Name: utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time
Uploaded: 2021-05-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

وpT-t7 البلازميد ترميز A56C α سين متحولة أعطيت لنا كهدية من الدكتور عساف غروبي، الدكتور دان أمير والدكتور إليشا هاس. تم دعم هذه الورقة من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH، منحة R01 GM130942 إلى E.L. باعتبارها سوباوارد)، ومؤسسة العلوم الإسرائيلية (منحة 3565/20 داخل KillCorona - كبح برنامج أبحاث فيروس كورونا)، وصندوق ميلنر والجامعة العبرية في القدس (أموال بدء التشغيل).

1. التحول البلازميد
<ol><li>إعداد 0.5 لتر من SOC المتوسطة<ol>
<li>وزن 10 غرام من التريبتون، 2.5 غرام من استخراج الخميرة، 0.25 غرام من كلوريد الصوديوم (NaCl)، 0.1 غرام من كلوريد البوتاسيوم (KCl).</li>
		<li>أضف الماء المقطر المزدوج (DDW) حتى الحجم الإجمالي 0.5 لتر.</li>
		<li>ضبط درجة الحموضة 7 بإضافة هيدروكسيد الصوديوم (NaOH).</l...

أجريت دراسات كيميائية حيوية وبيولوجية واسعة لدراسة الخصائص الهيكلية αسين وطبيعته المضطربة33و34و35و36و37و38. وقد استخدمت العديد من الأعمال بالفعل smFRET نشر بحرية للتحقيق في الديناميات د...

على مدى العقدين الماضيين، أصبحت الأساليب القائمة على مضان جزيء واحد أداة قوية لقياس الجزيئات الحيوية1،2، والتحقيق في كيفية توزيع المعلمات الجزيئية الحيوية المختلفة وكذلك كيف أنها تتقاطع ديناميكيا بين المجموعات الفرعية المختلفة من هذه المعلمات في قرار sub-millisecond3،4،5. المعلمات في هذه التقنيات تشمل كفاءة نقل الطاقة في قياسات FRET 6,7, مضان anisotropy8,9, مضان غلة الكم والعمر10,11, كدالة من مختلف مضان إخماد12 أو تعزيز13 آليات. واحدة من هذه الآليات، والمعروفة باسم تحسين الفلورية الناجمة عن البروتين (PIFE)14 يقدم تعزيز العائد الكم الفلوري والعمر كدالة لعرقلة steric إلى إيزوميريس الحرة من الفلوروفور عندما تكون في حالة متحمس، الناجمة عن أسطح البروتين في محيط الصبغة14،15،16،17،18،19 . وتعتبر كل من FRET وPIFE مساطر طيفية أو مستشعرات القرب لأن معلمتهما المقاسة ترتبط مباشرة بمقياس مكاني داخل الجزيئات الحيوية المسماة تحت القياس. في حين أن كفاءة FRET ترتبط بالمسافة بين زوج من الأصباغ ضمن نطاق 3-10 نانومتر20، فإن مسارات PIFE تزيد في غلة الكم الفلوري أو العمر المرتبط بالمسافة بين الصبغة وسطح بروتين قريب في نطاق 0-3 نانومتر19.
وقد استخدمت على نطاق واسع FRET جزيء واحد لتوفير رؤى الهيكلية في العديد من أنظمة البروتين المختلفة, بما في ذلك البروتينات المضطربة في جوهرها (النازحين)21, مثل α-سينوكلين (α-سين)22. α-Syn يمكن تشكيل هياكل مرتبة بعد ربط الجزيئات الحيوية المختلفة وتحت ظروف مختلفة23،24،25،26،27،28،29،30. ومع ذلك ، عندما لا تنضم ، يتميز مونومر α سين بعدم التجانس العالي مع التوافق السريع31،32.
وقد درست سابقا تشكيلات α سين باستخدام تقنيات مختلفة مختلفة تساعد في تحديد ديناميات تشكيلية من هذه النظم البروتين غير متجانسة للغاية وديناميكية33،34،35،36،37،38،39. ومن المثير للاهتمام، جزيء واحد FRET (smFRET) قياسات α سين في العازلة ذكرت واحد FRET السكان39،40 التي هي نتيجة لمتوسط الوقت من التوافقات بشكل حيوي في بعض الأحيان أسرع بكثير من وقت الانتشار النموذجي من α سين من خلال بقعة الكونفوار (مرات أسرع من بضع ميكروثانية وأسرع من ذلك ، بالنسبة لأوقات نشر ميلي ثانية نموذجية)40، 41. ومع ذلك ، باستخدام مسطرة مطيافية FRET مع حساسية المسافة 3-10 نانومتر في بعض الأحيان تقارير فقط عن التغيرات الهيكلية الشاملة في بروتين صغير مثل α سين. ويمكن أن تبلغ قياسات جزيء واحد باستخدام أجهزة استشعار القرب الطيفي ذات الحساسيات الأقصر مسافة عن ديناميات الهياكل المحلية. هنا نقوم بإجراء قياسات PIFE جزيء واحد من α-Syn وتحديد مجموعات فرعية مختلفة من العمر الفلوري رسم الخرائط إلى هياكل محلية مختلفة مع التحولات بينهما بطيئة مثل 100 مللي ثانية. يلخص هذا العمل قياسات smPIFE التي تم حلها زمنيا لجزيئات α-Syn التي يتم نشرها بحرية واحدة في كل مرة ، في المخزن المؤقت وعندما تكون مرتبطة بالأغشية المستندة إلى SDS كمستشعر القرب الطيفي أحادي الجزيئات قصير المدى.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units</td>
			<td>Merc</td>
			<td>C7715</td>
			<td>cutoff: 100 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cysteamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis bags - MEGA GeBaFlex-tube</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>MEGA320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E5134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast SeeBand staining solution</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>SB050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap Desalting 5 mL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>GE17-1408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (TROLOX)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>238813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>63068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MonoQ column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein LoBind tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EP0030108094</td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rinse a &#181;-slide 18</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cell spreaders, Drigalski spatulas</td>
			<td>mini-plast</td>
			<td>815-004-05-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptomycin sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sulfo-Cy3&#160;maleimide</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab146493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y1625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time

