Name: direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs
Uploaded: 2021-06-09T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs at JoVE.com

Bu çalışma Knut ve Alice Wallenberg Vakfı, Hjärnfonden, Wenner Gren Vakıfları ve Crafoord vakfı tarafından desteklendi.

Tüm prosedürler Avrupa direktifi 2010/63/EU uyarınca gerçekleştirilmiş ve Malmö-Lund Hayvan Araştırmaları Etik Komitesi (Dnr 5.8.18-05527/2019) tarafından onaylanmış ve İsveç Araştırma Konseyi'nin CODEX yönergelerine göre yürütülmüştür.
1. Hazırlık
<ol><li>Izleyici<ol>
<li>Yapay CSF (126 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM glikoz, 26 mM NaHCO3; pH 7,4) hazırlayın</li>
		<li>500...

<ol>
	<li>Redzic, Z. B., Segal, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+choroid+plexus+and+the+physiology+of+the+choroid+plexus+epithelium.">The structure of the choroid plexus and the physiology of the choroid plexus epithelium.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 56 (12), 1695-1716 (2004).</li><li>Sakka, L., Coll, G., Chazal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+physiology+of+cerebrospinal+fluid.">Anatomy and physiology of cerebrospinal fluid.</a> European Annals of Otorhinolaryngology, Head and Neck Diseases. 128 (6), 309-316 (2011).</li><li>Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Garbage+truck+of+the+brain.">Garbage truck of the brain.</a> Science. 340 (6140), 1529-1530 (2013).</li><li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Paravascular+pathway+facilitates+csf+flow+through+the+brain+parenchyma+and+the+clearance+of+interstitial+solutes,+including+amyloid+B.">A Paravascular pathway facilitates csf flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid B.</a> Science Translational Medicine. 4 (147), (2012).</li><li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+drives+metabolite+clearance+from+the+Adult+Brain.">Sleep drives metabolite clearance from the Adult Brain.</a> Science. 342 (6156), 373-378 (2013).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-4-dependent+glymphatic+solute+transport+in+the+rodent+brain.">Aquaporin-4-dependent glymphatic solute transport in the rodent brain.</a> eLife. 7, 40070 (2018).</li><li>Ringstad, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-wide+glymphatic+enhancement+and+clearance+in+humans+assessed+with+MRI.">Brain-wide glymphatic enhancement and clearance in humans assessed with MRI.</a> JCI Insight. 3 (13), 121537 (2018).</li><li>Lundgaard, I., Wang, W., Eberhardt, A., Vinitsky, H. S., Cameron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+low+alcohol+exposure,+but+adverse+effects+of+high+alcohol+intake+on+glymphatic+function.">Beneficial effects of low alcohol exposure, but adverse effects of high alcohol intake on glymphatic function.</a> Scientific Reports. , 1-16 (2018).</li><li>Munk, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDGF-B+is+required+for+development+of+the+glymphatic+system.">PDGF-B is required for development of the glymphatic system.</a> Cell Reports. 26 (11), 2955-2969 (2019).</li><li>Plog, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcranial+optical+imaging+reveals+a+pathway+for+optimizing+the+delivery+of+immunotherapeutics+to+the+brain.">Transcranial optical imaging reveals a pathway for optimizing the delivery of immunotherapeutics to the brain.</a> JCI Insight. 3 (20), 1-15 (2018).</li><li>Bechet, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+sheet+fluorescence+micrscopy+of+optically+cleared+brains+for+studying+the+glymphatic+system.">Light sheet fluorescence micrscopy of optically cleared brains for studying the glymphatic system.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 40 (10), 1975-1986 (2020).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57378 (2018).</li><li>Ramos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cisterna+magna+injection+in+rats+to+study+glymphatic+function.">Cisterna magna injection in rats to study glymphatic function.</a> Methods in Molecular Biology. 1938, (2019).</li><li>Sweeney, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=in+vivo+imaging+of+cerebrospinal+fluid+transport+through+the+intact+mouse+skull+using+fluorescence+macroscopy.">in vivo imaging of cerebrospinal fluid transport through the intact mouse skull using fluorescence macroscopy.</a> Journal of visualized experiments. (149), e59774 (2019).</li><li>Eide, P. K., Ringstad, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+with+intrathecal+MRI+gadolinium+contrast+medium+administration:+A+possible+method+to+assess+glymphatic+function+in+human+brain.">MRI with intrathecal MRI gadolinium contrast medium administration: A possible method to assess glymphatic function in human brain.</a> Acta Radiologica Open. 4 (11), 205846011560963 (2015).</li><li>Ringstad, G., Vatnehol, S. A. S., Eide, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+MRI+in+idiopathic+normal+pressure+hydrocephalus.">Glymphatic MRI in idiopathic normal pressure hydrocephalus.</a> Brain. 140 (10), 2691-2705 (2017).</li><li>Kornum, B. R., Knudsen, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+testing+of+pigs+(Sus+scrofa)+in+translational+biobehavioral+research.">Cognitive testing of pigs (Sus scrofa) in translational biobehavioral research.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 35 (3), 437-451 (2011).</li><li>B&#232;chet, N. B., Shanbhag, N. C., Lundgaard, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glymphatic+function+in+the+gyrencephalic+brain.">Glymphatic function in the gyrencephalic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. , (2021).</li><li>Raghunandan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+flow+of+cerebrospinal+fluid+observed+in+periarterial+spaces+is+not+an+artifact+of+injection.">Bulk flow of cerebrospinal fluid observed in periarterial spaces is not an artifact of injection.</a> bioRxiv. , (2020).</li><li>D'Angelo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+fluid+collection+technique+from+the+atlanto-occipital+space+in+pigs.">Spinal fluid collection technique from the atlanto-occipital space in pigs.</a> Acta Veterinaria Brno. 78 (2), 303-305 (2009).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathologica. 137 (1), 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+EEG+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high EEG delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Science Advances. 5 (2), 5447 (2019).</li><li>Mestre, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+of+cerebrospinal+fluid+is+driven+by+arterial+pulsations+and+is+reduced+in+hypertension.">Flow of cerebrospinal fluid is driven by arterial pulsations and is reduced in hypertension.</a> Nature Communications. 9 (1), 4878 (2018).</li><li>Pleticha, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pig+lumbar+spine+anatomy+and+imaging-guided+lateral+lumbar+puncture:+A+new+large+animal+model+for+intrathecal+drug+delivery.">Pig lumbar spine anatomy and imaging-guided lateral lumbar puncture: A new large animal model for intrathecal drug delivery.</a> Journal of Neuroscience Methods. 216 (1), 10-15 (2013).</li></ol>

