Name: retrograde parotid gland infusion through stensen's duct in a non-human primate for vectored gene delivery
Uploaded: 2021-08-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retrograde Parotid Gland Infusion through Stensen's Duct in a Non-Human Primate for Vectored Gene Delivery at JoVE.com

저자는 절차 촬영에 자신의 시청각 지원에 대한 씨 Cagney 젠트리에게 감사드립니다. 우리는 또한이 프로젝트를 추구하는 학문적 지원을위한 헤프너 VA 의료 센터를 인정하고 싶습니다.

모든 절차는 동물 연구를 위한 의학 클락슨 캠퍼스의 웨이크 포레스트 학교에서 수행되었습니다. 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)는 윤리적 고려 사항에 대한 자문을 받았으며 절차의 세부 사항은 검토를 위해 제출되었습니다. 웨이크 포레스트 IACUC는 우리의 연구 프로토콜을 승인하고 모든 절차는 iacUC 승인 프로토콜 #A17-147에 따라 수행되었다.
1. 주입 장치 준비
<ol><li>?...

<ol>
	<li>Isenman, L., Liebow, C., Rothman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+secretion+of+mammalian+digestive+enzymes+by+exocrine+glands.">The secretion of mammalian digestive enzymes by exocrine glands.</a> The American Journal of Physiology. 276, 223-232 (1999).</li><li>Perez, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+epithelial+cells:+An+unassuming+target+site+for+gene+therapeutics.">Salivary epithelial cells: An unassuming target site for gene therapeutics.</a> The International Journal of Biochemistry &amp; Cell Biology. 42, 773-777 (2010).</li><li>Kochel, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dengue+virus+serotype-1+DNA+vaccine+induces+virus+neutralizing+antibodies+and+provides+protection+from+viral+challenge+in+Aotus+monkeys.">A dengue virus serotype-1 DNA vaccine induces virus neutralizing antibodies and provides protection from viral challenge in Aotus monkeys.</a> Vaccine. 18, 3166-3173 (2000).</li><li>Ponzio, T. A., Sanders, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+salivary+gland+as+a+target+for+enhancing+immunization+response.">The salivary gland as a target for enhancing immunization response.</a> Tropical Diseases, Travel Medicine and Vaccines. 3, 4 (2017).</li><li>Baum, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+responses+to+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+for+radiation-induced+salivary+hypofunction.">Early responses to adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA for radiation-induced salivary hypofunction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 19403-19407 (2012).</li><li>Voutetakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sorting+of+Transgenic+Secretory+Proteins+in+Rhesus+Macaque+Parotid+Glands+After+Adenovirus-Mediated+Gene+Transfer.">Sorting of Transgenic Secretory Proteins in Rhesus Macaque Parotid Glands After Adenovirus-Mediated Gene Transfer.</a> Human Gene Therapy. 19, 1401-1405 (2008).</li><li>Niedzinski, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+systemic+transgene+expression+after+nonviral+salivary+gland+transfection+using+a+novel+endonuclease+inhibitor/DNA+formulation.">Enhanced systemic transgene expression after nonviral salivary gland transfection using a novel endonuclease inhibitor/DNA formulation.</a> Gene Therapy. 10, 2133-2138 (2003).</li><li>Niedzinski, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+Enhancement+of+Nonviral+Salivary+Gland+Transfection.">Zinc Enhancement of Nonviral Salivary Gland Transfection.</a> Molecular Therapy. 7, 396-400 (2003).</li><li>Samuni, Y., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+in+salivary+glands:+From+the+bench+to+the+clinic.">Gene delivery in salivary glands: From the bench to the clinic.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. , (2011).</li><li>Voutetakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-Associated+Virus+Serotype+2-Mediated+Gene+Transfer+to+The+Parotid+Glands+of+Nonhuman+Primates.">Adeno-Associated Virus Serotype 2-Mediated Gene Transfer to The Parotid Glands of Nonhuman Primates.</a> Human Gene Therapy. 18, 142-150 (2007).</li></ol>

여기서 우리는 스텐슨의 덕트를 통해 parotid 선으로 역행 주입의 프로토콜을 설명합니다. 설명된 방법론은 유전자 치료 및 그밖 응용을 위한 사이트로 타액 조직의 유용성을 탐구하는 연구원에 의해 잠재적으로 이용될 수 있는 지도를 제공합니다.
절차의 성공을 보장하기 위한 여러 가지 중요한 단계가 있습니다. 무엇보다도 모든 절차 단계를 부드럽게 완료해야 합니다. 입의 ...

