Name: retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases
Uploaded: 2021-06-14T13:45:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases at JoVE.com

Bu çalışma IAF-PP (HMBS Domain) (OrBID) tarafından desteklenmiştir: OculaR BIomaterials and Device, A*STAR, Singapore (H17/01/a0/013), NUS Start-up hibeSI NUHSRO/2016/100/SU/01, NUHS Klinik Bilimci Programı (NCSP) hibesi ve Ulusal Araştırma Vakfı Rekabetçi Araştırma Programı, Singapur (NRF-CRP21-2018-0008) X.S.'ye, Hong Leong Profesörlük fonlarını G.E.H. ve B.V.S.'ye bağışladı. ÇeviriSel Klinik Öncesi Model Platformu'ndaki (Singapur Göz Araştırma Enstitüsü, Singapur) veteriner ekibini NHP cerrahisi hazırlama ve hayvan takibi konusunda destek sağladığı için kabul etmek istiyoruz. Entegre intraoperatif OCT cihazına sahip OPMI-Lumera 700'e teknik destek için Jill Teo'ya ve C. Zeiss Meditec Singapore'dan meslektaşlarımıza teşekkürlerimizi iletiyoruz.

Boris Stanzel, bu çalışmada kullanılan bir enstrüman (RPE kazıyıcı) üzerinde ABD Patent 9980851 sahiptir. C. Zeiss Meditec ve Geuder'den Boris Stanzel'e konuşmacı onur ödülü. Diğer yazarların beyan edecekleri bir çıkar çatışması yoktur.

