Name: retrograde parotid gland infusion through stensen's duct in a non-human primate for vectored gene delivery
Uploaded: 2021-08-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retrograde Parotid Gland Infusion through Stensen's Duct in a Non-Human Primate for Vectored Gene Delivery at JoVE.com

लेखक प्रक्रिया को फिल्माने में अपने ऑडियोविजुअल समर्थन के लिए श्री कैगनी गेंट्री का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । हम इस परियोजना की खोज में अकादमिक सहायता के लिए हेफनर वीए मेडिकल सेंटर को भी स्वीकार करना चाहते हैं।

पशु अध्ययन के लिए जागो वन स्कूल ऑफ मेडिसिन क्लार्कसन परिसर में सभी प्रक्रियाओं का प्रदर्शन किया गया । संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) से नैतिक विचारों के लिए परामर्श किया गया था और प्रक?...

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	<li>Isenman, L., Liebow, C., Rothman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+secretion+of+mammalian+digestive+enzymes+by+exocrine+glands.">The secretion of mammalian digestive enzymes by exocrine glands.</a> The American Journal of Physiology. 276, 223-232 (1999).</li><li>Perez, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+epithelial+cells:+An+unassuming+target+site+for+gene+therapeutics.">Salivary epithelial cells: An unassuming target site for gene therapeutics.</a> The International Journal of Biochemistry &amp; Cell Biology. 42, 773-777 (2010).</li><li>Kochel, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dengue+virus+serotype-1+DNA+vaccine+induces+virus+neutralizing+antibodies+and+provides+protection+from+viral+challenge+in+Aotus+monkeys.">A dengue virus serotype-1 DNA vaccine induces virus neutralizing antibodies and provides protection from viral challenge in Aotus monkeys.</a> Vaccine. 18, 3166-3173 (2000).</li><li>Ponzio, T. A., Sanders, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+salivary+gland+as+a+target+for+enhancing+immunization+response.">The salivary gland as a target for enhancing immunization response.</a> Tropical Diseases, Travel Medicine and Vaccines. 3, 4 (2017).</li><li>Baum, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+responses+to+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+for+radiation-induced+salivary+hypofunction.">Early responses to adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA for radiation-induced salivary hypofunction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 19403-19407 (2012).</li><li>Voutetakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sorting+of+Transgenic+Secretory+Proteins+in+Rhesus+Macaque+Parotid+Glands+After+Adenovirus-Mediated+Gene+Transfer.">Sorting of Transgenic Secretory Proteins in Rhesus Macaque Parotid Glands After Adenovirus-Mediated Gene Transfer.</a> Human Gene Therapy. 19, 1401-1405 (2008).</li><li>Niedzinski, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+systemic+transgene+expression+after+nonviral+salivary+gland+transfection+using+a+novel+endonuclease+inhibitor/DNA+formulation.">Enhanced systemic transgene expression after nonviral salivary gland transfection using a novel endonuclease inhibitor/DNA formulation.</a> Gene Therapy. 10, 2133-2138 (2003).</li><li>Niedzinski, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+Enhancement+of+Nonviral+Salivary+Gland+Transfection.">Zinc Enhancement of Nonviral Salivary Gland Transfection.</a> Molecular Therapy. 7, 396-400 (2003).</li><li>Samuni, Y., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+in+salivary+glands:+From+the+bench+to+the+clinic.">Gene delivery in salivary glands: From the bench to the clinic.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. , (2011).</li><li>Voutetakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-Associated+Virus+Serotype+2-Mediated+Gene+Transfer+to+The+Parotid+Glands+of+Nonhuman+Primates.">Adeno-Associated Virus Serotype 2-Mediated Gene Transfer to The Parotid Glands of Nonhuman Primates.</a> Human Gene Therapy. 18, 142-150 (2007).</li></ol>

यहां हम स्टेनसेन की वाहिनी के माध्यम से पेरोटिड ग्रंथि में प्रतिगामी जलसेक के प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। वर्णित पद्धति मार्गदर्शन प्रदान करता है कि संभवतः जीन थेरेपी और अंय अनुप्रयोगों के लिए एक स?...

