Name: direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs
Uploaded: 2021-06-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs at JoVE.com

이 작품은 너트와 앨리스 발렌베르크 재단, 흐른폰덴, 베너 그렌 재단, 크라포르드 재단에 의해 지원되었다.

모든 절차는 유럽 지침 2010/63/EU에 따라 수행되었으며 동물 연구에 대한 말뫼 룬드 윤리위원회 (Dnr 5.8.18-05527/2019)의 승인을 받았으며 스웨덴 연구 위원회의 CODEX 지침에 따라 수행되었습니다.
1. 준비
<ol><li>예광탄<ol>
<li>준비 인공 CSF (126 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM 포도당, 26 mM NaHCO3; pH 7.4)</li>
		<li>인공 CSF의 500 ?...

<ol>
	<li>Redzic, Z. B., Segal, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+choroid+plexus+and+the+physiology+of+the+choroid+plexus+epithelium.">The structure of the choroid plexus and the physiology of the choroid plexus epithelium.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 56 (12), 1695-1716 (2004).</li><li>Sakka, L., Coll, G., Chazal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+physiology+of+cerebrospinal+fluid.">Anatomy and physiology of cerebrospinal fluid.</a> European Annals of Otorhinolaryngology, Head and Neck Diseases. 128 (6), 309-316 (2011).</li><li>Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Garbage+truck+of+the+brain.">Garbage truck of the brain.</a> Science. 340 (6140), 1529-1530 (2013).</li><li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Paravascular+pathway+facilitates+csf+flow+through+the+brain+parenchyma+and+the+clearance+of+interstitial+solutes,+including+amyloid+B.">A Paravascular pathway facilitates csf flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid B.</a> Science Translational Medicine. 4 (147), (2012).</li><li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+drives+metabolite+clearance+from+the+Adult+Brain.">Sleep drives metabolite clearance from the Adult Brain.</a> Science. 342 (6156), 373-378 (2013).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4-dependent+glymphatic+solute+transport+in+the+rodent+brain.">Aquaporin-4-dependent glymphatic solute transport in the rodent brain.</a> eLife. 7, 40070 (2018).</li><li>Ringstad, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-wide+glymphatic+enhancement+and+clearance+in+humans+assessed+with+MRI.">Brain-wide glymphatic enhancement and clearance in humans assessed with MRI.</a> JCI Insight. 3 (13), 121537 (2018).</li><li>Lundgaard, I., Wang, W., Eberhardt, A., Vinitsky, H. S., Cameron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+low+alcohol+exposure,+but+adverse+effects+of+high+alcohol+intake+on+glymphatic+function.">Beneficial effects of low alcohol exposure, but adverse effects of high alcohol intake on glymphatic function.</a> Scientific Reports. , 1-16 (2018).</li><li>Munk, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDGF-B+is+required+for+development+of+the+glymphatic+system.">PDGF-B is required for development of the glymphatic system.</a> Cell Reports. 26 (11), 2955-2969 (2019).</li><li>Plog, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcranial+optical+imaging+reveals+a+pathway+for+optimizing+the+delivery+of+immunotherapeutics+to+the+brain.">Transcranial optical imaging reveals a pathway for optimizing the delivery of immunotherapeutics to the brain.</a> JCI Insight. 3 (20), 1-15 (2018).</li><li>Bechet, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+fluorescence+micrscopy+of+optically+cleared+brains+for+studying+the+glymphatic+system.">Light sheet fluorescence micrscopy of optically cleared brains for studying the glymphatic system.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (10), 1975-1986 (2020).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57378 (2018).</li><li>Ramos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisterna+magna+injection+in+rats+to+study+glymphatic+function.">Cisterna magna injection in rats to study glymphatic function.</a> Methods in Molecular Biology. 1938, (2019).</li><li>Sweeney, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+cerebrospinal+fluid+transport+through+the+intact+mouse+skull+using+fluorescence+macroscopy.">in vivo imaging of cerebrospinal fluid transport through the intact mouse skull using fluorescence macroscopy.</a> Journal of visualized experiments. (149), e59774 (2019).</li><li>Eide, P. K., Ringstad, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+with+intrathecal+MRI+gadolinium+contrast+medium+administration:+A+possible+method+to+assess+glymphatic+function+in+human+brain.">MRI with intrathecal MRI gadolinium contrast medium administration: A possible method to assess glymphatic function in human brain.</a> Acta Radiologica Open. 4 (11), 205846011560963 (2015).</li><li>Ringstad, G., Vatnehol, S. A. S., Eide, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+MRI+in+idiopathic+normal+pressure+hydrocephalus.">Glymphatic MRI in idiopathic normal pressure hydrocephalus.</a> Brain. 140 (10), 2691-2705 (2017).</li><li>Kornum, B. R., Knudsen, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+testing+of+pigs+(Sus+scrofa)+in+translational+biobehavioral+research.">Cognitive testing of pigs (Sus scrofa) in translational biobehavioral research.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 35 (3), 437-451 (2011).</li><li>B&#232;chet, N. B., Shanbhag, N. C., Lundgaard, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+function+in+the+gyrencephalic+brain.">Glymphatic function in the gyrencephalic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. , (2021).</li><li>Raghunandan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+flow+of+cerebrospinal+fluid+observed+in+periarterial+spaces+is+not+an+artifact+of+injection.">Bulk flow of cerebrospinal fluid observed in periarterial spaces is not an artifact of injection.</a> bioRxiv. , (2020).</li><li>D'Angelo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+fluid+collection+technique+from+the+atlanto-occipital+space+in+pigs.">Spinal fluid collection technique from the atlanto-occipital space in pigs.</a> Acta Veterinaria Brno. 78 (2), 303-305 (2009).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathologica. 137 (1), 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+EEG+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high EEG delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Science Advances. 5 (2), 5447 (2019).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+of+cerebrospinal+fluid+is+driven+by+arterial+pulsations+and+is+reduced+in+hypertension.">Flow of cerebrospinal fluid is driven by arterial pulsations and is reduced in hypertension.</a> Nature Communications. 9 (1), 4878 (2018).</li><li>Pleticha, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pig+lumbar+spine+anatomy+and+imaging-guided+lateral+lumbar+puncture:+A+new+large+animal+model+for+intrathecal+drug+delivery.">Pig lumbar spine anatomy and imaging-guided lateral lumbar puncture: A new large animal model for intrathecal drug delivery.</a> Journal of Neuroscience Methods. 216 (1), 10-15 (2013).</li></ol>

