Name: direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs
Uploaded: 2021-06-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי קרן קנוט ואליס ולנברג, Hjärnfonden, קרנות וונר גרן וקרן קרפורד.

כל ההליכים בוצעו בהתאם להוראה האירופית 2010/63/האיחוד האירופי ואושרו על ידי ועדת האתיקה של מאלמו-לונד לחקר בעלי חיים (Dnr 5.8.18-05527/2019) ונערך על פי הנחיות CODEX של מועצת המחקר השוודית.
1. הכנה
<ol><li>מעקב<ol>
<li>הכן CSF מלאכותי (126 מ"מ NaCl, 2.5 מ"מ KCl, 1.25 מ"מ NaH2PO4, 2 מ"מ MgCl2, 2 מ"מ CaCl2<...

<ol>
	<li>Redzic, Z. B., Segal, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+choroid+plexus+and+the+physiology+of+the+choroid+plexus+epithelium.">The structure of the choroid plexus and the physiology of the choroid plexus epithelium.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 56 (12), 1695-1716 (2004).</li><li>Sakka, L., Coll, G., Chazal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+physiology+of+cerebrospinal+fluid.">Anatomy and physiology of cerebrospinal fluid.</a> European Annals of Otorhinolaryngology, Head and Neck Diseases. 128 (6), 309-316 (2011).</li><li>Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Garbage+truck+of+the+brain.">Garbage truck of the brain.</a> Science. 340 (6140), 1529-1530 (2013).</li><li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Paravascular+pathway+facilitates+csf+flow+through+the+brain+parenchyma+and+the+clearance+of+interstitial+solutes,+including+amyloid+B.">A Paravascular pathway facilitates csf flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid B.</a> Science Translational Medicine. 4 (147), (2012).</li><li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+drives+metabolite+clearance+from+the+Adult+Brain.">Sleep drives metabolite clearance from the Adult Brain.</a> Science. 342 (6156), 373-378 (2013).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4-dependent+glymphatic+solute+transport+in+the+rodent+brain.">Aquaporin-4-dependent glymphatic solute transport in the rodent brain.</a> eLife. 7, 40070 (2018).</li><li>Ringstad, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-wide+glymphatic+enhancement+and+clearance+in+humans+assessed+with+MRI.">Brain-wide glymphatic enhancement and clearance in humans assessed with MRI.</a> JCI Insight. 3 (13), 121537 (2018).</li><li>Lundgaard, I., Wang, W., Eberhardt, A., Vinitsky, H. S., Cameron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+low+alcohol+exposure,+but+adverse+effects+of+high+alcohol+intake+on+glymphatic+function.">Beneficial effects of low alcohol exposure, but adverse effects of high alcohol intake on glymphatic function.</a> Scientific Reports. , 1-16 (2018).</li><li>Munk, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDGF-B+is+required+for+development+of+the+glymphatic+system.">PDGF-B is required for development of the glymphatic system.</a> Cell Reports. 26 (11), 2955-2969 (2019).</li><li>Plog, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcranial+optical+imaging+reveals+a+pathway+for+optimizing+the+delivery+of+immunotherapeutics+to+the+brain.">Transcranial optical imaging reveals a pathway for optimizing the delivery of immunotherapeutics to the brain.</a> JCI Insight. 3 (20), 1-15 (2018).</li><li>Bechet, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+fluorescence+micrscopy+of+optically+cleared+brains+for+studying+the+glymphatic+system.">Light sheet fluorescence micrscopy of optically cleared brains for studying the glymphatic system.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (10), 1975-1986 (2020).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57378 (2018).</li><li>Ramos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisterna+magna+injection+in+rats+to+study+glymphatic+function.">Cisterna magna injection in rats to study glymphatic function.</a> Methods in Molecular Biology. 1938, (2019).</li><li>Sweeney, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+cerebrospinal+fluid+transport+through+the+intact+mouse+skull+using+fluorescence+macroscopy.">in vivo imaging of cerebrospinal fluid transport through the intact mouse skull using fluorescence macroscopy.</a> Journal of visualized experiments. (149), e59774 (2019).</li><li>Eide, P. K., Ringstad, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+with+intrathecal+MRI+gadolinium+contrast+medium+administration:+A+possible+method+to+assess+glymphatic+function+in+human+brain.">MRI with intrathecal MRI gadolinium contrast medium administration: A possible method to assess glymphatic function in human brain.</a> Acta Radiologica Open. 4 (11), 205846011560963 (2015).</li><li>Ringstad, G., Vatnehol, S. A. S., Eide, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+MRI+in+idiopathic+normal+pressure+hydrocephalus.">Glymphatic MRI in idiopathic normal pressure hydrocephalus.</a> Brain. 140 (10), 2691-2705 (2017).</li><li>Kornum, B. R., Knudsen, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+testing+of+pigs+(Sus+scrofa)+in+translational+biobehavioral+research.">Cognitive testing of pigs (Sus scrofa) in translational biobehavioral research.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 35 (3), 437-451 (2011).</li><li>B&#232;chet, N. B., Shanbhag, N. C., Lundgaard, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+function+in+the+gyrencephalic+brain.">Glymphatic function in the gyrencephalic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. , (2021).</li><li>Raghunandan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+flow+of+cerebrospinal+fluid+observed+in+periarterial+spaces+is+not+an+artifact+of+injection.">Bulk flow of cerebrospinal fluid observed in periarterial spaces is not an artifact of injection.</a> bioRxiv. , (2020).</li><li>D'Angelo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+fluid+collection+technique+from+the+atlanto-occipital+space+in+pigs.">Spinal fluid collection technique from the atlanto-occipital space in pigs.</a> Acta Veterinaria Brno. 78 (2), 303-305 (2009).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathologica. 137 (1), 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+EEG+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high EEG delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Science Advances. 5 (2), 5447 (2019).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+of+cerebrospinal+fluid+is+driven+by+arterial+pulsations+and+is+reduced+in+hypertension.">Flow of cerebrospinal fluid is driven by arterial pulsations and is reduced in hypertension.</a> Nature Communications. 9 (1), 4878 (2018).</li><li>Pleticha, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pig+lumbar+spine+anatomy+and+imaging-guided+lateral+lumbar+puncture:+A+new+large+animal+model+for+intrathecal+drug+delivery.">Pig lumbar spine anatomy and imaging-guided lateral lumbar puncture: A new large animal model for intrathecal drug delivery.</a> Journal of Neuroscience Methods. 216 (1), 10-15 (2013).</li></ol>

