Name: direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs
Uploaded: 2021-06-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs at JoVE.com

Эта работа была поддержана Фондом Кнута и Алисы Валленберг, Hjärnfonden, Wenner Gren Foundations и Фондом Crafoord.

Все процедуры были проведены в соответствии с Европейской директивой 2010/63/EU и были одобрены Этическим комитетом Мальмё-Лунда по исследованиям на животных (Dnr 5.8.18-05527/2019) и проведены в соответствии с руководящими принципами CODEX Шведского исследовательского совета.
1. Подгот?...

<ol>
	<li>Redzic, Z. B., Segal, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+choroid+plexus+and+the+physiology+of+the+choroid+plexus+epithelium.">The structure of the choroid plexus and the physiology of the choroid plexus epithelium.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 56 (12), 1695-1716 (2004).</li><li>Sakka, L., Coll, G., Chazal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+physiology+of+cerebrospinal+fluid.">Anatomy and physiology of cerebrospinal fluid.</a> European Annals of Otorhinolaryngology, Head and Neck Diseases. 128 (6), 309-316 (2011).</li><li>Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Garbage+truck+of+the+brain.">Garbage truck of the brain.</a> Science. 340 (6140), 1529-1530 (2013).</li><li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Paravascular+pathway+facilitates+csf+flow+through+the+brain+parenchyma+and+the+clearance+of+interstitial+solutes,+including+amyloid+B.">A Paravascular pathway facilitates csf flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid B.</a> Science Translational Medicine. 4 (147), (2012).</li><li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+drives+metabolite+clearance+from+the+Adult+Brain.">Sleep drives metabolite clearance from the Adult Brain.</a> Science. 342 (6156), 373-378 (2013).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4-dependent+glymphatic+solute+transport+in+the+rodent+brain.">Aquaporin-4-dependent glymphatic solute transport in the rodent brain.</a> eLife. 7, 40070 (2018).</li><li>Ringstad, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-wide+glymphatic+enhancement+and+clearance+in+humans+assessed+with+MRI.">Brain-wide glymphatic enhancement and clearance in humans assessed with MRI.</a> JCI Insight. 3 (13), 121537 (2018).</li><li>Lundgaard, I., Wang, W., Eberhardt, A., Vinitsky, H. S., Cameron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+low+alcohol+exposure,+but+adverse+effects+of+high+alcohol+intake+on+glymphatic+function.">Beneficial effects of low alcohol exposure, but adverse effects of high alcohol intake on glymphatic function.</a> Scientific Reports. , 1-16 (2018).</li><li>Munk, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDGF-B+is+required+for+development+of+the+glymphatic+system.">PDGF-B is required for development of the glymphatic system.</a> Cell Reports. 26 (11), 2955-2969 (2019).</li><li>Plog, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcranial+optical+imaging+reveals+a+pathway+for+optimizing+the+delivery+of+immunotherapeutics+to+the+brain.">Transcranial optical imaging reveals a pathway for optimizing the delivery of immunotherapeutics to the brain.</a> JCI Insight. 3 (20), 1-15 (2018).</li><li>Bechet, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+fluorescence+micrscopy+of+optically+cleared+brains+for+studying+the+glymphatic+system.">Light sheet fluorescence micrscopy of optically cleared brains for studying the glymphatic system.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (10), 1975-1986 (2020).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57378 (2018).</li><li>Ramos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisterna+magna+injection+in+rats+to+study+glymphatic+function.">Cisterna magna injection in rats to study glymphatic function.</a> Methods in Molecular Biology. 1938, (2019).</li><li>Sweeney, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+cerebrospinal+fluid+transport+through+the+intact+mouse+skull+using+fluorescence+macroscopy.">in vivo imaging of cerebrospinal fluid transport through the intact mouse skull using fluorescence macroscopy.</a> Journal of visualized experiments. (149), e59774 (2019).</li><li>Eide, P. K., Ringstad, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+with+intrathecal+MRI+gadolinium+contrast+medium+administration:+A+possible+method+to+assess+glymphatic+function+in+human+brain.">MRI with intrathecal MRI gadolinium contrast medium administration: A possible method to assess glymphatic function in human brain.</a> Acta Radiologica Open. 4 (11), 205846011560963 (2015).</li><li>Ringstad, G., Vatnehol, S. A. S., Eide, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+MRI+in+idiopathic+normal+pressure+hydrocephalus.">Glymphatic MRI in idiopathic normal pressure hydrocephalus.</a> Brain. 140 (10), 2691-2705 (2017).</li><li>Kornum, B. R., Knudsen, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+testing+of+pigs+(Sus+scrofa)+in+translational+biobehavioral+research.">Cognitive testing of pigs (Sus scrofa) in translational biobehavioral research.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 35 (3), 437-451 (2011).</li><li>B&#232;chet, N. B., Shanbhag, N. C., Lundgaard, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+function+in+the+gyrencephalic+brain.">Glymphatic function in the gyrencephalic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. , (2021).</li><li>Raghunandan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+flow+of+cerebrospinal+fluid+observed+in+periarterial+spaces+is+not+an+artifact+of+injection.">Bulk flow of cerebrospinal fluid observed in periarterial spaces is not an artifact of injection.</a> bioRxiv. , (2020).</li><li>D'Angelo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+fluid+collection+technique+from+the+atlanto-occipital+space+in+pigs.">Spinal fluid collection technique from the atlanto-occipital space in pigs.</a> Acta Veterinaria Brno. 78 (2), 303-305 (2009).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathologica. 137 (1), 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+EEG+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high EEG delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Science Advances. 5 (2), 5447 (2019).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+of+cerebrospinal+fluid+is+driven+by+arterial+pulsations+and+is+reduced+in+hypertension.">Flow of cerebrospinal fluid is driven by arterial pulsations and is reduced in hypertension.</a> Nature Communications. 9 (1), 4878 (2018).</li><li>Pleticha, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pig+lumbar+spine+anatomy+and+imaging-guided+lateral+lumbar+puncture:+A+new+large+animal+model+for+intrathecal+drug+delivery.">Pig lumbar spine anatomy and imaging-guided lateral lumbar puncture: A new large animal model for intrathecal drug delivery.</a> Journal of Neuroscience Methods. 216 (1), 10-15 (2013).</li></ol>

