Name: utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time
Uploaded: 2021-05-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

PT-t7 plasmid kodning A56C α-Syn mutant gavs till oss som en present från Dr. Asaf Grupi, Dr. Dan Amir och Dr. Elisha Haas. Detta dokument stöddes av National Institutes of Health (NIH, anslag R01 GM130942 till E.L. som subaward), Israel Science Foundation (anslag 3565/20 inom KillCorona - Curbing Coronavirus Research Program), Milner Fund och Hebrew University of Jerusalem (startup funds).

1. Plasmid omvandling
<ol><li>Beredning av 0,5 L SOC-medium<ol>
<li>Väg 10 g trypton, 2,5 g jästextrakt, 0,25 g natriumklorid (NaCl), 0,1 g kaliumklorid (KCl).</li>
		<li>Tillsätt dubbeldestillerat vatten (DDW) tills den totala volymen 0,5 L.</li>
		<li>Justera till pH 7 genom att tillsätta natriumhydroxid (NaOH).</li>
		<li>Förbered lager aliquots på 100 mL och autoklav.</li>
		<li>Tillsätt 0,5 ml steril magnesiumklorid (MgCl2)och 1,8 ml steril glukos till 100 ml SOC innan användning.</li>
	</ol>
</...

Omfattande biokemiska och biofysiska studier utfördes för att studera de strukturella egenskaperna hos α-Syn och dess oordnade natur33,34,35,36,37,38. Flera verk har redan använt fritt diffuserande smFRET för att undersöka den intramolekylära dynamiken hos α-Syn-monomer fri från bindning. Dessa arbeten rapporterade d...

Under de senaste två decennierna har fluorescensbaserade metoder med en molekyl blivit ett kraftfullt verktyg för att mäta biomolekyler1,2, som undersöker hur olika biomolekylära parametrar fördelar samt hur de dynamiskt interkonverterar mellan olika underpopulationer av dessa parametrar vid sub millisekundsupplösning3,4,5. Parametrarna i dessa tekniker inkluderar energiöverföringseffektiviteten i FRET-mätningar 6,7, fluorescensanisotropi8,9, fluorescenskvantutbyten ochlivstider 10,11, som en funktion av olika fluorescenssläckning12 eller förbättring13 mekanismer. En av dessa mekanismer, mer känd som proteininducerad fluorescensförbättring (PIFE)14 introducerar förbättringen av fluorescenskvantutbyte och livslängd som en funktion av sterisk obstruktion av fluoroforens fria isomerisering när den är i upphetsad tillstånd, orsakad av proteinytor i närheten av färgämnet14,15,16,17,18,19 . Både FRET och PIFE betraktas som spektroskopiska linjaler eller närhetssensorer eftersom deras uppmätta parameter är direkt kopplad till ett rumsligt mått inom den märkta biomolekylen under mätning. Medan FRET-effektiviteten är relaterad till avståndet mellan ett par färgämnen inom ett intervall av 3-10 nm20,ökar PIFE-spåren i fluorescenskvantutbyten eller livstider relaterade till avståndet mellan färgämnet och en yta av ett närliggande protein i intervallet 0-3 nm19.
Enmolekyliga FRET har använts i stor utsträckning för att ge strukturella insikter i många olika proteinsystem, inklusive inneboende oordnade proteiner (IDPs)21, såsom α-Synuclein (α-Syn)22. α-Syn kan bilda beställda strukturer efter bindning till olika biomolekyler och under olika förhållanden23,24,25,26,27,28,29,30. Men när den är obunden kännetecknas α-Syn-monomeren av hög konformations heterogenitet med snabbt interkonverterande konformationer31,32.
Konformationerna av α-Syn har tidigare studerats med hjälp av olika tekniker som hjälper till att identifiera konformationsdynamiken hos sådana mycket heterogena och dynamiska proteinsystem33,34,35,36,37,38,39. Intressant nog rapporterade enstaka molekyl FRET (smFRET) mätningar av α-Syn i buffert en enda FRET-population39,40 som är ett resultat av tidsgenomsättning av konformationer dynamiskt interkonverterande ibland mycket snabbare än den typiska diffusionstiden för α-Syn genom den konfokala punkten (gånger så snabbt som några mikrosekunder och till och med snabbare än så, i förhållande till typiska millisekunds diffusionstider)40, 41. Men med hjälp av en FRET spektroskopisk linjal med 3-10 nm avståndskänslighet rapporterar ibland endast om övergripande strukturella förändringar i ett litet protein som α-Syn. Enmolekylsmätningar med hjälp av spektroskopiska närhetssensorer med kortare avståndskänslighet har potential att rapportera om dynamiken i lokala strukturer. Häri utför vi pife-mätningar med en molekyl av α-Syn och identifierar olika underpopulationer av fluorescenslivslängder som kartlägger olika lokala strukturer med övergångar mellan dem så långsamma som 100 ms. Detta arbete sammanfattar tidsupplösta smPIFE-mätningar av fritt diffuserande α-Syn-molekyler en i taget, i buffert och när den är bunden till SDS-baserade membran som en kortdistans enmolekyls spektroskopisk närhetssensor.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units</td>
			<td>Merc</td>
			<td>C7715</td>
			<td>cutoff: 100 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cysteamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis bags - MEGA GeBaFlex-tube</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>MEGA320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E5134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast SeeBand staining solution</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>SB050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap Desalting 5 mL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>GE17-1408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (TROLOX)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>238813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>63068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MonoQ column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein LoBind tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EP0030108094</td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rinse a &#181;-slide 18</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cell spreaders, Drigalski spatulas</td>
			<td>mini-plast</td>
			<td>815-004-05-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptomycin sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sulfo-Cy3&#160;maleimide</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab146493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y1625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time