Submaküler RPE transplantasyonu-RPE süspansiyonunun enjeksiyonu ve monolayer RPE greftinin nakli için değerlendirilen iki ana yaklaşım vardır. İki yöntem arasında ayrıntılı bir karşılaştırma bu makalenin kapsamı dışındadır. Bununla birlikte, RPE hücreleri bir monolayerde süspansiyona göre daha düzenli olduğu için monolayer RPE greftinin nakli avantajlı olabilir. Greftteki RPE hücreleri, fizyolojik RPE hücre tabakasının organizasyonuna benzeyen ve nakledilen RPE hücrelerinin fizyolojik işlevlerini yerine getirmelerini sağlayan bir konfüçyüs monolayerde düzenlenir. Bu, düzenleyici çalışmalar ve endüstriyel ölçek büyütme için son derece alakalı olan hücre süspansiyonlarına kıyasla daha hassas dosing parametreleri sağlar.
RPE yama greftinin alt alana teslimi, makulanın dikkatli bir şekilde manipülesini ve greftin alt alana doğru yerleştirilmesini gerektirir. MiOCT gibi mikrocerrahideki teknolojik gelişmeler ve intraoperatif retina doku dinamiklerinin daha iyi anlaşılması bu prosedürün öğrenme eğrisini azaltmıştır. Bu tartışmada, aşağıdaki hususların rasyonelleri açıklanacaktır: i) ameliyat öncesi plazminojen enjeksiyonu; ii) intraoperatif miOCT kullanımı; iii) subretinal bleb oluşturma için özel 41 G çift delikli kanül, düşük Gop ayarları ve PFCL kullanımı; iv) transplantasyondan önce yerel RPE hücre tabakasının kazınmış; v) immünojenik greft reddini azaltmak için sirolimus, triamsinolon, doksiksin ve minosiklin kullanımı.
Preoperatif plazminojen enjeksiyonları parafoveal retinal yapışıklıkları serbest bırakır İlk deneylerde, foveayı tek bir sıvı dalgasıyla ayırmak zordu. MiOCT ile yapılan değerlendirmede, görüntüler intraretinal travma20 kanıtı ile birlikte doğal RPE'ye parafoveal dış retina yapışıklıklarının varlığını ortaya koydu. Bu yapışıklıklar retina konturuna yayılan subretinal sıvı dalgası yerine bleb'in dikey genişlemesine yol açmış ve foveal travmaya yol açmış olabilir. Plazminojen, fibronektin ve laminin hedefleyen bir proteaz olan plazomin inaktif öncüsüdür. Ocriplasmin, eşlik eden maküler delikli veya eşlik eden bir makula deliği olan veya olmayan semptomatik vitreomaküler çekişin tedavisi için Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) ve Avrupa İlaç Ajansı (EMA) tarafından onaylanan insan plazmininin biyomühendislik bir çeşididir. Bununla birlikte, ocriplasmin enjeksiyonundan sonra sistoid makula ödemi gelişiminin postapproval raporları, enzimin retina üzerinde daha geniş bir etkisini önermektedir23.
Kesin mekanizmalar tanımlanmamış olsa da, plazmin fotoreceptör-RPE yapışıklığından sorumlu interfotofoseptör matris elemanlarının bozulması yoluyla retina yapışıklığına neden olabileceği ileri sürüldü24. Bu protokolde NHP gözleri ameliyattan 1 hafta önce intravitreal plazminojen ile tedavi edilerek parafoveal dış retina yapışıklıkları serbest bırakıldı. Fotoreceptör-RPE yapıştırmasının zayıfladığı varsayımı altında, tipik olarak subretinal sıvı dalgasına direnen distal parafoveal halka da dahil olmak üzere nörosensör retinayı ayırmak için daha düşük bir kuvvet gerekir20. Böylece retina bleb müfrezesi sırasında uygulanan kuvvet, retinayı teğet olarak germek yerine bleb'in retina konturu boyunca genişlemesine neden olur. Bu foveal gözyaşı riskini azaltır. Ancak plazminojenin uzun süreli greft sağkalım üzerindeki etkisinin bu protokolde incelenmediği unutulmamalıdır. Gelecekteki çalışmalar bu etkiyi belirlemeye çalışmalıdır.
miOCT, subretinal bleb oluşturma, greft implantasyonu ve subretinal sıvı drenajını yönlendirmek için anatomik geri bildirim sağlar Makulanın intraoperatif, atrömatik manipülasyonu iyi transplantasyon sonuçları elde etmenin anahtarıdır. Bununla birlikte, manipülasyona bağlı makulanın mikroyapısal değişiklikleri her zaman çalışma mikroskopunda belirgin olmayabilir. Bu tür prosedürlerde, miOCT makula yapısının gerçek zamanlı, üç boyutlu, intraoperatif geri bildirimini sağlayan önemli bir araçtır. miOCT özellikle foveal dekrechment, greft implantasyonu ve sıvı-hava değişimi kullanılarak alt sıvının drenajı sırasında yararlıdır. Foveal dekupchment sırasında, miOCT bleb'in dikey ve yatay boyutlarını belirleyebilir. Cerrahi mikroskopta net olarak görselleştirilemeyen foveal mikrotearlar miOCT ile doğrulanabilir (Şekil 3). Greft implantasyonu sırasında miOCT görüntüleri, greftin yerini veya foveaya yakınlığını göstererek, genellikle daha az şeffaf, kopuk retina aracılığıyla kılavuzluk sağlar. miOCT ayrıca zorlu bir transplantasyon sürecinde retinal yapıştırma olası bölgelerini vurgulayabilir25. Son olarak, subretinal sıvı drenaj işleminde miOCT, retinal-RPE greft teması tam olana kadar subretinal sıvı drenajını güvenilir bir şekilde yönlendirebilir.
