Name: utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time
Uploaded: 2021-05-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

Den pT-t7 plasmid kodning A56C α-Syn mutant blev givet til os som en gave fra Dr. Asaf Grupi, Dr. Dan Amir og Dr. Elisha Haas. Dette papir blev støttet af National Institutes of Health (NIH, tilskud R01 GM130942 til E.L. som en subaward), Israel Science Foundation (tilskud 3565/20 inden for KillCorona - Curbing Coronavirus Research Program), Milner Fonden og Hebrew University of Jerusalem (start midler).

1. Plasmid transformation
<ol><li>Fremstilling af 0,5 L SOC medium<ol>
<li>10 g tryptone, 2,5 g gærekstrakt, 0,25 g natriumchlorid (NaCl), 0,1 g kaliumchlorid (KCl).</li>
		<li>Tilsæt dobbeltdestilleret vand (DDW) indtil det samlede volumen på 0,5 L.</li>
		<li>Juster til pH 7 ved tilsætning af natriumhydroxid (NaOH).</li>
		<li>Forbered lager aliquots på 100 mL og autoklave.</li>
		<li>Før du bruger, tilsættes 0,5 mL steril magnesiumchlorid (MgCl2) og 1,8 mL steril glukose til 100 mL SOC.</li>
	</ol>...

Omfattende biokemiske og biofysiske undersøgelser blev udført for at studere de strukturelle egenskaber ved α-Syn og dens uordnede natur33,34,35,36,37,38. Flere værker har allerede brugt frit diffuserende smFRET til at undersøge den intra-molekylære dynamik i α-Syn monomer fri for binding. Disse værker rapporterede de...

I løbet af de sidste to årtier er fluorescensbaserede metoder med enkeltmolekyler blevet et kraftfuldt værktøj til måling af biomolekyler1,2, hvilket undersøger, hvordan forskellige biomolekylære parametre fordelersig,samt hvordan de dynamisk interkonverterer mellem forskellige underpopulationer af disse parametre ved sub millisekunders opløsning3,4,5. Parametrene i disse teknikker omfatter energieffektivitet i FRET målinger 6,7, fluorescens anisotropi8,9, fluorescens quantum udbytter oglevetider 10,11, som en funktion af forskellige fluorescens slukke12 eller ekstraudstyr13 mekanismer. En af disse mekanismer, bedre kendt som protein-induceret fluorescens ekstraudstyr (PIFE)14 introducerer forbedring af fluorescens quantum udbytte og levetid som en funktion af sterisk obstruktion til fri isomerisering af fluorophore når i ophidset tilstand, forårsaget af proteinoverflader i nærheden af farvestoffet14,15,16,17,18,19 . Både FRET og PIFE betragtes som spektroskopiske linealer eller nærhedssensorer, da deres målte parameter er direkte forbundet med en rumlig foranstaltning inden for den mærkede biomolekyle under måling. Mens FRET-effektiviteten er relateret til afstanden mellem et par farvestoffer inden for en rækkevidde på 3-10 nm20, øger PIFE-spor i fluorescens quantum udbytter eller levetider relateret til afstanden mellem farvestoffet og en overflade af et nærliggende protein i intervallet 0-3 nm19.
Enkeltmolekyle FRET har været meget udbredt til at give strukturel indsigt i mange forskellige proteinsystemer, herunder iboende uorganiseret proteiner (IIV'er)21, såsom α-Synuclein (α-Syn)22. α-Syn kan danne ordnede strukturer efter binding til forskellige biomolekyler og under forskellige forhold23,24,25,26,27,28,29,30. Men når den er ubundet, er α-Syn-monomer karakteriseret ved høj kropsbygnings heterogenitet med hurtigt interkonverterende konformationer31,32.
Overensstemmelserne mellem α-Syn er tidligere blevet undersøgt ved hjælp af forskellige teknikker, der hjælper med at identificere kropsbygningsdynamikken i sådanne meget heterogene og dynamiske proteinsystemer33,34,35,36,37,38,39. Interessant, enkelt-molekyle FRET (smFRET) målinger af α-Syn i buffer rapporterede en enkelt FRET befolkning39,40, der er et resultat af tid-gennemsnit af konformationer dynamisk interkonvertere til tider meget hurtigere end den typiske diffusion tid α-Syn gennem confocal stedet (gange så hurtigt som få mikrosekunder og endnu hurtigere end det, i forhold til typiske millisekunder diffusion gange)40, 41. Men ved hjælp af en FRET spektroskopisk lineal med 3-10 nm afstand følsomhed undertiden rapporterer kun om generelle strukturelle ændringer i et lille protein som α-Syn. Målinger med enkeltmolekyler, der anvender spektroskopiske nærhedssensorer med kortere afstandsfølsomhed, har potentiale til at rapportere om dynamikken i lokale strukturer. Heri udfører vi enkeltmolekylet PIFE-målinger af α-Syn og identificerer forskellige underpopulationer af fluorescens levetid kortlægning til forskellige lokale strukturer med overgange mellem dem så langsomt som 100 ms. Dette arbejde opsummerer tidsforbestemte smPIFE-målinger af frit diffuserende α-Syn-molekyler en ad gangen, i buffer og når de er bundet til SDS-baserede membraner som en kortrækkende enkeltmolekylespektroskopisk nærhedssensor.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units</td>
			<td>Merc</td>
			<td>C7715</td>
			<td>cutoff: 100 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cysteamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis bags - MEGA GeBaFlex-tube</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>MEGA320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E5134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast SeeBand staining solution</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>SB050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap Desalting 5 mL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>GE17-1408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (TROLOX)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>238813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>63068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MonoQ column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein LoBind tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EP0030108094</td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rinse a &#181;-slide 18</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cell spreaders, Drigalski spatulas</td>
			<td>mini-plast</td>
			<td>815-004-05-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptomycin sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sulfo-Cy3&#160;maleimide</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab146493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y1625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time

