Name: direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs
Uploaded: 2021-06-09T15:00:00
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Este trabajo fue apoyado por la Fundación Knut y Alice Wallenberg, Hjärnfonden, las Fundaciones Wenner Gren y la Fundación Crafoord.

Todos los procedimientos se llevaron a cabo de acuerdo con la directiva europea 2010/63/UE y fueron aprobados por el Comité Ético de Investigación Animal de Malmö-Lund (Dnr 5.8.18-05527/2019) y se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices del CODEX del Consejo de Investigación de Suecia.
1. Preparación
<ol><li>Trazador<ol>
<li>Preparar LCR artificial (126 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM glucosa, 26 mM ...

<ol>
	<li>Redzic, Z. B., Segal, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+choroid+plexus+and+the+physiology+of+the+choroid+plexus+epithelium.">The structure of the choroid plexus and the physiology of the choroid plexus epithelium.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 56 (12), 1695-1716 (2004).</li><li>Sakka, L., Coll, G., Chazal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+physiology+of+cerebrospinal+fluid.">Anatomy and physiology of cerebrospinal fluid.</a> European Annals of Otorhinolaryngology, Head and Neck Diseases. 128 (6), 309-316 (2011).</li><li>Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Garbage+truck+of+the+brain.">Garbage truck of the brain.</a> Science. 340 (6140), 1529-1530 (2013).</li><li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Paravascular+pathway+facilitates+csf+flow+through+the+brain+parenchyma+and+the+clearance+of+interstitial+solutes,+including+amyloid+B.">A Paravascular pathway facilitates csf flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid B.</a> Science Translational Medicine. 4 (147), (2012).</li><li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+drives+metabolite+clearance+from+the+Adult+Brain.">Sleep drives metabolite clearance from the Adult Brain.</a> Science. 342 (6156), 373-378 (2013).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4-dependent+glymphatic+solute+transport+in+the+rodent+brain.">Aquaporin-4-dependent glymphatic solute transport in the rodent brain.</a> eLife. 7, 40070 (2018).</li><li>Ringstad, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-wide+glymphatic+enhancement+and+clearance+in+humans+assessed+with+MRI.">Brain-wide glymphatic enhancement and clearance in humans assessed with MRI.</a> JCI Insight. 3 (13), 121537 (2018).</li><li>Lundgaard, I., Wang, W., Eberhardt, A., Vinitsky, H. S., Cameron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+low+alcohol+exposure,+but+adverse+effects+of+high+alcohol+intake+on+glymphatic+function.">Beneficial effects of low alcohol exposure, but adverse effects of high alcohol intake on glymphatic function.</a> Scientific Reports. , 1-16 (2018).</li><li>Munk, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDGF-B+is+required+for+development+of+the+glymphatic+system.">PDGF-B is required for development of the glymphatic system.</a> Cell Reports. 26 (11), 2955-2969 (2019).</li><li>Plog, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcranial+optical+imaging+reveals+a+pathway+for+optimizing+the+delivery+of+immunotherapeutics+to+the+brain.">Transcranial optical imaging reveals a pathway for optimizing the delivery of immunotherapeutics to the brain.</a> JCI Insight. 3 (20), 1-15 (2018).</li><li>Bechet, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+fluorescence+micrscopy+of+optically+cleared+brains+for+studying+the+glymphatic+system.">Light sheet fluorescence micrscopy of optically cleared brains for studying the glymphatic system.