Çift delikli kanül, düşük Gİb ayarları ve PFCL vitreus tamponade kombinasyonu, subretinal bleb oluşturma sırasında makula travmasını sinerjik olarak azaltır İstenmeyen foveal yırtıklara yol açan foveal kopma için subretinal BSS enjeksiyonu sırasında teğetsel retina germe ve sıvı türbülansı oluşabilir. Bu fenomenlere karşı koymak için, enjeksiyonun başlatıldığı foveal merkezden göreceli konum ve mesafe, enjeksiyon hacmi ve hızı, vitreus tamponade, subretinal enstrümantasyon seçimi ve Gİb gibi faktörlerin hepsinin ilgili olduğu gösterilmiştir20,26,27. Foveal kopma için subretinal bleb, foveadan yeterince uzak bir yerde yerleştirilmelidir, çünkü retina germe bleb başlangıç bölgesinde en yüksek olabilir27. Gİb ayrıca subretinal bleb'in oluşturulması boyunca düşük tutulmalıdır. Gözün Gİb'i yüksek olduğunda, retinanın konturu boyunca genişleme yerine bleb boyutunda daha yüksek bir dikey artış gözlenirken, daha düşük basınçlarda blebler daha sığdır20. Ayrıca, 50 μL'lik intravitreal bir enjeksiyon insanlarda Gİb'i etkili bir şekilde iki katına çıkarsa da28, NHP'lerdeki daha kısa göz uzunluğu göz önüne alındığında, alt enjeksiyon sırasında Gİb yükselişi muhtemelen insanlardan daha yüksek ve daha hızlı olacaktır. Çoğu vitrektomi makinesi Gİb dalgalanmasına uyum sağlarken, ayarlama eşzamanlı değil, subretinal enjeksiyon ilerledikçe ortaya çıkan reaktif bir işlemdir. Bu nedenle, Gİb ne kadar yüksekse, retina aşırı uzaması ve bunun sonucunda foveal travma riski de o kadar yüksektir. Bu nedenle, subretinal enjeksiyon sırasında kararlı bir düşük Gİb'in korunması esastır.
Subretinal enjeksiyon için ticari 20/41 G (DORC) veya özel yapım 25/41 G çift delikli alt sanayi alt damarı önerilir. Kanı, alt alana enjekte edilen BSS karşılığında sıvının vitreus boşluğundan çıkmasını sağlar. Bu, alt enjeksiyon sırasında Gİb'in 'eşzamanlı' düzenlenmesini sağlar. Şekil 2'de çift delikli canülün şeması görülmektedir. Son olarak, PFCL foveal gözyaşı riskini azaltmak için kullanılır20,26,27. Oktalin gibi PFCL'ler daha yüksek özgül yerçekimine sahip olduklarından, foveal dekolman29 sırasında retina üzerinde aşağı doğru bir kuvvet uygularlar. Bu, foveal dekolman bleb oluşturma sürecini daha da stabilize eder ve bleb'in retina konturu boyunca genişlemesini arttırır. Bu teknik, nAMD30'a bağlı masif submaküler kanama ayarında rtPA'nın subretinal enjeksiyonu için başarıyla kullanılmıştır.
Yerel RPE'nin ön iletim kaldırması, RPE-fotoreceptör kompleksinin restorasyonunu sağlar Greft naklinden önce konak RPE çıkarılmalıdır. Bunun nedeni, RPE naklinin fotoreceptörleri destekleme fizyolojik işlevlerini yerine getirebilmesi için RPE-fotoreceptör kompleksinin restorasyonu gerektiğidir21. Ana bilgisayar RPE, kaldırılmazsa, bu kompleksin restorasyonunu önleyen mekanik bir bariyer olarak poz verebilir. RPE toksik kimyasalların kullanılması veya fiziksel çıkarma araçları kullanılarak çıkarılabilir. Kimyasal kaldırma yöntemleri sodyum iodate31,32'nin sistemik veya subretinal yönetimini içerir. Sodyum iyolat uygulandığında fotoreceptörlerin, RPE hücrelerinin ve Choriocapillaris'in yaygın dejenerasyonuna neden olduğundan, retina ve sistemik toksisitesi insan deneyleri için kullanılmasını engellemez32,33. Bu nedenle fiziksel intraoperatif teknikler tercih edilmektedir. Çeşitli fiziksel yöntemler kavramsallaştırılmıştır. Fiziksel yöntemlerden yararlanıldığında, Bruch'un zarı hasarsız kalması çok önemlidir. Birçok in vitro çalışma, RPE greft sağkalımının sağlam bir Bruch zarı üzerinde bağımlılığını göstermiştir34,35,36.
Hidrolik debridman girişimleri Bruch'un zarındaki kırılmalar, epiretinal membran gelişiminin artması ve proliferatif vitreoretinopati ile ilişkiliydi ve bu da çekiş retina dekolmanı37 ile sonuçlandı. RPE debridmanı için önerilen elmas tozlu bir spatula da Bruch'un zarında kırılmalara yol açtı ve bu da koroidden subretinal uzaya hücresel çoğalmaya neden oldu38. İlginçtir ki, özel yapım uzatılabilir bir döngü cihazı, Bruch'un zarının tavşan ve domuzların gözünde korunmasıyla overlying RPE'yi kaldırabilir11,39. Alttaki RPE'nin çıkarılması, AMD'nin gelişmiş atrofik formuna benzer şekilde RPE ve dış retina atrofisi ile hayvan modelleri oluşturmak için de yararlıdır. Makuladan RPE odak alanı çıkarıldığında, RPE yarası kalan RPE hücrelerinin hipertrofisi yoluyla kapanır. Bununla birlikte, bu yara iyileşme yanıtı dış nükleer tabakanın atrofisi ile ilişkilidir40. Bir hayvan modelinin oluşturulması bu makalenin kapsamı dışında olsa da, benzer bir prosedür RPE türevi hücre terapötiklerinin testi için gelişmiş bir atrofik AMD fenotipinin hayvan modelini oluşturabilir.