Здесь описан подробный протокол выполнения прямой канюляции cisterna magna у свиней, включающий необходимую подготовку, хирургическую процедуру, инфузию индикатора и извлечение из головного мозга. Для этого требуется кто-то с опытом и сертификацией для работы с крупными животными. При прави...

Спинномозговая жидкость (ликвор) представляет собой ультрафильтрат крови, который находится внутри и вокруг центральной нервной системы (ЦНС)1,2. Помимо придания плавучести мозгу или поглощения повреждающих механических сил, ликвор также играет ключевую роль в очистке метаболических отходов из ЦНС3. Очистка отходов облегчается недавно охарактеризованной глимфатической системой, которая позволяет конвективному потоку ликвора через паренхиму мозга через периваскулярные пространства (PVS), которые окружают проникающие артерии3,4,5. Было показано, что этот процесс зависит от аквапорина-4 (AQP4), водного канала, экспрессируемого главным образом на астроцитарном конце, связанном с PVS4,6. Исследование глимфатической системы достигается с помощью визуализации in vivo и ex vivo с использованием либо усовершенствованной световой микроскопии, либо магнитно-резонансной томографии (МРТ) после введения флуоресцентного/радиоактивного индикатора или контрастного вещества в CSF7,8,9,10,11.
Эффективным способом введения индикатора в ликвор без повреждения паренхимы головного мозга является канюляция cisterna magna (CMc)12,13. Подавляющее большинство всех глимфатических исследований до сих пор проводилось на грызунах и избегалось у высших млекопитающих из-за инвазивности CMc в сочетании с практической простотой работы с мелким млекопитающим. Кроме того, тонкие черепа мышей позволяют проводить визуализацию in vivo без необходимости в краниальном окне и впоследствии позволяют проводить неосложненную экстракцию мозга11,14. Эксперименты, проведенные на людях, дали ценные макроскопические данные in vivo о глимфатической функции, но опирались на инъекции интратекального индикатора в дистальный поясничный отдел позвоночника и, кроме того, использовали МРТ, которая не дает достаточного разрешения для захвата микроанатомии глимфатической системы7,15,16 . Понимание архитектуры и масштабов глимфатической системы у высших млекопитающих имеет важное значение для ее передачи людям. Чтобы облегчить глимфатическую трансляцию людям, важно применять методы, которые проводятся у грызунов, к высшим млекопитающим, чтобы можно было проводить прямые сравнения глимфатической системы между видами с возрастающим познанием и сложностью мозга17. Мозг свиньи и человека гиренцефален, обладая складчатой нейроархитектурой, в то время как мозг грызунов лиссенцефален, тем самым имея существенные различия между собой. С точки зрения общего размера, мозг свиньи также более сопоставим с человеческим, будучи в 10-15 раз меньше, чем человеческий мозг, в то время как мозг мыши в 3000 раз меньше18. Благодаря лучшему пониманию глимфатической системы у крупных млекопитающих, можно будет использовать глимфатическую систему человека для будущего терапевтического вмешательства в таких состояниях, как инсульт, черепно-мозговая травма и нейродегенерация. Прямой CMc у свиней in vivo - это метод, который позволяет проводить световую микроскопию с высоким разрешением глимфатической системы у более высокого млекопитающего. Кроме того, из-за размера используемых свиней можно применять системы мониторинга, аналогичные тем, которые используются в операциях на людях, что позволяет жестко документировать и регулировать жизненно важные функции, чтобы оценить, как они способствуют глимфатической функции.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.01% azide in PBS</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G needle</td>
			<td>Mediq</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>FischerSci</td>
			<td>15849152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anatomical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin Alexa-Fluor 647 Conjugate</td>
			<td>ThermoFischer</td>
			<td>A34785</td>
			<td>2 vials (10mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chisel</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-8870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cement</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>7508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>compact saw</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-9517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hammer</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-7694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insta-Set CA Accelerator</td>
			<td>BSI-Inc</td>
			<td>BSI-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV line TAP, 3-WAYS with 10cm extension</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker pen</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliQ water</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCL</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 20 scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 21 Scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 4 Scalpel handle</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salmon knife</td>
			<td>Fiskers</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-retaining retractors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical curved scissors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel clamps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs

Глимфатическая система представляет собой систему очистки отходов в мозге, которая зависит от потока спинномозговой жидкости (CSF) в периваскулярных пространствах, связанных с астроцитами, и участвует в клиренсе нейротоксических пептидов, таких как бета-амилоид. Нарушение глимфатической функции усугубляет патологию заболевания на животных моделях нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, что подчеркивает важность понимания этой системы клиренса. Глимфатическая система часто изучается с помощью cisterna magna cannulations (CMc), где индикаторы доставляются непосредственно в спинномозговую жидкость (CSF). Большинство исследований, однако, были проведены на грызунах. Здесь мы демонстрируем адаптацию техники CMc у свиней. Используя CMc у свиней, глимфатическая система может быть изучена с высоким оптическим разрешением в гиренцефальном мозге и при этом преодолевает разрыв в знаниях между грызунами и человеческими глимфатиками.

Как только свинья теряет сознание, ее пальпируют, и ее поверхностная анатомия отмечается, начиная с затылочного гребня (OC) и работая в направлении грудных позвонков (TV) и каждого основания уха (EB). Именно по этим линиям делаются дермальные разрезы (рисунок 1А). Три мышечных ...

Watch this Scientific Journal Video about Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs at JoVE.com

Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

В данной статье представлен пошаговый протокол прямой имплантации канюли в цистерну свиней.

