Name: utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time
Uploaded: 2021-05-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

PT-t7 plasmidkodingen A56C α-Syn mutant ble gitt til oss som en gave fra Dr. Asaf Grupi, Dr. Dan Amir og Dr. Elisha Haas. Denne artikkelen ble støttet av National Institutes of Health (NIH, gi R01 GM130942 til E.L. som en subaward), Israel Science Foundation (tilskudd 3565/20 i KillCorona - Curbing Coronavirus Research Program), Milner Fund og Det hebraiske universitetet i Jerusalem (oppstartsmidler).

1. Plasmid transformasjon
<ol><li>Tilberedning av 0,5 L SOC-medium<ol>
<li>Vei 10 g trypton, 2,5 g gjærekstrakt, 0,25 g natriumklorid (NaCl), 0,1 g kaliumklorid (KCl).</li>
		<li>Tilsett dobbelt destillert vann (DDW) til totalt volum på 0,5 L.</li>
		<li>Juster til pH 7 ved å tilsette natriumhydroksid (NaOH).</li>
		<li>Forbered lager aliquots på 100 ml og autoklav.</li>
		<li>Før bruk tilsettes 0,5 ml steril magnesiumklorid (MgCl2) og 1,8 ml steril glukose til 100 ml SOC.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tine BL...

Omfattende biokjemiske og biofysiske studier ble utført for å studere de strukturelle egenskapene til α-Syn og dens uordnede natur33,34,35,36,37,38. Flere arbeider har allerede brukt fritt diffuserende smFRET for å undersøke den intramolekylære dynamikken i α-Syn monomer fri for binding. Disse verkene rapporterte den h...

I løpet av de siste to tiårene har fluorescensbaserte metoder med ett molekyl blitt et kraftig verktøy for måling av biomolekyler1,2, som undersøker hvordan forskjellige biomolekylære parametere distribueres, samt hvordan de dynamisk interkonverterer mellom forskjellige underpopulasjoner av disse parametrene ved sub-millisekunders oppløsning3,4,5. Parametrene i disse teknikkene inkluderer energioverføringseffektiviteten i FRET-målinger 6,7, fluorescensanisotropi8,9, fluorescens kvanteutbytter og levetider10,11, som en funksjon av forskjellige fluorescens slukke12 eller forbedring13 mekanismer. En av disse mekanismene, bedre kjent som proteinindusert fluorescensforbedring (PIFE)14 introduserer forbedringen av fluorescens kvanteutbytte og levetid som en funksjon av sterisk obstruksjon til fri isomerisering av fluoroforen når den er i spent tilstand, forårsaket av proteinoverflater i nærheten avfargestoffet 14,15,16,17,18,19 . Både FRET og PIFE regnes som spektroskopiske linjaler eller nærhetssensorer siden deres målte parameter er direkte knyttet til et romlig mål innenfor den merkede biomolekylen under måling. Mens FRET-effektiviteten er relatert til avstanden mellom et par fargestoffer innenfor et område på 3-10 nm20, øker PIFE-sporene i fluorescens kvanteutbytter eller levetider relatert til avstanden mellom fargestoffet og en overflate av et nærliggende protein i området 0-3 nm19.
Enkeltmolekyl fret har blitt mye brukt for å gi strukturell innsikt i mange forskjellige proteinsystemer, inkludert iboende uordnede proteiner (IDPs)21, for eksempel α-Synuclein (α-Syn)22. α-Syn kan danne bestilte strukturer etter binding til forskjellige biomolekyler og under forskjellige forhold23,24,25,26,27,28,29,30. Men når den er ubundet, er α-Syn monomer preget av høy konformasjons heterogenitet med raskt mellomkonverterende konformasjoner31,32.
Konformasjonene til α-Syn har blitt studert tidligere ved hjelp av ulike teknikker som hjelper til med å identifisere konformasjonsdynamikk i slike svært heterogene og dynamiske proteinsystemer33,34,35,36,37,38,39. Interessant, enkeltmolekyl FRET (smFRET) målinger av α-Syn i buffer rapporterte en enkelt FRET-populasjon39,40 som er et resultat av tidsgjennomsnitt av konformasjoner dynamisk interkonverterer til tider mye raskere enn den typiske diffusjonstiden til α-Syn gjennom det konfokale stedet (ganger så raskt som få mikrosekunder og enda raskere enn det, i forhold til typiske millisekunder diffusjonstider) ,40 41. Ved hjelp av en FRET spektroskopisk linjal med 3-10 nm avstandsfølsomhet rapporterer imidlertid noen ganger bare om generelle strukturelle endringer i et lite protein som α-Syn. Enkeltmolekylmålinger ved hjelp av spektroskopiske nærhetssensorer med kortere avstandsfølsomhet har potensial til å rapportere om dynamikken i lokale strukturer. Her utfører vi pife-målinger av α-Syn og identifiserer ulike underpopulasjoner av fluorescenslevetider som kartlegger ulike lokale strukturer med overganger mellom dem så sakte som 100 ms. Dette arbeidet oppsummerer tidsavklarte smPIFE-målinger av fritt diffuserende α-Syn-molekyler en om gangen, i buffer og når de er bundet til SDS-baserte membraner som en kortdistanse enkeltmolekylspektroskopisk nærhetssensor.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units</td>
			<td>Merc</td>
			<td>C7715</td>
			<td>cutoff: 100 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cysteamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis bags - MEGA GeBaFlex-tube</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>MEGA320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E5134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast SeeBand staining solution</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>SB050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap Desalting 5 mL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>GE17-1408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (TROLOX)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>238813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>63068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MonoQ column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein LoBind tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EP0030108094</td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rinse a &#181;-slide 18</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cell spreaders, Drigalski spatulas</td>
			<td>mini-plast</td>
			<td>815-004-05-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptomycin sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sulfo-Cy3&#160;maleimide</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab146493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y1625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time