İmmünojenik greft reddini azaltmak için sirolimus, triamsinolon, doksiksin ve minosiklin kullanımı Subretinal alanın, bozulmamış bir kan retina bariyeri ve diğer faktörlerle korunan bağışıklık ayrıcalıklı bir bölge olduğu düşünülmektedir41. Kök hücre türevlerinin sağlam bir kan-retina bariyeri ile subretinal naklini içeren birçok çalışmada, immünsüpresif ilaçlar greft sağkalımında ihmal edilebilir bir rol oynamaktadır42. Dış kan retina bariyerinin, doğal RPE tabakası ve RPE hücreleri arasındaki sıkı kavşaklar tarafından oluştuğu düşünülmektedir. Doğal RPE çıkarılması, nakledilen RPE ve konak fotoreceptörlerinin daha iyi entegrasyonunu sağlarken, kan-retina bariyeri süreçte bozulur ve bağışıklık reddi olasılığını artırır. Klasik olarak, T hücreleri böbrek ve karaciğer gibi diğer organların nakil reddi sürecinin merkezindedir43. Bu nedenle, retinal doku nakli için ilk immünsüpresif rejimler bu adaptif immün yanıtları azaltmaya yönelik hedeflenmiştir.
Rapamycin inhibitörünün mekanistik bir hedefi olan Sirolimus ve kalsinörin inhibitörü olan tacrolimus, adaptif immün yanıtları hedefleyen immünsüpresif ilaçlara örnektir. Bununla birlikte, yeterli T hücre baskılamasına rağmen greft sağkalım oranları düşük kalır. Ek olarak, RPE hücrelerinin inhibitör faktörlerin salınımı yoluyla T hücre aktivasyonunu bastırdığı ve düzenleyici T hücrelerinin neslini teşvik etmesi bilinmektedir44. Bu nedenle, adaptif bağışıklığın greft reddine tek katkıda bulunmayabileceği giderek daha belirgin hale gelmiştir42. Hücresel ürünlerin subretinal nakli mikroglia45 birikimine ve aktivasyonuna neden olabilir.
Mikroglia retinanın makrofajlarıdır. İki ana popülasyondan oluşurlar: 1) iç retinal vaskülatın pervasküler mikrogliası ve 2) retina dokusu parenkim içindeki mikroglia. Mikroglia doğuştan gelen immün yanıtın bir parçası olduğundan, triamsinolon gibi intravitreal glukokortikoidler sitokin aracılı çoğalmasını baskılayabilir46. Doksiksin ve minosiklin de mikroglial aktivasyonu baskılayabilir ve 47,48 olarak düşünülmelidir. Son olarak, RPE allograftlarının ksinograftlara karşı immün reddinde farklılıklar eksik anlaşılmaktadır49. Örneğin in vivo immün ret modellerinin serumunda indüklenmiş pluripotent kök hücre türevi RPE hücrelerine karşı alloantibodlar bildirilmiştir. Ancak greft sağkalımında bu antikorların rolü ve antikor aracılı reddin önemi bilinmemektedir50. Bu nedenle, adaptif bağışıklığın bastırılması için sirolimus kullanan bir multidrug rejimi ve doğuştan gelen bağışıklık bastırma için triamsinolon, doksiksin ve minosiklin kombinasyonu önerilir. Bu rejim, iyi greft sağkalım sonuçlarına ve minimum sistemik etkilere sahip tavşanlarda başarıyla kullanılmıştır11.
Bu cerrahi tekniğin sınırlamaları Bu makalede, NHP'nin alt alanına bir RPE greft tabakası teslim etmek için olası bir cerrahi yöntem açıklanmaktadır; ancak, bu en iyi duruma getirilmiş tek yol olduğu anlamına gelmez. Farklı vitreo-retina cerrahlarının enstrümantasyon ve teknik için başka tercihleri olabilir. Örneğin, bu implantasyon cihazı tasarımı sadece daha sert bir hücre taşıyıcı ile desteklenen düz implantlar sağlayabilir ve bu nedenle nispeten esnek (veya haddelenmiş) implantlar için uygun olmayabilir. RPE süspansiyon nakilleri bu tekniğin çoğunu atlayabilir. Buna göre, cerrahi detaylar her doğum stratejisine göre değişiklik gerektirecektir.
Dejeneratif retina hastalıklarının tedavisi için hücresel terapötiklere olan ilgi artmaya devam ettikçe, RPE greft sağkalımını etkileyen faktörlerin incelenmesi için preklinik çalışmalarda NHP hayvan modeli esas olacaktır. Bu yazıda, NHP gözünde bir submaküler monolayer RPE greftinin daha sorunsuz bir şekilde verilmesini sağlayacak stratejiler önerilmektedir. İntraoperatif komplikasyonların daha iyi görselleştirilmesi için yöntemler de önerilmektedir. Hücresel terapötiklerin kullanımı genişledikçe bu yöntemlerin iyileşmeye devam edeceği öngörülmektedir. Gelecekteki yöntem makaleleri, greftin çeşitli yapısal ve işlevsel yönlerini değerlendirmek için kapsamlı bir araştırma listesi önermeyi de düşünmelidir.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.
The Authors section was updated from:
Ivan Seah*1, Zengping Liu*2,3,4, Daniel Soo Lin Wong3, Wendy Wong1, Graham E. Holder1,3,5, Veluchamy Amutha Barathi3,4,6, Gopal Lingam1,3,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
2Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR), 
3Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally
to:
Ivan Seah*1,2, Zengping Liu*1,3,4, Daniel Soo Lin Wong1, Wendy Wong2, Graham E. Holder1,2,5, Veluchamy Amutha Barathi1,4,6, Gopal Lingam1,2,4, Xinyi Su1,2,3,4, Boris V. Stanzel1,7,8 
1Department of Ophthalmology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore 
2Department of Ophthalmology, National University Hospital, Singapore, 
3Institute of Molecular and Cell Biology (IMCB), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR) 
4Singapore Eye Research Institute (SERI), 
5UCL Institute of Ophthalmology, 
6Academic Clinical Program in Ophthalmology, Duke-NUS Medical School, 
7Macula Center Saar, Eye Clinic Sulzbach, Knappschaft Hospital Saar, 
8Department of Ophthalmology, University of Bonn 
* These authors contributed equally

