Name: aav deployment of enhancer-based expression constructs in vivo in mouse brain
Uploaded: 2022-03-31T12:50:00
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测序在加州大学戴维斯分校DNA技术核心进行。我们感谢加州大学戴维斯分校林田实验室对rAAV包装的培训，并慷慨地赠送给我们AAV助手和代表/帽质粒。这项工作得到了NIH / NIGMS R35GM119831的支持。

该协议已获得加州大学戴维斯分校机构动物护理和使用委员会（协议#22339）和加州大学戴维斯分校机构生物安全委员会（BUA-R1903）的批准。该协议已在出生后第0-1天在两性的C57BL / 6J小鼠上进行了测试。
1.将增强子候选序列克隆到AAV载体质粒中。
注意：给出了代表性的方案，但克隆策略具有高度的灵活性。
<ol><li>选择或设计报告器构造。在?...

该协议描述了一种基于rAAV的方法，用于在出生后小鼠大脑中部署增强子驱动的转基因。在这个通用的方案中，将候选增强子、最小启动子、报告基因和可选的条形码序列克隆到 AAV 质粒骨架中。这些实验可以用单个候选增强子序列或多个序列并行完成。质粒被包装成rAAV并输送到出生后的小鼠大脑。在一段时间允许病毒转导后，收集大脑并进行成像以进行报告基因表达。包括一种组成型表达的报告...

