Name: utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time
Uploaded: 2021-05-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

PT-t7 plazmid kodlu A56C α-Syn mutant bize Dr. Asaf Grupi, Dr. Dan Amir ve Dr. Elisha Haas tarafından hediye edildi. Bu makale Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH, R01 GM130942'yi E.L.'ye subaward olarak vermek), İsrail Bilim Vakfı (KillCorona - Curbing Coronavirus Araştırma Programı dahilinde 3565/20 hibe), Milner Fonu ve Kudüs İbrani Üniversitesi (başlangıç fonları) tarafından desteklendi.

1. Plazmid dönüşümü
<ol><li>0,5 L SOC ortamının hazırlanması<ol>
<li>10 g tripton, 2,5 g Maya özü, 0,25 g sodyum klorür (NaCl), 0,1 g potasyum klorür (KCl) ağırlığındadır.</li>
		<li>Toplam 0,5 L hacme kadar çift damıtılmış su (DDW) ekleyin.</li>
		<li>Sodyum hidroksit (NaOH) ekleyerek pH 7'ye ayarlayın.</li>
		<li>100 mL ve otoklav stok aliquots hazırlayın.</li>
		<li>Kullanmadan önce, 100 mL SOC'ye 0,5 mL steril magnezyum klorür (MgCl2)ve 1,8 mL steril glikoz ekleyin.</li>
	</o...

α-Syn'nin yapısal özelliklerini ve düzensiz doğasını incelemek için kapsamlı biyokimyasal ve biyofiziksel çalışmalar yapıldı33,34,35,36,37,38. Α-Syn monomerinin bağdan arındırılmış moleküler içi dinamiklerini araştırmak için birçok çalışma serbestçe dağıtıcı smFRET'i kullanmıştır. Bu çal...

Son yirmi yılda, tek moleküllü floresan bazlı yöntemler biyomolekülleri ölçmek için güçlü bir araçhalinegelmiştir 1,2, farklı biyomoleküler parametrelerin nasıl dağılacağını ve bu parametrelerin farklı alt popülasyonları arasında milisaniyenin altında çözünürlük 3 , 4,5arasında dinamik olarak nasıl bir araya geldiklerini yoklar. Bu tekniklerdeki parametreler, FRET ölçümlerinde enerji transfer verimliliğini içerir 6,7, floresan anizotropi8,9, floresan kuantum verimleri ve ömürleri10,11, farklı floresan söndürme bir fonksiyon olarak12 veya geliştirme13 mekanizmaları. Protein kaynaklı floresan geliştirme (PIFE) 14 olarak bilinen bu mekanizmalardan biri,14, 15 , 16 ,17,18,19 boyasının çevresindeki protein yüzeylerinin neden olduğu, heyecan verici durumdayken floroforun serbest izomerizasyonunasteriktıkanıklığın bir işlevi olarak floresan kuantum veriminin ve ömrünün artırılmasınıtanıtır. . Hem FRET hem de PIFE spektroskopik cetveller veya yakınlık sensörleri olarak kabul edilir, çünkü ölçülen parametreleri ölçüm altında etiketli biyomolekül içindeki uzamsal bir ölçüye doğrudan bağlıdır. FRET verimliliği 3-10 nm20aralığındaki bir çift boya arasındaki mesafe ile ilgili olsa da, PIFE izleri floresan kuantum veriminde veya 0-3 nm19aralığındaki yakındaki bir proteinin yüzeyi arasındaki mesafe ile ilgili yaşam sürelerinde artar.
Tek moleküllü FRET, α-Synuclein (α-Syn) 22 gibi özünde düzensiz proteinler (IDP'ler)21de dahil olmak üzere birçokfarklı protein sistemine yapısal içgörüler sağlamak için yaygın olarak kullanılmıştır. α-Syn, farklı biyomoleküllere ve farklı koşullar altında 23 , 24 , 25 ,26,27,28,29,30'abağlanarak sıralı yapılar oluşturabilir. Bununla birlikte, ilişkisiz olduğunda, α-Syn monomer, hızla birbirine keneşen konformasyonlarla yüksek konformasyonlu heterojenlik ile karakterize edilir31,32.
α-Syn'nin konformasyonları daha önce, bu tür yüksek heterojen ve dinamik protein sistemlerinin konformasyonsal dinamiklerinin belirlenmesine yardımcı olan çeşitli farklı teknikler kullanılarak çalışılmıştır33,34,35,36,37,38,39. İlginçtir ki, tampondaki α-Syn'nin tek moleküllü FRET (smFRET)ölçümleri,konfokal nokta aracılığıyla α-Syn'nin tipik difüzyon zamanından çok daha hızlı zaman zaman dinamik olarak kesişen konfeksiyonların zaman ortalamasının bir sonucu olan tek bir FRET popülasyonu39,40 bildirdi (birkaç mikrosaniye kadar hızlı ve hatta bundan daha hızlı, tipik milisaniye difüzyon sürelerine göre)40, 41. Bununla birlikte, 3-10 nm mesafe hassasiyetine sahip bir FRET spektroskopik cetveli kullanmak bazen sadece α-Syn gibi küçük bir proteindeki genel yapısal değişiklikleri raporlar. Daha kısa mesafe hassasiyetlerine sahip spektroskopik yakınlık sensörlerini kullanan tek moleküllü ölçümler, yerel yapıların dinamiklerini raporlama potansiyeline sahiptir. Burada α-Syn'nin tek moleküllü PIFE ölçümlerini gerçekleştiriyor ve floresan ömürlerinin farklı alt popülasyonlarını, aralarında 100 ms kadar yavaş geçişlerle farklı yerel yapılara eşleşiyor. Bu çalışma, serbestçe dağılan α-Syn moleküllerinin zaman çözümlenmiş smPIFE ölçümlerini birer birer, tamponda ve SDS tabanlı membranlara kısa menzilli tek moleküllü spektroskopik yakınlık sensörü olarak bağlandığında özetlemektedir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units</td>
			<td>Merc</td>
			<td>C7715</td>
			<td>cutoff: 100 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonium sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cysteamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dialysis bags - MEGA GeBaFlex-tube</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>MEGA320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>43815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E5134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast SeeBand staining solution</td>
			<td>Gene Bio-Application</td>
			<td>SB050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>50046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap Desalting 5 mL</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>GE17-1408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (TROLOX)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>238813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isopropyl &#946;-d-1-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>63068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MonoQ column</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>54807</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein LoBind tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EP0030108094</td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rinse a &#181;-slide 18</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>81816</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75746</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71507</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cell spreaders, Drigalski spatulas</td>
			<td>mini-plast</td>
			<td>815-004-05-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>streptomycin sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sulfo-Cy3&#160;maleimide</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab146493</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>93363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7293</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Extract</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Y1625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