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (10), 1975-1986 (2020).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57378 (2018).</li><li>Ramos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisterna+magna+injection+in+rats+to+study+glymphatic+function.">Cisterna magna injection in rats to study glymphatic function.</a> Methods in Molecular Biology. 1938, (2019).</li><li>Sweeney, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+cerebrospinal+fluid+transport+through+the+intact+mouse+skull+using+fluorescence+macroscopy.">in vivo imaging of cerebrospinal fluid transport through the intact mouse skull using fluorescence macroscopy.</a> Journal of visualized experiments. (149), e59774 (2019).</li><li>Eide, P. K., Ringstad, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+with+intrathecal+MRI+gadolinium+contrast+medium+administration:+A+possible+method+to+assess+glymphatic+function+in+human+brain.">MRI with intrathecal MRI gadolinium contrast medium administration: A possible method to assess glymphatic function in human brain.</a> Acta Radiologica Open. 4 (11), 205846011560963 (2015).</li><li>Ringstad, G., Vatnehol, S. A. S., Eide, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+MRI+in+idiopathic+normal+pressure+hydrocephalus.">Glymphatic MRI in idiopathic normal pressure hydrocephalus.</a> Brain. 140 (10), 2691-2705 (2017).</li><li>Kornum, B. R., Knudsen, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+testing+of+pigs+(Sus+scrofa)+in+translational+biobehavioral+research.">Cognitive testing of pigs (Sus scrofa) in translational biobehavioral research.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 35 (3), 437-451 (2011).</li><li>B&#232;chet, N. B., Shanbhag, N. C., Lundgaard, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+function+in+the+gyrencephalic+brain.">Glymphatic function in the gyrencephalic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. , (2021).</li><li>Raghunandan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+flow+of+cerebrospinal+fluid+observed+in+periarterial+spaces+is+not+an+artifact+of+injection.">Bulk flow of cerebrospinal fluid observed in periarterial spaces is not an artifact of injection.</a> bioRxiv. , (2020).</li><li>D'Angelo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+fluid+collection+technique+from+the+atlanto-occipital+space+in+pigs.">Spinal fluid collection technique from the atlanto-occipital space in pigs.</a> Acta Veterinaria Brno. 78 (2), 303-305 (2009).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathologica. 137 (1), 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+EEG+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high EEG delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Science Advances. 5 (2), 5447 (2019).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+of+cerebrospinal+fluid+is+driven+by+arterial+pulsations+and+is+reduced+in+hypertension.">Flow of cerebrospinal fluid is driven by arterial pulsations and is reduced in hypertension.</a> Nature Communications. 9 (1), 4878 (2018).</li><li>Pleticha, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pig+lumbar+spine+anatomy+and+imaging-guided+lateral+lumbar+puncture:+A+new+large+animal+model+for+intrathecal+drug+delivery.">Pig lumbar spine anatomy and imaging-guided lateral lumbar puncture: A new large animal model for intrathecal drug delivery.</a> Journal of Neuroscience Methods. 216 (1), 10-15 (2013).</li></ol>