본명, 기술된 바와 같은 상세한 프로토콜은 필요한 제제, 외과적 시술, 추적자 주입 및 뇌추출을 포함하여 돼지에서 시스테나 마그나의 직접 적인 수통을 수행하는 상세한 프로토콜이다. 이를 위해서는 대형 동물과 함께 일하기 위한 경험과 인증을 가진 사람이 필요합니다. 올바르게 수행하면 CSF로 직접 확실하게 원하는 분자를 전달할 수 있으며, 그 후 일련의 다른 고급 광 이미징 양식이 큰 포유...

뇌척수액 (CSF)은 중추 신경계 (CNS)1,2 의 안팎에서 발견되는 혈액의 초침염입니다. CSF는 뇌에 부력을 주거나 해로운 기계적 힘을 흡수하는 것 외에도 CNS3에서 대사 폐기물을 제거하는 데 중추적인 역할을 합니다. 폐적 통관은 관통 동맥을 둘러싸고 있는 인식 공간(PVS)을 통해 뇌 완충증을 통해 CSF의 대류 흐름을 허용하는 최근 특징의 글리프파틱 시스템에 의해 촉진된다3,4,5. 이 과정은 PVS4,6에 바인딩 된 성상체 끝발에 주로 표현 된 수로 인 아쿠아 포린-4 (AQP4)에 의존하는 것으로 나타났습니다. glymphatic 시스템의 연구는 CSF7, 8,9,10,11에 형광/방사성 추적자 또는 조영제의 도입에 따라, 향상된 광 현미경 검사법 또는 자기 공명 화상 진찰 (MRI)를 사용하여 생체 내 및 전 생체 이미징 모두에 의해 달성된다.
뇌 완두엽에 손상을 주지 않고 CSF에 트레이서를 도입하는 효과적인 방법은 시스테나 마그나 수분(CMc)12,13을 통해서입니다. 모든 glymphatic 연구의 대부분은, 지금까지 설치류에서 수행되고 작은 포유동물로 작업의 실제적인 단순성에 결합된 CMc의 침략성 때문에 더 높은 포유동물에서 피했습니다. 추가적으로, 마우스의 얇은 두개골은 두개골 창에 대한 필요없이 생체 내 이미징을 허용하고 이후 복잡하지 않은 뇌 추출을 허용11,14. 인간에서 수행된 실험은 글리프파틱 기능에 대한 생체 내 데이터에서 귀중한 거시적 인 거시적 인 생성을 산출했지만, 황실 요추 척추의 내 추적자 주사에 의존하고, 또한, 글리파틱 시스템 7,15,16을 포착하기에 충분한 해상도를 산출하지 않는 MRI를 활용 . 더 높은 포유류에서 글리프파틱 시스템의 건축과 범위를 이해하는 것은 인간에게 의한 번역에 필수적입니다. 인간에 대한 림프변환을 용이하게 하기 위해서는 인식과 뇌의 복잡성이 증가하는 종에 걸쳐 글리파틱 시스템의 직접 비교를 허용하도록 설치류에서 수행되는 기술을 더 높은 포유류에 적용하는 것이 중요합니다. 돼지와 인간의 뇌는 접힌 신경 구조를 소유, 자이렌스 실릭, 설치류 뇌는 lissencephalic 동안, 따라서 서로 상당한 차이를 갖는. 전반적인 크기의 관점에서, 돼지 두뇌는, 또한, 인간에 게 더 비교, 되 고 10-15 인간의 두뇌 보다 작은 시간, 마우스 두뇌는 3,000 배 작은 18. 큰 포유동물의 림프계를 더 잘 이해함으로써 뇌졸중, 외상성 뇌 손상 및 신경 변성과 같은 조건에서 미래의 치료 개입을 위해 인간 림프시스템을 활용할 수 있을 수 있다. 생체 내돼지에서 직접 CMc는 더 높은 포유동물에서 글리프파틱 시스템의 고해상도 광 현미경 검사를 허용하는 방법입니다. 또한, 사용되는 돼지의 크기로 인해, 이러한 글리파스틱 기능에 기여하는 방법을 평가하기 위해 중요한 기능을 엄격하게 문서화하고 조절할 수 있도록 인간 수술에 사용되는 것과 유사한 모니터링 시스템을 적용 할 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.01% azide in PBS</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G needle</td>
			<td>Mediq</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>FischerSci</td>
			<td>15849152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anatomical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin Alexa-Fluor 647 Conjugate</td>
			<td>ThermoFischer</td>
			<td>A34785</td>
			<td>2 vials (10mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chisel</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-8870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cement</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>7508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>compact saw</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-9517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hammer</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-7694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insta-Set CA Accelerator</td>
			<td>BSI-Inc</td>
			<td>BSI-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV line TAP, 3-WAYS with 10cm extension</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker pen</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliQ water</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCL</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 20 scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 21 Scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 4 Scalpel handle</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salmon knife</td>
			<td>Fiskers</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-retaining retractors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical curved scissors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel clamps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs

글리파틱 시스템은 성상세포-경계 계피 공간에서 뇌척수액(CSF)의 흐름에 의존하는 뇌의 폐통관 시스템으로 아밀로이드 베타와 같은 신경독성 펩타이드의 클리어런스에 연루되어 있다. 손상된 g림프 기능은 알츠하이머병과 같은 신경 퇴행성 질환의 동물 모델에서 질병 병리학을 악화시며, 이는 이 통관 시스템을 이해하는 것의 중요성을 강조합니다. 글리파틱 시스템은 종종 추적자가 뇌척수액 (CSF)으로 직접 전달되는 cisterna magna 캐니어 (CMc)에 의해 연구됩니다. 대부분의 연구, 그러나, 설치류에서 수행 되었습니다. 여기에서는 돼지의 CMc 기술의 적응을 보여줍니다. 돼지에서 CMc를 사용하여, glymphatic 시스템은 자임내팔리크 두뇌에 있는 높은 광학 해상도에서 공부될 수 있고 이렇게 해서 설치류와 인간 glymphatics 사이 지식 격차를 다리.

돼지가 의식이 없는 후에는, 그것은 심근되고, 그것의 표면 해부학은 황두 문장 (OC)에서 시작하여 흉부 척추 (TV) 및 각 귀 기지 (EB)를 향해 일하기 위하여 표시됩니다. 진피 절개가 이루어진 것은 이 선(도 1A)을 따라 이루어진다. 트라페지우스, 세미스피니스 카피투스 비벤터 및 반스피증 카피투스 복합체를 포함한 3개의 근육 층은 시스테나 마그나(CM)(그림 1B</...

Watch this Scientific Journal Video about Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs at JoVE.com

Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

이 문서에서는 돼지의 시스테나 마그나에서 직접 캐뉼라 이식에 대한 단계별 프로토콜을 제시합니다.