타액선은 타액의 외분 생산으로 잘 알려져 있지만, 연구자들은 오랫동안혈류1에직접 단백질을 분비하는 능력을 인식하여 대체 호르몬이나 항체 생산과 같은 전신 투여를 위한 유전자 치료의 잠재적 인 표적이 되었습니다. 실제로, 타액선은 분비(재산 근육 부족), 벡터 확산을 제한할 수 있는 무거운 캡슐화, 비통합 벡터에 대한 안정성을 제공하는 잘 분화된 조직 등 다른 조직 표적에 비해 몇 가지 이점을 제공합니다. 또한 심각한 부작용이 발생할 경우 타액선은 생명에 중요하지 않으며 외과적으로 제거 될 수 있습니다. 즉시 직관적이지는 않지만, 파로티드 땀샘은 메인 배설덕트인 스텐센덕트2를통해 입에서 쉽게 접근할 수 있습니다.
유전자 치료를 위한 타액 조직의 장점을 감안할 때, 이 조직 표적을 탐구에 있는 관심이 증가하고 있습니다. 설치류, 개 및 비인간 영장류 모델에서 이미 수많은 연구가 수행되었으며 적어도 하나의 인간 임상 시험이3,4,5로진행중이다. 유전자 치료 목적을 위해이 조직 표적의 유용성을 더 탐구하고 개발하기 위해 더 많은 비 인간 영장류 연구가 수행되어야합니다. 이 논문은 비인간 영장류 모델에서 트랜스포메이션을 위한 벡터 유전자를 전달하기 위해 스텐센덕트를 통해 파로티드 땀샘에 접근하는 방법을 설명합니다. 선으로 들어갈 때 덕트의 내후및 해부학의 전달을 눈에 띄게 입증하기 위해, 방사선 대조를 이용하여 형광술이 수행되었다. 벡터의 성공적인 전도를 입증하기 위해, 아데노바이러스 혈청형 5(Ad5) 벡터에그fp 유전자가 사용되었다. Ad5는 타액 조직을 변형시킬 수 있는 잘 기술된 벡터이다. 궁극적인 임상 사용을 위해 너무 면역원성이지만, 효율적인 트랜스듀션을 보장하기 위해 이 데모 연구를 위해 Ad5 벡터를 선택했습니다. 향상된 녹색 형광 단백질 (EGFP) 생산을 평가하는 것은 변환 다음 벡터 유전자의 성공적인 전사 및 번역을 입증하는 잘 설명 된 방법이며 여기에서 수행되었습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>500 &#181;L U100 syringes with 30-gauge needles</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>328466</td>
			<td>fixed needle for less waste</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive (e.g., Ethicon Dermabond)</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>Cyanoacrylate adhesive to seal and keep the tubing in the duct during infusion.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine injectable solution</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07 869-6061</td>
			<td>Atropine inj. 0.54 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Ultra-Fine Insulin Syringes 30G</td>
			<td>Walmart</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Avilable in 0.5 mL and 1.0 mL sizes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate (medical glue)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>DNX12</td>
			<td>Dermabond topical skin adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental loops with light</td>
			<td>Amazon (DDP)</td>
			<td>B012M3IV80</td>
			<td>Used to enhance visualization of Stensen&#39;s duct papilla</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infant Lacrimal Dilator</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>SPOI-137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine injectable solution</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-803-6637</td>
			<td>Ketaset inj. 100 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lacrimal Dilator</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>SPOI-132</td>
			<td>Used to dialate the Stensen&#39;s duct.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam injectable solution</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07 890-6698</td>
			<td>Midazolam inj. 5mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pair of scissors</td>
			<td>Amazon (DDP)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to cut PET10 tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene Tubing (PE-10)</td>
			<td>Scientific Comodities, Inc</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td>Tubing connecting the 30G syringe and inserted into the duct.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-tips</td>
			<td>Walmart</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to spread cyanoacrylate on the cheek</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Size 10 Polyethylene Tube (PET 10)</td>
			<td>Scientific Commodities</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td>low density polyethylene tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Mouth Opener</td>
			<td>Amazon (DDP)</td>
			<td>B01F3LVJXC</td>
			<td>Used to keep the animal&#39;s mouth open.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Amazon (DDP)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to insert PET10 tube into Stenson&#39;s duct</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7646-86-7</td>
			<td>Included in plasmid DNA infusates</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