Ved hjelp av spektroskopiske herskere for å spore flere konformasjoner av enkeltbiomolekyler og deres dynamikk har revolusjonert forståelsen av strukturell dynamikk og dens bidrag til biologi. Mens den FRET-baserte linjalen rapporterer om interfargeavstander i 3-10 nm-serien, rapporterer andre spektroskopiske teknikker, for eksempel proteinindusert fluorescensforbedring (PIFE), om nærheten mellom et fargestoff og en proteinoverflate i det kortere 0-3 nm-området. Uavhengig av valgmetoden, henter bruken i å måle fritt diffuserende biomolekyler en om gangen histogrammer av den eksperimentelle parameteren som gir separate sentralt fordelte underpopulasjoner av biomolekyler, hvor hver underpopulasjon representerer enten en enkelt konformasjon som forble uendret innen millisekunder, eller flere konformasjoner som interkonverterer mye raskere enn millisekunder, og dermed en gjennomsnittlig sub-ut underpopulasjon. I enkeltmolekylet FRET, hvor den rapporterte parameteren i histogrammer er den mellomfargede FRET-effektiviteten, ble et iboende uordnet protein, som α-Synuclein monomer i buffer, tidligere rapportert å vise en enkelt gjennomsnittlig underpopulasjon av flere konformasjoner som interkonverterer raskt. Mens disse tidligere funnene avhenger av 3-10 nm-serien til den FRET-baserte linjalen, forsøkte vi å sette dette proteinet på prøve ved hjelp av enkeltmolekyl pife, hvor vi sporer fluorescenslevetiden til stedsspesifikke sCy3-merkede α-Synuclein-proteiner en om gangen. Interessant nok, ved hjelp av denne kortere rekkeviddespektroskopiske nærhetssensoren, viser sCy3-merkede α-Synuclein flere livsunderpopulasjoner med tydelig forskjellige gjennomsnittlige levetider som interkonverterer i 10-100 ms. Disse resultatene viser at selv om α-Synuclein kan være uorden globalt, oppnår det likevel stabile lokale strukturer. Oppsummert fremhever vi i dette arbeidet fordelen ved å bruke forskjellige spektroskopiske nærhetssensorer som sporer lokale eller globale strukturelle endringer en biomolekyl om gangen.