Burada, gerekli hazırlık, cerrahi prosedür, izleyici infüzyonu ve beynin çıkarılması da dahil olmak üzere domuzlarda sarnıç magnasının doğrudan kanülasyonunu gerçekleştirmek için ayrıntılı bir protokol açıklanmıştır. Bu, büyük hayvanlarla çalışmak için deneyime ve sertifikaya sahip birini gerektirir. Doğru bir şekilde gerçekleştirilirse, bu, istenen moleküllerin doğrudan CSF'ye teslim edilmesine izin verir, bundan sonra büyük bir memelide CSF dağılımını ve glimfik fonksiyonu y...

Beyin omurilik sıvısı (CSF), merkezi sinir sistemi (CNS)1,2 içinde ve çevresinde bulunan ultrafilt kandır. CSF, beyne yüzdürme vermenin veya zarar verici mekanik kuvvetleri emmenin yanı sıra, metabolik atıkların CNS3'ten temizlenmesinde de önemli bir rol oynar. Atık temizliği, CSF'nin beyin parankiminde pervasküler boşluklar (PVS) yoluyla konvektif akışına izin veren ve nüfuz eden arterleri çevreleyen yakın zamanda karakterize edilen glimfik sistem tarafından kolaylaştırılmıştır3,4,5. Bu işlemin, öncelikle astrositik endfeet üzerinde ifade edilen ve PVS4,6'ya bağlı bir su kanalı olan aquaporin-4'e (AQP4) bağlı olduğu gösterilmiştir. Glimfik sistemin çalışması, CSF7,8,9,10,11'e floresan/radyoaktif izleyici veya kontrast madde girmesini takiben gelişmiş ışık mikroskopisi veya manyetik rezonans görüntüleme (MRG) kullanılarak hem in vivo hem de ex vivo görüntüleme ile elde edilir.
Beyin parankiminde hasara yol etmeden CSF'ye bir izleyici sokmanın etkili bir yolu sarnıç magna kanülasyonundan (CMc)12,13'dür. Tüm glimfik çalışmaların büyük bir çoğunluğu, şimdiye kadar kemirgenlerde yapılmış ve CMc'nin istilacılığı ve küçük bir memeli ile çalışmanın pratik basitliği nedeniyle daha yüksek memelilerde kaçınılmıştır. Ek olarak, farelerin ince kafatasları, kafatası penceresine ihtiyaç duymadan in vivo görüntülemeye izin verir ve daha sonra karmaşık olmayan bir beyin ekstraksiyonuna izin verir11,14. İnsanlarda yapılan deneyler glimfatik fonksiyon hakkında değerli bir makroskopik in vivo veri elde etti, ancak distal lomber omurgadaki intratekal izleyici enjeksiyonlarına dayandı ve ayrıca glimfatik sistemi mikroanatomi yakalamak için yeterli çözünürlük vermeyen MRI'ı kullandı7,15,16 . Yüksek memelilerde glimfik sistemin mimarisini ve kapsamını anlamak, insanlara çevrilmesinde esastır. İnsanlara glimfik çeviriyi kolaylaştırmak için, kemirgenlerde gerçekleştirilen tekniklerin daha yüksek memelilere uygulanması önemlidir, böylece glimfik sistemin artan biliş ve beyin karmaşıklığı türleri arasında doğrudan karşılaştırılmasına izin vermek önemlidir17. Domuz ve insan beyinleri katlanmış bir nöroarşisitture sahip olan jinekfaliktir, kemirgen beyinleri ise lisensefaliktir, böylece birbirleri arasında önemli bir fark vardır. Genel boyut açısından, domuz beyinleri de, insan beyninden 10-15 kat daha küçükken, fare beyinleri 3.000 kat daha küçüktür18. Büyük memelilerde glimfik sistemi daha iyi anlayarak, inme, travmatik beyin hasarı ve nörodejenerasyon gibi durumlarda gelecekteki terapötik müdahale için insan glimfik sistemini kullanmak mümkün olabilir. Domuz in vivo doğrudan CMc, daha yüksek bir memelide glimfik sistemin yüksek çözünürlüklü ışık mikroskopisine izin veren bir yöntemdir. Ayrıca, kullanılan domuzların büyüklüğü nedeniyle, insan ameliyatlarında kullanılanlara benzer izleme sistemleri uygulamak mümkündür, bu da bunların glimfik işleve nasıl katkıda bulunduğunu değerlendirmek için hayati işlevleri sıkı bir şekilde belgelemeyi ve düzenlemeyi mümkün hale getirir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.01% azide in PBS</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G needle</td>
			<td>Mediq</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1ml Syringe</td>
			<td>FischerSci</td>
			<td>15849152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22G cannula</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anatomical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin Alexa-Fluor 647 Conjugate</td>
			<td>ThermoFischer</td>
			<td>A34785</td>
			<td>2 vials (10mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chisel</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-8870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental cement</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>7508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>compact saw</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-9517</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hammer</td>
			<td>ClasOhlson</td>
			<td>40-7694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insta-Set CA Accelerator</td>
			<td>BSI-Inc</td>
			<td>BSI-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV line TAP, 3-WAYS with 10cm extension</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marker pen</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilliQ water</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCL</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S8282</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigmaaldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 20 scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 21 Scalpel blade</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>BB521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 4 Scalpel handle</td>
			<td>Agnthos</td>
			<td>10004-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Mediq</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Salmon knife</td>
			<td>Fiskers</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-retaining retractors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superglue</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical curved scissors</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical forceps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical towel clamps</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct cannula implantation in the cisterna magna of pigs