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62638">Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

RPE transplantasyonu kalıtsal ve edinilmiş retina dejeneratif hastalıkların tedavisi için büyük umut vaat etmektedir. Bu durumlar retinitis pigmentosa (RP, rod-koni distrofisi) ve GA gibi amd ileri formlarını içerir. AMD'nin ileri aşamaları neovasküler AMD (nAMD) ve GA olarak kategorize edilir. NAMD için anti-vasküler endotel büyüme faktörü (anti-VEGF) enjeksiyonları gibi etkili tedavi seçenekleri bulunurken, GA'lı hastaların tedavi seçenekleri sınırlıdır. RP, ilerleyici retina fotoreceptör dejenerasyonu ile karakterize kalıtsal retina bozukluklarının son derece heterojen bir grubudur. Bazı hastalarda, etken genetik defekt fotoreceptörler yerine RPE içinde bulunur; bu nedenle, gen tedavisi mümkün değilse RPE replasman tedavisi alternatif bir strateji olabilir.
Bu durumlar için etkili tedaviler geliştirmeye önemli bir ilgi vardır. Özellikle RPE transplantasyonu potansiyel bir terapötik yaklaşım olarak ilgi görmeye devam etmektedir3,4,5,6,7,8. RPE transplantasyonu ile ilgili ilk raporlar 1980'lerde ortaya çıktığından beri, alan çeşitli RPE hücre kaynaklarını, doğum stratejilerini ve deneysel hastalık ve transplantasyon modellerini içerecek şekilde genişlemiştir10,11,12,13,14. Çeşitli hayvan modelleri arasında, sadece NHP'de insanlarla paylaşılan retinanın arka kutbunda anatomik bir uzmanlık olan 'fovea centralis' ile bir 'makula lutea' vardır. Fovea, yüksek çözünürlüklü merkezi görüş sağlayan çok yüksek yoğunluklu koni fotoreceptörleri içerir15. NHP ayrıca insanlara kıyasla benzer bir genomik ve proteomik makyaj16'ya sahiptir. Bu benzerlikler onu insan retinasını etkileyen oküler hastalıkların incelenmesi için önemli ve uygun bir hayvan modeli haline getirmektedir17,18.
Bu makalede, pet hücre taşıyıcısı tarafından desteklenen bir RPE ksinograftının immünsüprese NHP'lerde submaküler nakli için bir yöntem açıklanmaktadır. Tavşanlarda subretinal RPE transplantasyonu için transvitreal bir teknik daha önceki bir el yazmasında tanımlanmıştır19. Bununla birlikte, NHP'lerde, fovea varlığı intraoperatif manipülasyon sırasında özel bakım gerektirir20. Özellikle, subretinal sıvı enjeksiyon yöntemleri retina üzerinde aşırı bir güç oluşturuyorsa foveal yırtılma riski yüksektir20. Bu nedenle, bu makalenin odak noktası, NHP'de yanlışlıkla foveal travma riskini azaltmaya yönelik stratejilerdir.
Bunlar arasında parafoveal yapışıklıkların salınımı için preoperatif intravitreal plazminojen enjeksiyonu ve foveal anatominin gerçek zamanlı görselleştirilmesi için intraoperatif olarak cerrahi mikroskop entegre optik koherens tomografisi (miOCT) yer almaktadır. Düşük GOP ayarları altında göz içi PFCL tampona sahip özel yapım 25/41 G çift delikli alt sahra kanül, daha kontrollü bir foveal kopuş sürecine izin vermek için önerilir. Ayrıca, nakledilen RPE hücreleri ve konak fotoreceptörleri arasında daha iyi entegrasyon sağlamak için implantasyondan önce lokal RPE'nin cerrahi olarak çıkarılması önerilir. Son olarak, RPE xenograft transplantasyon sonrası sağkalını iyileştirmek için NHP modelleri için peri ve postoperatif sistemik immünosupresyon protokolü tanımlanmıştır11,21.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1% Mydriacyl (Tropicamide 1.0%) Sterile Ophthalmic preparation</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>SIN 4715P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3800598</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5% Mydfrin (Phenylephrine hydrochloride) Ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01785</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G AWH Vivid Chandelier</td>
			<td>Synergetics</td>
			<td>56.54.25P</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 Ga Bi-Blade Vitreous Cutter Combined Wide-Field Stellaris Elite Pack</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>SE5525WVB</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AMO ENDOSOL Balanced Salt Solution for ophthalmic irrigation</td>
			<td>Abbott Medical Optics</td>
			<td>15020</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apo-minocycline</td>
			<td>Apotex Inc</td>
			<td>2084104</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AUROVISC - Hypromellose Ophthalmic Solution USP 2% w/v</td>
			<td>Aurolab</td>
			<td>TN 00002387</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave MELAG, Vacuklav</td>
			<td>MELAG</td>
			<td>1131-B2300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autostainer XL (ST5010)</td>
			<td>Leica</td>
			<td>2433</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced Saline Solution</td>
			<td>Beaver Visitec</td>
			<td>581732</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Bud</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NA6-100</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diagnosys Espion E3 Console</td>
			<td>Diagnosys</td>
			<td>272</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxycycline</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>MAL 19950403AEZ</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0100</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERG-Jet contact lens electrodes</td>
			<td>Fabrinal</td>
			<td>F-06</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extendable PolyTip Cannula 25 G/38 G</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3247</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlexTip Brush (25 g) 1.5 mm</td>
			<td>MedOne</td>
			<td>3222</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoresceine 10% Faure</td>
			<td>Curatis AG</td>
			<td>5030376</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Swab</td>
			<td>WINNER MEDICAL</td>
			<td>1NP3275</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton gas tight syringe 250 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>81101</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heidelberg Spectralis HRA + OCT Computer System</td>
			<td>Heidelberg Engineering</td>
			<td>N.A.</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Gill II</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>3801520</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope eclipse Ti-E main body (100-240V)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>33131</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin injection</td>
			<td>Ceva</td>
			<td>37711/58317</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium carbonate</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.05680.0250</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monkey plasminogen</td>
			<td>Molecular Innovations</td>
			<td>SKU-CYPLG</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-contact wide angled 128 degree fundus lens</td>
			<td>C. Zeiss Medtech</td>
			<td>Resight 700</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-woven Ophthalmic Drape</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065103120</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Corneal/Scleral V-Lance Knife 20 G</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>8065912001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Embedding Station</td>
			<td>Leica</td>
			<td>EG1150 H</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraplast High Melt Paraffin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>39601095</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phloxin B</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1.15935.0025</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prepowdered Surgical Gloves</td>
			<td>MAXITEX</td>
			<td>85-173-2/85-173-3/85-173-4</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PRODINE Povidone-Iodine Solution BP</td>
			<td>ICM PHARMA</td>
			<td>PMLBLP20-01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Righton Slit Lamp Model MW50D (RAA133CB)</td>
			<td>Righton-Oph</td>
			<td>5200162</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2255</td>
			<td>Histology procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safil Polyglycolic acid, braided, coated, absorbable surgical suture 7/0</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>G1048711</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHINCORT I.M. INJ. Triamcinolone Acetonide 40 mg/mL</td>
			<td>Yung Shin</td>
			<td>SHI40 SGP-2610015-001</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 21 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657527</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-Use Hypodermic Needle 23 G</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4657667</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sirolimus</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>SIN12034P</td>
			<td>Immunosuppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel subdermal needle electrode</td>
			<td>OcuScience</td>
			<td>F-E2</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stellaris Elite vision enhancement system</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>BL15455</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 27 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4665406</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterican Single Use Insulin Needles Long Bevel 30 G 12 mm</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>4656300</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gown + 2 Hand Towels</td>
			<td>STERIL</td>
			<td>APP10 00 01</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegaderm Film</td>
			<td>3M</td>
			<td>1626W</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 1 cc/mL Luer SlipTip with needle 26 G</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-01S</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 3 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-03L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TERUMO Syringe 5 cc/mL Luer LockTip</td>
			<td>Teruma</td>
			<td>SS-05L</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TobraDex (Tobramycin, Dexamethasone) Sterile Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>No. 01577</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Topcon Retinal Camera TRC-50DX</td>
			<td>Topcon</td>
			<td>948605</td>
			<td>Ophthamic imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vidisic Gel</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb</td>
			<td>GB41789155517</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazil-20</td>
			<td>Ilium</td>
			<td>38653/50276</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Opmi Rescan 700</td>
			<td>Carl Zeiss Meditec AG</td>
			<td>7210</td>
			<td>Surgical procedure</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