Som en IDP, når den ikke er bundet til en annen biomolekyl, viser α-Syn strukturell dynamikk mellom flere konformasjoner, med overganger ved få mikroseconds40 og til og med på hundrevis av nanoseconds41. Når α-Syn krysser det konfiske stedet, kan det gjennomgå tusenvis av overganger mellom konformasjoner. Faktisk var dette tilfelle da smFRET ble brukt39,40. Her utfører vi smPIFE-målinger for å undersøke d...

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃƒÅ½Ã‚Â±-Synuclein Monomer at a Time

Tidsavklart proteinindusert fluorescensforbedring med ett molekyl er en nyttig fluorescensspektroskopisk nærhetssensor som er følsom for lokale strukturelle endringer i proteiner. Her viser vi at den kan brukes til å avdekke stabile lokale konformasjoner i α-Synuclein, som ellers kalles globulært ustrukturert og ustabilt når den måles ved hjelp av FRET-linjalen med lengre rekkevidde.

Bruke tidsbestemt proteinindusert fluorescensforbedring for å identifisere stabile lokale konformasjoner En α-Synuclein Monomer om gangen

Using spectroscopic rulers to track multiple conformations of single biomolecules and their dynamics have revolutionized the understanding of structural ...

Enkeltmolekyl, proteinindusert fluorescensforbedring kan komplimentere enkeltmolekylet FRET-målinger når du studerer proteinstrukturelle subpopulasjoner og konformasjoner, spesielt i tilfeller der distinkte strukturelle subpopulations rapporterer om stabile lokale strukturer. Den største fordelen med denne teknikken er at den fanger distinkte stedsspesifikke strukturelle underpopulasjoner basert på nærheten av fargemerkingsstedet til proteinoverflatene. Enkeltmolekyl, proteinindusert fluorescensforbedring kan brukes på ethvert biomolekylært system av interesse for å sondere distinkte, lokale, strukturelle subpopulasjoner.Begynn med å forberede 25 picomolar Sulfo-Cy3-merket alfa-synuclein i målebuffer i et bindingsrør med lavt proteininnhold. Tilsett 100 mikroliter av ett milligram per milliliter BSA til 18-kammermikroskopidekselet og inkuber i ett minutt, og kast deretter BSA. Tilsett 100 mikroliter med 25 picomolar Sulfo-Cy3-merket alfasynuclein-prøve i kammeret på dekselglidningen.Deretter legger du til en dråpe ultrapure vann på toppen av den høy numerical-aperture vann nedsenknings objektiv linsen, fest dekselglidningen i scenekammeret, og installer deretter enheten på toppen av mikroskopstadiet. Ta objektivlinsen oppover til vanndråpen på toppen av objektivlinsen smøres nederst på dekselglidningen, og åpne laserlukkeren. Når objektivet beveger seg oppover, må du kontrollere mønsteret til de luftige ringene på et CCD-kamera.Den første ringen representerer fokuset ved vann/glass-grensesnittet, og den andre ringen representerer fokuset på grensesnittet mellom glasset og prøveløsningen. Øk høyden på objektivlinsen med 75 mikrometer for å bringe laserfokuset dypt inn i løsningen for å minimere autofluorescensen fra glassoverflaten på dekselslippet. Juster lasereffekten på objektivlinsen ca. 100 mikrowatt.Start oppkjøpet av de oppdagede fotonene i en forhåndsdefinert tid. Åpne Jupyter Notebooks, og åpne deretter eksempelnotatblokken. Last inn datafilen FRETBursts og Photon-HDF5.Bruk histogrammet for interfotontidene til å beregne bakgrunnsfrekvensene for hvert 30. Flytt et tidsvindu med ett foton om gangen for 20 påfølgende fotoner, og samle inn fotondataene hvis den øyeblikkelige fotonfrekvensen F er minst 11 ganger større enn bakgrunnsfrekvensen for den perioden av datainnsamlingen. Beregn burst-størrelsen og mengden fotoner i en serie, burst-varigheten, tidsforskjellen mellom de siste og første fotondeteksjonstidene i en serie, den briste lysstyrken, den største verdien av den øyeblikkelige fotonhastigheten i en serie, og burst-separasjonen, tidsintervallet mellom påfølgende brister.Tegn inn histogrammet for burst-lysstyrkeverdier med hendelsesaksen i en logaritmisk skala. Definer terskelverdien for burst-lysstyrke som den minste verdien for burst-lysstyrke som histogrammet viser et forfallende mønster