retrograde parotid gland infusion through stensen's duct in a non-human primate for vectored gene delivery

침샘은 이미 인체 실험으로 이어지는 유망한 결과를 가진 유전자 치료를 위한 매력적인 조직 표적입니다. 그(것)들은 본질적으로 혈류량으로 단백질을 분비할 수 있고 쉽게 접근할 수 있습니다, 그(것)들을 유전자 전송에 의하여 대체 호르몬 생산 또는 예방 접종을 위한 잠재적으로 우수한 조직 사이트를 만들기. 유전자 전달을 위한 건의한 방법은 타액 덕트를 통해 경피 주입 및 역행 주입을 포함합니다. 우리는 비 인간 영장류에서 역행 타액 선동맥 주입 (RSGI)을 수행하는 방법을 보여줍니다. 우리는 parotid 유두의 식별, 기본 치과 도구를 사용하여 스텐슨의 덕트를 수착하고 밀봉하는 외상성 방법, 폴리에틸렌 튜브 및 시아노아크라이레이트, 적절한 주입 속도를 포함한 중요한 해부학 적 랜드 마크를 설명합니다. 이것은 전달의 가장 외상적인 방법이지만, 방법은 여전히 전달 될 수있는 부피 (<0.5 mL)와 덕트와 동맥에 외상의 잠재력에 의해 제한됩니다. 당사는 불소시경검사를 사용하여 인퓨아이 선으로 완전히 전달될 수 있음을 입증하고, 면역히스토케로 전달된 유전자의 전형 및 발현을 더욱 입증한다.

성공적인 절차, 변환 및 전사 도 1은 후방 우수한 뺨에2nd 어금니에 인접한 파로티드 유두를 나타낸다. 이미지는 또한 입 중괄호의 올바른 배치, 하드 입맛에 하나의 고무 끝 및 입시 종개에 다른 고무 끝을 보여줍니다. 도 2는 PET10의 2cm 마크에서 파로티드 유두의 성공적인 캔레이션 후 촬영한 이미지를 나타낸다. ?...

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Retrograde Parotid Gland Infusion through Stensen's Duct in a Non-Human Primate for Vectored Gene Delivery

타액선은 유전자 치료를 위한 조직 표적 사이트로서, 특히 유전자 전달에 의한 예방 접종 영역에서 제안되었다. 역행 마루드 주입을 활용한 비인간 영장류 모델에서 유전자 전달을 시연합니다.

벡터 유전자 전달을 위한 비인간 영장류에서 스텐센의 덕트를 통한 역행 파로티드 글랜드 주입

Salivary glands are an attractive tissue target for gene therapy with promising results already leading to human trials. They are inherently capable of ...