जबकि लार ग्रंथियों अच्छी तरह से लार के अपने एक्सोक्राइन उत्पादन के लिए जाना जाता है, शोधकर्ताओं ने लंबे समय से उनके लिए सीधे खून में प्रोटीन स्राव करने की क्षमता को मांयता दीहै 1,उंहें प्रणालीगत प्रशासन के लिए जीन थेरेपी के लिए एक संभावित लक्ष्य बना, जैसे प्रतिस्थापन हार्मोन या एंटीबॉडी उत्पादन के रूप में । वास्तव में, लार ग्रंथियां अन्य ऊतक लक्ष्यों पर कई फायदे प्रदान करती हैं, जैसे स्राव के लिए प्रोटीन का उत्पादन करने की अंतर्निहित क्षमता (संपत्ति की मांसपेशियों की कमी), भारी एनकैप्सुलेशन जो वेक्टर प्रसार को सीमित कर सकता है, और अच्छी तरह से विभेदित ऊतक गैर-एकीकृत वैक्टर के लिए स्थिरता प्रदान करते हैं। इसके अलावा, एक गंभीर प्रतिकूल घटना की स्थिति में, लार ग्रंथियों जीवन के लिए महत्वपूर्ण नहीं हैं और शल्य चिकित्सा हटाया जा सकता है। जबकि तुरंत सहज नहीं, पेरोटिड ग्रंथियां भी अपने मुख्य उत्सर्जन वाहिनी, स्टेनसेन की वाहिनी2के माध्यम से मुंह से आसानी से सुलभ हैं।
जीन थेरेपी के लिए लार ऊतक के फायदों को देखते हुए, इस ऊतक लक्ष्य की खोज में रुचि बढ़ रही है । कृंतक, कुत्ते और गैर-मानव रहनुमा मॉडल में पहले से ही कई अध्ययन किए जा चुके हैं और कम से कम एक मानव नैदानिक परीक्षण3,4,5चल रहा है। जीन थेरेपी प्रयोजनों के लिए इस ऊतक लक्ष्य की उपयोगिता का पता लगाने और विकसित करने के लिए, अधिक गैर-मानव रहनुमा अध्ययन किए जाने की आवश्यकता होगी। यह पत्र गैर-मानव रहनुमा मॉडल में लेनदेन के लिए एक वेक्टर जीन देने के लिए स्टेनसेन की वाहिनी के माध्यम से पेरोटिड ग्रंथियों तक पहुंचने के लिए एक विधि का वर्णन करता है। यह ग्रंथि में प्रवेश करता है के रूप में जलसेतु और वाहिनी के शरीर रचना विज्ञान के वितरण को प्रदर्शित करने के लिए, रेडियोकंट्रैक्ट का उपयोग कर फ्लोरोस्कोपी किया गया था। वेक्टर के सफल लेनदेन को प्रदर्शित करने के लिए, एडेनोवायरस सेरोटाइप 5 (Ad5) वेक्टर एग्एफपी जीन का उपयोग किया गया था। Ad5 लार ऊतक ट्रांसड्यूस करने में सक्षम एक अच्छी तरह से वर्णित वेक्टर है। यद्यपि यह अंतिम नैदानिक उपयोग के लिए बहुत इम्यूनोजेनिक है, लेकिन कुशल लेनदेन को आश्वस्त करने के लिए इस प्रदर्शन अध्ययन के लिए एक Ad5 वेक्टर चुना गया था। संवर्धित ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (ईजीएफपी) उत्पादन का मूल्यांकन एक अच्छी तरह से वर्णित विधि है जो ट्रांसडक्शन के बाद एक वेक्टर जीन के सफल ट्रांसक्रिप्शन और अनुवाद को प्रदर्शित करती है और यहां किया गया था।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>500 &#181;L U100 syringes with 30-gauge needles</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>328466</td>
			<td>fixed needle for less waste</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive (e.g., Ethicon Dermabond)</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>Cyanoacrylate adhesive to seal and keep the tubing in the duct during infusion.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine injectable solution</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07 869-6061</td>
			<td>Atropine inj. 0.54 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Ultra-Fine Insulin Syringes 30G</td>
			<td>Walmart</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Avilable in 0.5 mL and 1.0 mL sizes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate (medical glue)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>DNX12</td>
			<td>Dermabond topical skin adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental loops with light</td>
			<td>Amazon (DDP)</td>
			<td>B012M3IV80</td>
			<td>Used to enhance visualization of Stensen&#39;s duct papilla</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infant Lacrimal Dilator</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>SPOI-137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine injectable solution</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-803-6637</td>
			<td>Ketaset inj. 100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lacrimal Dilator</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>SPOI-132</td>
			<td>Used to dialate the Stensen&#39;s duct.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam injectable solution</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07 890-6698</td>
			<td>Midazolam inj. 5mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pair of scissors</td>
			<td>Amazon (DDP)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to cut PET10 tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene Tubing (PE-10)</td>
			<td>Scientific Comodities, Inc</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td>Tubing connecting the 30G syringe and inserted into the duct.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-tips</td>
			<td>Walmart</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to spread cyanoacrylate on the cheek</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Size 10 Polyethylene Tube (PET 10)</td>
			<td>Scientific Commodities</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td>low density polyethylene tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Mouth Opener</td>
			<td>Amazon (DDP)</td>
			<td>B01F3LVJXC</td>
			<td>Used to keep the animal&#39;s mouth open.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Amazon (DDP)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to insert PET10 tube into Stenson&#39;s duct</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7646-86-7</td>
			<td>Included in plasmid DNA infusates</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