utilizing time-resolved protein-induced fluorescence enhancement to identify stable local conformations one &#945;-synuclein monomer at a time

Tek biyomoleküllerin ve dinamiklerinin birden fazla konformasyonunu izlemek için spektroskopik cetvellerin kullanılması, yapısal dinamiklerin anlaşılmasında ve biyolojiye katkılarında devrim yaratmasına neden oldu. FRET tabanlı cetvel 3-10 nm aralığındaki boyalar arası mesafeleri raporlarken, protein kaynaklı floresan geliştirme (PIFE) gibi diğer spektroskopik teknikler, daha kısa 0-3 nm aralığında bir boya ile protein yüzeyi arasındaki yakınlığı rapor eder. Tercih yöntemi ne olursa olsun, serbestçe dağılan biyomolekülleri teker teker ölçmedeki kullanımı, deneysel parametrenin histogramlarını alarak, her alt popülasyonun milisaniyeler içinde değişmeden kalan tek bir uyumu veya milisaniyeden çok daha hızlı bir şekilde kesişen birden fazla uyumu ve dolayısıyla ortalama bir alt popülasyonu temsil ettiği ayrı merkezi olarak dağıtılmış biyomolekül alt popülasyonlarını verir. Histogramlarda bildirilen parametrenin inter-boya FRET verimliliği olduğu tek moleküllü FRET'te, tampondaki α-Synuclein monomer gibi özünde düzensiz bir proteinin, daha önce hızla birbirine keneşen birden fazla konfektörden oluşan tek bir ortalama alt popülasyon sergilediği bildirilmiştir. Bu geçmiş bulgular FRET tabanlı cetvelin 3-10 nm aralığına bağlı olsa da, bu proteini, mekâna özgü sCy3 etiketli α-Synuclein proteinlerinin floresan ömrünü tek tek izlediğimiz tek moleküllü PIFE kullanarak test etmeye çalıştık. İlginçtir ki, bu daha kısa menzilli spektroskopik yakınlık sensörunu kullanarak, sCy3 etiketli α-Synuclein, 10-100 ms'de kesişen belirgin şekilde farklı ortalama ömürlere sahip birkaç ömür boyu alt popülasyon sergiler. Bu sonuçlar, α-Synuclein'in küresel olarak düzensiz olabileceğini, ancak yine de istikrarlı yerel yapılara sahip olduğunu göstermektedir. Özetle, bu çalışmada, yerel veya küresel yapısal değişiklikleri aynı anda bir biyomolekülden izleyen farklı spektroskopik yakınlık sensörleri kullanmanın avantajını vurguluyoruz.

