Name: direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs
Uploaded: 2021-06-09T15:00:00
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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Knut e Alice Wallenberg, Hjärnfonden, Fundações Wenner Gren e fundação Crafoord.

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com a diretiva europeia 2010/63/UE e aprovados pelo Comitê ético de Malmö-Lund em Pesquisa Animal (Dnr 5.8.18-05527/2019) e conduzidos de acordo com as diretrizes do CODEX do Conselho sueco de Pesquisa.
1. Preparação
<ol><li>Traçador<ol>
<li>Prepare CSF artificial (126 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM de glicose, 26 mM NaHCO3; pH 7.4)</li>
		<li>A ...

<ol>
	<li>Redzic, Z. B., Segal, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+choroid+plexus+and+the+physiology+of+the+choroid+plexus+epithelium.">The structure of the choroid plexus and the physiology of the choroid plexus epithelium.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 56 (12), 1695-1716 (2004).</li><li>Sakka, L., Coll, G., Chazal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+physiology+of+cerebrospinal+fluid.">Anatomy and physiology of cerebrospinal fluid.</a> European Annals of Otorhinolaryngology, Head and Neck Diseases. 128 (6), 309-316 (2011).</li><li>Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Garbage+truck+of+the+brain.">Garbage truck of the brain.</a> Science. 340 (6140), 1529-1530 (2013).</li><li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Paravascular+pathway+facilitates+csf+flow+through+the+brain+parenchyma+and+the+clearance+of+interstitial+solutes,+including+amyloid+B.">A Paravascular pathway facilitates csf flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid B.</a> Science Translational Medicine. 4 (147), (2012).</li><li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+drives+metabolite+clearance+from+the+Adult+Brain.">Sleep drives metabolite clearance from the Adult Brain.</a> Science. 342 (6156), 373-378 (2013).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4-dependent+glymphatic+solute+transport+in+the+rodent+brain.">Aquaporin-4-dependent glymphatic solute transport in the rodent brain.</a> eLife. 7, 40070 (2018).</li><li>Ringstad, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-wide+glymphatic+enhancement+and+clearance+in+humans+assessed+with+MRI.">Brain-wide glymphatic enhancement and clearance in humans assessed with MRI.</a> JCI Insight. 3 (13), 121537 (2018).</li><li>Lundgaard, I., Wang, W., Eberhardt, A., Vinitsky, H. S., Cameron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+low+alcohol+exposure,+but+adverse+effects+of+high+alcohol+intake+on+glymphatic+function.">Beneficial effects of low alcohol exposure, but adverse effects of high alcohol intake on glymphatic function.</a> Scientific Reports. , 1-16 (2018).</li><li>Munk, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDGF-B+is+required+for+development+of+the+glymphatic+system.">PDGF-B is required for development of the glymphatic system.</a> Cell Reports. 26 (11), 2955-2969 (2019).</li><li>Plog, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcranial+optical+imaging+reveals+a+pathway+for+optimizing+the+delivery+of+immunotherapeutics+to+the+brain.">Transcranial optical imaging reveals a pathway for optimizing the delivery of immunotherapeutics to the brain.</a> JCI Insight. 3 (20), 1-15 (2018).</li><li>Bechet, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+fluorescence+micrscopy+of+optically+cleared+brains+for+studying+the+glymphatic+system.">Light sheet fluorescence micrscopy of optically cleared brains for studying the glymphatic system.