retrograde parotid gland infusion through stensen's duct in a non-human primate for vectored gene delivery

लार ग्रंथियों पहले से ही मानव परीक्षणों के लिए अग्रणी आशाजनक परिणामों के साथ जीन थेरेपी के लिए एक आकर्षक ऊतक लक्ष्य हैं । वे स्वाभाविक रूप से रक्त में प्रोटीन स्राव करने में सक्षम हैं और आसानी से सुलभ हैं, जिससे उन्हें जीन हस्तांतरण द्वारा प्रतिस्थापन हार्मोन उत्पादन या टीकाकरण के लिए संभावित रूप से बेहतर ऊतक साइटें मिल जाती हैं। जीन वितरण के लिए सुझाए गए तरीकों में लार नलिकाओं के माध्यम से ट्रांसक्यूटेनियस इंजेक्शन और प्रतिगामी जलसेक शामिल हैं । हम प्रदर्शित करते हैं कि गैर-मानव वानरों में प्रतिगामी लार ग्रंथि जलसेक (आरएसजीआई) कैसे करें। हम पैराटिड पैपिला की पहचान, बुनियादी दंत उपकरणों, पॉलीथीन ट्यूबिंग, और साइनोक्रिलेट, और जलसेक की उचित दर का उपयोग करते हुए स्टेनसेन की डक्ट को कैन्यूलेटिंग और सील करने की एक अत्रेगत विधि सहित महत्वपूर्ण शारीरिक स्थलों का वर्णन करते हैं। हालांकि यह प्रसव की सबसे कम दर्दनाक विधि है, विधि अभी भी (<०.५ एमएल) और वाहिनी और ग्रंथि के लिए आघात के लिए क्षमता को वितरित करने में सक्षम मात्रा से सीमित है । हम फ्लोरोस्कोपी का उपयोग करके प्रदर्शित करते हैं कि एक जलसेक को पूरी तरह से ग्रंथि में वितरित किया जा सकता है, और आगे इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा एक विशिष्ट वेक्टर और वितरित जीन की अभिव्यक्ति के ट्रांजडक्शन को प्रदर्शित करता है।

सफल प्रक्रिया, ट्रांसडक्शन और ट्रांसक्रिप्शन चित्रा 1 पीछे के बेहतर गाल पर 2nd मोलर से सटे पैराटिड पैपिला को दिखाता है। छवि भी मुंह संभालो, कठिन तालू पर एक रबर अंत और ipsilateral कुत्ते पर ?...

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Retrograde Parotid Gland Infusion through Stensen's Duct in a Non-Human Primate for Vectored Gene Delivery

लार ग्रंथियों जीन थेरेपी के लिए एक ऊतक लक्ष्य स्थल के रूप में प्रस्तावित किया गया है, विशेष रूप से जीन हस्तांतरण द्वारा टीकाकरण के क्षेत्र में । हम प्रतिगामी पेरोटिड जलसेक का उपयोग करते हुए एक गैर-मानव रहनुमा मॉडल में जीन वितरण का प्रदर्शन करते हैं।

वेक्टर जीन डिलीवरी के लिए एक गैर-मानव रहनुमा में स्टेनसेन की वाहिनी के माध्यम से प्रतिगामी पैराटिड ग्रंथि जलसेक

Salivary glands are an attractive tissue target for gene therapy with promising results already leading to human trials. They are inherently capable of ...