Bir IDP olarak, başka bir biyomoleküle bağlı olmadığında, α-Syn, birkaç mikrosaniye40 ve hatta yüzlerce nanosaniye41'degeçişlerle birden fazla konformasyon arasında yapısal dinamikler sergiler. α-Syn konfokal noktayı geçtiğinde, konformasyonlar arasında binlerce geçişe maruz kalabilir. Gerçekten de, smFRET kullanıldığında durum böyleydi39,40. Burada α-Syn'nin yerel konformasyon dinamikler...

Watch this Scientific Journal Video about Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃŽÂ±-Synuclein Monomer at a Time at JoVE.com

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One ÃƒÅ½Ã‚Â±-Synuclein Monomer at a Time

Zaman çözümlenmiş tek moleküllü protein kaynaklı floresan geliştirme, proteinlerdeki yerel yapısal değişikliklere duyarlı yararlı bir floresan spektroskopik yakınlık sensörüdür. Burada, daha uzun menzilli FRET cetveli kullanılarak ölçüldüğünde küresel olarak yapılandırılmamış ve kararsız olarak bilinen α-Synuclein'deki kararlı yerel konformasyonları ortaya çıkarmak için kullanılabileceğini gösteriyoruz.

Kararlı Yerel Konformasyonları Belirlemek için Zaman Çözümlenmiş Protein Kaynaklı Floresan Geliştirmeyi Kullanmak Bir Seferde Bir α-Synuclein Monomer

Using spectroscopic rulers to track multiple conformations of single biomolecules and their dynamics have revolutionized the understanding of structural ...