增强子是作为转录因子结合位点的基因组顺式调控元件，可以以时空特异性的方式驱动靶基因的表达1，2。它们在不同的细胞类型、组织和发育阶段中具有差异活性，并且可以是疾病风险相关基因组变异的底物3，4。因此，了解增强子功能动态的需求对于基因组学中转化和基础科学应用的进展至关重要。在计算机中，增强子活性的预测可以作为产生增强子能力假设的极好资源5，6。这种预测的增强子活性可能需要额外的验证和询问，以充分了解功能活性。增强子报告基因测定已被证明在从细胞到动物的各种系统中具有此目的的价值7，8，9。为了在灵活且具有成本效益的瞬时体内环境中扩展这些研究，该协议描述了使用基于体内AAV的方法来测试推定的增强子序列，以了解它们在出生后小鼠大脑中驱动异位报告基因表达的能力。这一系列方法可用于询问单个候选序列或平行文库筛选，并且与基础和转化研究相关。
该方法在单个质粒中将推定的增强子候选DNA序列与报告基因（此处为EGFP）结合，在最小启动子的控制下，单独不驱动显着表达。将质粒包装成重组AAV（rAAV）并注射到动物模型中。虽然这里的应用是大脑，但各种rAAV血清型能够感染不同的组织类型，因此这种方法可以扩展到其他系统10。一段时间后，可以收集大脑并检测报告基因的表达。与对照组相比，强表达表明测试的候选序列能够“增强”基因的表达（图1）。这种简单的设计提供了一种简单明了的方法来测试 大脑中体内 增强子活性的序列。
除了测试序列的增强子能力外，该方法还可以与确定细胞类型增强子活性的技术相结合。在确定差异增强子活性的基于序列的方法中，在DNA和RNA测序之前对细胞类型特异性标记进行分选可以使研究人员确定不同的细胞类型是否显示出差异增强子活性，如Gisselbrecht等人11所述。在基于成像的方法中，将图像与细胞类型特异性标记物共标记，可以检查表现出增强子驱动荧光的细胞是否也显示感兴趣的细胞类型标记物12，13，14，15，16。增强子报告基因测定能够直接测试增强子中与风险相关的等位基因变异对增强子能力的影响。在全基因组关联研究（GWAS）中确定的绝大多数风险位点位于基因组的非编码区域17。这些风险位点的功能注释研究表明，很大一部分可能充当增强子18，19，20。MPRA在体内部署可以测试这些与风险相关的变异，以增强大脑中的活性12，21。最后，不同时间点的交付和收集可以提供对增强子活跃的发育阶段的见解。
增强子-报告质粒设计多种多样，可以定制以适应实验目标。有几种用于增强子研究的最小启动子的选择，例如人β珠蛋白最小启动子22 和小鼠Hsp68最小启动子23。已知这些启动子会驱动低水平的表达，除非与增强子元件耦合来激活它们。相反，组成型启动子元件驱动转基因的强表达，可用于阳性对照或在稳健表达的背景下测试增强子功能。组成型启动子的常见选择包括CAG，一种衍生自鸡β-肌动蛋白启动子和巨细胞病毒即时早期增强子24的杂交启动子24，或人EF1α25。由于已知增强子26双向工作，因此增强子相对于最小启动子的方向和位置是灵活的（图2A）。传统的增强子-报告基因测定将增强子置于启动子的上游，并且在文库递送中，包括报告基因下游的条形码序列，以将测序读数与测试的增强子27相关联。然而，增强子也可以放置在报告基因的开放阅读框架中，并作为它们自己的条形码序列，就像在STARR-seq28中所做的那样。这里描述的方案利用STARR-seq测定设计，将候选增强子序列放入报告基因的3' UTR中。虽然STARR-seq取向提供了更简化的克隆的好处，但与传统方法相比，它不太清楚，并且可能在构建体之间诱导可变的RNA稳定性。所描述的方法可以很容易地适应STARR-seq或常规取向，对克隆过程进行微小的改变，这些改动已在其他地方描述27，29。
可以采用不同的AAV递送方法来进一步定制该技术以适应实验目标（图2B）。直接颅内注射，在本协议中进一步描述，将高浓度的病毒直接输送到大脑30。这提供了以注射部位为中心的高转导效率，使其成为希望最大化组织区域内转导细胞密度的实验的绝佳技术。立体定向注射可以帮助标准化动物的注射部位，以实现可重复的局部转导。颅内注射在出生后早期动物中最直接。作为一种替代技术，全身注射可以使用具有能够穿过血脑屏障的血清型的AAV传递转基因31。尾静脉注射允许病毒在全身循环，从而可以在许多组织中广泛传递10。眶后注射是另一种全身注射技术，可将病毒从眼睛后面输送到眶后窦32。这为AAV从静脉系统到大脑提供了更直接的途径，导致大脑中转导细胞的浓度高于注射到更多外周血管中的浓度33。
这种技术的另一个灵活方面是读出方法。从广义上讲，选项可以描述为基于报告基因或基于测序（图2C）。将荧光报告基因（如GFP）掺入构建体的开放阅读框中，导致荧光蛋白在候选增强子驱动表达的任何转导细胞中的表达。标记和成像技术（如免疫组织化学）可实现信号放大。基于测序的读出技术涉及从组织收集的RNA中从递送的构建体中识别序列。通过量化最初递送的病毒DNA的数量，表达RNA与递送DNA的比较可用于确定测试的增强子序列能够在多大程度上驱动转基因的表达增加，例如，在大规模平行报告测定（MPRA）的背景下。MPRA提供了这些技术的强大扩展，可以同时测试多达数千种候选增强子的活性，并在基因组学研究中进行了广泛的描述12，27，34，35，36。通过批量而不是单独对候选增强子执行克隆、包装、递送和测序步骤，可以实现更高的通量筛选。
候选增强子选择提供了另一个灵活性的机会（图 2D）。例如，该测定可用于鉴定特定基因的增强子，确定感兴趣的非编码DNA区域的功能，或确定增强子活跃的特定细胞类型或发育阶段 - 所有这些都服务于基础科学和疾病研究的目标。通常，候选增强子 的选择是由增强 子活性的计算机预测驱动的。通常， 计算机 预测包括组蛋白修饰的 ChIP-seq，这些修饰指示可能的增强子，例如 H3K27ac37 和染色质可及性映射38。最后，一个不断增长的研究领域是对合成设计的增强子元件进行基于功能的筛选，从而能够研究增强子序列如何指导功能39 和设计具有特定性质的增强子40。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x Citrate Buffer</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C9999-1000ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#39;-gatcactctcggcatggac-3&#39;</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td>N/A: Custom designed</td>
			<td>Forward primer for verifying clones after transformation. These primers are specific to the vector used and were designed for the specific vector used in our experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#39;-gatggctggcaactagaagg-3&#39;</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td>N/A: Custom designed</td>
			<td>Reverse primer for verifying clones after transformation. These primers are specific to the vector used and were designed for the specific vector used in our experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>VWR</td>
			<td>VWRVN605-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tube assemblies</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5177-5EA</td>
			<td>for mouth-driven delivery of rAAV</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteriological petri dishes</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>08-757-100D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbenicillin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1389-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken IgY anti-GFP</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A10262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM900</td>
			<td>The images were taken on the LSM800 model, but Zeiss launched the LSM900 model in recent years to replace LSM800.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical centrifuge tubes 15 mL</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-565-269</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomolds</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC9806558</td>
			<td>These molds are suitable for P28 mouse brain. Other sizes may be more suitable for larger or smaller tissues.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors, 4.5&#34;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-chicken AlexaFlour-488</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>703-545-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS 1x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>MT21031CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Microcentrifuge tubes 2.0 mL</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22431048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon round-bottom tubes 14 mL</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>352059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green dye</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>F0099-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine detail paint brush set</td>
			<td>Artbrush Tower</td>
			<td>B014GWCLFO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibson Assembly Master Mix</td>
			<td>NEB</td>
			<td>E2611S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary tubes</td>
			<td>Drummond Scientific Company</td>
			<td>5-000-2005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiSpeed Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>12663</td>
			<td>Commercial plasmid maxi prep kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone HyPure Molecular Biology Grade Water</td>
			<td>VWR</td>
			<td>SH30538.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IV butterfly infusion set with 12&#34; tubing and 25G needle</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>26708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>34155</td>
			<td>Lint-free wipe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Agar</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>BP1425-500</td>
			<td>LB agar pre-mix for selective media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McPherson Vannas iris scissor</td>
			<td>Integra LifeSciences</td>
			<td>360-215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral oil</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>69794-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEB Stable Competent E. coli</td>
			<td>NEB</td>
			<td>C3040I</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NucleoSpin Gel and PCR Clean-Up</td>
			<td>Takara</td>
			<td>740609.5</td>
			<td>Kit for enzymatic reaction cleanup and gel extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT medium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>60-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR strip tubes 0.2 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>490003-692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F155005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS) 10x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>70011044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion Hot Start II High Fidelity DNA Polymerase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F549L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powdered milk</td>
			<td>Sunny Select</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAquick PCR Purification Kit</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>28106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rCutSmart Buffer</td>
			<td>NEB</td>
			<td>B6004S</td>
			<td>Buffer for restriction digest with PacI, AscI, and XmaI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restriction enzyme: AscI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0558L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restriction enzyme: PacI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0547L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restriction enzyme: XmaI</td>
			<td>NEB</td>
			<td>R0180L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOC outgrowth medium</td>
			<td>NEB</td>
			<td>B0920S</td>
			<td>Recovery medium after transformation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose (RNase/DNase free)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>033522.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TAE buffer</td>
			<td>Apex</td>
			<td>20-194</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer tubing</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F1179941</td>
			<td>For peristaltic pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wizard Plus SV Minipreps DNA Purification System</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1460</td>
			<td>Plasmid mini prep kit</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