돼지의 시스테나 마그나에서 직접 캐뉼라 이식

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

이 프로토콜은 큰 포유동물에서 림프계의 조사를 허용하므로 인간에서 글리파틱 시스템을 이해하는 데 더 가까워지게합니다. 이 기술에는 두 가지 장점이 있습니다. cisterna 마그나에 흔적의 도입은 뇌에 직접적인 손상을 방지, 이는 정맥 내 주사와는 대조적이다.둘째, 이것은 캐니어의 즉각적인 시각화와 그것이 성공적이었는지 여부를 알 수있는 직접적인 접근 방식입니다. 돼지를 경향이 있는 위치에 놓는 것으로 시작합니다. 머리와 목의 뒷면을 만지시면 후두 문장, 첫 번째 흉부 척추의 척추 및 각 귀의 베이스를 찾아 표시합니다.문장과 세로 축을 따라 척추 사이에 직선을 그립니다. 그런 다음 두개골의 기초를 따라, 각 귀의 바닥에 문장에서 두 줄을 그립니다. 동물의 꼬리를 조심스럽게 고정하고 반사신경이 깊은 수면에 있는지 확인하십시오.먼저 21번 블레이드를 가진 메스를 사용하여 세로선을 따라 근육까지 진피 절개를 한 다음, 어깨를 따라 두 개의 수직 절개를 더 길게 10~15cm 길이로 확장합니다. 후두 문장에서 시작하여 라인을 따라 진피 절개를 각 귀의 밑면까지 만듭니다. 해부학 적 집게를 사용하여 후두 문장에서 형성 된 피부 모서리를 잡고 메스 블레이드를 근막 위로 가볍게 실행하여 피부를 기본 근육과 분리하십시오.사다리꼴 근육의 일부를 시각화하기 위해 다섯 절개 각각을 따라 피부를 절제합니다. 메스를 사용하여 사다리꼴이 중간선에서 함께 오는 약 1센티미터 깊이의 세로 절개를 한 다음, 사다리꼴과 근본적인 반척추 카피티스 의 배를 분리하는 직선 및 곡선 수술 집게의 조합을 사용하여 근육의 세로 절단을 따라 무딘 해부를 수행합니다. 메스로 지속근육 섬유를 끊고 반척추기 카피티스 복합체가 눈에 띄게 될 때까지 무딘 해부를 계속 수행합니다.두개골의 후방 측면을 따라 이동하고 사다리꼴과 반척추 카피티스 biventer 근육의 기원을 끊습니다. 두 근육을 세로로 분리하려면 외과 용 집게를 사용하여 반척추 경 카피티스 컴플렉스가 완전히 보일 때까지 무딘 해부를 수행하십시오. 그런 다음 자기 유지 리트랙터를 사용하여 사다리꼴과 반척추기 카피티스 biventer 근육을 철회하십시오.메스를 사용하여 반척추키스 카피티스 복합체의 배가 중간선에 모이는 1센티미터 깊이의 경도 절개를 만듭니다. 아틀라스와 축이 모두 만져질 때까지 근육 배 사이의 세로 절단을 따라 작동하는 외과 용삼을 사용하여 무딘 해부를 수행하십시오. 두개골의 후방 측면을 따라 이동하여 반척추수미스 카피티스 복합 근육의 기원을 끊습니다.메스와 무딘 해부를 사용하여 근육을 기본 척추와 세로로 분리한 다음 반척수비스 카피티스 복합 근육을 회수하기 위해 다른 자체 유지 리트랙터 세트를 사용합니다. 메스를 사용하여 아틀라스가 두개골 베이스를 만나는 부위에 남은 조직을 조심스럽게 제거합니다. 