Tek moleküllü, protein kaynaklı floresan geliştirme, protein yapısal alt nüfusları ve konformasyonları incelerken, özellikle farklı yapısal alt nüfusların kararlı yerel yapılar hakkında rapor verdiği durumlarda, tek moleküllü FRET ölçümlerini tamamlayabilir. Bu tekniğin temel avantajı, boya etiketleme bölgesinin protein yüzeylerine olan çevresine göre bölgeye özgü farklı yapısal alt popülasyonları yakalamasıdır. Tek moleküllü, protein kaynaklı floresan geliştirme, farklı, lokal, yapısal alt nüfusları araştırmak için ilgi çekici herhangi bir biyomoleküler sisteme uygulanabilir.Düşük proteinli bir bağlama tüpünde ölçüm tamponunda 25 picomolar Sulfo-Cy3 etiketli alfa-sinüklein hazırlayarak başlayın. 18 odalı mikroskopi kapak kaydırasına mililitre başına bir miligramlık 100 mikrolitre ekleyin ve bir dakika kuluçkaya yatırın, ardından BSA'yı atın. Kapak kayması slayt odasına 25 pikolar Sulfo-Cy3 etiketli alfa-sinüklein örneğinden oluşan 100 mikrolitre ekleyin.Daha sonra, veri toplama için, yüksek sayısal diyaframlı su daldırma objektif lensinin üstüne bir damla ultra saf su ekleyin, kapak kayması kaydıramasını sahne odasına sabitleyin ve ardından montajı mikroskop aşamasının üstüne takın. Kapak kayması kaydırağındaki objektif lensin üstündeki su damlası sürtünene kadar objektif lensi yukarı getirin ve lazer deklanşörü açın. Objektif lens yukarı doğru hareket ettiğinde, ccd kameradaki havadar halkaların desenini inceleyin.İlk halka su/cam ara uzayını, ikinci halka ise cam ve numune çözeltisi arasındaki arayüzdeki odağı temsil eder. Lazer odağını kapak fişinin cam yüzeyinden gelen otofluoresansı en aza indirmek için çözeltinin derinliklerine getirmek için objektif lensin yüksekliğini 75 mikrometre artırın. Objektif lensteki lazer gücünü yaklaşık 100 mikrowatt ayarlayın.Önceden tanımlanmış bir süre için algılanan fotonların alımını başlatın. Jupyter Not Defterleri'ni açın ve ardından örnek not defterini açın. FRETBursts ve Photon-HDF5 veri dosyasını yükleyin.Her 30 saniyelik veri toplama için arka plan hızlarını hesaplamak için interfotoğraf zamanlarının histogramını kullanın. Ardışık 20 foton için aynı anda bir foton zaman penceresini taşıyın ve anlık foton oranı F, veri toplama döneminin arka plan hızından en az 11 kat daha büyükse foton verilerini toplayın. Bir patlamadaki fotonların patlama boyutunu ve miktarını, patlama süresini, bir patlamadaki son ve ilk foton algılama süreleri arasındaki zaman farkını, patlama parlaklığını, bir patlamada anlık foton hızının en büyük değerini ve patlama ayrımını, ardışık patlamalar arasındaki zaman aralığını hesaplayın.Patlama parlaklığı değerlerinin histogramını logaritmik ölçekte olaylar ekseniyle çizin. Patlama parlaklığı eşiğini, histogramın çürüyen bir desen sergilediği minimum patlama parlaklık değeri olarak tanımlayın ve patlama parlaklık eşiğinden daha büyük parlaklık değerlerine sahip patlamaları seçin. Patlama ortalama floresan ömrü ölçümü için, seçilen patlamalardaki tüm fotonlar için foton nano zamanı histogramını logaritmik ölçekte foton sayım ekseni ile çizin.Nanotime eşiğini, foton nanotimes histogramının çürüyen bir desen sergilediği minimum nano zaman değeri olarak tanımlayın. Yalnızca nanotime eşiğinden daha büyük nanotime'lara sahip fotonları seçin. Seçilen tüm foton nanotimes cebirsel ortalamasını hesaplayın.Nanotime eşiğini foton nanotime cebirsel ortalamasından çıkarın. Elde edilen değer, ortalama floresan ömrü ile doğru orantılı olarak patlamanın ortalama foton nano zamanıdır. Tüm patlama ortalama floresan ömürlerinin histogramını çizin.Floresan ömrünün merkezi olarak dağıtılmış alt nüfusları ortaya çıkabilir. Daha düşük değerli ortalamalara sahip alt nüfuslar, Sulfo-Cy3 ile sterik olarak engellenmemiş moleküler türleri temsil ederken, daha yüksek değerli ortalamalara sahip alt nüfuslar, S-Cy3 ile daha sterik olarak engellenmiş molekül türlerini temsil eder. Yavaş, patlama arası dinamikler değerlendirmesi için, patlama ayırma sürelerinin histogramını logaritmik ölçekte bir ayırma süresi ekseniyle çizin.Aynı molekül alt nüfusunu tanımlayan maksimum ayırma süresinden daha az bir süreyle ayrılan ardışık patlamaların tüm çiftlerini kaydetmek için seçin. Belirli bir ayırma süresi eşiğinin altında yinelenen tüm patlama çiftleri için birinci ve ikinci patlamaların ortalama floresan ömürlerinin bir histogramını veya bir saçanı çizin. Tek bir S-Cy3 etiketli, alfa-sinüklein-56 molekülünün ortalama floresan ömürlerinin histogramları, ilk alt eğilimin 1,6 nanosaniyelik karakteristik bir floresan ömrüne sahip olduğunu ve kalıntı 56 civarında az protein yüzeyi olan alfa-sinüklein konformasyon durumlarını temsil ettiğini göstermiştir.İkinci alt nüfus 3,5 nanosaniyelik karakteristik bir floresan ömrüne sahipti ve kalıntı 56 civarında daha fazla protein yüzeyine sahip alfa-sinüklein konformasyon durumlarını temsil ediyordu. Alfa-sinüklein moleküllerinin amiloid olmayan beta bileşen segmentlerinin, yaklaşık üç nanosaniye karakteristik ömrüne sahip tek bir floresan yaşam boyu popülasyonu ve karakteristik ömrü 1,6 nanosaniye olan subpopülasyonun yokluğu olarak doğrulanan SDS veziküllerine bağlanması üzerine sarmal, saç tokası yapısını benimsediği bilinmektedir. Ardışık, tek moleküllü patlamalar arasındaki ayırma sürelerinin histogramı, birinci ve ikinci patlamaların aynı molekülden kaynaklandığı 100 milisaniyeden daha hızlı ayırma süreleri için yinelenen molekülleri raporlar.Tüm tek molekül patlamalarının ortalama floresan ömür histogramı, kısa karakteristik ömürle ve uzun karakteristik yaşam süresine sahip alt nüfuslar gösterdi, bu da bireysel moleküllerin patlama süresi sürelerinden daha yavaş farklı ortalama yaşam değerleri arasında geçişlere maruz kaldığını gösteriyor. En fazla 100 milisaniyelik patlama ayırma sürelerinde, kısa ömür alt nüfusta ilk patlama olarak başlayan ve uzun ömür altı nüfus içinde ikinci bir patlama olarak tekrarlanan moleküllerin bir kısmı vardı. Uzun ömürlü alt popülasyonda ilk patlama olarak başlayan ve kısa ömürlü popülasyon içinde ikinci bir patlama olarak tekrarlanan moleküllerin fraksiyonu, iki alt popülasyon arasındaki geçişleri 10 ila 100 milisaniye içinde gösterir.Deneysel sonuçları analiz ederken hatırlanması gereken en önemli şey, tek moleküllü floresan sinyallerini arka plandan düzgün bir şekilde ayırmak ve patlamaları yeterli foton nanotimes ile analiz etmektir. smPIFE'nin geliştirilmesi, araştırmacıların nükleik asit protein etkileşimlerini tek molekül düzeyinde keşfetmelerinin yolunu açtı. Bu ilerleme, proteinler içindeki yerel yapısal dinamikleri incelemek için zemin hazırlar.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Utilizing Time-Resolved Protein-Induced Fluorescence Enhancement to Identify Stable Local Conformations One &#945;-Synuclein Monomer at a Time