Genom att använda spektroskopiska härskare för att spåra flera konformationer av enstaka biomolekyler och deras dynamik har revolutionerat förståelsen av strukturell dynamik och dess bidrag till biologin. Medan fret-baserade linjalen rapporterar om inter-dye avstånd i 3-10 nm intervallet, andra spektroskopiska tekniker, såsom protein-inducerad fluorescens förbättring (PIFE), rapportera om närheten mellan ett färgämne och en protein yta i det kortare 0-3 nm intervallet. Oavsett vilken metod man väljer, dess användning vid mätning av fritt diffuserande biomolekyler en i taget hämtar histogram av den experimentella parametern som ger separata centralt fördelade underpopulationer av biomolekyler, där varje underpopulation representerar antingen en enda konformation som förblev oförändrad inom millisekunder, eller flera konformationer som interkonverterar mycket snabbare än millisekunder, och därmed en genomsnittlig ut-ut-underpopulation. I enmolekyl fret, där den rapporterade parametern i histogram är inter-dye FRET effektivitet, en intrinsically oordnad protein, såsom α-Synuclein monomer i buffert, rapporterades tidigare som uppvisar en enda genomsnittlig ut-ut underpopulation av flera konformationer interconverting snabbt. Medan dessa tidigare resultat beror på 3-10 nm intervallet av FRET-baserade linjalen, försökte vi sätta detta protein på prov med en-molekyl PIFE, där vi spårar fluorescens livslängden för platsspecifika sCy3-märkta α-Synuclein proteiner en i taget. Intressant nog, med hjälp av denna kortare räckvidd spektroskopisk närhetssensor, sCy3-märkta α-Synuclein uppvisar flera livstidsunderpopulationer med tydligt olika genomsnittliga livslängder som interkonverteras i 10-100 ms. Dessa resultat visar att även om α-Synuclein kan vara oordnad globalt, uppnår det ändå stabila lokala strukturer. Sammanfattningsvis lyfter vi i detta arbete fram fördelen med att använda olika spektroskopiska närhetssensorer som spårar lokala eller globala strukturella förändringar en biomolekyl i taget.

Som en IDP, när den inte är bunden till en annan biomolekyl, uppvisar α-Syn strukturell dynamik mellan flera konformationer, med övergångar vid några mikrosekunder40 och till och med vid hundratals nanosekunder41. När α-Syn korsar den konfokala platsen kan den genomgå tusentals övergångar mellan konformationer. Detta var faktiskt fallet när smFRET användes39,40. Här utför vi smPIFE-mätningar för att...

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃƒÅ½Ã‚Â±-Synuclein Monomer at a Time

Tidsupplöst enmolekyls protein-inducerad fluorescens förbättring är en användbar fluorescens spektroskopisk närhetssensor känslig för lokala strukturella förändringar i proteiner. Här visar vi att den kan användas för att upptäcka stabila lokala konformationer i α-Synuclein, som annars kallas klotformigt ostrukturerad och instabil när den mäts med den längre räckvidden FRET-linjalen.

Använda tidsupplöst proteininducerad fluorescensförbättring för att identifiera stabila lokala konformationer en α-synukleinmonomer i taget

Using spectroscopic rulers to track multiple conformations of single biomolecules and their dynamics have revolutionized the understanding of structural ...