fra, og velger utbruddene med lysstyrkeverdier som er større enn terskelverdien for burst-lysstyrke. For utbruddet betyr fluorescens livstidsmåling, plott histogrammet av foton nanotid for alle fotoner i de valgte bristene med fotonen teller aksen i en logaritmisk skala.Definer nanotidsterskelen som den minste nanotidsverdien som histogrammet av foton nanotider viser et forfallende mønster fra. Velg bare de fotonene med nanotider som er større enn nanotidsterskelen. Beregn det algebraiske gjennomsnittet av alle de valgte foton nanotimene.Trekk nanotidsterskelen fra det foton nanotidsalgebraiske gjennomsnittet. Den oppnådde verdien er gjennomsnittlig foton nanotid av bristen, direkte proporsjonal med gjennomsnittlig fluorescens levetid. Plott histogrammet til alle briste betyr fluorescens levetid.De sentralt fordelte subpopulasjonene av fluorescenslevetid kan oppstå. Subpopulasjonene med gjennomsnitt av lavere verdi representerer molekylartene med Sulfo-Cy3 som ikke var sterisk blokkert, mens subpopulasjonene med gjennomsnitt av høyere verdi representerer molekylartene med S-Cy3 som var mer sterisk blokkert. For den langsomme, mellom-burst dynamikk vurdering, plott histogrammet av burst separasjonstider med en separasjonstid akse i en logaritmisk skala.Merk av for dette alternativet hvis du vil lagre alle parene med de påfølgende utbruddene som er atskilt med mindre enn en maksimal separasjonstid som definerer subpopuleringen av samme molekyl. Plott et histogram eller en spredning av gjennomsnittlig fluorescenslevetid for første og andre utbrudd for alle par av bristene som oppstod under en viss separasjonstidsterskel. Histogrammene til gjennomsnittlig fluorescenslevetid for en enkelt, S-Cy3-merket alfasynuclein-56 molekyl viste at den første underbefolkningen hadde en karakteristisk fluorescenslevetid på 1,6 nanosekonds, og representerte alfa-synukleinkonformasjonstilstander med få proteinoverflater i nærheten av rester 56.Den andre subpopulasjonen hadde en karakteristisk fluorescenslevetid på 3,5 nanosekonds og representerte alfa-synukleinkonformasjonstilstander med flere proteinoverflater i nærheten av rester 56. De ikke-amyloide betakomponentsegmentene av alfa-synucleinmolekyler er kjent for å vedta en spiralformet, hårnålstruktur ved binding til SDS-vesikler, som ble bekreftet som en enkelt florescens levetidspopulasjon med en karakteristisk levetid på omtrent tre nanosekunder, og fravær av underbefolkningen med den karakteristiske levetiden på 1,6 nanosekunder. Histogrammet av separasjonstidene mellom påfølgende, enkeltmolekylutbrudd rapporterer tilbakevendende molekyler for separasjonstidene raskere enn 100 millisekunder, hvor den første og andre brister oppstår fra samme molekyl.Den gjennomsnittlige fluorescenslevetids histogrammet til alle enkeltmolekylutbrudd viste subpopulasjoner med kort karakteristisk levetid, samt med en lang karakteristisk levetid, noe som indikerer at individuelle molekyler kan gjennomgå overganger mellom forskjellige gjennomsnittlige levetidsverdier langsommere enn bristevarighetstider. Innen briste separasjonstider på maksimalt 100 millisekunder var det en brøkdel av molekyler som startet som en første utbrudd i underbefolkningen med kort levetid, og oppstod igjen som en andre utbrudd innenfor den langvarige subpopulasjonen. Mens brøkdelen av molekyler som startet som en første utbrudd i lang levetid subpopulasjon, og recurred som en andre briste innenfor kort levetid befolkningen, indikerer overgangene mellom de to subpopulasjoner innen 10 til 100 millisekunder.Det viktigste å huske når du analyserer de eksperimentelle resultatene er å skille enkeltmolekylfluorescenssignaler riktig fra bakgrunnen, og å analysere brister med nok foton nanotider. Utvikling av smPIFE banet vei for forskere å utforske nukleinsyreproteininteraksjoner på enkeltmolekylnivå. Dette fremskrittet legger grunnlaget for å studere lokal strukturell dynamikk innen proteiner.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One &#945;-Synuclein Monomer at a Time