A continuación, se describe, un protocolo detallado para realizar la canulación directa de la cisterna magna en cerdos, incluyendo la preparación necesaria, procedimiento quirúrgico, infusión trazadora y extracción del cerebro. Esto requiere de alguien con experiencia y certificación para trabajar con animales grandes. Si se lleva a cabo correctamente, esto permite la entrega de moléculas deseadas con garantía directamente en el LCR, después de lo cual se pueden utilizar una serie de diferentes modalidades avan...

El líquido cefalorraquídeo (LCR) es un ultrafiltrato de sangre que se encuentra dentro y alrededor del sistema nervioso central (SNC)1,2. Además de dar flotabilidad al cerebro o absorber fuerzas mecánicas dañinas, el LCR también juega un papel fundamental en la eliminación de desechos metabólicos del SNC3. La eliminación de residuos se ve facilitada por el sistema glinfático recientemente caracterizado que permite el flujo convectivo del LCR a través del parénquima cerebral a través de los espacios perivasculares (PVS), que rodean las arterias penetrantes3,4,5. Se ha demostrado que este proceso depende de la acuaporina-4 (AQP4), un canal de agua expresado principalmente en los extremos astrocíticos, unido al PVS4,6. El estudio del sistema glinfático se realiza mediante imágenes tanto in vivo como ex vivo, utilizando microscopía de luz avanzada o resonancia magnética (RM), tras la introducción de un marcador fluorescente/radiactivo o agente de contraste en el LCR7,8,9,10,11.
Una forma eficaz de introducir un trazador en el LCR sin sufrir daños en el parénquima cerebral es a través de la cánulación cisterna magna (CMc)12,13. Una gran mayoría de todos los estudios glinfáticos, hasta ahora se han llevado a cabo en roedores y se han evitado en mamíferos superiores debido a la invasividad de CMc junto con la simplicidad práctica de trabajar con un mamífero pequeño. Además, los delgados cráneos de ratones permiten la obtención de imágenes in vivo sin necesidad de una ventana craneal y, posteriormente, permiten una extracción cerebral sin complicaciones11,14. Los experimentos realizados en humanos han arrojado valiosos datos macroscópicos in vivo sobre la función glinfática, pero se han basado en inyecciones de trazadores intratecales en la columna lumbar distal y, además, utilizan resonancia magnética que no produce la resolución suficiente para capturar la microanatomía del sistema glinfático7,15,16 . Comprender la arquitectura y la extensión del sistema glinfático en mamíferos superiores es esencial para su traducción a los humanos. Para facilitar la traducción glinfática a los seres humanos, es importante aplicar técnicas que se llevan a cabo en roedores a mamíferos superiores para permitir comparaciones directas del sistema glinfático entre especies de creciente cognición y complejidad cerebral17. Los cerebros de cerdos y humanos son giroencefálicos, poseen una neuroarquitectura plegada, mientras que los cerebros de roedores son lisencefálicos, por lo que tienen una diferencia sustancial entre sí. En términos del tamaño total, los cerebros de cerdo son, también, más comparables a los humanos, siendo 10-15 veces más pequeños que el cerebro humano, mientras que los cerebros de ratón son 3.000 veces más pequeños18. Al comprender mejor el sistema glinfático en grandes mamíferos, puede ser posible utilizar el sistema glinfático humano para futuras intervenciones terapéuticas en afecciones como accidente cerebrovascular, lesión cerebral traumática y neurodegeneración. CMc directo en cerdos in vivo es un método que permite la microscopía de luz de alta resolución del sistema glinfático en un mamífero superior. Además, debido al tamaño de los cerdos utilizados, es posible aplicar sistemas de monitoreo similares a los utilizados en cirugías humanas, lo que hace posible documentar y regular estrechamente las funciones vitales para evaluar cómo estas contribuyen a la función glinfática.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.01% azide in PBS</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G needle</td>
			<td>Mediq</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>FischerSci</td>
			<td>15849152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anatomical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin Alexa-Fluor 647 Conjugate</td>
			<td>ThermoFischer</td>
			<td>A34785</td>
			<td>2 vials (10mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chisel</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-8870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cement</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>7508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>compact saw</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-9517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hammer</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-7694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insta-Set CA Accelerator</td>
			<td>BSI-Inc</td>
			<td>BSI-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV line TAP, 3-WAYS with 10cm extension</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker pen</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliQ water</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCL</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 20 scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 21 Scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 4 Scalpel handle</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salmon knife</td>
			<td>Fiskers</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-retaining retractors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical curved scissors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel clamps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs

El sistema glinfático es un sistema de eliminación de desechos en el cerebro que depende del flujo de líquido cefalorraquídeo (LCR) en espacios perivasculares unidos a astrocitos y se ha implicado en el aclaramiento de péptidos neurotóxicos como la beta amiloide. La función glinfática deteriorada exacerba la patología de la enfermedad en modelos animales de enfermedades neurodegenerativas, como el Alzheimer, lo que destaca la importancia de comprender este sistema de eliminación. El sistema glinfático a menudo se estudia mediante cánulaciones de cisterna magna (CMc), donde los trazadores se administran directamente en el líquido cefalorraquídeo (LCR). La mayoría de los estudios, sin embargo, se han llevado a cabo en roedores. Aquí, demostramos una adaptación de la técnica CMc en cerdos. Usando CMc en cerdos, el sistema glinfático se puede estudiar a una alta resolución óptica en cerebros giroencefálicos y, al hacerlo, cierra la brecha de conocimiento entre los roedores y los glinfáticos humanos.