Прямая имплантация канюли в Cisterna Magna свиней

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

Этот протокол важен, поскольку он позволяет исследовать глимфатическую систему у крупного млекопитающего, тем самым приближая нас к пониманию глимфатической системы у людей. У этой техники есть два преимущества. Введение следов в цистерну magna позволяет избежать какого-либо прямого повреждения головного мозга, что контрастирует с внутрижелудочковыми инъекциями.Во-вторых, это прямой подход, который позволяет немедленно визуализировать каннуляцию и знать, была ли она успешной или нет. Начните с того, что поместите свинью в положение лежа. Пальпируйте затылок и шею, чтобы найти и отметить затылочный гребень, позвоночник первых грудных позвонков и основание каждого уха.Проведите прямую линию между гребнем и позвонками вдоль продольной оси. Затем, следуя за основанием черепа, нарисуйте две линии от гребня до основания каждого уха. Осторожно зажмите хвост животного и следите за рефлексом, чтобы увидеть, находится ли оно в глубоком сне.Начните с того, что сделайте дермальный разрез вдоль продольной линии вниз до мышцы с помощью скальпеля с лезвием no 21, затем вытяните два перпендикулярных разреза дальше вдоль плеч, каждый от 10 до 15 сантиметров в длину. Начиная с затылочного гребня, делайте дермальные разрезы по линии вплоть до основания каждого уха. Используйте анатомические щипцы, чтобы захватить уголки кожи, образованные на затылочном гребне, затем слегка проведите лезвием скальпеля по фасции, чтобы отделить кожу от нижележащей мышцы.Резекция кожи вдоль каждого из пяти разрезов для визуализации частей трапециевидной мышцы. Используйте скальпель, чтобы сделать продольный разрез глубиной примерно один сантиметр, где трапеция собирается вместе на средней линии, затем выполните тупое рассечение вдоль продольного разреза в мышцах, используя комбинацию прямых и изогнутых хирургических щипцов, которые разделят живот трапеции и лежащую в основе полуспиналистическую мышцу capitis biventer. Отрежьте скальпелем любые сохранившиеся мышечные волокна и продолжайте выполнять тупое рассечение до тех пор, пока не станет виден полуспиналистический комплекс капита.Двигайтесь вдоль заднего аспекта черепа и разрывайте истоки трапециевидных и полуспиналисных мышц капита бивентерных мышц. Чтобы разделить две мышцы продольно, используйте хирургические щипцы для выполнения тупого рассечения до тех пор, пока полуспиналисный комплекс капита не будет полностью виден. Затем используйте самоудерживающиеся ретракторы для втягивания трапециевидных и полуспиналисных мышц капита бивентеров.Используйте скальпель, чтобы сделать продольный разрез глубиной в один сантиметр, где животы полуспиналистического комплекса капита собираются вместе по средней линии. Выполните тупое рассечение с помощью хирургических щипцов, работающих вдоль продольного разреза между мышечными животами до тех пор, пока атлас и ось не станут ощутимыми. Двигайтесь вдоль заднего аспекта черепа, разрывая истоки полуспиналисных мышц capitis complexus.