Utilizing the Ethylene-releasing Compound, 2-Chloroethylphosphonic Acid, as a Tool to Study Ethylene Response in Bacteria

Aracı Olarak Etilen serbest Bileşik, 2-chloroethylphosphonic acid, kullanan Bakterilerin Etilen Yanıtı Eğitim için

Ethylene (C2H4) is a gaseous phytohormone that is involved in numerous aspects of plant development, playing a dominant role in senescence and fruit ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

Zaman çözülmesi elektro sprey iyonizasyon Hidrojen-döteryum Değişim Kütle Spektrometre Protein Yapısı ve Dinamikleri incelenmesi için

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

Utilizing a Comprehensive Immunoprecipitation Enrichment System to Identify an Endogenous Post-translational Modification Profile for Target Proteins

Bir endojen translasyonel modifikasyon profil hedef proteinler için tanımlamak için bir kapsamlı Immunoprecipitation zenginleştirme sistemi kullanan

It is now well-appreciated that post-translational modifications (PTMs) play an integral role in regulating a protein&#39;s structure and function, which ...

Generation of Native, Untagged Huntingtin Exon1 Monomer and Fibrils Using a SUMO Fusion Strategy

Yerli, etiketsiz Huntingtin Exon1 Monomer ve SUMO Fusion strateji kullanarak liflerinde nesil

Huntington&#39;s Disease (HD) is an inherited fatal neurodegenerative disease caused by a CAG expansion (&#8805;36) in the first exon of the HD gene, ...

Manipulating Living Cells to Construct Stable 3D Cellular Assembly Without Artificial Scaffold

Canlı hücreler yapay iskele olmayan istikrarlı 3D hücresel derleme oluşturmak için değiştirme

Regenerative medicine and tissue engineering offer several advantages for the treatment of intractable diseases, and several studies have demonstrated the ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Bir floresan dalgalanma spektroskopisi tahlil Protein-Protein etkileşimlerinin hücre-hücre kişiler

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

Protein kompleksleri milisaniyelik zaman ölçekte dinamikleri çalışmaya vitro Floresans rezonans enerji transferi içinde kullanma

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

A Strategy to Identify Compounds that Affect Cell Growth and Survival in Cultured Mammalian Cells at Low-to-Moderate Throughput

Düşük-Orta Throughput'ta Kültürlü Memeli Hücrelerinde Hücre Büyümesini ve SağkalımLarını Etkileyen Bileşikleri Belirleme Stratejisi

Cytotoxicity is a critical parameter that needs to be quantified when studying drugs that may have therapeutic benefits. Because of this, many drug ...

Fast Grid Preparation for Time-Resolved Cryo-Electron Microscopy

Zaman Çözümlü Cryo-Elektron Mikroskopisi için Hızlı Şebeke Hazırlığı

The field of cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly developing with new hardware and processing algorithms, producing higher resolution structures ...

Time-resolved F&#246;rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

Time-resolved FÃƒÆ’Ã‚Â¶rster Resonance Energy Transfer Assays for Measurement of Endogenous Phosphorylated STAT Proteins in Human Cells

İnsan Hücrelerinde Endojen Fosforile STAT Proteinlerinin Ölçümü için Zaman Çözülmüş Förster Rezonans Enerji Transfer Testleri

The Janus kinase (JAK)/signal transducer and activator of transcription (STAT) signaling pathway plays a crucial role in mediating cellular responses to ...