Glimfik sistem, beyin omurilik sıvısının (CSF) astrositlere bağlı pervasküler alanlarda akışına dayanan ve amiloid-beta gibi nörotoksik peptitlerin temizlenmesinde bulaşmış bir atık temizleme sistemidir. Bozulmuş glimfik fonksiyon, Alzheimer gibi nörodejeneratif hastalıkların hayvan modellerinde hastalık patolojisini şiddetlendirir ve bu da bu boşluk sistemini anlamanın önemini vurgular. Glimfik sistem genellikle sezgilerin doğrudan beyin omurilik sıvısına (CSF) teslim edildiği sarnıç magna cannülasyonları (CMc) tarafından incelenir. Bununla birlikte, çoğu çalışma kemirgenlerde yapılmıştır. Burada, domuzlarda CMc tekniğinin bir uyarlamasını gösteriyoruz. Domuzlarda CMc kullanılarak, glimfatik sistem jinekökenik beyinlerde yüksek optik çözünürlükte incelenebilir ve bunu yaparken kemirgen ve insan glimfatiği arasındaki bilgi boşluğunu kapatır.

Domuz bilinçsiz hale geldikten sonra palpe olur ve yüzey anatomisi oksipital kret (OC) den başlayarak torasik omurlara (TV) ve her kulak tabanına (EB) doğru çalışarak işaretlenir. Dermal kesilerin yapıldığı bu hatlar boyuncadır (Şekil 1A). Trapezius, semispinalis capitus biventer ve semispinalis capitus complexus dahil olmak üzere üç kas tabakası resected ve sarnıç magna (CM) ortaya çıkarmak için kendi kendini tutan retraktörler iki set tarafından açık tutulur (<s...

Watch this Scientific Journal Video about Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs at JoVE.com

Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

Bu makale, domuzların sarnıç magnasında doğrudan canül implantasyonu için adım adım bir protokol sunun.