Una vez que el cerdo está inconsciente, se palpa y se marca su anatomía superficial, comenzando en la cresta occipital (OC) y trabajando hacia las vértebras torácicas (TV) y cada base de la oreja (EB). Es en esta línea que se realizan las incisiones dérmicas (Figura 1A). Las tres capas musculares que incluyen trapecio, semiespinalis capitus biventer y semiespinalis capitus complexus son resecadas y mantenidas abiertas por dos conjuntos de retractores autocontenedores para exponer la ci...

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Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

Este artículo presenta un protocolo paso a paso para la implantación directa de cánulas en la cisterna magna de cerdos.

Implantación directa de cánula en la Cisterna Magna de Cerdos

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

Este protocolo es importante ya que permite la investigación del sistema glinfático en un mamífero grande, lo que nos acerca a la comprensión del sistema glinfático en humanos. Hay dos ventajas en esta técnica. La introducción de rastros en la cisterna magna evita cualquier daño directo al cerebro, lo que contrasta con las inyecciones intraventriculares.En segundo lugar, se trata de un enfoque directo que permite la visualización inmediata de la canulación y saber si ha tenido éxito o no. Comience colocando al cerdo en una posición prona. Palpar la parte posterior de la cabeza y el cuello para localizar y marcar la cresta occipital, la columna vertebral de las primeras vértebras torácicas y la base de cada oreja.Dibuja una línea recta entre la cresta y las vértebras a lo largo del eje longitudinal. Luego, siguiendo la base del cráneo, dibuje dos líneas desde la cresta hasta la base de cada oreja. Sujete con cuidado la cola del animal y observe si hay un reflejo para ver si está en un sueño profundo.Comience haciendo una incisión dérmica a lo largo de la línea longitudinal hasta el músculo usando un bisturí con una cuchilla número 21, luego extienda dos incisiones perpendiculares a lo largo de los hombros, cada una de 10 a 15 centímetros de longitud. A partir de la cresta occipital, haga incisiones dérmicas a lo largo de la línea hasta la base de cada oreja. Use fórceps anatómicos para agarrar las esquinas de la piel formadas en la cresta occipital, luego pase la hoja del bisturí ligeramente sobre la fascia para separar la piel del músculo subyacente.Reseque la piel a lo largo de cada una de las cinco incisiones para visualizar partes del músculo trapecio. Use el bisturí para hacer una incisión longitudinal de aproximadamente un centímetro de profundidad donde el trapecio se une en la línea media, luego realice una disección contundente a lo largo del corte longitudinal en los músculos utilizando una combinación de pinzas quirúrgicas rectas y curvas, que separarán los vientres del trapecio y el músculo semiespinal de capitis bíter subyacente. Corte cualquier fibra muscular persistente con un bisturí y continúe realizando una disección contundente hasta que el complejo de capitis semiespinal se haga visible.Muévete a lo largo de la cara posterior del cráneo y corta los orígenes de los músculos trapecio y semiespinalis capitis biventer. Para separar los dos músculos longitudinalmente, use las pinzas quirúrgicas para realizar una disección roma hasta que el complejo de capitis semiespinal sea completamente visible. Luego use los retractores autocontenedores para retraer los músculos trapecio y semiespinalis capitis biventer.Use el bisturí para hacer una incisión longitudinal de un centímetro de profundidad donde los vientres del semiespinalis capitis complexus se unen en la línea media. Realice una disección contundente utilizando pinzas quirúrgicas trabajando a lo largo del corte longitudinal entre los vientres musculares hasta que tanto el atlas como el eje sean palpables. Muévase a lo largo de la cara posterior del cráneo, cortando los orígenes de los músculos semiespinales de la capitis compleja.Use el bisturí y la disección roma para separar el músculo longitudinalmente de las vértebras subyacentes, luego use otro conjunto de retractores autocontenedores para retraer los músculos semiespinalis capitis complexus. Use un bisturí para eliminar cuidadosamente cualquier tejido restante que cubra la región donde el atlas se encuentra con la base del cráneo. Coloque un brazo sobre el cuello del animal y un dedo en la unión del atlas y el cráneo, luego eleve simultáneamente la cabeza y flexione el cuello mientras palpa con el dedo para revelar la cisterna magna.Asegúrese de que una persona eleve