aav deployment of enhancer-based expression constructs in vivo in mouse brain

增强子是多种转录因子的结合平台，可驱动组织和细胞类型特异性基因的特定表达模式。评估非编码DNA和各种染色质状态的多种方法已被证明可用于预测基因组中增强子序列的存在，但验证这些序列的活性并找到它们活跃的器官和发育阶段是一个劳动密集型过程。腺相关病毒（AAV）载体的最新进展使转基因能够广泛递送到小鼠组织，从而能够在不需要转基因动物的情况下进行 体内 增强子测试。该协议显示了在最小启动子的控制下表达EGFP的报告构建体如何用于研究小鼠大脑中候选增强子序列的活动模式，该启动子本身不会驱动显着表达。将AAV包装的报告构建体输送到小鼠大脑并孵育1-4周，之后处死动物，并在显微镜下观察脑切片。EGFP出现在测试增强子足以启动基因表达的细胞中，确定增强子在大脑中活跃的位置和发育阶段。标准的克隆方法、低成本的AAV包装以及扩展的AAV血清型和 体内 递送和标准成像读数的方法使其成为研究大脑中基因表达如何调节的可访问方法。

使用这些方法，测试了基因CACNA1C19，49，50的精神风险相关第三内含子中的915 bp序列在出生后小鼠大脑中的增强子活性。该序列是在以精神和神经风险SNPs 12为中心的345个候选增强子序列的MPRA中发现的，这里将表征实验描述为一般示例。在Hsp68最小启动子和单个候选增强子序列的控制下，在P0上注射AAV9构?...

