán el Dr. Zenping Liu, un investigador principal, y el Sr. Daniel Soo Lin Wong, un asistente de investigación, ambos de un laboratorio. El profesor Gopal Lingam, consultor sénior, también demostrará los procedimientos de operación.Para comenzar, use las tijeras Vannas para incidir la conjuntiva cerca del limbo para una peritomía conjuntival de 360 grados y realice una disección contundente para agrandar la peritomía. Use una cuchilla micro vitreorretiniana de calibre 25 para hacer una incisión de tres milímetros en la esclerótica a las ocho en punto en el ojo derecho o a las cuatro en punto en el ojo izquierdo. Inserte una cánula y sutura de infusión de puerto lateral personalizado de calibre 25 con una sutura Vicryl 7-0.Después de confirmar la ubicación intravítrea, inicie la infusión de solución salina equilibrada y configure el sistema para mantener la presión intraocular de 20 mililitros de mercurio. Use un trocar de cabeza plana de calibre 25 para incidir la esclerótica a las dos en punto en el ojo derecho o a las 10 en punto en el ojo izquierdo. Inserte una luz de araña de calibre 25 en el trocar de cabeza plana y asegure la luz con cinta adhesiva.Ajuste la fuente de luz a aproximadamente el 60% Realice otra esclerotomía a las 10 en punto para el ojo derecho o a las dos en punto para el ojo izquierdo como se demuestra. Coloque una sutura Vicryl 7-0 en forma de U alrededor de la esclerotomía sin atar los nudos. Inserte el trócar de vitrectomía a través de la esclerotomía.Realice la vitrectomía alrededor del puerto de entrada, seguida de una vitrectomía de núcleo corto con un máximo de 5. 000 cortes por minuto y aspiración máxima a 400 milímetros de mercurio. Inyecte de 20 a 50 microlitros de triamcinolona para una mejor visualización vítrea. Separar el cuerpo vítreo de la retina para inducir un desprendimiento vítreo posterior.Coloque el vitrector sobre el disco óptico para permitir una inducción suave del desprendimiento vítreo posterior. Mantenga el vitrector solo en aspiración a un máximo de 400 milímetros de mercurio sin que implique ningún corte. Si es necesario, use las pinzas intraoculares de calibre 25 para desgarrar la corteza vítrea para facilitar el desprendimiento.Abra la membrana hialoide posterior con el cortador y retire la falda vítrea desprendida hasta la base vítrea. Aspire cualquier triamcinolona restante en la superficie de la retina. Inyecte de uno a dos mililitros de líquido de perfluorocarbono para cubrir el polo posterior hasta la retina periférica anterior y media.Ingrese al ojo con una cánula de inyección subretiniana. Utilice la cánula de inyección subretiniana de doble orificio personalizada de calibre 25 por 41 o la cánula de inyección subretiniana de calibre 25 por 38 conectada a una jeringa de 250 microlitros para inyección subretiniana. Ajuste la presión intraocular a cero a cuatro milímetros de mercurio.Realice suavemente una inyección subretiniana de BSS para inducir un desprendimiento de retina localizado. Una vez que la ampolla cruce la fóvea, deje de inyectar BSS. Cree una segunda ampolla desde una dirección separada.Fusiona ambas ampollas para separar completamente la fóvea. Permitir que la función de tomografía de coherencia óptica intraoperatoria visualice la formación de ampollas, asegurando que los escaneos de línea y cubo estén en modo de alta definición para adquirir una imagen en la fóvea. Agrandar la incisión de la retina a 1,5 milímetros con un par de tijeras vitreorretinianas verticales de calibre 25 para permitir el acceso al espacio subretiniano para el trasplante.Ajuste la presión intraocular a 50 milímetros de mercurio. Use una cánula de punta de silicona cepillada para eliminar el líquido de perfluorocarbono. Use un cuchillo de incisión de 1,4 milímetros para extender la esclerotomía.Ingrese un instrumento de bucle extensible de calibre 20 y elimine el epitelio pigmentario de la retina del huésped submacular mediante raspado. Inserte la punta del dispositivo tirador a través de la esclerotomía y pase a través de la cavidad vítrea a una presión intraocular de 20 milímetros de mercurio. Inyecte el implante hacia el espacio subretiniano a través del borde de la retinotomía creado a partir de la superficie de la retina con el lado portador de la célula frente a la membrana de Brooks y el xenoinjerto frente a los fotorreceptores.Visualice la ubicación del implante habilitando la función de tomografía de coherencia óptica intraoperatoria. Ajuste la posición del implante con la cánula de inyección subretiniana o una tijera intraocular curvada de calibre 25 para garantizar que el implante descanse plano sobre la membrana de Brooks en el espacio subretiniano con una retina suprayacente intacta, así como ubicado distante de la retinotomía creada y no impactado en el sitio de la retinotomía. Use una cánula de punta de silicona cepillada para el intercambio líquido-aire y aspire suavemente el líquido subretiniano desde el desprendimiento de retina de la ampolla y la aposición del borde de la retinotomía hasta que la retina se vuelva a unir sobre el implante.Luego, para terminar la cirugía, cierre la esclerotomía de puerto de trabajo con la sutura Vicryl 7-0 precolocada. Administrar 0,05 mililitros por dos miligramos de triamcinolona sin conservantes intravítreos a las ocho en punto esclerotomía. Retire la lámpara de araña y la cánula de infusión.Cierre estas esclerotomías con suturas de Vicryl. Palpar el ojo para asegurarse de que la presión intraocular está dentro del rango aceptable. Inyecte aire filtrado o BSS a través de una aguja de calibre 30 si es necesario.Se realizó una imagen in vivo del trasplante de injerto epitelial pigmentario de retina submacular del ojo izquierdo en varias modalidades de imágenes durante un máximo de tres meses. La fotografía del fondo de ojo indicó que el injerto trasplantado en la fóvea no migró con el tiempo. Las imágenes de autofluorescencia del fondo de ojo mostraron cambios mínimos en la hiperautofluorescencia superpuesta al injerto epitelial pigmentario de la retina.La angiografía con fluoresceína del fondo de ojo de fase temprana y tardía no mostró ninguna fuga alrededor del injerto. Las imágenes de tomografía de coherencia óptica macular mostraron la preservación de las capas externas de la retina sobre el injerto a medida que avanzaba el tiempo, lo que sugiere la funcionalidad de las células epiteliales pigmentarias de la retina. La tinción heno mostró capas retinianas intactas sin evidencia de micro desgarros.La tomografía de coherencia óptica intraoperatoria permite la visualización de las dimensiones de la ampolla y del potencial desgarro foveal intraoperatoriamente durante el desprendimiento foveal. La presencia de desgarro puede interferir con la formación de ampollas. El éxito de la correcta formación de ampollas fue indicado por la ausencia de desgarro.Para la evaluación funcional de la retina, se realizaron evaluaciones de electrorretinograma de campo completo del ojo xenoinjertado epitelial pigmentario retiniano. La ausencia de deterioro significativo en las formas de onda del electrorretinograma sugiere que la función de los fotorreceptores de bastone y cono se mantuvo con los xenoinjertos. Durante la creación de la ampolla retiniana localizada, hágalo muy suavemente, ya que cualquier cambio repentino en la velocidad del chorro puede provocar desgarros foveales.Realizar este paso lentamente es clave para reducir la lesión foveal. Las imágenes multimodales que incluyen la autofluorescencia del fondo de ojo, la angiografía con fluoresceína y la tomografía de coherencia óptica, junto con los estudios de electrofisiología, pueden proporcionar una mayor comprensión de la capacidad de supervivencia del injerto y los factores que lo afectan.