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (10), 1975-1986 (2020).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57378 (2018).</li><li>Ramos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisterna+magna+injection+in+rats+to+study+glymphatic+function.">Cisterna magna injection in rats to study glymphatic function.</a> Methods in Molecular Biology. 1938, (2019).</li><li>Sweeney, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+cerebrospinal+fluid+transport+through+the+intact+mouse+skull+using+fluorescence+macroscopy.">in vivo imaging of cerebrospinal fluid transport through the intact mouse skull using fluorescence macroscopy.</a> Journal of visualized experiments. (149), e59774 (2019).</li><li>Eide, P. K., Ringstad, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+with+intrathecal+MRI+gadolinium+contrast+medium+administration:+A+possible+method+to+assess+glymphatic+function+in+human+brain.">MRI with intrathecal MRI gadolinium contrast medium administration: A possible method to assess glymphatic function in human brain.</a> Acta Radiologica Open. 4 (11), 205846011560963 (2015).</li><li>Ringstad, G., Vatnehol, S. A. S., Eide, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+MRI+in+idiopathic+normal+pressure+hydrocephalus.">Glymphatic MRI in idiopathic normal pressure hydrocephalus.</a> Brain. 140 (10), 2691-2705 (2017).</li><li>Kornum, B. R., Knudsen, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+testing+of+pigs+(Sus+scrofa)+in+translational+biobehavioral+research.">Cognitive testing of pigs (Sus scrofa) in translational biobehavioral research.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 35 (3), 437-451 (2011).</li><li>B&#232;chet, N. B., Shanbhag, N. C., Lundgaard, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+function+in+the+gyrencephalic+brain.">Glymphatic function in the gyrencephalic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. , (2021).</li><li>Raghunandan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+flow+of+cerebrospinal+fluid+observed+in+periarterial+spaces+is+not+an+artifact+of+injection.">Bulk flow of cerebrospinal fluid observed in periarterial spaces is not an artifact of injection.</a> bioRxiv. , (2020).</li><li>D'Angelo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+fluid+collection+technique+from+the+atlanto-occipital+space+in+pigs.">Spinal fluid collection technique from the atlanto-occipital space in pigs.</a> Acta Veterinaria Brno. 78 (2), 303-305 (2009).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathologica. 137 (1), 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+EEG+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high EEG delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Science Advances. 5 (2), 5447 (2019).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+of+cerebrospinal+fluid+is+driven+by+arterial+pulsations+and+is+reduced+in+hypertension.">Flow of cerebrospinal fluid is driven by arterial pulsations and is reduced in hypertension.</a> Nature Communications. 9 (1), 4878 (2018).</li><li>Pleticha, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pig+lumbar+spine+anatomy+and+imaging-guided+lateral+lumbar+puncture:+A+new+large+animal+model+for+intrathecal+drug+delivery.">Pig lumbar spine anatomy and imaging-guided lateral lumbar puncture: A new large animal model for intrathecal drug delivery.</a> Journal of Neuroscience Methods. 216 (1), 10-15 (2013).</li></ol>

