Name: utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time
Uploaded: 2021-05-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

De pT-t7 plasmide coderend voor A56C α-Syn mutant werd ons cadeau gedaan door Dr. Asaf Grupi, Dr. Dan Amir en Dr. Elisha Haas. Dit artikel werd ondersteund door de National Institutes of Health (NIH, subsidie R01 GM130942 aan E.L. als subaward), de Israel Science Foundation (subsidie 3565/20 binnen het KillCorona - Curbing Coronavirus Research Program), het Milner Fund en de Hebreeuwse Universiteit van Jeruzalem (start-upfondsen).

1. Plasmide transformatie
<ol><li>Bereiding van 0,5 L SOC-medium<ol>
<li>Weeg 10 g trypton, 2,5 g gistextract, 0,25 g natriumchloride (NaCl), 0,1 g kaliumchloride (KCl) af.</li>
		<li>Voeg dubbel gedestilleerd water (DDW) toe tot een totaal volume van 0,5 l.</li>
		<li>Stel in op pH 7 door natriumhydroxide (NaOH) toe te voegen.</li>
		<li>Bereid bouillon aliquots van 100 ml en autoclaaf.</li>
		<li>Voeg voor gebruik 0,5 ml steriel magnesiumchloride (MgCl2) en 1,8 ml steriele glucose toe aan 100 ml SOC.</li>
...

Uitgebreide biochemische en biofysische studies werden uitgevoerd om de structurele kenmerken van α-Syn en zijn ongeordende aard te bestuderen33,34,35,36,37,38. Verschillende werken hebben al vrij diffuus smFRET gebruikt om de intramoleculaire dynamica van het α-Syn-monomeer vrij van binding te onderzoeken. Deze werken rapp...

In de afgelopen twee decennia zijn op fluorescentie gebaseerde methoden met één molecuul een krachtig hulpmiddel geworden voor het meten van biomoleculen1,2, waarbij wordt geprofiteerd hoe verschillende biomoleculaire parameters zich verdelen en hoe ze dynamisch interconverteren tussen verschillende subpopulaties van deze parameters met een resolutie van minder dan een milliseconde3,4,5. De parameters in deze technieken omvatten de energie-overdrachtsefficiëntie in FRET-metingen 6,7,fluorescentie-anisotropie8,9,fluorescentie-kwantumopbrengsten en levensduur10,11,als functie van verschillende fluorescentie-quenching12 of verbetering13-mechanismen. Een van deze mechanismen, beter bekend als eiwit-geïnduceerde fluorescentieverbetering (PIFE)14 introduceert de verbetering van de kwantumopbrengst en levensduur van fluorescentie als een functie van sterische obstructie van de vrije isomerisatie van de fluorofoor in aangeslagen toestand, veroorzaakt door eiwitoppervlakken in de buurt van de kleurstof14,15,16,17,18,19 . Zowel FRET als PIFE worden beschouwd als spectroscopische linialen of nabijheidssensoren, omdat hun gemeten parameter direct is gekoppeld aan een ruimtelijke maat binnen het gelabelde biomolecuul dat wordt gemeten. Terwijl de FRET-efficiëntie gerelateerd is aan de afstand tussen een paar kleurstoffen binnen een bereik van 3-10 nm20,volgt PIFE toenames in fluorescentie kwantumopbrengsten of levensduur gerelateerd aan de afstand tussen de kleurstof en een oppervlak van een nabijgelegen eiwit in het bereik van 0-3 nm19.
Single-molecule FRET is op grote schaal gebruikt voor het verstrekken van structurele inzichten in veel verschillende eiwitsystemen, waaronder intrinsiek ongeordende eiwitten (IDP's)21, zoals α-Synuclein (α-Syn)22. α-Syn kan geordende structuren vormen na binding aan verschillende biomoleculen en onder verschillende omstandigheden23,24,25,26,27,28,29,30. Wanneer echter niet gebonden, wordt het α-Syn-monomeer gekenmerkt door een hoge conformatie heterogeniteit met snel interconverterende conformaties31,32.
De conformaties van α-Syn zijn eerder bestudeerd met behulp van verschillende technieken die helpen bij het identificeren van conformatiedynamiek van dergelijke zeer heterogene en dynamische eiwitsystemen33,34,35,36,37,38,39. Interessant is dat single-molecule FRET (smFRET) metingen van α-Syn in buffer een enkele FRET-populatie rapporteerden39,40 die een uitkomst is van tijdgemiddelde van conformaties die dynamisch interconverteren op momenten veel sneller dan de typische diffusietijd van α-Syn door de confocale vlek (keer zo snel als enkele microseconden en zelfs sneller dan dat, ten opzichte van typische millisecondediffusietijden)40, 41. Het gebruik van een FRET-spectroscopische liniaal met de afstandsgevoeligheid van 3-10 nm rapporteert soms alleen over algemene structurele veranderingen in een klein eiwit zoals α-Syn. Metingen met één molecuul met behulp van spectroscopische nabijheidssensoren met kortere afstandsgevoeligheden hebben het potentieel om te rapporteren over de dynamiek van lokale structuren. Hierin voeren we single-molecule PIFE-metingen uit van α-Syn en identificeren we verschillende subpopulaties van fluorescentielevens die in kaart worden gebracht met verschillende lokale structuren met overgangen tussen hen zo langzaam als 100 ms. Dit werk vat tijd-opgeloste smPIFE-metingen samen van vrij diffuserende α-Syn-moleculen één voor één, in buffer en wanneer gebonden aan SDS-gebaseerde membranen als een spectroscopische nabijheidssensor met één molecuul op korte afstand.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units</td>
			<td>Merc</td>
			<td>C7715</td>
			<td>cutoff: 100 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cysteamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis bags - MEGA GeBaFlex-tube</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>MEGA320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E5134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast SeeBand staining solution</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>SB050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap Desalting 5 mL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>GE17-1408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (TROLOX)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>238813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>63068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MonoQ column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein LoBind tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EP0030108094</td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rinse a &#181;-slide 18</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cell spreaders, Drigalski spatulas</td>
			<td>mini-plast</td>
			<td>815-004-05-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptomycin sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sulfo-Cy3&#160;maleimide</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab146493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y1625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time