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AAV Deployment of Enhancer-Based Expression Constructs In Vivo in Mouse Brain

该协议描述了一种新型基于rAAV的瞬时增强子 - 报告基因测定。该测定可用于在小鼠 大脑中诱导 增强子驱动的体内表达。

基于增强子的表达构建体在小鼠 大脑中的 AAV部署

Enhancers are binding platforms for a diverse array of transcription factors that drive specific expression patterns of tissue- and cell-type-specific ...

该协议意义重大，因为它不仅可以可视化增强子序列是否可以驱动表达，还可以可视化它可以驱动身体特定部位的表达。它很快。注射只需不到10分钟即可完成，并且在样本采集后的短短几天内即可看到报告基因是否表达以及在哪里表达。要开始克隆，请选择或设计报告器构造。这里使用的构建体将增强子候选者置于在hsp68最小启动子控制下表达的EGFP报告基因的三个主要非翻译区域中。为了设计用于扩增目标序列并克隆到载体中的PCR引物，请在引物的五个素末添加适当的Gibson克隆同源臂。使用设计的引物，从DNA样品中进行PCR。使用 Pac1 和 Asc1 消化 1 至 10 微克的载体 DNA，具体取决于所需的克隆反应次数。通过在 100 伏下采用 0.7 至 1% 凝胶电泳 30 至 60 分钟，分离限制性酶切片段。提取线性化载体的条带，并使用商业凝胶提取试剂盒纯化。一旦完成吉布森克隆和细胞转化，将细胞铺在选择性培养基上，并在37摄氏度下孵育过夜。在验证报告构建体的成功克隆后，使用甘油原液接种五毫升发酵剂。在 30 摄氏度的振荡培养箱中培养培养 8 至 16 小时，每分钟 180 次旋转。当肉汤变浑浊时，将发酵剂培养物在 250 至 300 毫升新鲜选择性 LB 肉汤中稀释 1， 000 倍，并在 30 摄氏度和每分钟 180 旋转的振荡培养箱中孵育过夜。使用商业质粒超大试剂盒纯化质粒。要测试ITR的重组，请执行Xma1消化。可视化波段。确保摘要显示预期的波段数。重组将导致波段少于预期。准备重组AAV混合物以进行交付。如果比较多种增强子报告病毒的表达模式，请稀释每种病毒，使病毒滴度等同于浓度最低的病毒。将增强子报告病毒和组成型表达的对照报告病毒以二比一或三比一的比例混合。加入少量终浓度为0.06%的快速绿色染料，轻轻刺入精致的无绒擦拭布中，打破由微升刻度毛细管制成的拉动玻璃移液管的尖端。将移液器插入吸引器组件中，带有连接到橡胶垫圈的压力施加装置，用于固定微毛细管移液器。通过吸气器施加负压，将少量约0.2至0.5微升的矿物油吸入移液器中。将抽吸器组件放在一边，将病毒放在冰上，直到准备好注射。冷冻麻醉新生小鼠后，使用吸引器组件施加负压，并将病毒混合物吸入拉动的玻璃移液管中，直到半月板通过两微升刻度线。将鼠标从冷室中取出，然后将其放在工作台上。定位双侧注射部位在λ和前膛之间，以及矢状缝和每只眼睛之间。使用酒精湿巾对它们进行消毒。使用拉动的玻璃移液管刺穿新生小鼠的头骨。当针头进入颅骨时，通过吸引器组件施加正压。将一微升病毒分配到侧心室，然后取出移液器。将鼠标放在加热垫或加热室上以恢复。动物醒来后将动物放回笼子里。使用低放大倍率5倍主观镜片记录横跨脑切片的荧光图像。通过定位注射部位，根据红色荧光细胞的密度和强度评估病毒转导的程度。比较相似转导的动物。使用超过25倍的高倍率物镜记录荧光图像。接下来，打开分析软件，并应用三乘三的中值滤波器来降低噪声。单击“处理”菜单，然后单击“噪声”，然后选择“去斑点”选项。接下来，要从图像中减去背景荧光，首先分离多通道图像的通道。单击“图像”菜单，然后单击“颜色”，然后选择“拆分通道”选项。使用矩形或圆形选择工具，在没有任何荧光细胞的图像区域中绘制一个小形状。通过单击“分析”，然后单击“测量”来测量背景的平均像素强度，然后重复多次采样。平均 5 到 8 个背景区域的平均灰度值，并删除十进制值。通过选择“处理”菜单从图像中的每个像素中减去值，然后单击“数学并减去”。接下来，输入要减去的背景值，然后单击“确定”。如果需要，通过选择“图像”菜单将通道合并回多通道图像，然后单击“颜色”，然后选择“合并通道”。要计算绿色荧光细胞的数量，请隐藏绿色通道，并使用自由形式选择工具在表达红色荧光的大脑区域周围绘制一个形状。单击测量功能以测量所选区域中红色通道的面积、积分密度和平均灰度值。使用多点选择工具计算绿像元的数量，并通过红色通道的积分强度对绿像元数进行归一化。在转导增强子报告基因后，小鼠在P0处颅内注射，AAV构建体阳性，注射后28天在皮质的中下层显示增强子驱动的EGFP表达。在P0处注射阴性对照构建体的小鼠在注射后28天没有显示EGFP的任何表达，这表明发现增强子元件可以驱动小鼠大脑中EGFP的转录。为了可视化成功转导的区域并控制潜在的变异性，检查了AAV递送的不同滴度增强子报告文库。候选增强子的高滴度库驱动广泛的EGFP表达，而候选增强子的低滴度库驱动P7小鼠大脑中稀疏的CGFP表达。在每次注射时将增强子报告基因AAV与阳性对照混合至关重要，以区分没有活性的增强子和失败的交付。该程序可以与免疫组织化学、RNA FISH 或单细胞 RNA 测序配对，以确定增强子在哪种细胞类型中具有活性。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