Aqui está descrito, um protocolo detalhado para realizar a cannulação direta da cisterna magna em suínos, incluindo a preparação necessária, procedimento cirúrgico, infusão de rastreadores e extração do cérebro. Isso requer alguém com experiência e certificação para trabalhar com animais de grande porte. Se realizado corretamente, isso permite a entrega de moléculas desejadas com garantia diretamente no CSF, após a qual uma série de diferentes modalidades avançadas de imagem luminosa podem ser usadas ...

O fluido cefalorraquidiano (CSF) é um ultrafiltrato de sangue que é encontrado dentro e ao redor do sistema nervoso central (CNS)1,2. Além de dar flutuação ao cérebro ou absorver forças mecânicas prejudiciais, a CSF também desempenha um papel fundamental na limpeza de resíduos metabólicos do CNS3. O despejo de resíduos é facilitado pelo sistema glicêtico recentemente caracterizado que permite o fluxo convectivo de CSF através do parenchyma cerebral através de espaços perivasculares (PVS), que circundam artérias penetrantes3,4,5. Este processo mostrou-se dependente da aquaporina-4 (AQP4), um canal de água expresso principalmente no endfeta astrócito, vinculado ao PVS4,6. O estudo do sistema glicêmático é realizado por imagens in vivo e ex vivo, utilizando microscopia de luz avançada ou ressonância magnética (RM), após a introdução de um rastreador fluorescente/radioativo ou agente de contraste no CSF7,8,9,10,11.
Uma maneira eficaz de introduzir um rastreador no CSF sem incorrer em danos ao parênquim cerebral é através da cisterna magna cannulation (CMc)12,13. A grande maioria de todos os estudos glifáticos, até agora foram realizados em roedores e evitados em mamíferos superiores devido à invasividade do CMC acoplado à simplicidade prática de trabalhar com um pequeno mamífero. Além disso, os crânios finos de camundongos permitem imagens in vivo sem a necessidade de uma janela craniana e, posteriormente, permitem uma extração cerebral descomplicada11,14. Experimentos realizados em humanos produziram um valioso dados in vivo macroscópicos sobre a função glifática, mas se basearam em injeções de rastreador intratecal na coluna lombar distal e, além disso, utilizam ressonância magnética que não produz resolução suficiente para capturar a micronatomia do sistema glicêntico7,15,16 . Compreender a arquitetura e a extensão do sistema glicêtico em mamíferos superiores é essencial para sua tradução para humanos. Para facilitar a tradução glifática para humanos, é importante aplicar técnicas que são realizadas em roedores a mamíferos superiores, de modo a permitir comparações diretas do sistema glicêtico entre espécies de crescente cognição e complexidade cerebral17. Os cérebros de porco e humano são gyrencephalic, possuindo uma neuroarquitetura dobrada, enquanto cérebros de roedores são lisscérefálicos, tendo assim uma diferença substancial entre si. Em termos do tamanho geral, os cérebros de porco são, também, mais comparáveis aos humanos, sendo 10-15 vezes menores que o cérebro humano, enquanto os cérebros de camundongos são 3.000 vezes menores18. Ao entender melhor o sistema glicêtico em grandes mamíferos, pode ser possível utilizar o sistema glicêtico humano para futura intervenção terapêutica em condições como derrame, lesão cerebral traumática e neurodegeneração. CMc direto em suínos in vivo é um método que permite a microscopia leve de alta resolução do sistema glicêtico em um mamífero superior. Além disso, devido ao tamanho dos suínos utilizados, é possível aplicar sistemas de monitoramento semelhantes aos utilizados em cirurgias humanas, tornando viável documentar e regularmente funções vitais, a fim de avaliar como estes contribuem para a função glifática.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.01% azide in PBS</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G needle</td>
			<td>Mediq</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>FischerSci</td>
			<td>15849152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anatomical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin Alexa-Fluor 647 Conjugate</td>
			<td>ThermoFischer</td>
			<td>A34785</td>
			<td>2 vials (10mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chisel</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-8870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cement</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>7508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>compact saw</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-9517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hammer</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-7694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insta-Set CA Accelerator</td>
			<td>BSI-Inc</td>
			<td>BSI-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV line TAP, 3-WAYS with 10cm extension</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker pen</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliQ water</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCL</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 20 scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 21 Scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 4 Scalpel handle</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salmon knife</td>
			<td>Fiskers</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-retaining retractors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical curved scissors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel clamps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs

O sistema glicênico é um sistema de liberação de resíduos no cérebro que se baseia no fluxo de fluido cefalorraquidiano (CSF) em espaços perivasculares ligados a astrocitos e foi implicado no despejo de peptídeos neurotóxicos como amilóide-beta. A função glifática prejudicada exacerba a patologia da doença em modelos animais de doenças neurodegenerativas, como o Alzheimer, que destaca a importância de entender esse sistema de liberação. O sistema glicênico é frequentemente estudado por cisterna magna cannulations (CMc), onde os rastreadores são entregues diretamente no fluido cefalorraquidiano (CSF). A maioria dos estudos, no entanto, tem sido realizada em roedores. Aqui, demonstramos uma adaptação da técnica CMc em suínos. Usando CMc em suínos, o sistema glicêtico pode ser estudado em alta resolução óptica em cérebros giroscéceis e ao fazê-lo faz a ponte entre roedores e gglifáticos humanos.