Het gebruik van spectroscopische linialen om meerdere conformaties van enkele biomoleculen en hun dynamiek te volgen, heeft een revolutie teweeggebracht in het begrip van structurele dynamica en de bijdragen ervan aan de biologie. Terwijl de fret-gebaseerde liniaal rapporteert over inter-dye afstanden in het 3-10 nm bereik, rapporteren andere spectroscopische technieken, zoals eiwit-geïnduceerde fluorescentieverbetering (PIFE), over de nabijheid tussen een kleurstof en een eiwitoppervlak in het kortere 0-3 nm bereik. Ongeacht de methode van keuze, haalt het gebruik ervan bij het meten van vrij verspreidende biomoleculen één voor één histogrammen van de experimentele parameter op die afzonderlijke centraal verdeelde subpopulaties van biomoleculen opleveren, waarbij elke subpopulatie ofwel een enkele conformatie vertegenwoordigt die onveranderd bleef binnen milliseconden, of meerdere conformaties die veel sneller interconverteren dan milliseconden, en dus een gemiddelde subpopulatie. In single-molecule FRET, waar de gerapporteerde parameter in histogrammen de inter-dye FRET-efficiëntie is, werd eerder gemeld dat een intrinsiek ongeordend eiwit, zoals het α-Synucleïne-monomeer in buffer, een enkele gemiddelde subpopulatie van meerdere conformaties vertoonde die snel interconverteerde. Hoewel deze eerdere bevindingen afhankelijk zijn van het 3-10 nm-bereik van de FRET-gebaseerde liniaal, probeerden we dit eiwit op de proef te stellen met behulp van PIFE met één molecuul, waarbij we de fluorescentielevensduur van site-specifieke sCy3-gelabelde α-Synucleïne-eiwitten één voor één volgen. Interessant is dat met behulp van deze spectroscopische nabijheidssensor met een korter bereik, sCy3-gelabelde α-Synuclein verschillende levenslange subpopulaties vertoont met duidelijk verschillende gemiddelde levens die interconverteren in 10-100 ms. Deze resultaten tonen aan dat hoewel α-Synuclein wereldwijd ongeordende organismen kan zijn, het toch stabiele lokale structuren bereikt. Samenvattend benadrukken we in dit werk het voordeel van het gebruik van verschillende spectroscopische nabijheidssensoren die lokale of wereldwijde structurele veranderingen één biomolecuul per keer volgen.