Brug af spektroskopiske linealer til at spore flere konformationer af enkelte biomolekyler og deres dynamik har revolutioneret forståelsen af strukturelle dynamikker og dens bidrag til biologi. Mens den FRET-baserede lineal rapporterer om interfarveafstande i 3-10 nm-området, rapporterer andre spektroskopiske teknikker, såsom proteininduceret fluorescensforbedring (PIFE), om nærheden mellem et farvestof og en proteinoverflade i det kortere 0-3 nm-interval. Uanset valgmetoden henter dens anvendelse til måling af frit diffust biomolekyler en ad gangen histogrammer af forsøgsparameteren, der giver separate centralt fordelte underpopulationer af biomolekyler, hvor hver underpopulation enten repræsenterer en enkelt kropsbygning, der forblev uændret inden for millisekunder, eller flere konformationer, der interkonverterer meget hurtigere end millisekunder og dermed en gennemsnitlig subpopulation. I enkeltmolekyle FRET, hvor den rapporterede parameter i histogrammer er inter-dye FRET effektivitet, en iboende uordnet protein, såsom α-Synuclein monomer i buffer, blev tidligere rapporteret som udviser en enkelt gennemsnitlig-out delpopulation af flere konformationer inter konvertering hurtigt. Mens disse tidligere fund afhænger af 3-10 nm rækkevidde af FRET-baserede lineal, vi forsøgte at sætte dette protein på prøve ved hjælp af enkelt-molekyle PIFE, hvor vi spor fluorescens levetid stedspecifikke sCy3-mærket α-Synuclein proteiner én ad gangen. Interessant, ved hjælp af denne kortere rækkevidde spektroskopisk nærhed sensor, sCy3-mærket α-Synuclein udstiller flere levetid subpopulationer med tydeligt forskellige gennemsnitlige levetider, interkonvertere i 10-100 ms. Disse resultater viser, at mens α-Synuclein kan være uorden globalt, det ikke desto mindre opnår stabile lokale strukturer. Sammenfattende fremhæver vi i dette arbejde fordelen ved at bruge forskellige spektroskopiske nærhedssensorer, der sporer lokale eller globale strukturelle ændringer en biomolekyle ad gangen.

Som en IDP, når det ikke er bundet til en anden biomolekyle, α-Syn udviser strukturelle dynamik mellem flere konformationer, med overgange på få mikrosekunder40 og selv på hundredvis af nanosekunder41. Når α-Syn krydser det konfokale sted, kan det gennemgå tusindvis af overgange mellem konformationer. Dette var faktisk tilfældet , da smFRET blev brugt39,40. Her udfører vi smPIFE-målinger for at sondere de...

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃƒÅ½Ã‚Â±-Synuclein Monomer at a Time

Tidsforeltigt proteininduceret fluorescensforbedring med et enkeltmolekyle er en nyttig fluorescensspektspekter, der er følsom over for lokale strukturelle ændringer i proteiner. Her viser vi, at det kan bruges til at afdække stabile lokale konformationer i α-Synuclein, som ellers er kendt som kugleformet ustruktureret og ustabil, når den måles ved hjælp af den længere rækkevidde FRET lineal.

Udnyttelse af tidsforelt protein-induceret fluorescensforbedring til at identificere stabile lokale konformationer En α-Synuclein Monomer ad gangen

Using spectroscopic rulers to track multiple conformations of single biomolecules and their dynamics have revolutionized the understanding of structural ...