להלן, מתואר, פרוטוקול מפורט לביצוע השיעון הישיר של בור הים בחזירים, כולל ההכנה הדרושה, הליך כירורגי, עירוי מעקב ומיצוי המוח. זה דורש מישהו עם ניסיון והסמכה לעבודה עם בעלי חיים גדולים. אם מתבצע כראוי, זה מאפשר משלוח של מולקולות הרצויות עם בטחון ישירות לתוך CSF, ולאחר מכן סדרה של שיטות הדמיה אור ...

נוזל השדרתי (CSF) הוא אולטרה סינון של דם אשר נמצא בתוך ומסביב למערכת העצבים המרכזית (CNS)1,2. מלבד מתן ציפה למוח או ספיגת כוחות מכניים מזיקים, CSF ממלא גם תפקיד מרכזי בניקוי פסולת מטבולית מה- CNS3. פינוי פסולת מתאפשר על ידי מערכת גלימפטית שאופיינה לאחרונה המאפשרת את זרימת הקונבקטיבית של CSF דרך פרנצ'ימה במוח דרך מרחבים perivascular (PVS), אשר סובבים עורקים חודרים3,4,5. תהליך זה הוכח כתלוי במים-4 (AQP4), תעלת מים המתבטאת בעיקר בקצה האסטרוציטי, הקשור ל- PVS4,6. המחקר של המערכת הגלימפטית מושגת הן על ידי דימות ויוו והן על ידי ex vivo, באמצעות מיקרוסקופיה אור מתקדמת או הדמיית תהודה מגנטית (MRI), לאחר כניסתו של מעקב פלואורסצנטי / רדיואקטיבי או סוכן ניגוד לתוך CSF7,8,9,10,11.
דרך יעילה להכניס מכשיר מעקב לתוך CSF מבלי לגרום נזק לפרנצ'ימה במוח היא באמצעות קנוניציה מגנה בור (CMc)12,13. רוב גדול של כל המחקרים הגלימפטיים, עד כה בוצעו במכרסמים ונמנעו ביונקים גבוהים יותר בגלל הפולשניות של CMc בשילוב עם הפשטות המעשית של עבודה עם יונק קטן. בנוסף, גולגולות דקות של עכברים מאפשרות הדמיית ויוו ללא צורך בחלון גולגולת ולאחר מכן מאפשרות חילוץ מוח לא מסובך11,14. ניסויים שבוצעו בבני אדם הניבו נתונים מקרוסקופיים בעלי ערך ב-vivo על הפונקציה הגלימפטית, אך הסתמכו על זריקות מעקב תוך-אט-תיא-צילומי בעמוד השדרה המותני הדיסטלי, יתר על כן, משתמשים ב-MRI שאינו מניב רזולוציה מספקת כדי ללכוד את המיקרואנטומיה של המערכת הגלימפטית7,15,16 . הבנת הארכיטקטורה והיקף המערכת הגלימפטית ביונקים גבוהים יותר חיונית לתרגומה לבני אדם. על מנת להקל על תרגום גלימפטי לבני אדם, חשוב ליישם טכניקות המתבצעות במכרסמים ליונקים גבוהים יותר כדי לאפשר השוואות ישירות של המערכת הגלימפטית על פני מינים של קוגניציה גוברת ומורכבות המוח17. מוחות חזירים ואנושיים הם gyrencephalic, בעל נוירו-ארכיקטורה מקופלת, בעוד מוחות מכרסמים הם lissencephalic, ובכך יש הבדל משמעותי בין אחד לשני. במונחים של הגודל הכולל, מוחות חזירים דומים יותר לבני אדם, קטנים פי 10-15 מהמוח האנושי, בעוד מוחות העכבר קטנים פי 3,000 מ-18. על ידי הבנה טובה יותר של המערכת הגלימפטית ביונקים גדולים, ייתכן שניתן יהיה לנצל את המערכת הגלימפטית האנושית להתערבות טיפולית עתידית בתנאים כגון שבץ מוחי, פגיעה מוחית טראומטית ונוירו-דגנרציה. CMc ישיר בחזירים ב vivo היא שיטה המאפשרת מיקרוסקופיית אור ברזולוציה גבוהה של מערכת גלימפטית ביונק גבוה יותר. יתר על כן, בשל גודל החזירים המשמשים, ניתן ליישם מערכות ניטור דומות לאלה המשמשות בניתוחים אנושיים מה שהופך אותו אפשרי לתעד ולווסת פונקציות חיוניות כדי להעריך כיצד אלה תורמים לתפקוד הגלימפטי.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.01% azide in PBS</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G needle</td>
			<td>Mediq</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>FischerSci</td>
			<td>15849152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anatomical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin Alexa-Fluor 647 Conjugate</td>
			<td>ThermoFischer</td>
			<td>A34785</td>
			<td>2 vials (10mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chisel</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-8870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cement</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>7508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>compact saw</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-9517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hammer</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-7694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insta-Set CA Accelerator</td>
			<td>BSI-Inc</td>
			<td>BSI-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV line TAP, 3-WAYS with 10cm extension</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker pen</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliQ water</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCL</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 20 scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 21 Scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 4 Scalpel handle</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salmon knife</td>
			<td>Fiskers</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-retaining retractors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical curved scissors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel clamps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs

מערכת גלימפטית היא מערכת פינוי פסולת במוח הנשענת על זרימת נוזל השדרתי (CSF) בחללי כלי דם הקשורים לאסטרוציטים, והיא הייתה מעורבת בסיווג של פפטידים נוירוטוקסיים כגון עמילואיד-בטא. תפקוד גלימפטי לקוי מחריף את הפתולוגיה של המחלה במודלים של בעלי חיים של מחלות ניווניות, כגון אלצהיימר, המדגיש את החשיבות של הבנת מערכת סיווג זו. מערכת גלימפטית נחקרת לעתים קרובות על ידי cannulations מגנה בור (CMc), שבו מעקבים מועברים ישירות לתוך הנוזל השדרתי (CSF). עם זאת, רוב המחקרים בוצעו במכרסמים. כאן, אנו מדגימים הסתגלות של טכניקת CMC בחזירים. באמצעות CMc בחזירים, ניתן ללמוד את המערכת הגלימפטית ברזולוציה אופטית גבוהה במוחות גיראנצפליים ובכך מגשרת על פער הידע בין מכרסמים לגלימפטיקה אנושית.

ברגע שהחזיר חסר הכרה, הוא מפונק, ואנטומיה פני השטח שלו מסומנת, החל בפסגת העורף (OC) ועבודה לכיוון חוליות בית החזה (טלוויזיה) וכל בסיס האוזן (EB). לאורך הקווים הללו נעשים החתכים העוריים (איור 1A). שלוש שכבות השריר, כולל טרפז, דוונטיטר הקפיטוס למחצה ורכב הקפיטוס הקפיטוס למחצה ננותכי...

Watch this Scientific Journal Video about Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs at JoVE.com

Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

מאמר זה מציג פרוטוקול שלב אחר שלב להשתלת צינורית ישירה בבור החזירים.