Uma vez que o porco está inconsciente, ele é palpatado, e sua anatomia superficial é marcada, começando na crista occipital (OC) e trabalhando em direção às vértebras torácicas (TV) e cada base de ouvido (EB). É nesse sentido que as incisões dérmicas são feitas (Figura 1A). As três camadas musculares, incluindo trapézio, semi-pinalis capitus biventer e semispinalis capitus complexus são ressecadas e mantidas abertas por dois conjuntos de retentores auto-retentores para expor ...

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Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

Este artigo apresenta um protocolo passo-a-passo para a implantação direta de cânula na cisterna magna dos suínos.

Implantação direta de cânula na Cisterna Magna dos Porcos

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

Este protocolo é importante, pois permite a investigação do sistema glifático em um grande mamífero, aproximando-nos da compreensão do sistema glicêntico em humanos. Há duas vantagens nessa técnica. A introdução de traços na cisterna magna evita qualquer dano direto ao cérebro, o que contrasta com as injeções intraventriculares.Em segundo lugar, trata-se de uma abordagem direta que permite a visualização imediata da cannulação e saber se ela foi ou não bem sucedida. Comece colocando o porco em uma posição propensa. Palpa a parte de trás de sua cabeça e pescoço para localizar e marcar a crista occipital, a coluna das primeiras vértebras torácicas, e a base de cada orelha.Desenhe uma linha reta entre a crista e as vértebras ao longo do eixo longitudinal. Em seguida, seguindo a base do crânio, desenhe duas linhas da crista até a base de cada orelha. Fixar cuidadosamente a cauda do animal e observar um reflexo para ver se ele está em um sono profundo.Comece fazendo uma incisão dérmica ao longo da linha longitudinal até o músculo usando um bisturi com uma lâmina número 21, em seguida, estender duas incisões perpendiculares mais ao longo dos ombros, cada uma de 10 a 15 centímetros de comprimento. Partindo da crista occipital, faça incisões dérmicas ao longo da linha até a base de cada orelha. Use fórceps anatômicos para segurar os cantos da pele formados na crista occipital, em seguida, executar a lâmina do bisturi levemente sobre a fáscia para separar a pele do músculo subjacente.Ressele a pele ao longo de cada uma das cinco incisões para visualizar partes do músculo trapézio. Use o bisturi para fazer uma incisão longitudinal de aproximadamente um centímetro de profundidade onde o trapézio se reúne na linha média, em seguida, realizar uma dissecção contundente ao longo do corte longitudinal nos músculos usando uma combinação de fórceps cirúrgicos retos e curvados, que separarão as barrigas do trapézio e do músculo semi-revolucionário subjacente capitis biventer. Corte qualquer fibra muscular persistente com um bisturi e continue a realizar dissecção contundente até que o complexo se tornar visível.Mova-se ao longo do aspecto posterior do crânio e corte as origens dos músculos trapézio e semi-pinalis capitis biventer. Para separar os dois músculos longitudinalmente, use os fórceps cirúrgicos para realizar dissecção contundente até que o complexo semiespinhal capitis seja totalmente visível. Em seguida, use os retráteis auto-retentores para retrair os músculos trapézio e semi-pinalis capitis biventer.Use o bisturi para fazer uma incisão longitudinal de um centímetro de profundidade onde as barrigas do complexo semispinalis capitis se unem na linha média. Realize uma dissecção contundente usando fórceps cirúrgicos trabalhando ao longo do corte longitudinal entre as barrigas musculares até que tanto o atlas quanto o eixo sejam palpáveis. Mova-se ao longo do aspecto posterior do crânio, cortando as origens dos músculos semispinalis capitis complexus.Use o bisturi e a dissecção contundente para separar o músculo longitudinalmente das vértebras subjacentes, em seguida, use outro conjunto de retráculos auto-retentores para retrair os músculos semispinalis capitis complexus. Use um bisturi para remover cuidadosamente qualquer tecido remanescente sobrepondo a região onde o atlas encontra a base do crânio. Coloque um braço no pescoço do animal e um dedo na conjuntura do atlas e no crânio, em seguida, eleve simultaneamente a cabeça e flexione o pescoço enquanto palpating com