Enkeltmolekyle, protein-induceret fluorescens ekstraudstyr kan komplimentere enkelt-molekyle FRET målinger, når de studerer protein strukturelle delpopulationer og konformationer, især i tilfælde, hvor forskellige strukturelle delpopulationer rapport om stabile lokale strukturer. Den største fordel ved denne teknik er, at den indfanger forskellige stedspecifikke strukturelle underpopulationer baseret på nærheden af farvemærkningsstedet til proteinoverfladerne. Enkelt-molekyle, protein-induceret fluorescens ekstraudstyr kan anvendes til enhver biomolekylær system af interesse for at sonde forskellige, lokale, strukturelle delpopulationer.Begynd med at forberede 25 picomolar Sulfo-Cy3-mærket alfa-synuclein i målebuffer i et lavproteinbindingsrør. Tilsæt 100 mikroliter af et milligram pr. milliliter BSA til 18-kammermikroskopidækslet og inkuber i et minut, og kassér derefter BSA' en. Tilsæt 100 mikroliter af 25 picomolar Sulfo-Cy3-mærket alfa-synuclein prøve i kammeret af dækslet slip slide.Dernæst for dataindsamling, tilføje en dråbe ultrapure vand på toppen af høj-numerisk blænde vand nedsænkning objektive linse, fastsætte dækslet slip slide i scenen kammer, og derefter installere samlingen på toppen af mikroskop fase. Bring den objektive linse opad, indtil vanddråben på toppen af objektive linse udstrygninger i bunden af dækslet slip slide, og åbne laser lukkeren. Når objektive objektivet bevæger sig opad, inspicere mønsteret af de luftige ringe på en CCD kamera.Den første ring repræsenterer fokus på vand/glas interface, og den anden ring repræsenterer fokus på grænsefladen mellem glasset og prøveopløsningen. Forøg højden af den objektive linse med 75 mikrometer for at bringe laserfokus dybt i løsningen til at minimere autofluorescence fra glasoverfladen af dækslet slip. Tune laser magt på den objektive linse ca 100, mikrowatt.Start anskaffelsen af de fundne fotoner i et foruddefineret tidsrum. Åbn Jupyter Notebooks, og åbn derefter eksempelnotesbogen. Indlæs FRETBursts- og Photon-HDF5-datafilen.Brug histogrammet af interphoton gange til at beregne baggrundsfrekvenserne for hvert 30. sekund af dataindsamlingen. Flyt et tidsvindue for én foton ad gangen i 20 på hinanden følgende fotoner, og indsamle foton data, hvis den øjeblikkelige foton sats F er mindst 11 gange større end baggrundsfrekvensen for denne periode af dataindsamlingen. Beregn burst størrelse og mængden af fotoner i en burst, burst varighed, tidsforskellen mellem den sidste og første foton afsløring gange i en burst, burst lysstyrke, den største værdi af den øjeblikkelige foton sats i en burst, og burst adskillelse, tidsintervallet mellem hinanden følgende brister.Plot histogrammet af burst lysstyrke værdier med hændelser akse i en logaritmisk skala. Definer tærsklen for burst lysstyrke som den mindste burst lysstyrke værdi, hvorfra histogrammet udviser et forfaldent mønster, og vælger brister med lysstyrke værdier større end burst lysstyrke tærskel. For burst betyde fluorescens levetid måling, plot histogramme af foton nanotime for alle fotoner i de valgte byger med foton tæller akse i en logaritmisk skala.Definer nanotidstærsklen som den minimale nanotidsværdi, hvorfra histogrammet af foton nanotider udviser et forfaldent mønster. Vælg kun de fotoner med nanotider, der er større end nanotidsgrænsen. Beregn algebraisk gennemsnit af alle de valgte foton nanotider.Træk nanotidstærsklen fra foton nanotime algebraisk gennemsnit. Den opnåede værdi er den gennemsnitlige foton nanotime af burst, direkte proportional med den gennemsnitlige fluorescens levetid. Plot histogrammet af alle de brast betyde fluorescens levetid.De centralt distribuerede delpopulationer af fluorescenslevetiden kan forekomme. De delpopulationer med lavere værdi gennemsnit repræsenterer de molekylære arter med Sulfo-Cy3, der ikke var sterisk blokeret, mens delpopulationer med højere værdi gennemsnit repræsenterer molekylet arter med S-Cy3, der var mere sterisk blokeret. For den langsomme, mellem-burst dynamik vurdering, plot histogrammet af burst separation gange med en adskillelse tid akse i en logaritmisk skala.Vælg denne indstilling for at gemme alle parrene i de fortløbende udbrud, der er adskilt af mindre end en maksimal separationstid, der definerer underpopulationen af samme molekyler. Plot et histogramme eller en scatterplot af den gennemsnitlige fluorescens levetid for den første og anden brister for alle par af de byger, der gentog sig under en vis adskillelse tid tærskel. Histogrammerne af det gennemsnitlige fluorescenslevetid for et enkelt S-Cy3-mærket, alfa-synuclein-56-molekyle viste, at den første delpopulation havde en karakteristisk fluorescenslevetid på 1,6 nanosekunder og repræsenterede alfa-synucleinkonformationstilstande med få proteinoverflader i nærheden af rest 56.Den anden delpopulation havde en karakteristisk fluorescenslevetid på 3,5 nanosekunder og repræsenterede alfa-synucleinkonformationstilstande med flere proteinoverflader i nærheden af restkoncentration 56. De ikke-amyloid beta komponent segmenter af alfa-synuclein molekyler er kendt for at vedtage en spiralformet, hårnål struktur ved binding til SDS vesikler, som blev bekræftet som en enkelt florescence levetid befolkning med en karakteristisk levetid på ca. tre nanosekunder, og fravær af subpopulation med den karakteristiske levetid på 1,6 nanosekunder. Histogrammet af separationstider mellem på hinanden følgende, enkeltmolekyleudbrud rapporterer tilbagevendende molekyler til separationstiderne hurtigere end 100 millisekunder, hvor det første og andet udbrud opstår fra det samme molekyle.Den gennemsnitlige fluorescens levetid histogram af alle enkelt molekyle-bursts viste delpopulationer med en kort karakteristisk levetid, samt med en lang karakteristisk levetid, hvilket indikerer, at de enkelte molekyler kunne gennemgå overgange mellem forskellige gennemsnitlige levetid værdier langsommere end burst varighed gange. Inden for bristede separationstider på højst 100 millisekunder var der en brøkdel af molekyler, der startede som en første burst i den korte levetid delpopulation, og gentog sig som en anden burst inden for den lange levetid delpopulation. Mens den brøkdel af molekyler, der startede som en første brast i den lange levetid subpopulation, og gentog sig som en anden brast inden for den korte levetid befolkning, angiver overgangene mellem de to delpopulationer inden for 10 til 100 millisekunder.Det vigtigste at huske, når man analyserer de eksperimentelle resultater, er at adskille fluorescenssignaler med enkeltmolekylet fra baggrunden og analysere udbrud med nok foton nanotider. Udvikling af smPIFE banede vejen for forskere at udforske nukleinsyreproteininteraktioner på enkeltmolekyleniveau. Dette fremskridt lægger grunden til at studere lokale strukturelle dynamikker inden for proteiner.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One &#945;-Synuclein Monomer at a Time