Research

JoVE Journal

Medicine

Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis

Técnicas de Procesamiento de ojos implantados con una prótesis de retina para el análisis histopatológico localizada

With  the recent development of retinal prostheses, it is important to develop  reliable techniques for assessing the safety of these devices in ...

Investigación

Medicina

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Desprendimiento de Retina modelo en roedores por inyección subretiniana de Hialuronato de Sodio

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Realizar Subretinal Inyecciones en roedores administrar células de la retina epitelio pigmentario en Suspensión

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Las técnicas para Ojos Procesamiento implantados con una retina Prótesis para análisis histopatológico localizado: Parte 2 Epirretinal Implantes de retina con tachuelas

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

Cuantitativa del fondo de ojo autofluorescencia para la Evaluación de Enfermedades de la Retina

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Un Paso a Paso Protocolo para la cirugía subretiniana en conejos

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Un modelo murino de isquemia retiniana-reperfusión mediante la elevación de la presión intraocular

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

Un modelo agudo de retina para evaluar sanguíneos de la retina barrera violación, así como potenciales fármacos para el tratamiento

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset (Callithrix jacchus)

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset Callithrix jacchus

Un procedimiento quirúrgico para la administración de medicamentos para el oído interno en una no humanos primates común tití (Callithrix jacchus)

Hearing research has long been facilitated by rodent models, although in some diseases, human symptoms cannot be recapitulated. The common marmoset ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

Modelo de retinopatía inducida por oxígeno para enfermedades retinianas isquémicas en roedores

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...