retinal pigment epithelium transplantation in a non-human primate model for degenerative retinal diseases

Retina pigment epitel (RPE) transplantasyonu kalıtsal ve edinilmiş retina dejeneratif hastalıkların tedavisi için büyük umut vaat etmektedir. Bu durumlar arasında retinitis pigmentosa (RP) ve coğrafi atrofi (GA) gibi yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) ileri formları bulunur. Birlikte, bu bozukluklar küresel olarak şu anda tedavi edilemeyen körlüğün önemli bir bölümünü temsil eder. Karşılanmayan bu tıbbi ihtiyaçlar, RPE değiştirme yöntemlerinin geliştirilmesine akademik ilginin artmasına neden oldu. Terapötiklerin preklinik testleri için yaygın olarak kullanılan hayvan modelleri arasında, insan olmayan primat (NHP) makulaya sahip tek hayvan modelidir. Bu anatomik benzerliği insan gözü ile paylaştığı için NHP gözü, RPE hücre tedavisi gibi ileri tedavi tıbbi ürünlerinin (ATMP' ler) geliştirilmesi için önemli ve uygun bir preklinik hayvan modelidir.
Bu makalede, bir polietilen tereftalat (PET) hücre taşıyıcısı üzerinde kültürlenen bir RPE monolayerinin, makulanın altında, bağışıklığı baskılanmış NHP'lerde cerrahi olarak oluşturulan bir RPE yarasına altmaküler nakli için bir yöntem açıklanmaktadır. Makulanın fovea-merkezi avasküler kısmı-transplantasyon sırasında en büyük mekanik zayıflığın yaşandığı yerdir. foveal travma, ilk subretinal sıvı enjeksiyonu retina üzerinde aşırı bir güç oluşturursa ortaya çıkacaktır. Bu nedenle, perflorokarbon sıvı (PFCL) vitreus tamponade altında yavaş enjeksiyon, retinal bleb oluşturmak için düşük göz içi basıncı (Gİb) ayarlarında çift delikli subretinal enjeksiyon kanül ile önerilir. 
Parafoveal RPE-fotoreceptör yapışıklıklarını serbest bırakmak için intravitreal plazminojen enjeksiyon ile ön işlem de önerilir. Bu kombine stratejiler, geleneksel tekniklerle karşılaştırıldığında foveal gözyaşı olasılığını azaltabilir. NHP, RPE hücre tedavisi gelişiminin preklinik aşamasında önemli bir hayvan modelidir. Bu protokol, NHP gözünde RPE hücresel tedavisinin sunumuyla ilgili teknik zorlukları ele almaktadır.