استخدام المساطر الطيفية لتتبع تشكيلات متعددة من الجزيئات الحيوية واحدة ودينامياتها قد أحدثت ثورة في فهم الديناميات الهيكلية ومساهماتها في علم الأحياء. في حين أن المسطرة المستندة إلى FRET تقارير عن المسافات بين الصبغة في نطاق 3-10 نانومتر، تقنيات الطيفية الأخرى، مثل تعزيز الفلورية الناجمة عن البروتين (PIFE)، تقرير عن القرب بين صبغة وسطح البروتين في أقصر 0-3 نانومتر المدى. وبغض النظر عن الطريقة المفضلة، فإن استخدامها في قياس الجزيئات الحيوية المنتشرة بحرية واحدة تلو الثانية يسترجع المدرجات التكرارية للمعلمة التجريبية التي تسفر عن مجموعات فرعية منفصلة موزعة مركزيا من الجزيئات الحيوية، حيث يمثل كل مجموعة فرعية إما تشكيلا واحدا بقي دون تغيير داخل ميلي ثانية، أو تشكيلات متعددة تتقاطع أسرع بكثير من ميلي ثانية، وبالتالي مجموعة فرعية متوسطة. في FRET أحادي الجزيء ، حيث المعلمة المبلغ عنها في المدرجات التكرارية هي كفاءة FRET بين الصبغات ، تم الإبلاغ سابقا عن α بروتين فرعي متوسط واحد من التركيبات المتعددة التي تتشابك بسرعة. في حين أن هذه النتائج السابقة تعتمد على نطاق 3-10 نانومتر من المسطرة القائمة على FRET ، سعينا إلى وضع هذا البروتين على المحك باستخدام PIFE أحادي الجزيء ، حيث نتتبع عمر الفلورية لبروتينات sCy3 المحددة لموقع معين α-Synuclein واحدة في كل مرة. ومن المثير للاهتمام ، وذلك باستخدام هذا أقصر مدى مستشعر القرب الطيفي ، sCy3 المسمى α - Synuclein معارض عدة مجموعات فرعية مدى الحياة مع مختلفة بوضوح متوسط العمر التي تتقاطع في 10-100 مللي ثانية. وتبين هذه النتائج أنه على الرغم من أن α سينوكلين قد يكون مضطربا على الصعيد العالمي، فإنه يحقق مع ذلك هياكل محلية مستقرة. باختصار، في هذا العمل نسلط الضوء على ميزة استخدام أجهزة استشعار القرب الطيفية المختلفة التي تتبع التغيرات الهيكلية المحلية أو العالمية الجزيئات الحيوية واحد في وقت واحد.