השתלת צינורית ישירה ב"ציסטרנה מגנה של חזירים"

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

פרוטוקול זה חשוב שכן הוא מאפשר לחקור את המערכת הגלימפטית ביונק גדול, ובכך לקרב אותנו להבנת המערכת הגלימפטית בבני אדם. ישנם שני יתרונות לטכניקה זו. הכנסת עקבות לתוך מגנה בור מים מונעת כל נזק ישיר למוח, וזה בניגוד זריקות תוך חדריקולרי.שנית, זוהי גישה ישירה המאפשרת הדמיה מיידית של הקנוניציה ולדעת אם היא הצליחה או לא. התחל על ידי הצבת החזיר בתנוחה נוטה. למשר את החלק האחורי של ראשו וצווארו כדי לאתר ולסמן את סמל העורף, את עמוד השדרה של חוליות בית החזה הראשונות ואת הבסיס של כל אוזן.צייר קו ישר בין הסמל לחוליות לאורך ציר האורך. לאחר מכן, לאחר מכן, לאחר בסיס הגולגולת, צייר שני קווים מהפסגה לבסיס של כל אוזן. יש להדק בזהירות את זנב החיה ולצפות ברפלקס כדי לראות אם הוא בשינה עמוקה.התחל על ידי ביצוע חבטה עורית לאורך קו האורך עד השריר באמצעות אזמל עם להב מספר 21, ולאחר מכן להאריך שני חתכים בניצב בהמשך לאורך הכתפיים, כל אורך 10 עד 15 ס"מ. החל מהפסגת העורפית, לעשות חתכים עוריים לאורך הקו עד לבסיס של כל אוזן. השתמש במלקחיים אנטומיים כדי לאחוז בפינות העור שנוצרו בפסגת העורף, ולאחר מכן הפעל את להב האזמל בקלילות מעל הפאסיה כדי להפריד את העור מהשריר שמתחת.יש לכרות את העור לאורך כל אחד מחמשת החתכים כדי לדמיין חלקים משריר הטרפז. השתמש באזמל כדי לבצע חתך אורך בעומק של סנטימטר אחד שבו הטרפז מגיע יחד בקו האמצע, ולאחר מכן לבצע ניתוח קהה לאורך החתך האורך בשרירים באמצעות שילוב של מלקחיים כירורגיים ישרים ומעוקלים, אשר יפריד את הבטן של טרפז ואת שריר biventer semispinalis הבסיסי. נתק את כל סיבי השריר המתמשכים עם אזמל ולהמשיך לבצע ניתוח קהה עד קומפלקס capitis semispinalis הופך גלוי.לנוע לאורך ההיבט האחורי של הגולגולת ולנתק את המקורות של טרפז ושרירי חצאי קפיטוליס biventer. כדי להפריד בין שני השרירים לאורך, השתמש במלקחיים הניתוחיים כדי לבצע ניתוח בוטה עד קומפלקס הקפיטוליס למחצה גלוי לחלוטין. לאחר מכן השתמש במשחזרים לשמירה עצמית כדי לבטל את שרירי הטרפז והסמינליס קפטיס דוונטיטר.השתמש באזמל כדי לבצע חתך אורך בעומק סנטימטר אחד שבו הבטן של קומפלקס הקפיטוליס semispinalis לבוא יחד בקו האמצע. בצע ניתוח קהה באמצעות מלקחיים כירורגיים העובדים לאורך החתך האורך בין הבטן השריר עד הן האטלס והן הציר מוחשיים. לנוע לאורך ההיבט האחורי של הגולגולת, ניתוק המקורות של שרירי קומפלקסוס קפטיטיס למחצה.