Als een IDP, wanneer het niet gebonden is aan een ander biomolecuul, vertoont α-Syn structurele dynamiek tussen meerdere conformaties, met overgangen op enkele microseconden40 en zelfs op honderden nanoseconden41. Wanneer α-Syn de confocale plek kruist, kan het duizenden overgangen tussen conformaties ondergaan. Inderdaad, dit was het geval toen smFRET werd gebruikt39,40. Hier voeren we smPIFE-metingen uit om de l...

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃƒÅ½Ã‚Â±-Synuclein Monomer at a Time

Tijd-opgeloste single-molecule eiwit-geïnduceerde fluorescentieverbetering is een nuttige fluorescentiespectroscopische nabijheidssensor die gevoelig is voor lokale structurele veranderingen in eiwitten. Hier laten we zien dat het kan worden gebruikt om stabiele lokale conformaties in α-Synuclein te ontdekken, dat ook wel bekend staat als bolvormig ongestructureerd en onstabiel wanneer het wordt gemeten met behulp van de FRET-liniaal met een groter bereik.

Gebruik van time-resolved eiwit-geïnduceerde fluorescentieverbetering om stabiele lokale conformaties één α-synucleïnemonomeer tegelijk te identificeren

Using spectroscopic rulers to track multiple conformations of single biomolecules and their dynamics have revolutionized the understanding of structural ...