كما المشردين داخليا، عندما لا يكون ملزما إلى الجزيئات الحيوية آخر، α سين معارض الديناميات الهيكلية بين تشكيلات متعددة، مع التحولات في عدد قليل من ميكروثانية40 وحتى في مئات نانو ثانية41. عندما يعبر α سين بقعة الكونفوجال ، قد يخضع لآلاف التحولات بين التركيبات. في ال?...

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃƒÅ½Ã‚Â±-Synuclein Monomer at a Time

الوقت حل واحد جزيء البروتين الناجم عن تعزيز الفلورية هو مفيد مضان مطيافية القرب الاستشعار حساسة للتغيرات الهيكلية المحلية في البروتينات. هنا نظهر أنه يمكن استخدامه للكشف عن تشكيلات محلية مستقرة في α-Synuclein ، والتي تعرف باسم غير منظم وغير مستقر كروي عند قياسه باستخدام مسطرة FRET طويلة المدى.

استخدام تحسين الفلورية المستحث بالبروتين الذي تم حله زمنيا لتحديد التركيبات المحلية المستقرة α-Synuclein Monomer في كل مرة

Using spectroscopic rulers to track multiple conformations of single biomolecules and their dynamics have revolutionized the understanding of structural ...

يمكن أن يكمل تعزيز الفلورية الناجم عن البروتين جزيء واحد قياسات FRET عند دراسة الملوثات الفرعية الهيكلية للبروتين والتواؤم ، خاصة في الحالات التي تبلغ فيها الخلايا الفرعية الهيكلية المتميزة عن الهياكل المحلية المستقرة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تلتقط مجموعات فرعية هيكلية متميزة خاصة بالموقع استنادا إلى محيط موقع وضع العلامات على الصبغة إلى أسطح البروتين. يمكن تطبيق تعزيز الفلورسينس أحادي الجزيء والبروتين على أي نظام حيوي جزيئي ذي أهمية للتحقيق في مجموعات فرعية هيكلية متميزة ومحلية.تبدأ بإعداد 25 بيكومولار سولفو-Cy3 المسمى ألفا-سينوكلين في العازلة القياس في أنبوب ملزم منخفض البروتين. إضافة 100 ميكرولتر من ملليغرام واحد لكل ملليلتر BSA إلى الشريحة غطاء المجهر 18 غرفة واحتضان لمدة دقيقة واحدة، ثم، تجاهل BSA. إضافة 100 ميكرولتر من 25 بيكومولار سولفو-Cy3 المسمى ألفا-سينوكلين عينة في غرفة الشريحة زلة الغطاء.بعد ذلك ، للحصول على البيانات ، أضف قطرة من المياه فائقة البرودة على الجزء العلوي من عدسة هدف الغمر بالماء ذات الفتحة العددية العالية ، وإصلاح شريحة زلة الغطاء في غرفة المسرح ، ثم تثبيت التجميع على الجزء العلوي من مرحلة المجهر. جلب العدسة الهدف صعودا حتى قطرة الماء على رأس مسحات العدسة الهدف في الجزء السفلي من الشريحة زلة الغطاء، وفتح مصراع الليزر. عندما تتحرك العدسة الموضوعية إلى الأعلى، تفقد نمط الحلقات الهوائية على كاميرا CCD.الحلقة الأولى تمثل التركيز في واجهة الماء / الزجاج، والحلقة الثانية تمثل التركيز في واجهة بين الزجاج والحل عينة. زيادة ارتفاع العدسة الهدف من قبل 75 ميكرومتر لجعل تركيز الليزر عميق في الحل لتقليل autofluorescence من السطح الزجاجي للانزلاق الغطاء. ضبط قوة الليزر في عدسة الهدف ما يقرب من 100 ، ميكروواط.بدء اكتساب فوتونات الكشف عن لفترة محددة مسبقا. افتح دفاتر Jupyter، ثم افتح نموذج دفتر الملاحظات. قم بتحميل ملف بيانات FRETBursts وPhoton-HDF5.استخدم الرسم البياني للزهات بين الفوتون لحساب معدلات الخلفية لكل 30 ثانية من اكتساب البيانات. نقل إطار زمني من فوتون واحد في كل مرة لمدة 20 فوتون متتالية، وجمع بيانات الفوتون إذا كان معدل الفوتون الفوري F أكبر ب 11 مرة على الأقل من معدل الخلفية لتلك الفترة من اكتساب البيانات. حساب حجم انفجار وكمية الفوتونات في انفجار، ومدة انفجار، والفرق الزمني بين آخر وأول أوقات الكشف عن الفوتون في انفجار، وسطوع انفجار، وأكبر قيمة لمعدل الفوتون لحظية في انفجار، وانفجار الفصل، والفاصل الزمني بين رشقات نارية متتالية.