Используйте скальпель и тупое рассечение, чтобы отделить мышцу продольно от нижележащих позвонков, затем используйте другой набор самоудерживающихся ретракторов для втягивания мышц полуспиналисного комплекса капита. Используйте скальпель, чтобы аккуратно удалить любую оставшуюся ткань, покрывающую область, где атлас встречается с основанием черепа. Поместите одну руку на шею животного и один палец на стыке атласа и черепа, затем одновременно поднимите голову и согните шею, пальпируя пальцем, чтобы открыть cisterna magna.Убедитесь, что один человек поднимает и сгибает голову и шею животного, в то время как другой пальпирует для cisterna magna, отмечая его анатомическое местоположение. Медленно и осторожно введите канюлю 22 калибра в цистерну magna через твердую мозговую оболочку под углом, наклоненным к продольной оси, затем вытяните иглу из канюли и поместите колпачок на замок. Начните с нанесения суперклея и ускорителя, где канюля попадает в ткани, затем нанесите зубной цемент.Подождите пять минут, пока цемент затвердеет. Аккуратно снимите колпачок с канюли. Прикрепите канюлю к мужскому концу линии IV с помощью трассера с помощью 10-сантиметрового расширения.Вводите индикатор медленно со скоростью 100 микролитров в минуту либо вручную, либо с помощью микроинфузионного насоса. Снимите кран линии IV и замените его колпачком. Проверьте, виден ли трассер пульсирующим у основания канюли.Затем поместите мешки с песком под шею животного, чтобы сохранить некоторое сгибание. Отпустите голову и оставьте животное в положении лежа. Отпустите самоудерживающиеся ретракторы и замените мышцы.Используйте хирургические зажимы для полотенец, чтобы сблизить кожу над мышцами. Сначала используйте марлю, а затем одеяло, чтобы покрыть зажимы полотенца и разрез, чтобы ограничить потери тепла. Позвольте индикатору циркулировать в течение нужного количества времени.Сшитые макроскопические изображения спинной поверхности мозга могут дать подробное представление о паттернах распределения индикатора по бороздам и трещинам. Подобные изображения с вентральной и боковой поверхностей мозга могут предоставить информацию о распределении индикатора в височной доле и боковой трещине. Изображения поверхности мозга с более высоким увеличением, полученные с помощью стереоскопа, могут помочь визуализировать индикатор в PVS вдоль артерий.Макроскопические корональные участки мозга дают представление о глубине проникновения индикаторов в межполушарные трещины и распределение и структуру подкорковых индикаторов, таких как гиппокамп и полосатое тело. Иммуногистохимическое окрашивание для AQP4, глиального фибриллярного кислого белка и актина гладких мышц показало, что индикатор локализуется внутри PVS, а также перемещается в паренхиму головного мозга. Астроцитарные ножные отростки, образующие внешнюю поверхность PVS, идентифицируются с помощью AQP4 и глиального фибриллярного кислого белкового окрашивания.Эндотелиальные клетки, которые образуют внутреннюю поверхность PVS, окрашиваются с помощью лектина и пятна GLUT-1. Окрашивание СМА идентифицирует артерии и артериолы и может быть использовано, чтобы показать, что приток PVS происходит вдоль артерий, а не вен, что составляет основную физиологию нормальной глимфатической функции. Забегая вперед, мы надеемся исследовать глимфатическую систему с высоким разрешением у крупных млекопитающих в контексте невропатологии, такой как инсульт и черепно-мозговая травма.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