y flexione la cabeza y el cuello del animal mientras que la otra palpa para la cisterna magna, tomando nota de su ubicación anatómica. Introduzca una cánula de calibre 22 lenta y cuidadosamente en la cisterna magna a través de la duramadre en un ángulo oblicuo al eje longitudinal, luego retraiga la aguja de la cánula y coloque una tapa en la cerradura. Comience con la aplicación de súper pegamento y un acelerador donde la cánula ingresa al tejido, luego aplique el cemento dental.Espere cinco minutos para que el cemento se endurezca. Retire la tapa con cuidado de la cánula. Conecte la cánula al extremo masculino del grifo de la línea IV con el trazador utilizando una extensión de 10 centímetros.Inyecte el trazador lentamente a una velocidad de 100 microlitros por minuto, ya sea a mano o utilizando una bomba de micro infusión. Retire el grifo de la línea IV y reemplácelo con la tapa. Compruebe si el trazador es visible pulsando en la base de la cánula.Luego coloque sacos de arena debajo del cuello del animal para mantener cierta flexión. Suelte la cabeza y deje al animal en una posición prona en reposo. Suelte los retractores autocontenetivos y reemplace los músculos.Use las pinzas de toalla quirúrgicas para unir la piel sobre los músculos. Primero use una gasa y luego una manta para cubrir las abrazaderas de la toalla y la incisión para limitar la pérdida de calor. Permita que el trazador circule durante el tiempo deseado.Las imágenes macroscópicas cosidas de la superficie dorsal del cerebro pueden proporcionar información detallada sobre los patrones de distribución del trazador a través de los surcos y fisuras. Imágenes similares de las superficies ventral y lateral del cerebro pueden proporcionar información sobre la distribución del trazador en el lóbulo temporal y la fisura lateral. Las imágenes de la superficie cerebral de mayor aumento producidas con un estereoscopio pueden ayudar a visualizar el marcador en el PVS a lo largo de las arterias.Las secciones macroscópicas del cerebro coronal proporcionan información sobre la profundidad de la penetración del trazador en la fisura interhemisférica y la distribución y estructura del trazador subcortical, como el hipocampo y el cuerpo estriado. La tinción inmunohistoquímica para AQP4, la proteína ácida fibrilar glial y la actina del músculo liso mostraron que el marcador se localizó dentro del PVS, así como se trasladó al parénquima cerebral. Los procesos del pie de astrocito que forman la superficie externa del PVS se identifican utilizando AQP4 y tinción de proteína ácida fibrilar glial.Las células endoteliales que forman la superficie interna del PVS se tiñen con lectina y tinción GLUT-1. La tinción de AME identifica arterias y arteriolas y se puede usar para mostrar que la afluencia de PVS ocurre a lo largo de las arterias en lugar de las venas, lo que constituye la fisiología básica de la función glinfática normal. En el futuro, esperamos explorar el sistema glinfático a alta resolución en grandes mamíferos en el contexto de la neuropatología como el accidente cerebrovascular y la lesión cerebral traumática.

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Laminectomía e implantación de la ventana de la médula espinal en el ratón

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Implantación crónica de todo cortical matriz electrocorticográfica en el tití común

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset (Callithrix jacchus)

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset Callithrix jacchus

Cirugía estereotaxia para la implantación de matrices de microelectrodos en el Marmoset común (Jacchus Callithrix)

Marmosets (Callithrix jacchus) are small non-human primates that are gaining popularity in biomedical and preclinical research, including the ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Doble inyección directa de sangre en la Cisterna Magna como modelo de hemorragia subaracnoidea

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Abordaje quirúrgico estereotáxico para microinyectar el tronco encefálico caudal y la médula espinal cervical superior a través de la Cisterna Magna en ratones

Stereotaxic surgery to target brain sites in mice is commonly guided by skull landmarks. Access is then obtained via burr holes drilled through the skull. ...

Pupillometry to Assess Auditory Sensation in Guinea Pigs

Pupilometría para evaluar la sensación auditiva en cobayas

Noise exposure is a leading cause of sensorineural hearing loss. Animal models of noise-induced hearing loss have generated mechanistic insight into the ...