Enmolekylig, proteininducerad fluorescensförbättring kan komplettera enmolekyliga FRET-mätningar när man studerar proteinstrukturala subpopulationer och konformationer, särskilt i fall då distinkta strukturella subpopulationer rapporterar om stabila lokala strukturer. Den största fördelen med denna teknik är att den fångar upp distinkta platsspecifika strukturella underpopulationer baserat på närheten av färgämnesmärkningsstället till proteinytorna. Enmolekylig, proteininducerad fluorescensförbättring kan appliceras på alla biomolekylära system av intresse för att undersöka distinkta, lokala, strukturella subpopulationer.Börja med att förbereda 25 picomolar Sulfo-Cy3-märkt alfa-synuklein i mätbuffert i ett lågproteinbindningsrör. Tillsätt 100 mikroliter på ett milligram per milliliter BSA till 18-kammarmikroskopikåpans omslagsbild och inkubera i en minut och kassera sedan BSA. Tillsätt 100 mikroliter av 25 picomolar Sulfo-Cy3-märkta alfa-synukleinprov i kammaren på omslagsglidningen.Därefter, för datainsamlingen, lägg till en droppe ultrapure vatten på toppen av den hög numeriska bländaren vatten nedsänkning objektiv, fixa täckglidningsbilden i scenkammaren och installera sedan enheten på toppen av mikroskopstadiet. För objektivet uppåt tills vattendroppen ovanpå objektivet smetar i botten av omslagsslipen och öppna laserluckan. När objektivet rör sig uppåt, inspektera mönstret på de luftiga ringarna på en CCD-kamera.Den första ringen representerar fokus vid vatten/glasgränssnittet, och den andra ringen representerar fokus vid gränssnittet mellan glaset och provlösningen. Öka höjden på objektivet med 75 mikrometer för att få laserfokus djupt i lösningen för att minimera autofluorescensen från glasytan på täckglidningen. Justera lasereffekten vid objektivet cirka 100 mikrowatt.Starta förvärvet av de identifierade fotonerna under en fördefinierad tid. Öppna Jupyter Notebooks och öppna sedan exempel anteckningsboken. Ladda fretbursts och Photon-HDF5 datafil.Använd histogrammet för interfotontiderna för att beräkna bakgrundsfrekvensen för var 30: e sekund av datainsamlingen. Flytta ett tidsfönster på en foton i taget i 20 på varandra följande fotoner och samla in fotondata om den ögonblickliga fotonhastigheten F är minst 11 gånger större än bakgrundshastigheten för den perioden av datainsamlingen. Beräkna burst-storleken och mängden fotoner i en burst, burst-varaktigheten, tidsskillnaden mellan de senaste och första fotondetekteringstiderna i en burst, burst-ljusstyrkan, det största värdet för den momentana fotonhastigheten i en burst och burst-separationen, tidsintervallet mellan på varandra följande bursts.Rita histogrammet av burst-ljusstyrkevärden med händelseaxeln i en logaritmisk skala. Definiera tröskelvärdet för burst-ljusstyrka som det lägsta burst-ljusstyrkan från vilket histogrammet uppvisar ett förfallet mönster och väljer sprängningarna med ljusstyrka värden som är större än tröskelvärdet för burst-ljusstyrka. För burst genomsnittlig fluorescenslivslängdsmätning, plotta histogrammet av fotonnanotid för alla fotoner i de valda sprängningarna med fotonräkningsaxeln i en logaritmisk skala.Definiera nanotidströskeln som det lägsta nanotidsvärdet från vilket histogrammet av fotonnanotider uppvisar ett förfallet mönster. Välj bara fotoner med nanotider som är större än nanotidströskeln. Beräkna det algebraiska medelvärdet av alla valda fotonnanotider.Subtrahera nanotidströskeln från fotonna nanotid algebraiskt medelvärde. Det erhållna värdet är den genomsnittliga fotonnanotiden för sprängningen, direkt proportionell mot den genomsnittliga fluorescenslivslängden. Plot histogrammet av alla sprängning betyder fluorescens livstider.De centralt fördelade subpopulationerna av fluorescenslivslängden kan förekomma. Subpopulationerna med lägre medelvärden representerar de molekylära arterna med Sulfo-Cy3 som inte varsteriskt blockerade, medan subpopulationerna med högre värdegenomsnitt representerar molekylarten med S-Cy3 som var mer steriskt blockerade. För den långsamma, mellan burst dynamik bedömningen, plotta histogrammet för burst separation gånger med en separation tid axel i en logaritmisk skala.Välj om du vill spara alla par i de på varandra följande bursts som separeras med mindre än en maximal separationstid som definierar subpopulationen av samma molekyl. Plot en histogram eller en spridning av den genomsnittliga fluorescens livstiden för den första och andra bursts för alla par av sprängningarna som återkommit under en viss separationstidströskel. Histogrammen av den genomsnittliga fluorescens livstiden av en enda, S-Cy3-märkt, alfa-synuklein-56 molekyl visade att den första subpopulationen hade en karakteristisk fluorescens livslängd på 1,6 nanosekunder och representerar alfa-synuklein konformationella tillstånd med få protein ytor i närheten av rester 56.Den andra subpopulationen hade en karakteristisk fluorescens livslängd på 3,5 nanosekunder och representerar alfa-synuklein konformationella tillstånd med fler proteinytor i närheten av rester 56. De icke-amyloid beta komponent segmenten av alfa-synuklein molekyler är kända för att anta en spiralformad, hårnål struktur vid bindning till SDS vesicles, som bekräftades som en enda florescence livstid befolkning med en karakteristisk livslängd på cirka tre nanosekunder, och avsaknad av subpopulation med den karakteristiska livslängden på 1,6 nanosekunder. Histogrammet av separationtiderna mellan på varandra följande, enmolekylssprängningar rapporterar återkommande molekyler för separationstiderna snabbare än 100 millisekunder, där den första och andra sprängningen uppstår från samma molekyl.Det genomsnittliga fluorescenslivslängds histogrammet av alla enskilda molekylsprängningar visade subpopulationer med en kort karakteristisk livslängd, liksom med en lång karakteristisk livslängd, vilket indikerar att enskilda molekyler kan genomgå övergångar mellan olika genomsnittliga livstidsvärden långsammare än burst varaktighetstider. Inom burst-separationstider på högst 100 millisekunder fanns det en bråkdel av molekyler som började som en första bristning i den korta livstidssubpopulationen och återkom som en andra bristning inom den långa livstidssubpopulationen. Medan den del av molekyler som började som en första bristning i den långa livstidssubpopulationen, och återkom som en andra bristning inom kortlivspopulationen, indikerar övergångarna mellan de två subpopulationerna inom 10 till 100 millisekunder.Det viktigaste att komma ihåg när man analyserar de experimentella resultaten är att korrekt separera enmolekyliga fluorescenssignaler från bakgrunden och att analysera sprängningar med tillräckligt med fotonnanotider. Utvecklingen av smPIFE banade väg för forskare att utforska nukleinsyraproteininteraktioner på enmolekylsnivå. Detta framsteg lägger grunden för att studera lokal strukturell dynamik inom proteiner.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One &#945;-Synuclein Monomer at a Time