Single-molecule, eiwit-geïnduceerde fluorescentieverbetering kan een aanvulling zijn op single-molecule FRET-metingen bij het bestuderen van eiwitstructure subpopulaties en conformaties, vooral in gevallen waarin verschillende structurele subpopulaties rapporteren over stabiele lokale structuren. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het verschillende site-specifieke structurele subpopulaties vangt op basis van de nabijheid van de kleurstofetiketteringsplaats naar de eiwitoppervlakken. Single-molecule, eiwit-geïnduceerde fluorescentieverbetering kan worden toegepast op elk biomoleculair systeem van belang om verschillende, lokale, structurele subpopulaties te onderzoeken.Begin met het bereiden van 25 picomolaire Sulfo-Cy3-gelabelde alfa-synucleïne in meetbuffer in een eiwitarme bindingsbuis. Voeg 100 microliter van één milligram per milliliter BSA toe aan de 18-kamer microscopiedekselschuif en incubeer gedurende één minuut en gooi vervolgens de BSA weg. Voeg 100 microliter van 25 picomolair Sulfo-Cy3-gelabeld alfa-synucleïnemonster toe aan de kamer van de afdekschuif.Voeg vervolgens voor de gegevensverzameling een druppel ultrapioneel water toe aan de bovenkant van de wateronderdompelingsobjectieflens met hoog numeriek diafragma, bevestig de afdekschuif in de podiumkamer en installeer vervolgens de assemblage aan de bovenkant van de microscooptrap. Breng de objectieflens naar boven totdat de waterdruppel bovenop de objectieflens aan de onderkant van de schuif van de afdekplaat smeert en open de lasersluiter. Wanneer de objectieflens naar boven beweegt, inspecteer je het patroon van de luchtige ringen op een CCD-camera.De eerste ring vertegenwoordigt de focus op de water/glas interface en de tweede ring vertegenwoordigt de focus op het raakvlak tussen het glas en de monsteroplossing. Verhoog de hoogte van de objectieflens met 75 micrometer om de laserfocus diep in de oplossing te brengen om de autofluorescentie van het glazen oppervlak van de afdekslip te minimaliseren. Stem het laservermogen af op de objectieflens ongeveer 100, microwatt.Begin met het verwerven van de gedetecteerde fotonen voor een vooraf gedefinieerde tijd. Open de Jupyter-notitieblokken en open vervolgens het voorbeeldnotitieblok. Laad het fretbursts en photon-hdf5 databestand.Gebruik het histogram van de interfotontijden om de achtergrondsnelheden te berekenen voor elke 30 seconden van gegevensverzameling. Verplaats een tijdvenster van één foton tegelijk voor 20 opeenvolgende fotonen en verzamel de fotongegevens als de momentane fotonsnelheid F ten minste 11 keer groter is dan de achtergrondsnelheid voor die periode van de gegevensverzameling. Bereken de burstgrootte en hoeveelheid fotonen in een burst, de burst-duur, het tijdsverschil tussen de laatste en eerste fotondetectietijden in een burst, de burst-helderheid, de grootste waarde van de momentane fotonsnelheid in een burst en de burst-scheiding, het tijdsinterval tussen opeenvolgende bursts.Plot het histogram van burst-helderheidswaarden met de gebeurtenissenas in een logaritmische schaal. Definieer de bursthelderheidsdrempel als de minimale bursthelderheidswaarde van waaruit het histogram een vervallend patroon vertoont en selecteert de bursts met helderheidswaarden die groter zijn dan de burst-helderheidsdrempel. Voor de burst mean fluorescence lifetime measurement plot het histogram van foton nanotime voor alle fotonen in de geselecteerde bursts met de foton counts as in een logaritmische schaal.Definieer de nanotijddrempel als de minimale nanotijdwaarde van waaruit het histogram van fotonnnanotijden een vervalpatroon vertoont. Selecteer alleen die fotonen met nanotijden groter dan de nanotijddrempel. Bereken het algebraïsch gemiddelde van alle geselecteerde fotonnnanotijden.Trek de nanotijddrempel af van het algebraïsche gemiddelde van de foton nanotijd. De verkregen waarde is de gemiddelde fotonnnanotijd van de burst, recht evenredig met de gemiddelde fluorescentielevensduur. Plot het histogram van alle burst mean fluorescentielevens.De centraal verdeelde subpopulaties van de fluorescentielevensduur kunnen verschijnen. De subpopulaties met gemiddelden met een lagere waarde vertegenwoordigen de moleculaire soorten met Sulfo-Cy3 die niet sterisch werden belemmerd, terwijl de subpopulaties met gemiddelden met een hogere waarde de molecuulsoorten met S-Cy3 vertegenwoordigen die meer sterisch werden belemmerd. Voor de langzame, tussen-burst dynamica beoordeling, plot het histogram van de burst scheidingstijden met een scheidingstijdas in een logaritmische schaal.Selecteer deze optie om alle paren van de opeenvolgende bursts op te slaan die worden gescheiden door minder dan een maximale scheidingstijd die de subpopulatie van hetzelfde molecuul definieert. Plot een histogram of een scatterplot van de gemiddelde fluorescentielevensduur van de eerste en tweede bursts voor alle paren van de bursts die terugkeerden onder een bepaalde scheidingstijddrempel. De histogrammen van de gemiddelde fluorescentielevensduur van een enkel, S-Cy3-gelabeld, alfa-synucleïne-56-molecuul toonden aan dat de eerste subpopulatie een karakteristieke fluorescentielevensduur van 1,6 nanoseconden had en alfa-synucleïneconforme toestanden vertegenwoordigde met weinig eiwitoppervlakken in de buurt van residu 56.De tweede subpopulatie had een karakteristieke fluorescentielevensduur van 3,5 nanoseconden en vertegenwoordigde alfa-synucleïne conformatietoestanden met meer eiwitoppervlakken in de buurt van residu 56. Van de niet-amyloïde bètacomponentsegmenten van alfa-synucleïnemoleculen is bekend dat ze een spiraalvormige haarspeldstructuur aannemen bij binding aan SDS-blaasjes, wat werd bevestigd als een enkele florescence-levenspopulatie met een karakteristieke levensduur van ongeveer drie nanoseconden en afwezigheid van de subpopulatie met de karakteristieke levensduur van 1,6 nanoseconden. Het histogram van de scheidingstijden tussen opeenvolgende, single-molecule bursts rapporteert terugkerende moleculen voor de scheidingstijden sneller dan 100 milliseconden, waarbij de eerste en tweede bursts ontstaan uit hetzelfde molecuul.Het gemiddelde fluorescentielevensduur histogram van alle single molecule-bursts toonde subpopulaties met een korte karakteristieke levensduur, evenals met een lange karakteristieke levensduur, wat aangeeft dat individuele moleculen overgangen tussen verschillende gemiddelde levensduurwaarden langzamer konden ondergaan dan burst-duurtijden. Binnen burst-scheidingstijden van maximaal 100 milliseconden was er een fractie van moleculen die begon als een eerste burst in de kortlevende subpopulatie en terugkeerde als een tweede burst binnen de langlevende subpopulatie. Terwijl de fractie van moleculen die begon als een eerste uitbarsting in de langlevende subpopulatie en terugkeerde als een tweede uitbarsting binnen de kortlevende populatie, de overgangen tussen de twee subpopulaties binnen 10 tot 100 milliseconden aangeeft.Het belangrijkste om te onthouden bij het analyseren van de experimentele resultaten is om fluorescentiesignalen met één molecuul goed te scheiden van de achtergrond en om uitbarstingen te analyseren met voldoende foton nanotijden. De ontwikkeling van smPIFE maakte de weg vrij voor onderzoekers om nucleïnezuureiwitinteracties op het niveau van één molecuul te onderzoeken. Deze vooruitgang legt de basis voor het bestuderen van lokale structurele dynamica binnen eiwitten.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One &#945;-Synuclein Monomer at a Time