Domuzların Sarnıç Magnasında Doğrudan Kanın İmplantasyonu

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

Bu protokol, büyük bir memelide glimfik sistemin araştırılmasına izin verdiği için önemlidir, böylece bizi insanlardaki glimfik sistemi anlamaya yaklaştırır. Bu tekniğin iki avantajı vardır. Sarnıç magnasına izlerin girmesi, beyinde intraventriküler enjeksiyonların aksine doğrudan herhangi bir hasar görmesini önler.İkincisi, bu, canülasyonun hemen görselleştirilmesine ve başarılı olup olmadığının bilgilendirilmesine izin veren doğrudan bir yaklaşımdır. Domuzu eğilimli bir konuma getirerek başlayın. Oksipital kreti, ilk torasik omurun omurgasını ve her kulağın tabanını bulmak ve işaretlemek için başının ve boynunun arkasını palpate edin.Uzunlamasına eksen boyunca tepe ve omurlar arasında düz bir çizgi çizin. Daha sonra kafatasının tabanını takip ederek, tepenin içinden her kulağın tabanına iki çizgi çizin. Hayvanın kuyruğunu dikkatlice kenetleyin ve derin bir uykuda olup olmadığını görmek için bir refleks izleyin.21 numaralı bir bıçak ile neşter kullanarak uzunlamasına çizgi boyunca kaslara kadar dermal bir kesi yaparak başlayın, ardından omuzlar boyunca her biri 10 ila 15 santimetre uzunluğunda iki dik kesi uzatın. Oksipital kretten başlayarak, her kulağın tabanına kadar olan çizgi boyunca dermal kesiler yapın. Oksipital krette oluşan cilt köşelerini kavramak için anatomik forseps kullanın, ardından cildi alttaki kastan ayırmak için neşter bıçağını fasya üzerinde hafifçe çalıştırın.Yamuk kasının parçalarını görselleştirmek için beş kesi boyunca cildi resect. Neşteri kullanarak yamuk orta hatta bir araya geldiği yaklaşık bir santimetre derinliğinde uzunlamasına bir kesi yapın, ardından yamuk ve alttaki semispinalis kapit biventer kasının karınlarını ayıracak düz ve kavisli cerrahi tokparlamaların bir kombinasyonunu kullanarak kaslardaki boyuna kesim boyunca künt bir diseksiyon yapın. Kalıcı kas liflerini neşterle kesin ve semispinalis capitis complexus görünene kadar künt diseksiyon yapmaya devam edin.Kafatasının arka yönü boyunca hareket edin ve yamuk ve semispinalis capitis biventer kaslarının kökenlerini ayırın. İki kası boyuna ayırmak için, semispinalis capitis complexus tamamen görünene kadar künt diseksiyon yapmak için cerrahi tokmakları kullanın. Daha sonra trapezius ve semispinalis capitis biventer kaslarını geri çekmek için kendi kendini koruyan retraktörleri kullanın.Semispinalis capitis complexus'un karınlarının orta çizgide bir araya geldiği bir santimetre derinliğinde uzunlamasına kesi yapmak için neşteri kullanın. Hem atlas hem de eksen hissedilene kadar kas karınları arasındaki boyuna kesik boyunca çalışan cerrahi önkseçimleri kullanarak künt bir diseksiyon gerçekleştirin. Kafatasının arka yönü boyunca hareket edin, semispinalis capitis complexus kaslarının kökenlerini kesin.Kası uzunlamasına alttaki omurlardan ayırmak için neşter ve künt diseksiyonu kullanın, ardından semispinalis capitis complexus kaslarını geri çekmek için başka bir kendi kendini koruyan retraktör seti kullanın. Atlasın kafatası tabanıyla buluştuğu bölgenin üzerinde kalan