यह प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है क्योंकि यह विस्तार से प्रतिगामी लार ग्रंथि जलसेक की प्रक्रिया को दर्शाता है । प्रक्रिया का उपयोग विभिन्न प्रकार के चिकित्सा कारणों से किया जा सकता है, जैसे वेक्टर्ड इम्यूनोप्रोफिलैक्सिस या जीन थेरेपी। इस तकनीक को जानने के लिए और पुन: पेश करने के लिए आसान है।लेखक मौखिक सर्जन नहीं होने के बावजूद कई अवसरों पर इस प्रक्रिया को सफलतापूर्वक करने में कामयाब रहे हैं, न ही ऐसी कोई पृष्ठभूमि है। एनेस्थेटाइजिंग के बाद आवर्धन के लिए दंत loupes का उपयोग करें और ऊपरी दूसरे मोलर के निकट पीछे के गाल पर पैरोटिड पैपिला या स्टेनसन की वाहिनी के उद्घाटन की पहचान करें। धीरे-धीरे एक शंकुधारी के बिंदु को केंद्र में रखकर या पैपिला के उद्घाटन करके पैराटिड पैपिला को फैलाएं और लगभग 20 से 30 सेकंड के लिए डिलेटर को आगे-पीछे घुमाएं।इसके बाद, चिमटी का उपयोग करके डिस्टल एंड से लगभग 0.5 सेंटीमीटर पर इन्फ्यूसेट युक्त सिरिंज से जुड़ी पॉलीथीन ट्यूब के चिह्नित अंत को पकड़ें और धीरे-धीरे ट्यूब की नोक को फैली हुई पैपिला में डालें। ट्यूब स्लाइड में मदद करने के लिए छोटे घूर्णन आंदोलनों द्वारा ट्यूब को धीरे से आगे बढ़ाते हैं, इसके बाद चिमटी 0.5 सेंटीमीटर समीपस्थ को पिछली पकड़ में पुनः समायोजित किया जाता है। इस प्रक्रिया को तब तक दोहराएं जब तक कि दो सेंटीमीटर का निशान पैराओटिड पैपिला तक न पहुंच जाए।इसके बाद, पेरोटिड पैपिला को सील करने और मौखिक गुहा में वापस इन्फ्यूजेट के बिखराव को कम करने के लिए, पिपिला के चारों ओर और डाला ट्यूब पर गाल पर एक साइनोक्रिलेट लागू करें। एक बार साइनोएक्रेलेट सूख जाता है, धीरे-धीरे प्रति मिनट 100 माइक्रोलीटर की दर से पांच मिनट से अधिक इन्फ्यूजेट इंजेक्ट करें। जलसेक पूरा होने के बाद, ट्यूब को कम से कम पांच मिनट के लिए छोड़ दें, जिससे डक्ट को सील कर दिया जाए और जलसेक को पेरोटिड ग्रंथि में रहने की अनुमति दी जा सके।अंत में, कोमल कर्षण के साथ ट्यूब को हटा दें और साइनोक्रिलेट ट्यूब के साथ मुक्त हो जाएगा। एक रेडियो विपरीत जलसेक का उपयोग कर फ्लोरोस्कोपी स्टेनसन की नली के माध्यम से और पेरोटिड ग्रंथि में समाधान की शाखाओं में बंटी का प्रदर्शन किया । परोटिड ग्रंथि के रासायनिक विश्लेषण के रूप में इम्यूनो दोनों डक्टल और acinar कोशिकाओं में EGFP के लिए सकारात्मक धुंधला पता चला दोनों कोशिका प्रकारों में सफल लेनदेन और प्रतिलेखन का संकेत है ।इस प्रक्रिया में मुख्य चुनौती शायद पॉलीथीन ट्यूब को पैपिला में पेश करना है, जिसे बहुत धीरे और धीरे-धीरे किया जाना चाहिए।

Research

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