Utilizing the Ethylene-releasing Compound, 2-Chloroethylphosphonic Acid, as a Tool to Study Ethylene Response in Bacteria

Gebruik makend van de Ethyleen-vrijmakende verbinding, 2-Chloroethylphosphonic zuur, als een instrument om ethyleenreactie in Bacteria Studie

Ethylene (C2H4) is a gaseous phytohormone that is involved in numerous aspects of plant development, playing a dominant role in senescence and fruit ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Tijdsgeresolveerde elektrosprayionisatie waterstof-deuterium Exchange Massaspectrometrie voor het bestuderen van Protein Structure en Dynamics

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Utilizing a Comprehensive Immunoprecipitation Enrichment System to Identify an Endogenous Post-translational Modification Profile for Target Proteins

Met behulp van een uitgebreide Immunoprecipitation verrijking systeem ter identificatie van het profiel van een endogene posttranslationele wijziging voor Target eiwitten

It is now well-appreciated that post-translational modifications (PTMs) play an integral role in regulating a protein&#39;s structure and function, which ...

Generation of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Using a SUMO Fusion Strategy

Generatie van eigen, niet-gecodeerde Huntingtin Exon1 monomeer en fibrillen met behulp van een SUMO Fusion strategie

Huntington&#39;s Disease (HD) is an inherited fatal neurodegenerative disease caused by a CAG expansion (&#8805;36) in the first exon of the HD gene, ...

Manipulating Living Cells to Construct Stable 3D Cellular Assembly Without Artificial Scaffold

Manipuleren van levende cellen om te bouwen van stabiele 3D cellulaire vergadering zonder kunstmatige steiger

Regenerative medicine and tissue engineering offer several advantages for the treatment of intractable diseases, and several studies have demonstrated the ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Een fluorescentie schommelingen spectroscopie Assay voor eiwit-eiwitinteractie op cel contacten

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Met behulp van In Vitro fluorescentie Resonance Energy Transfer te bestuderen van de dynamiek van eiwitcomplexen op de tijdschaal van een milliseconde

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Strategy to Identify Compounds that Affect Cell Growth and Survival in Cultured Mammalian Cells at Low-to-Moderate Throughput

Een strategie om verbindingen te identificeren die van invloed zijn op de celgroei en overleving in gekweekte zoogdiercellen bij een lage tot matige doorvoer

Cytotoxicity is a critical parameter that needs to be quantified when studying drugs that may have therapeutic benefits. Because of this, many drug ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Snelle rastervoorbereiding voor tijd-opgeloste cryo-elektronenmicroscopie

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Tijd-opgeloste Förster Resonantie Energie Transfer Assays voor meting van endogene gefosforyleerde STAT-eiwitten in menselijke cellen

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...