herhangi bir dokuyu dikkatlice çıkarmak için bir neşter kullanın. Bir kolunun hayvanın boynuna, bir parmağınızı da atlasın ve kafatasının ucuna yerleştirin, ardından aynı anda başı yükseltin ve sarnıç magnasını ortaya çıkarmak için parmakla palpe olurken boynu esnetin.Bir kişinin hayvanın başını ve boynunu yükselttiği ve esnettiğinden emin olun, diğeri ise sarnıç magna için palpe olur ve anatomik konumunu not eder. 22 kalibrelik bir kanül yavaşça ve dikkatlice sarnıç magnasına uzunlamasına eksene eğik bir açıyla takın, ardından iğneyi kanülden geri çekin ve kilidin üzerine bir kapak yerleştirin. Süper tutkal ve damarın dokuya girdiği bir hızlandırıcı uygulayarak başlayın, ardından diş çimentosuz eti uygulayın.Çimentonun sertleşmesi için beş dakika bekleyin. Kapağı iyice damardan çıkarın. 10 santimetrelik bir uzatma kullanarak damarı IV hattına dokunun.İzleyiciyi dakikada 100 mikrolitre hızında elle veya mikro infüzyon pompası kullanarak yavaşça enjekte edin. IV hattı musluğunu çıkarın ve kapakla değiştirin. İzleyicinin canül tabanında titreşen görünür olup olmadığını kontrol edin.Daha sonra biraz esnemeyi sürdürmek için hayvanın boynunun altına kum torbaları yerleştirin. Başı serbest bırakın ve hayvanı dinlenmeye eğilimli bir pozisyonda bırakın. Kendini koruyan retraktörleri serbest bırakın ve kasları değiştirin.Cildi kasların üzerinde bir araya getirmek için cerrahi havlu kelepçelerini kullanın. Önce gazlı bez ve ardından ısı kaybını sınırlamak için havlu kelepçelerini ve kesiyi örtmek için bir battaniye kullanın. İzleyicinin istenen süre boyunca dolaşmasına izin verin.Beynin sırt yüzeyinin dikişli makroskopik görüntüleri, izleyicinin sülücü ve çatlaklar boyunca dağılım kalıpları hakkında ayrıntılı içgörüler sağlayabilir. Beynin ventral ve lateral yüzeylerinden elde edilen benzer görüntüler temporal lobdaki izleyici dağılımı ve lateral çatlak hakkında bilgi sağlayabilir. Stereoskop kullanılarak üretilen daha yüksek büyütmenin beyin yüzeyinin görüntüleri, PVS'deki izleyicinin arterler boyunca görselleştirilmesine yardımcı olabilir.Makroskopik koronal beyin bölümleri, hipokampus ve striatum gibi interhemisferik fissür ve subkortikal izleyici dağılımı ve yapısında izleyici penetrasyonunun derinliği hakkında fikir sağlar. AQP4 için immünohistokimyasal lekeleme, glial fibril asidik protein ve düz kas aktinin, izleyicinin PVS içinde lokalize olduğunu ve beyin parenkimine taşındığını gösterdi. PVS'nin dış yüzeyini oluşturan astrosit ayak prosesleri AQP4 ve glial fibril asidik protein boyama kullanılarak tanımlanır.PVS'nin iç yüzeyini oluşturan endotel hücreleri lektin ve GLUT-1 lekesi kullanılarak boyanır. SMA lekeleme arterleri ve arteriyolleri tanımlar ve normal glimfik fonksiyonun temel fizyolojisini oluşturan damarlar yerine arterler boyunca PVS akınının meydana geldiğini göstermek için kullanılabilir. İleride, glimfik sistemi inme ve travmatik beyin hasarı gibi nöropatoloji bağlamında büyük memelilerde yüksek çözünürlükte keşfetmeyi umuyoruz.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrode Positioning and Montage in Transcranial Direct Current Stimulation