Multimodal görüntüleme yöntemleri (fundus fotoğrafçılığı, fundus otofluoresans görüntüleme (FAF), fundus floresan anjiyografi (FFA)-erken evre ve geç evre ve optik koherens tomografisi (OCT)) başarılı bir submaküler RPE greft naklinin özelliklerini vurgulamaktadır (Şekil 1). Fundus fotoğrafçılığı, RPE greft naklinin zaman içinde göç etmeden foveadaki konumunu gösterir. FAF görüntüleme, RPE grefti ile örtüşen hiper otofluoresansta (beyaz, yüksek yoğunluklu alanlarda gösterilmiştir) minimum değişiklik gösterir. Erken ve geç faz FFA, RPE greftini çevreleyen belirgin bir sızıntı (zamanla genişleyen beyaz, yüksek yoğunluklu alanlar tarafından gösterilmiştir) göstermez. 3. Gündeki ilk görüntüler, greft implantasyonundan önce doğal RPE'nin çıkarılması nedeniyle pencere kusurunu göstermektedir. Maküler OCT görüntüleri, zaman ilerledikçe RPE grefti üzerinde dış retina katmanlarının (özellikle fotoreceptör tabakası) korunmasını gösterir. Hematoksilin ve eozin lekeleme mikrotear kanıtı olmadan bozulmamış retina katmanları gösterir. Dış nükleer tabakanın greftin çevrelerinin üzerinde korunması, RPE hücrelerinin fotoreceptör sağlığını korumanın fizyolojik işlevlerini yerine getirmelerini göstermektedir.
25/41 G çift delikli kanolün göz içi ve dış görünümleri, alt enjeksiyon sırasında Gİb'in kontrol edilen mekanizmasını vurgular (Şekil 2). BSS, subretinal sıvı enjeksiyonu sırasında subretinal boşluğa merkezi uzun kavun yoluyla girer. Göz içi basıncındaki önemli artışlar, vitreus boşluğu içindeki BSS'nin kanülün daha büyük metal deliği yoluyla gözden çıkmasına neden olur. BSS daha sonra canül boyunca ilerler ve sonunda cannula hub yakınındaki çıkış bağlantı noktasından çıkarılır. Canül'ün beklendiği gibi çalışıp çalışmadığını değerlendirmek için, sıvının cannula hub yakınındaki çıkış portundan aktığından emin olun.
MiOCT, foveal kopma sırasında bleb boyutlarının ve potansiyel bir foveal yırtığın intraoperatif olarak görselleştirilmesini sağlar (Şekil 3). Şekil 3A1-A3 foveal yırtık ile bleb bir vaka vurgulamak. Şekil 3A1'de, alt bleb cerrahi mikroskop altında görünürken, yırtığın görselleştirilmesi zordur. Şekil 3A2, bir bleb'in boyuna bölümünü herhangi bir gözyaşı olmadan gösterir. Şekil 3A3, bleb'in dikey bölümünü değerlendirirken foveal yırtık gösterir. Şekil 3B1-B3, herhangi bir gözyaşı olmadan başarıyla oluşturulmuş bir bleb göstermektedir.
ERG dalga formlarında önemli bozulma olmaması, hem çubuk hem de koni fotoreceptörlerinin küresel işlevinin subretinal RPE ksinograftlarla korunduğunu göstermektedir (Şekil 4). ERG dalga formları retinanın genel işlevini gösterir. Özellikle, fotoreceptör fonksiyonunun herhangi bir kaybını belirlemek için A dalgalarına dikkat edilmelidir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig01.jpg"> Şekil 1: Multimodal görüntüleme ile postoperatif in vivo analiz. (A) Sol göz submaküler RPE greft naklinin (fundus fotoğrafçılığında sarı) çeşitli görüntüleme yöntemleri üzerinde in vivo görüntülenmesi (soldan sağa: fundus fotoğrafçılığı, otoflüoresans, fundus floresan anjiyografi-erken evre, fundus floresan anjiyografi-geç evre, optik koherens tomografisi) 3 aya kadar zaman noktaları (yukarıdan alt sıralara: Gün 3, 14; Ay 1, 3). Fundus fotoğrafındaki yıldız işareti retinotomi bölgesini gösterir; beyaz kesikli ok çizgi taramasının yönünü gösterir. Fundus otofluoresans görüntülemesinde sarı çizilmiş şekil naklin yerini vurgular. OCT görüntülerindeki beyaz üçgenler greftin ilgili yan kenarlarını gösterir (renkli fundus görüntüsündeki çizgi taramasına göre). (B) Atrofik fovea altında (intraoperatif yırtılma nedeniyle) katmanlar etiketli naklin hematoksilin ve eozin lekesi. Ölçek çubukları = A'da 1 mm (otomatik düzenleme ve SK görüntüleri), A'da 200 μm (OCT görüntüleri) ve B'de 100 μm. Kısaltmalar: SK = fundus anjiyografisi; OCT = optik tutarlılık tomografisi; RGC = retina ganglion hücre tabakası; INL = iç nükleer katman; ONL = dış nükleer katman; RPE = retina pigment epitel. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig02.jpg"> Şekil 2: 25/41 G çift delikli kanülün göz içi ve dış görünümleri. (A) Subretinal bleb oluşturma sırasında 25/41 G çift delikli kanülün göz içi görünümü. Beyaz ok, subretinal enjeksiyon için daha uzun merkezi canüle işaret eder. Kesikli ok, BSS'nin gözden çıkmak için geçtiği çıkışak kavununun açılmasına işaret eder. (B) 25/41 G çift delikli kanolün dış görünümü. Yıldız işareti, göz içi BSS'nin boşaltıldığı kanolan göbeğinin yakınındaki çıkış bağlantı noktasını işaretler. Kısaltma: BSS = dengeli tuz çözeltisi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig03.jpg"> Şekil 3: Foveal yırtık ile komplike subretinal bleb'in intraoperatif mikroskop görüntüleri ve miOCT görüntüleri. (A1) Foveal yırtığı olan bir bleb'de boyuna (mavi) ve enine (kırmızı) taramaların konumunu gösteren intraoperatif mikroskop görüntüsü. (A2) Foveal bölgede (sarı ok) bir subretinal bleb gösteren boyuna miOCT taraması. (A3) Foveal yırtığı (beyaz ok ucu) yakalayan enine miOCT taraması, retinotomi (yıldız ve subretinal bleb (sarı ok). (B1) Başarıyla oluşturulmuş bir bleb'de boyuna (mavi) ve enine (kırmızı) taramaların konumunu gösteren intraoperatif mikroskobik bir görüntü. (B2) Foveal bölgede (sarı ok) bir subretinal bleb gösteren boyuna miOCT taraması. (B3) Başarılı bir şekilde oluşturulmuş bir altretinal bleb'i üstün bir şekilde sağlam bir fovea (beyaz elmas) ile gösteren enine miOCT taraması. Kısaltma: miOCT = mikroskop entegre optik koherens tomografisi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62638/62638fig04.jpg"> Şekil 4: RPE xenograft nakledilen gözün ERG'si. Retinanın fonksiyonel değerlendirmesi için, RPE-ksinografted gözün taban çizgisi (üst sıra) ve 3 ay transplantasyon sonrası (alt sıra) tam alan ERG değerlendirmeleri, RPE ksinograft transplantasyonunun koyu veya ışığa uyarlanmış koşullar altında herhangi bir yanıt genliği, zamanlama veya dalga formu üzerinde önemli bir etkisi olmadığını göstermektedir. Kısaltmalar: RPE = retina pigment epitel; ERG = elektroretinogram; DA = koyu uyarlanmış; LA = ışığa uyarlanmış. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62638/62638fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases at JoVE.com