השתמש באזמל ובניתוח קהה כדי להפריד את השריר אורך החוליות הבסיסיות, ולאחר מכן להשתמש קבוצה אחרת של מפסקים שמירה עצמית כדי לבטל את שרירי קומפלקס קומפלקס קפיטוליס semispinalis. השתמש באזמל כדי להסיר בזהירות כל רקמה שנותרה מעל האזור שבו האטלס פוגש את בסיס הגולגולת. מניחים זרוע אחת על צוואר החיה ואצבע אחת בצומת האטלס והגולגולת, ואז מרמים בו זמנית את הראש ומכופפים את הצוואר תוך כדי מישוש עם האצבע כדי לחשוף את המגנה הבור.ודא שאדם אחד מרים ומכופף את הראש והצוואר של החיה בעוד השני מתרמס עבור מגנה בור המים, מה שהופך את ההערה של המיקום האנטומי שלה. הציגו צינורית 22 מד לאט ובזהירות לתוך הבור דרך הדורה בזווית אל ציר האורך, ולאחר מכן לסגת המחט מן הצינורית ולהניח כובע על המנעול. התחל עם החלת דבק סופר מאיץ שבו הצינורית נכנסת לרקמה, ולאחר מכן להחיל את המלט הדנטלי.חכה חמש דקות עד שהמלט יתקשה. הסר את המכסה בזהירות מן הצינורית. חבר את הצינורית לקצה הגברי של הקשת קו העירוי עם המעקב באמצעות סיומת של 10 ס"מ.הזריקו את העקבות לאט בקצב של 100 מיקרוליטרים לדקה או ביד או באמצעות משאבת עירוי מיקרו. הסר את הקשת הקו IV והחלף אותו במכסה. בדוק אם המעקב נראה פועם בבסיס הצינורית.ואז מניחים שקי חול מתחת לצוואר החיה כדי לשמור על כיפוף מסוים. שחררו את הראש והותיר את החיה במצב נוטה למנוחה. שחררו את המפסקים לשמירה עצמית והחליפו את השרירים.השתמש מהדקי המגבת הכירורגיים כדי לחבר את העור על השרירים. ראשית להשתמש גזה ולאחר מכן שמיכה כדי לכסות את מהדקי המגבת ואת ההסתה כדי להגביל את אובדן החום. אפשר למעקב להסתובב למשך פרק הזמן הרצוי.תמונות מקרוסקופיות תפורות של פני השטח של המוח יכולות לספק תובנות מפורטות על דפוסי ההפצה של העוקב על פני הסדקים והסולצי. תמונות דומות מהמשטחים הגחון והלבטיים של המוח יכולות לספק מידע על התפלגות המעקב באונה הטמפורלית והסדק לרוחב. תמונות של פני השטח במוח של הגדלה גבוהה יותר המיוצר באמצעות סטריאוסקופ יכול לעזור לדמיין את המעקב ב PVS לאורך העורקים.מקטעי מוח קורונליים מקרוסקופיים מספקים תובנה על עומק חדירת העוקב בסדק הבין-חימי והתפלגות ומבנה מעקב תת-קורטיקטי, כגון ההיפוקמפוס והסטריאטום. כתמים אימונוהיסטוכימיים עבור AQP4, חלבון חומצי פרברילי גליה, ואקטין שריר חלק הראו כי המעקב מקומי בתוך PVS, כמו גם עבר לתוך פרנשימה במוח. תהליכי כף הרגל של אסטרוציטים היוצרים את פני השטח החיצוניים של ה- PVS מזוהים באמצעות כתמי חלבון חומצי AQP4 וגליה.תאי האנדהל היוצרים את פני השטח הפנימיים של ה- PVS מוכתמים באמצעות כתם לציטין ו- GLUT-1. כתמי SMA מזהים עורקים ועורקים וניתן להשתמש בהם כדי להראות כי זרם PVS מתרחש לאורך העורקים במקום ורידים, המהווה את הפיזיולוגיה הבסיסית של תפקוד גלימפטי נורמלי. בהמשך, אנו מקווים לחקור את המערכת הגלימפטית ברזולוציה גבוהה ביונקים גדולים בהקשר של נוירופתולוגיה כגון שבץ ופגיעה מוחית טראומטית.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