AAV Deployment of Enhancer-Based Expression Constructs In Vivo in Mouse Brain

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

小鼠视网膜神经节细胞的转染在体内电穿孔

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

科研

神经科学

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

使用超声波血脑屏障破坏和锰增强MRI的脑功能成像

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Brain Slice Biotinylation: An Ex Vivo Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

Brain Slice Biotinylation: An Ex Vivo Approach to Measure Region-specific Plasma Membrane Protein Trafficking in Adult Neurons

大脑切片生物素化：一个<em&gt;前体内</em&gt;方法来衡量地区特有的质膜蛋白贩运成年神经元

Regulated endocytic trafficking is the central mechanism facilitating a variety of neuromodulatory events, by dynamically controlling receptor, ion ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

同时<em&gt;体外</em两个由视网膜&gt;功能测试<em&gt;在体内</em&gt;电图系统

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...

Purification of Mouse Brain Vessels

对小鼠脑血管净化

In the brain, most of the vascular system consists of a selective barrier, the blood-brain barrier (BBB) that regulates the exchange of molecules and ...

HSV-Mediated Transgene Expression of Chimeric Constructs to Study Behavioral Function of GPCR Heteromers in Mice

研究小鼠GPCR异聚的行为功能嵌合构造的HSV介导的转基因表达

The heteromeric receptor complex between 5-HT2A and mGlu2 has been implicated in some of the behavioral phenotypes in mouse models of psychosis1,2.  ...

In Vivo Targeted Expression of Optogenetic Proteins Using Silk/AAV Films

In Vivo Targeted Expression of Optogenetic Proteins Using Silk/AAV Films

在 vivosilk/aav 薄膜在光基因表达中的靶向表达

The quest to understand how neural circuits process information in order to drive behavioral output has been greatly aided by recently-developed optical ...

Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

小鼠视网膜的经瞳双光子体内成像

The retina transforms light signals from the environment into electrical signals that are propagated to the brain. Diseases of the retina are prevalent ...

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

生态HIV脑感染的老鼠模型

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

在体内 小鼠劣质橄榄中的钙成像

Inferior olive (IO), a nucleus in the ventral medulla, is the only source of climbing fibers that form one of the two input pathways entering the ...

基于增强子的表达构建体在小鼠 大脑中的 AAV部署

基于增强子的表达构建体在小鼠大脑中的 AAV部署