o dedo para revelar a cisterna magna.Certifique-se de que uma pessoa eleva e flexiona a cabeça e o pescoço do animal enquanto a outra palpatiza para a cisterna magna, anotando sua localização anatômica. Introduza uma cânula de 22 bitola lentamente e cuidadosamente na cisterna magna através da dura dura em um ângulo oblíquo ao eixo longitudinal, em seguida, retraia a agulha da cânula e coloca uma tampa na fechadura. Comece com a aplicação de super cola e um acelerador onde a cânula entra no tecido, em seguida, aplique o cimento dentário.Espere cinco minutos para o cimento endurecer. Retire a tampa cuidadosamente da cânula. Conecte a cânula à extremidade masculina da linha IV com o rastreador usando uma extensão de 10 centímetros.Injete o rastreador lentamente a uma taxa de 100 microliters por minuto, à mão ou usando uma bomba de micro infusão. Remova a torneira da linha IV e substitua-a pela tampa. Verifique se o rastreador está visível pulsando na base da cânula.Em seguida, coloque sacos de areia sob o pescoço do animal para manter alguma flexão. Solte a cabeça e deixe o animal em uma posição propensa a repouso. Solte os retráteis de auto-retenção e substitua os músculos.Use os grampos cirúrgicos da toalha para unir a pele sobre os músculos. Primeiro use gaze e depois um cobertor para cobrir os grampos de toalha e a incisão para limitar a perda de calor. Permita que o rastreador circule pelo tempo desejado.Imagens macroscópicas costuradas da superfície dorsal do cérebro podem fornecer insights detalhados sobre os padrões de distribuição do rastreador através do sulci e fissuras. Imagens semelhantes das superfícies ventral e lateral do cérebro podem fornecer informações sobre a distribuição do rastreador no lobo temporal e na fissura lateral. Imagens da superfície cerebral de maior ampliação produzida usando um estereoscópio podem ajudar a visualizar o rastreador no PVS ao longo das artérias.As seções cerebrais coronal macroscópicas fornecem uma visão da profundidade da penetração do rastreador na distribuição e estrutura de traços interêmesféricos e interconóféricos, como o hipocampo e o estriado. A coloração imunohistoquímica para AQP4, proteína ácida fibrilar gliana e actina muscular lisa mostrou que o rastreador localizado dentro do PVS, bem como se mudou para o parenchyma cerebral. Os processos de pé astrócito que formam a superfície externa do PVS são identificados utilizando a coloração de proteína ácida AQP4 e fibrilar gliais.As células endoteliais que formam a superfície interna do PVS são manchadas usando lectina e mancha GLUT-1. A coloração de SMA identifica artérias e artérias e pode ser usada para mostrar que o fluxo de PVS ocorre ao longo das artérias em vez de veias, o que constitui a fisiologia básica da função glifática normal. Daqui para frente, esperamos explorar o sistema glifático em alta resolução em grandes mamíferos no contexto da neuropatologia, como derrame e lesão cerebral traumática.

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This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Crônica implantação de matriz Electrocorticographic todo-cortical no sagui comum

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset (Callithrix jacchus)

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset Callithrix jacchus

Cirurgia estereotástrica para implante de matrizes de microeletrodos no Marmoset comum (Callithrix jacchus)

Marmosets (Callithrix jacchus) are small non-human primates that are gaining popularity in biomedical and preclinical research, including the ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Dupla injeção direta de sangue na Cisterna Magna como modelo de hemorragia subaracnóide

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Abordagem Cirúrgica Estereotaxic para Microinpor o Tronco Cerebral Caudal e Medula Espinhal Cervical Superior através da Cisterna Magna em Camundongos

Stereotaxic surgery to target brain sites in mice is commonly guided by skull landmarks. Access is then obtained via burr holes drilled through the skull. ...

Pupillometry to Assess Auditory Sensation in Guinea Pigs

Pupilometria para Avaliar a Sensação Auditiva em Cobaias

Noise exposure is a leading cause of sensorineural hearing loss. Animal models of noise-induced hearing loss have generated mechanistic insight into the ...