동물의 목에 한 쪽 팔을 놓고 아틀라스와 두개골의 정초에 한 손가락을 두른 다음, 동시에 머리를 올리고 손가락을 만지면서 목을 구부려 시스스테나 마그나를 드러냅니다.한 사람이 동물의 머리와 목을 높이고 굴곡하도록 하고, 다른 한 명은 시스테나 마그나를 위해 심필을 하고 해부학적 위치를 기록합니다. 22 게이지 캐뉼라를 천천히 조심스럽게 시스테나 마그나(cisterna magna)에 비스듬히 비스듬히 기울어진 후 캐뉼라에서 바늘을 철회하고 자물쇠에 캡을 놓습니다. 수퍼 접착제와 캐뉼러가 조직에 들어가는 가속기를 바르는 것으로 시작한 다음 치과 시멘트를 적용하십시오.시멘트가 굳어질 때까지 5분 간 기다립니다. 캐뉼라에서 캡을 조심스럽게 제거합니다. 10센티미터 연장을 사용하여 트레이서와 IV 라인 탭의 수컷 끝에 캐뉼라를 부착합니다.손으로 또는 마이크로 주입 펌프를 사용하여 분당 100 마이크로 리터의 속도로 천천히 트레이서를 주입하십시오. IV 라인 탭을 제거하고 캡으로 교체합니다. 추적자가 캐뉼라 의 기지에서 맥동하는 것으로 보이는지 확인합니다.그런 다음 모래 주머니를 동물의 목 아래에 놓고 약간의 굴곡을 유지합니다. 머리를 풀어 놓고 동물을 쉬는 경향이 있는 자세로 둡니다. 자기 유지 리트랙터를 해제하고 근육을 대체합니다.수술 수건 클램프를 사용하여 근육을 통해 피부를 함께 가져옵니다. 먼저 거즈와 담요를 사용하여 수건 클램프와 절개를 덮어 열 손실을 제한하십시오. 추적자가 원하는 시간 동안 순환하도록 허용합니다.뇌의 등대 표면의 스티치 거시적 이미지는 설시와 균열을 가로 질러 추적자의 분포 패턴에 대한 자세한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 뇌의 복부 및 측면 표면에서 유사한 이미지는 측두엽과 측면 균열의 추적자 분포에 대한 정보를 제공 할 수 있습니다. 스테레오스코코프를 사용하여 생성된 더 높은 배율의 뇌 표면의 이미지는 동맥을 따라 PVS의 추적자를 시각화하는 데 도움이 될 수 있습니다.거시적 관상 동맥 뇌 섹션은 해마와 줄무늬와 같은 연고체 균열 및 피형 추적기 분포 및 구조에서 추적자 침투의 깊이에 대한 통찰력을 제공합니다. AQP4, 글리아 세동 산성 단백질 및 부드러운 근육 액틴에 대한 면역 조직화학 적 염색은 추적자가 PVS 내에서 국소화뿐만 아니라 뇌 완두종으로 이동한 것으로 나타났습니다. PVS의 외부 표면을 형성하는 성상세포 발 공정은 AQP4 및 글리아 세동 산성 단백질 염색을 사용하여 식별됩니다.PVS의 내부 표면을 형성하는 내피 세포는 렉틴과 GLUT-1 얼룩을 사용하여 염색된다. SMA 염색은 동맥과 동맥을 식별하고 PVS 유입이 정상적인 림프절 기능의 기본 생리학을 구성하는 정맥 대신 동맥을 따라 발생한다는 것을 보여주기 위해 사용될 수 있습니다. 앞으로, 우리는 뇌졸중과 외상성 뇌 손상과 같은 신경 병리학의 맥락에서 큰 포유동물의 고해상도에서 글리파틱 시스템을 탐구하기를 희망합니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