Позиционирование электродов и монтаж в Транскраниальная постоянного тока стимуляции

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

Мультимодальные изображений имплантации стволовых клеток в центральной нервной системе мышей

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Прямая Внутрижелудочковая поставке лекарственных препаратов грызунов центральной нервной системы

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents

Канюля имплантации в Чистерна Magna грызунов

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

Ламинэктомия и имплантация окна спинного мозга в мыши

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Хронический имплантации целом корковых Electrocorticographic массива в общей игрунка

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset (Callithrix jacchus)

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset Callithrix jacchus

Стереотаксическая хирургия для имплантации микроэлектродных массивов в общем Мармосете (Callithrix jacchus)

Marmosets (Callithrix jacchus) are small non-human primates that are gaining popularity in biomedical and preclinical research, including the ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Двойная прямая инъекция крови в Цистерна Магна как модель субарахноидового кровоизлияния

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Стереотаксический хирургический подход к микроинъекции каудального ствола головного и верхнего шейного отдела спинного мозга через Cisterna Magna у мышей

Stereotaxic surgery to target brain sites in mice is commonly guided by skull landmarks. Access is then obtained via burr holes drilled through the skull. ...

Pupillometry to Assess Auditory Sensation in Guinea Pigs

Пупиллометрия для оценки слуховых ощущений у морских свинок

Noise exposure is a leading cause of sensorineural hearing loss. Animal models of noise-induced hearing loss have generated mechanistic insight into the ...