Utilizing the Ethylene-releasing Compound, 2-Chloroethylphosphonic Acid, as a Tool to Study Ethylene Response in Bacteria

Utnytte Etylen-frigjørende forbindelse, 2-Chloroethylphosphonic Acid, som et verktøy for å studere Etylen Response i Bakterier

Ethylene (C2H4) is a gaseous phytohormone that is involved in numerous aspects of plant development, playing a dominant role in senescence and fruit ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Time-løst elektrospray-ionisering Hydrogen-deuterium Veksling massespektrometri for å studere Protein struktur og dynamikk

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Utilizing a Comprehensive Immunoprecipitation Enrichment System to Identify an Endogenous Post-translational Modification Profile for Target Proteins

Bruker en omfattende Immunoprecipitation berikelse System for å identifisere en endogen post-translasjonell modifikasjon profil for målet proteiner

It is now well-appreciated that post-translational modifications (PTMs) play an integral role in regulating a protein&#39;s structure and function, which ...

Generation of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Using a SUMO Fusion Strategy

Generasjon av innfødte, ukodede Huntingtin Exon1 Monomer og Fibrils bruker en SUMO Fusion strategi

Huntington&#39;s Disease (HD) is an inherited fatal neurodegenerative disease caused by a CAG expansion (&#8805;36) in the first exon of the HD gene, ...

Manipulating Living Cells to Construct Stable 3D Cellular Assembly Without Artificial Scaffold

Manipulere levende celler å konstruere stabil 3D Cellular samling uten kunstige stillas

Regenerative medicine and tissue engineering offer several advantages for the treatment of intractable diseases, and several studies have demonstrated the ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

En fluorescens svingninger spektroskopi analysen av Protein-Protein interaksjoner i celle-celle kontakter

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Bruke i Vitro fluorescens resonans energioverføring å studere dynamikken i Protein komplekser på et millisekund tidsskala

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Strategy to Identify Compounds that Affect Cell Growth and Survival in Cultured Mammalian Cells at Low-to-Moderate Throughput

En strategi for å identifisere forbindelser som påvirker Cell vekst og overlevelse i kultivert pattedyrceller ved lav-til-moderat gjennomstrømming

Cytotoxicity is a critical parameter that needs to be quantified when studying drugs that may have therapeutic benefits. Because of this, many drug ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Rask nettforberedelse for tidsavklart kryo-elektronmikroskopi

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Tidsavklarte Förster Resonance Energy Transfer Assays for måling av endogene fosforylaterte STAT-proteiner i humane celler

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...