Transcranial 직접 전류 자극의 전극 위치와 몬티지

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

연구

신경과학

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

마우스의 중추 신경계에서 줄기 세포 주입의 Multimodal 이미징

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

설치류 중추 신경계에 약물을 직접 심실 배달

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents

설치류의 시스테 마그나에 정 맥 주입

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

마우스에 있는 Laminectomy 및 척수 창 이식

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

일반적인 마모 셋에 전체 피 질 Electrocorticographic 배열의 만성 이식

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset (Callithrix jacchus)

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset Callithrix jacchus

일반적인 마모셋에 있는 마이크로 전극 배열의 이식을 위한 입체 외과(칼리트릭스 jacchus)

Marmosets (Callithrix jacchus) are small non-human primates that are gaining popularity in biomedical and preclinical research, including the ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

수브라크누드 출혈의 모델로 시스테나 마그나에 혈액을 이중 직접 주입

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

마우스의 Cisterna Magna를 통해 Caudal Brainstem과 Upper Cervical Spinal Spind를 미세 주입하는 입체 택시 외과 적 접근법

Stereotaxic surgery to target brain sites in mice is commonly guided by skull landmarks. Access is then obtained via burr holes drilled through the skull. ...

Pupillometry to Assess Auditory Sensation in Guinea Pigs

기니피그의 청각 감각을 평가하기 위한 동공 측정

Noise exposure is a leading cause of sensorineural hearing loss. Animal models of noise-induced hearing loss have generated mechanistic insight into the ...