رسم الرسم البياني لقيم سطوع الاندفاع مع محور الأحداث في مقياس لوغاريتمي. حدد عتبة سطوع الاندفاع على أنها الحد الأدنى لقيمة سطوع الاندفاع التي يعرض منها الرسم البياني نمطا متحللا ، ويختار الرشقات بقيم سطوع أكبر من عتبة سطوع الاندفاع. بالنسبة للانفجار يعني قياس العمر الفلوري، رسم الرسم البياني للنانوتاين الفوتون لجميع الفوتونات في رشقات نارية مختارة مع محور العد الفوتون في مقياس لوغاريتمي.حدد عتبة نانوتايم على أنها الحد الأدنى لقيمة نانوتايم التي يعرض منها الرسم البياني للفوتونات نانوتيم نمطا متحللا. حدد فقط تلك فوتونات مع nanotimes أكبر من عتبة نانوتايم. حساب المتوسط الجبري لجميع nanotimes فوتون مختارة.طرح عتبة نانوتايم من المتوسط الجبري نانوتايم فوتون. القيمة التي تم الحصول عليها هي متوسط فوتون نانوتايم للانفجار ، يتناسب مباشرة مع متوسط عمر الفلورسينس. رسم الرسم البياني لجميع انفجار يعني العمر الفلوري.قد تظهر الخلايا الفرعية الموزعة مركزيا لعمر الفلورسينس. تمثل الخلايا الفرعية ذات المتوسطات الأقل قيمة الأنواع الجزيئية مع Sulfo-Cy3 التي لم يتم عرقلتها بشكل نجمي ، في حين أن الاكتظاظ السكاني الفرعي بمتوسطات ذات قيمة أعلى يمثل أنواع الجزيئات مع S-Cy3 التي كانت أكثر عرقلة نجمية. لتقييم الديناميكيات البطيء بين الاندفاعات، قم برسم الرسم البياني لأوقات الفصل المتفجرة بمحور وقت الفصل في مقياس لوغاريتمي.حدد لحفظ جميع أزواج من رشقات نارية متتالية التي يتم فصلها بأقل من وقت الفصل الأقصى الذي يحدد نفس الجزيء subpopulation. رسم رسم بياني أو مبعثر من متوسط العمر الفلوري من رشقات نارية الأولى والثانية لجميع أزواج من رشقات نارية التي تتكرر تحت عتبة زمنية معينة فصل. وأظهرت المدرجات التكرارية لمعنى العمر الفلوري لجزيء واحد يحمل علامة S-Cy3، ألفا-سينوكلين-56 أن أول اكتظاظ فرعي له عمر مفلور مميز يبلغ 1.6 نانو ثانية، ويمثل حالات تشكيل ألفا-سينوكلين مع عدد قليل من أسطح البروتين بالقرب من البقايا 56.أما المجموعة الفرعية الثانية فقد كان عمرها الفلوري المميز 3.5 نانو ثانية وتمثل حالات تشكيل ألفا-سينوكلين مع المزيد من أسطح البروتين بالقرب من المخلفات 56. ومن المعروف أن الأجزاء المكونة بيتا غير الأميلويد من جزيئات ألفا-سينوكلين تعتمد هيكلا دمويا دبوس شعر عند الربط ب vesicles SDS، والذي تم تأكيده كسكان وحيدين مدى الحياة مع عمر مميز يبلغ حوالي ثلاثة نانو ثانية، وغياب السكان الفرعيين مع عمر مميز قدره 1.6 نانو ثانية. الرسم البياني لأوقات الفصل بين رشقات نارية متتالية، جزيء واحد تقارير جزيئات متكررة لأوقات الانفصال أسرع من 100 مللي ثانية، حيث رشقات نارية الأولى والثانية تنشأ من نفس الجزيء.أظهر الرسم البياني المتوسط العمري الفلوري لجميع رشقات الجزيء المفردة ملء السكان بفترة حياة مميزة قصيرة ، وكذلك مع عمر مميز طويل ، مما يشير إلى أن الجزيئات الفردية يمكن أن تخضع لتحولات بين قيم متوسطة مختلفة مدى الحياة أبطأ من أوقات مدة الانفجار. في غضون أوقات فصل انفجار 100 مللي ثانية على الأكثر، كان هناك جزء صغير من الجزيئات التي بدأت كأول انفجار في السكان الفرعيين قصيرة العمر، وتكررت كما انفجار الثاني داخل السكان الفرعية طويلة العمر. في حين أن جزء من الجزيئات التي بدأت كأول انفجار في السكان الفرعيين لمدى الحياة الطويلة ، وتكررت كما انفجر الثاني داخل السكان قصيرة العمر ، يشير إلى التحولات بين السكان الفرعيين في غضون 10 إلى 100 مللي ثانية.أهم شيء يجب تذكره عند تحليل النتائج التجريبية هو فصل إشارات الفلورسينس أحادية الجزيء بشكل صحيح عن الخلفية ، وتحليل رشقات نارية مع ما يكفي من النانوتات الفوتونية. مهد تطوير smPIFE الطريق للباحثين لاستكشاف تفاعلات بروتين الحمض النووي على مستوى الجزيء الواحد. هذا التقدم يضع الأساس لدراسة الديناميات الهيكلية المحلية داخل البروتينات.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One &#945;-Synuclein Monomer at a Time