Utilizing the Ethylene-releasing Compound, 2-Chloroethylphosphonic Acid, as a Tool to Study Ethylene Response in Bacteria

Med användning av eten-frigörande förening, 2-kloretylfosfonsyra, som ett verktyg för att studera Eten Response i bakterier

Ethylene (C2H4) is a gaseous phytohormone that is involved in numerous aspects of plant development, playing a dominant role in senescence and fruit ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Tidsupplöst elektrosprayjonisering Väte-deuterium Exchange-masspektrometri för att studera Protein Structure and Dynamics

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Utilizing a Comprehensive Immunoprecipitation Enrichment System to Identify an Endogenous Post-translational Modification Profile for Target Proteins

Använda ett omfattande Immunoprecipitation berikning System för att identifiera en endogen posttranslationella modifieringen profil för målproteiner

It is now well-appreciated that post-translational modifications (PTMs) play an integral role in regulating a protein&#39;s structure and function, which ...

Generation of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Using a SUMO Fusion Strategy

Generation av infödda, otaggade Huntingtin Exon1 Monomer och fibriller med en SUMO Fusion strategi

Huntington&#39;s Disease (HD) is an inherited fatal neurodegenerative disease caused by a CAG expansion (&#8805;36) in the first exon of the HD gene, ...

Manipulating Living Cells to Construct Stable 3D Cellular Assembly Without Artificial Scaffold

Manipulera levande celler att bygga stabila 3D cellulära montering utan konstgjorda byggnadsställning

Regenerative medicine and tissue engineering offer several advantages for the treatment of intractable diseases, and several studies have demonstrated the ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

En fluorescens fluktuation spektroskopi haltbestämning av Protein-Protein interaktioner på Cell-Cell kontakter

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Använda i Vitro fluorescens resonans energiöverföring att studera dynamiken i proteinkomplex på en millisekund tidsskala

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Strategy to Identify Compounds that Affect Cell Growth and Survival in Cultured Mammalian Cells at Low-to-Moderate Throughput

En strategi för att identifiera substanser som påverkar cell tillväxt och överlevnad i odlade däggdjursceller vid låg till måttlig genomströmning

Cytotoxicity is a critical parameter that needs to be quantified when studying drugs that may have therapeutic benefits. Because of this, many drug ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Snabb gallerförberedelse för tidsupp lös Cryo-Electron mikroskopi

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Tidsupplösta Förster-resonansenergiöverföringsanalyser för mätning av endogena fosforylerade STAT-proteiner i humana celler

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...