Transkraniyal Doğru Akım Uyarım Elektrot Konumlandırma ve Montaj

Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a technique that has been intensively investigated in the past decade as this method offers a ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Kemirgen Merkezi Sinir Sistemi İlaçların doğrudan Intraventriküler teslim

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents

Kanül implantasyon Sisterna Magna kemirgenler içine

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

Farede Laminektomi ve Omurilik Penceresi İmplantasyonu

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Kronik yaygın Marmoset bütün kortikal Electrocorticographic dizide implantasyonu

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset (Callithrix jacchus)

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset Callithrix jacchus

Ortak Marmoset Mikroelektrot Dizileri İmplantasyonu için Stereotaksik Cerrahi (Callithrix jacchus)

Marmosets (Callithrix jacchus) are small non-human primates that are gaining popularity in biomedical and preclinical research, including the ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subaraknoid Kanama Modeli olarak Cisterna Magna içine Kan Çift Doğrudan Enjeksiyon

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Stereotaxic Surgical Approach to Microinject the Caudal Brainstem and Upper Cervical Spinal Cord via the Cisterna Magna in Mice

Farelerde Cisterna Magna ile Kaudal Beyin Sapı ve Üst Servikal Omuriliğin Mikroenjekte Edilmesine Stereotaksik Cerrahi Yaklaşım

Stereotaxic surgery to target brain sites in mice is commonly guided by skull landmarks. Access is then obtained via burr holes drilled through the skull. ...

Pupillometry to Assess Auditory Sensation in Guinea Pigs

Gine Domuzlarında İşitsel Hissi Değerlendirmek için Pupillometri

Noise exposure is a leading cause of sensorineural hearing loss. Animal models of noise-induced hearing loss have generated mechanistic insight into the ...