Utilizing the Ethylene-releasing Compound, 2-Chloroethylphosphonic Acid, as a Tool to Study Ethylene Response in Bacteria

الاستفادة من مجمع بين الافراج عن الإثيلين، حمض 2-Chloroethylphosphonic، كأداة لدراسة استجابة الإثيلين في البكتيريا

Ethylene (C2H4) is a gaseous phytohormone that is involved in numerous aspects of plant development, playing a dominant role in senescence and fruit ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

وقت حل التأين electrospray الهيدروجين، الديوتيريوم تبادل الطيف الكتلي لدراسة بنية البروتين وديناميكية

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Utilizing a Comprehensive Immunoprecipitation Enrichment System to Identify an Endogenous Post-translational Modification Profile for Target Proteins

استخدام نظام إثراء إيمونوبريسيبيتيشن شاملة لتحديد ملف تعريف تعديل بوستترانسلاشونال ذاتية للبروتينات المستهدفة

It is now well-appreciated that post-translational modifications (PTMs) play an integral role in regulating a protein&#39;s structure and function, which ...

Generation of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Using a SUMO Fusion Strategy

جيل مونومر Exon1 هونتينجتين الأصلية، وليس تمييز وييفات استخدام استراتيجية انصهار السومو

Huntington&#39;s Disease (HD) is an inherited fatal neurodegenerative disease caused by a CAG expansion (&#8805;36) in the first exon of the HD gene, ...

Manipulating Living Cells to Construct Stable 3D Cellular Assembly Without Artificial Scaffold

التعامل مع الخلايا الحية لبناء الجمعية الخلوية 3D مستقرة دون سقالة اصطناعية

Regenerative medicine and tissue engineering offer several advantages for the treatment of intractable diseases, and several studies have demonstrated the ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

تحليل الطيفي تقلب Fluorescence من تفاعلات البروتين البروتين في الخلية جهات الاتصال

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

استخدام الأنابيب الفلورية الرنين نقل الطاقة لدراسة ديناميات البروتين المجمعات في مقياس زمني ميلي ثانية

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Strategy to Identify Compounds that Affect Cell Growth and Survival in Cultured Mammalian Cells at Low-to-Moderate Throughput

استراتيجية لتحديد المركبات التي تؤثر على نمو الخلايا والبقاء على قيد الحياة في خلايا الثدييات المستزرعة في الإنتاجية المنخفضة إلى المتوسطة

Cytotoxicity is a critical parameter that needs to be quantified when studying drugs that may have therapeutic benefits. Because of this, many drug ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

إعداد الشبكة السريعة للمجهر Cryo-Electron الذي تم حله زمنيا

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

مقايسات نقل طاقة الرنين Förster التي تم حلها بمرور الوقت لقياس بروتينات STAT المفسفرة الداخلية في الخلايا البشرية

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...