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

İnsan olmayan primat (NHP), anatomik ve genetik benzerlikler nedeniyle insan retina hücresel terapötiklerini incelemek için ideal bir modeldir. Bu makalede, NHP gözündeki retina pigment epitel hücrelerinin submaküler nakli için bir yöntem ve makula manipülasyonu ile ilişkili intraoperatif komplikasyonları önleme stratejileri açıklanmaktadır.

Dejeneratif Retina Hastalıkları için İnsan Dışı Primat Modelinde Retina Pigment Epitel Transplantasyonu

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Retina pigment epitel greft nakli sırasında foveal travma görme sonuçlarının kötü çıkmasına neden olabilir. Önerilen bu yöntem, geleneksel tekniklerle karşılaştırıldığında foveal gözyaşı olasılığını azaltabilir. Önerilen yöntem, subretinal yapışıklıkların salınması, retina katmanlarının daha iyi görselleştirilmesi ve bleb oluşumu sırasında teğetsel kesme kuvvetleri de dahil olmak üzere foveal travmaya katkıda bulunan birden fazla faktörü ele alınmaktadır.İntravitreal plazminojen ön işlem, mikroskop entegre OCT güdümlü retina bleb oluşumu ve çift delikli kanül kullanan perflorokarbon sıvı vitreus tamponatı içeren bu teknik, daha nazik bir işlemle foveal travma olasılığını üretir. Prosedürü gösterenler, kıdemli bir araştırma görevlisi olan Dr. Zenping Liu ve her ikisi de bir laboratuvardan araştırma asistanı olan Bay Daniel Sou Lin Wong olacak. Kıdemli danışman Profesör Gopal Lingam da operasyon prosedürlerini gösterecek.Başlamak için, 360 derece konjonktival peritomi için limbus yakınındaki konjonktivayı yakmak için Vannas makasını kullanın ve peritomiyi büyütmek için künt bir diseksiyon gerçekleştirin. Sklera'da saat sekizde sağ gözünde veya sol gözde saat dörtte üç milimetrelik bir kesi yapmak için 25 kalibrelik bir mikro vitreoretinal bıçak kullanın. 7-0 Vicryl dikiş kullanarak 25 gauge özel yan bağlantı noktası infüzyon kanül ve dikiş takın.İntravitreal yeri doğruladıktan sonra, dengeli tuz çözeltisi infüzyonunu başlatın ve sistemi 20 mililitre cıvanın göz içi basıncını koruyacak şekilde ayarlayın. Sklerayı sağ gözde saat ikide veya sol gözde saat 10'da inzivaya çekmek için 25 kalibrelik düz başlı trokar kullanın. Düzbaş trokara içine 25 kalibre avize ışığı yerleştirin ve ışığı yapışkan bantla sabitleyin.Işık kaynağını yaklaşık %60'a ayarlayın Sağ göz için saat 10'da veya sol göz için saat ikide gösterildiği gibi başka bir sklerotomi yapın. Düğümleri takmadan sklerotomi etrafına U şeklinde bir Vicryl 7-0 dikişi yerleştirin. Vitrektomi trokarını sklerotomiden geçirin.Giriş portu çevresinde vitrektomiyi gerçekleştirin, ardından dakikada maksimum 5.000 kesik ve 400 milimetre cıvada maksimum aspirasyon ile kısa bir çekirdek vitrektomisi gerçekleştirin. Daha iyi vitreus görselleştirme için 20 ila 50 mikrolitre triamsinolon enjekte edin. Arka vitreus bir kopuşa neden olmak için vitreus gövdesini retinadan ayırın.Arka vitreus müfrezesinin yumuşak indüksiyonunu sağlamak için vitrektörü optik diskin üzerine yerleştirin. Vitrekörü herhangi bir kesme olmadan sadece en fazla 400 milimetre cıvada aspirasyonda tutun. Gerekirse, dekupsifikasyonu kolaylaştırmak için vitreus korteksini yırtmak için 25 gösterge göz içi forseps kullanın.Arka hyaloid zarı kesici ile açın ve kopuk vitreus eteğini vitreus tabanına kadar çıkarın. Retina yüzeyinde kalan triamsinolonları aspire edin. Arka direği ön ve orta periferik retinaya kadar örtmek için bir ila iki mililitre perflorokarbon sıvı enjekte edin.Subretinal enjeksiyonlu bir canül ile göze girin. Subretinal enjeksiyon için 250 mikroliter şırıngaya bağlı 25'e 41 gauge özelleştirilmiş çift delikli subretinal enjeksiyon cannula veya 25'e 38 ölçer alt enjeksiyon cannula kullanın. Göz içi basıncını sıfırdan dört milimetreye kadar cıvaya ayarlayın.Lokalize retina dekolmanını indük etmek için BSS'nin subretinal enjeksiyonu hafifçe gerçekleştirilir. Bleb foveayı geçtikten sonra BSS enjekte etmeyi bırakın. Ayrı bir yönden ikinci bir bleb oluşturun.Foveayı tamamen ayırmak için her iki lekeyi de birleştirin. Bleb oluşumunu görselleştirmek için intraoperatif optik tutarlılık tomografi işlevini etkinleştirin, fovea'da bir görüntü elde etmek için çizgi ve küp taramalarının yüksek tanımlı modda olmasını sağlayın. Retinanın kesisini bir çift dikey 25 gauge vitreoretinal makasla 1,5 milimetreye büyüterek transplantasyon için alt alana erişime izin verin.Göz içi basıncını 50 milimetre cıvaya ayarlayın. Perflorokarbon sıvısını çıkarmak için fırçalanmış bir silikon uçlu kanonül kullanın. Sklerotomiyi uzatmak için 1,4 milimetrelik bir kesi bıçağı kullanın.20 ölçer genişletilebilir bir döngü cihazı girin ve kazıyarak submaküler konak retina pigment epitelini çıkarın. Atıcı cihazının ucunu sklerotomiden geçirin ve 20 milimetrelik cıva göz içi basıncında vitreus boşluğundan geçirin. Hücre taşıyıcı tarafı Brooks membran ve ksinograft fotoreceptörlere bakacak şekilde retina yüzeyinden oluşturulan retinotomi kenarı aracılığıyla implantı subretinal boşluğa doğru enjekte edin.İntraoperatif optik koherens tomografi fonksiyonunu etkinleştirerek implantın yerini görselleştirin. İmplantın alt enjeksiyonlu kanonla veya 25 ölçer kavisli göz içi makasıyla implantın sağlam bir aşırı retina ile alt alandaki Brooks zarı üzerinde düz bir şekilde dinlendiğini ve oluşturulan retinotomiden uzakta ve retinotomi bölgesine engel olmadığını sağlamak için implant pozisyonunu ayarlayın. Sıvı-hava değişimi için fırçalanmış bir silikon uç kanülü kullanın ve retina implantın üzerine yeniden takılana kadar bleb retina dekolmanı ve retinotomi kenar apsasyonundan subretinal sıvıyı hafifçe epire edin.Daha sonra ameliyatı bitirmek için, önceden yerleştirilmiş 7-0 Vicryl dikişini kullanarak çalışma limanı sklerotomisini kapatın. Saat sekiz sklerotomisinde iki miligram intravitreal koruyucu içermeyen triamsinolon başına 0.05 mililitre ver. Avize ve infüzyon kanüllerini çıkarın.Bu sklerotomileri Vicryl dikişleriyle kapatın. Göz içi basıncının kabul edilebilir aralıkta olduğundan emin olmak için gözü palpe edin. Gerekirse filtrelenmiş havayı veya BSS'i 30 kalibrelik bir iğne ile enjekte edin.Sol göz submaküler retina pigment epitel greft naklinin çeşitli görüntüleme yöntemleri üzerinde in vivo görüntülemesi üç aya kadar yapıldı. Fundus fotoğrafçılığı, foveadaki nakledilen greftin zamanla göç etmediğini gösteriyordu. Fundus otomatik floresan görüntüleme retina pigment epitel grefti ile örtüşen hiper otomatik floresan minimum değişiklik gösterdi.Erken ve geç faz fundus floresan anjiyografisinde grefti çevreleyen herhangi bir sızıntı görülmedi. Maküler optik tutarlılık tomografi görüntüleri, zaman ilerledikçe greft üzerindeki dış retina katmanlarının korunmasını göstererek retina pigment epitel hücrelerinin işlevselliğini düşündürdü. HE lekesi, mikro yırtıklara dair hiçbir kanıt olmadan bozulmamış retina katmanları gösterdi.İntraoperatif optik koherens tomografisi, foveal kopma sırasında bleb boyutlarının ve potansiyel foveal yırtığın intraoperatif olarak görselleştirilmesini sağlar. Gözyaşının varlığı bleb oluşumuna müdahale edebilir. Doğru bleb oluşumunun başarısı gözyaşının olmaması ile endikedir.Retinanın fonksiyonel değerlendirmesi için retina pigment epitel ksinografted gözün tam alan elektroretinogram değerlendirmeleri yapıldı. Elektroretinogram dalga formlarında önemli bozulma olmaması, hem çubuk hem de koni fotoreceptörlerinin işlevinin ksinograftlarla korunduğunu göstermektedir. Lokalize retina bleb'in oluşturulması sırasında, jet hızındaki herhangi bir ani değişiklik foveal yırtıklara yol açabileceğinden çok nazikçe yapın.Bu adımı yavaşça gerçekleştirmek, foveal yaralanmayı azaltmanın anahtarıdır. Fundus oto-floresan, floresan anjiyografi ve optik koherens tomografisi ile elektrofizyoloji çalışmaları dahil olmak üzere multimodal görüntüleme, greftin hayatta kalabileceği ve onu etkileyen faktörler hakkında daha fazla fikir verebilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis

Lokalize histopatolojik analizi için bir Retina Protez ile implant İşleme Gözler Teknikleri

With  the recent development of retinal prostheses, it is important to develop  reliable techniques for assessing the safety of these devices in ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Sodyum Hyaluronat subretinal Enjeksiyon Kemirgenler Retina Dekolmanı Modeli

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Süspansiyon Retina pigment epiteli Hücreleri sunun Kemirgenler Subretinal Enjeksiyonları Sahne

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Lokalize Histopatolojik Analiz için bir Retina Protez ile implant İşleme Teknikleri Gözler için: Bölüm Retina Tacks ile 2 Epiretinal İmplantlar

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

Retina Hastalıkları Değerlendirilmesi Nicel Otofloresans

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Tavşanlarda Subretinal Cerrahi Adım Protokolle Bir Adım

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Göz İçi Basıncı Yükselmesi ile Retina İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

Tedavi Kan Retina Bariyer ihlali ve Potansiyel İlaçlar değerlendirilmesi için bir Akut Retina Modeli

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset (Callithrix jacchus)

A Surgical Procedure for the Administration of Drugs to the Inner Ear in a Non-Human Primate Common Marmoset Callithrix jacchus

Bir insan olmayan primatların ortak Marmoset (Callithrix jacchus) iç kulak ilaçlara Yönetim için bir cerrahi prosedür

Hearing research has long been facilitated by rodent models, although in some diseases, human symptoms cannot be recapitulated. The common marmoset ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

Kemirgenlerde İskemik Retina Hastalıkları için Oksijen Kaynaklı Retinopati Modeli

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...