이 프로토콜은 역행 타액 선 주입의 절차를 자세히 보여주기 때문에 중요합니다. 절차는 벡터화 된 면역 프로피시스 또는 유전자 치료와 같은 다양한 의학적 이유로 사용될 수 있습니다. 이 기술은 쉽게 배우고 재현할 수 있습니다.저자는 구강 외과 의사가 아니거나 그러한 배경을 가지고 있음에도 불구하고 여러 번이 절차를 성공적으로 수행 할 수있었습니다. 마취 후 배율에 대한 치과 형근을 사용하고 파로티드 유두 또는 상부 두 번째 어금니에 인접한 후방 뺨에 스텐슨의 덕트의 개방을 식별합니다. 원추형 확장기의 점을 유두의 중앙이나 개구부로 배치하여 파로티드 유두를 부드럽게 팽창시키고 약 20~30초 동안 확장기를 앞뒤로 회전시합니다.다음으로, 핀셋을 사용하여 실외 끝에서 약 0.5센티미터에서 주사기를 함유하는 분리체에 부착된 폴리에틸렌 튜브의 표시끝을 잡고 튜브의 끝을 부드럽게 팽창유두리로 삽입한다. 튜브가 미끄러지는 데 도움이 되는 작은 회전 동작으로 튜브를 부드럽게 전진시키고, 핀셋은 0.5센티미터의 근접계를 이전 그립으로 재조정합니다. 2센티미터 표시가 파로티드 유두에 도달할 때까지 이 과정을 반복합니다.다음으로, 파로티드 유두를 밀봉하고 구강 내 의 폐포물의 유출을 줄이려면 유두 주위와 삽입 된 튜브에 뺨에 시아노아크릴레이트를 적용하십시오. 시아노아크릴레이트건조가 끝나면 분당 100 마이크로리터의 속도로 5분 이상 비핵을 천천히 주입하십시오. 주입이 완료된 후 튜브를 최소 5분 동안 제자리에 두고 덕트를 밀봉하고 비소가 파로티드 선에 남을 수 있도록 합니다.마지막으로, 부드러운 견인로 튜브를 제거하고 시아노아크라이레이트는 튜브와 함께 자유롭게 당겨집니다. 무선 콘트라스트 주입을 이용한 불소 검사는 스텐슨의 덕트를 통해 그리고 parotid 선으로 용액의 분기를 시연했습니다. parotid 선의 화학적 분석으로서 면역은 두 세포 유형모두에서 성공적인 트랜스듀션 및 전사를 나타내는 덕트 및 아시나르 세포 모두에서 EGFP에 대한 양성 얼룩을 드러냈다.이 절차의 주요 과제는 아마도 매우 부드럽고 천천히 수행해야 하는 유두에 폴리에틸렌 튜브를 도입하는 것입니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

V3의 HIV - 1 Tropism의 Genotypic 추론 사용 인구를 기반 시퀀싱

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

연구

면역학 및 감염병학

Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant

Multivirus 특정 T 세포 생성 Allogeneic 조혈 줄기 세포 이식 후 바이러스 감염을 예방 / 치료

Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. We and others have successfully ...

Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

의 드문 경우에 이가와 조직 Transglutaminase이 항체에 의해 표피 Transglutaminase의 인식 붉은 털원숭이 피부염

Tissue transglutaminase 2 (tTG2) is an intestinal digestive enzyme which deamidates already partially digested dietary gluten e.g. gliadin peptides. In ...

Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

알렉사 플루어 라벨링을 통해 뎅그열 바이러스를 떠올리

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Ixodes Scapularis 진드기의 타액, 침샘 및 Hemolymph 컬렉션

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Feeding of Ticks on Animals for Transmission and Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

라임 병 연구의 변속기 및 Xenodiagnosis에 대한 동물에 진드기의 먹이

Transmission of the etiologic agent of Lyme disease, Borrelia burgdorferi, occurs by the  attachment and blood feeding of Ixodes species ticks on ...

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

제한 효소 기반의 복제 방법을 평가하기 위해<em&gt; 시험관</em&gt; HIV-1 서브 타입 C 개그 - MJ4 키메라 바이러스의 복제 능력

The protective effect of many HLA class I alleles on HIV-1 pathogenesis and disease progression is, in part, attributed to their ability to target ...

A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

복구하는 새로운 미세 절제 접근<em&gt; 결핵균</em폐 육아종 임베디드 포르말린 고정 파라핀에서&gt; 특정 성적 증명서

Microdissection has been used for the examination of tissues at DNA, RNA, and protein levels for over a decade. Laser capture microscopy (LCM) is the most ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Utilizing the Antigen Capsid-Incorporation Strategy for the Development of Adenovirus Serotype 5-Vectored Vaccine Approaches

아데노 바이러스 혈청 형 5 된 벡터 백신 접근 방법의 개발을위한 항원 캡시드-설립 전략을 활용

Adenovirus serotype 5 (Ad5) has been extensively modified with traditional transgene methods for the vaccine development. The reduced efficacies of these ...