אלקטרודה מיצוב ו מונטאז גירוי ישיר Transcranial נוכחי

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

משלוח תוך חדרי ישיר של תרופות למערכת העצבים המרכזית מכרסם

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents

השרשה בצינורית לתוך המלון Cisterna של מכרסמים

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

כריתת למינציה ואת חוט השדרה חלון השרשה בעכבר

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

השרשה כרונית של מערך שלם-קורטיקליים Electrocorticographic ב המרמוסט נפוצות

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset (Callithrix jacchus)

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset Callithrix jacchus

כירורגיה סטריאוטקאית עבור השרשה של מערכים מיקרואלקטרודה ב מרמוסטמצוי

Marmosets (Callithrix jacchus) are small non-human primates that are gaining popularity in biomedical and preclinical research, including the ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

הזרקת דם ישירה כפולה לתוך מגנה צ'יסטרנה כודל של דימום Subarachnoid

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

גישה כירורגית סטריאוטקסית למיקרו-איניג'קט גזע המוח הקאודלי וחוט השדרה הצווארי העליון באמצעות ציסטרנה מגנה בעכברים

Stereotaxic surgery to target brain sites in mice is commonly guided by skull landmarks. Access is then obtained via burr holes drilled through the skull. ...

Pupillometry to Assess Auditory Sensation in Guinea Pigs

אישונים להערכת תחושה שמיעתית בשרקנים

Noise exposure is a leading cause of sensorineural hearing loss. Animal models of noise-induced hearing loss have generated mechanistic insight into the ...