Utilizing the Ethylene-releasing Compound, 2-Chloroethylphosphonic Acid, as a Tool to Study Ethylene Response in Bacteria

Udnytte den Ethylen-frigivende forbindelse, 2-Chloroethylphosphonic Acid, som værktøj til at studere Ethylen Respons Bacteria

Ethylene (C2H4) is a gaseous phytohormone that is involved in numerous aspects of plant development, playing a dominant role in senescence and fruit ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Time-løst elektrosprayioniserings Brint-deuterium Exchange-massespektrometri til at studere proteiners struktur og Dynamics

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Utilizing a Comprehensive Immunoprecipitation Enrichment System to Identify an Endogenous Post-translational Modification Profile for Target Proteins

Udnytte en omfattende Immunoprecipitation berigelse System for at identificere en endogen posttranslationel modifikation profil for Target proteiner

It is now well-appreciated that post-translational modifications (PTMs) play an integral role in regulating a protein&#39;s structure and function, which ...

Generation of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Using a SUMO Fusion Strategy

Generation af indfødte, ukodede Huntingtin Exon1 monomere og fibriller ved hjælp af en SUMO Fusion strategi

Huntington&#39;s Disease (HD) is an inherited fatal neurodegenerative disease caused by a CAG expansion (&#8805;36) in the first exon of the HD gene, ...

Manipulating Living Cells to Construct Stable 3D Cellular Assembly Without Artificial Scaffold

Manipulere levende celler til at konstruere stabil 3D cellulære forsamling uden kunstige stillads

Regenerative medicine and tissue engineering offer several advantages for the treatment of intractable diseases, and several studies have demonstrated the ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Et fluorescens udsving spektroskopi Assay af Protein-Protein interaktioner på celle-celle kontakter

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Bruger i Vitro fluorescens resonans energioverførsel at studere dynamikken i proteinkomplekser på en millisekund tidsskala

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Strategy to Identify Compounds that Affect Cell Growth and Survival in Cultured Mammalian Cells at Low-to-Moderate Throughput

En strategi til identificering af forbindelser, der påvirker cellevækst og overlevelse i dyrkede pattedyrceller ved lav til moderat gennemløb

Cytotoxicity is a critical parameter that needs to be quantified when studying drugs that may have therapeutic benefits. Because of this, many drug ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Hurtig gitterforberedelse til tidstilslutt kryo-elektronmikroskopi

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Tidsopløste Förster Resonans Energy Transfer Assays til måling af endogene fosforylerede STAT-proteiner i humane celler

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...