Name: spatio-temporal in vivo imaging of ocular drug delivery systems using fiberoptic confocal laser microendoscopy
Uploaded: 2021-09-27T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spatio-Temporal In Vivo Imaging of Ocular Drug Delivery Systems using Fiberoptic Confocal Laser Microendoscopy at JoVE.com

이 연구는 NTU-노스웨스턴 나노의학 연구소(NNIN)가 (SV에) 수여하고 싱가포르 국립 연구 재단 보조금 AG/CIV/GC70-C/NRF/2013/2및 싱가포르의 보건 생물 의학 과학(HBMS) 산업 정렬 사전 포집(IAF-PP) 보조금 H18/01/01/01에 의해 지원되었습니다. 기술 및 연구(A*STAR) (AMC). 듀크-NUS 번역 및 분자 이미징 연구소(LTMI)의 회원덕분에 장비에 대한 연구 및 교육의 물류 및 실행을 용이하게 합니다. 그녀의 편집 지원에 대한 위스타 노파 양에게 특별한 감사.

여기에 설명된 모든 방법은 SingHealth (싱가포르)에서 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 여성 C57BL/6 J 마우스(6-8주 전, 18-20g)는 싱가포르 인비보스에서 수득되었으며 싱가포르 듀크-NUS 의과대학의 온도 및 빛 제어 생체관리에 보관되었다. 동물은 안과 및 시력 연구에서 동물의 사용을위한 비전과 안과 (ARVO) 성명서에 대한 연구를위한 협회의 지침에 따라 치료되었다.
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<ol>
	<li>Chaw, S. Y., Novera, W., Chacko, A. -. M., Wong, T. T. L., Venkatraman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+fate+of+liposomes+after+subconjunctival+ocular+delivery.">In vivo fate of liposomes after subconjunctival ocular delivery.</a> Journal of Controlled Release. 329, 162-174 (2021).</li><li>Kuo, J. C. -. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+colorectal+dysplasia+using+fluorescently+labelled+lectins.">Detection of colorectal dysplasia using fluorescently labelled lectins.</a> Scientific Reports. 6 (1), 24231 (2016).</li><li>Wu, Y. -. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation,+characterization,+and+in+vivo+evaluation+of+nanoliposomes-encapsulated+Bevacizumab+(Avastin)+for+intravitreal+administration.">Preparation, characterization, and in vivo evaluation of nanoliposomes-encapsulated Bevacizumab (Avastin) for intravitreal administration.</a> Retina. 29 (5), 699-703 (2009).</li><li>Pleyer, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+absorption+of+cyclosporine+A+from+liposomes+incorporated+into+collagen+shields.">Ocular absorption of cyclosporine A from liposomes incorporated into collagen shields.</a> Current Eye Research. 13 (3), 177-181 (1994).</li><li>Shen, Y., Tu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+ocular+pharmacokinetics+of+ganciclovir+liposomes.">Preparation and ocular pharmacokinetics of ganciclovir liposomes.</a> The AAPS Journal. 9 (3), 371-377 (2007).</li><li>Weijtens, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+concentration+of+dexamethasone+in+aqueous+and+vitreous+after+subconjunctival+injection.">High concentration of dexamethasone in aqueous and vitreous after subconjunctival injection.</a> American Journal of Ophthalmology. 128 (2), 192-197 (1999).</li><li>Voss, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+injectable+drug+delivery+system+for+subconjunctival+glaucoma+treatment.">Development of a novel injectable drug delivery system for subconjunctival glaucoma treatment.</a> Journal of Controlled Release. 214, 1-11 (2015).</li><li>Giarmoukakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+nanoparticles+for+controlled+subconjunctival+delivery+of+latanoprost+acid:+In+vitro+and+in+vivo+evaluation.+Preliminary+results.">Biodegradable nanoparticles for controlled subconjunctival delivery of latanoprost acid: In vitro and in vivo evaluation. Preliminary results.</a> Experimental Eye Research. 112, 29-36 (2013).</li><li>Shah, N. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+and+subconjunctival+melphalan+for+retinoblastoma+in+transgenic+mice.">Intravitreal and subconjunctival melphalan for retinoblastoma in transgenic mice.</a> Journal of Ophthalmology. 2014, 829879 (2014).</li><li>Dastjerdi, M. H., Sadrai, Z., Saban, D. R., Zhang, Q., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+Penetration+of+Topical+and+Subconjunctival+Bevacizumab.">Corneal Penetration of Topical and Subconjunctival Bevacizumab.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 52 (12), 8718-8723 (2011).</li><li>Ezra-Elia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+an+in+vivo+imaging+system+be+used+to+determine+localization+and+biodistribution+of+AAV5-mediated+gene+expression+following+subretinal+and+intravitreal+delivery+in+mice.">Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice.</a> Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).</li><li>Movila, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+endoscopic+technology+for+real-time+monitoring+of+inflammation+caused+in+experimental+periodontitis.">Intravital endoscopic technology for real-time monitoring of inflammation caused in experimental periodontitis.</a> Journal of Immunological Methods. 457, 26-29 (2018).</li><li>Vanherp, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bronchoscopic+fibered+confocal+fluorescence+microscopy+for+longitudinal+in+vivo+assessment+of+pulmonary+fungal+infections+in+free-breathing+mice.">Bronchoscopic fibered confocal fluorescence microscopy for longitudinal in vivo assessment of pulmonary fungal infections in free-breathing mice.</a> Scientific Reports. 8 (1), 3009 (2018).</li><li>Chagnon, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+intravital+endoscopic+confocal+fluorescence+microscopy+of+normal+and+acutely+injured+rat+lungs.">In vivo intravital endoscopic confocal fluorescence microscopy of normal and acutely injured rat lungs.</a> Laboratory Investigation. 90 (6), 824-834 (2010).</li><li>Yun, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+near-infrared+fluorescence+conjugation+on+the+anti-cancer+potential+of+cetuximab.">The effect of near-infrared fluorescence conjugation on the anti-cancer potential of cetuximab.</a> Laboratory Animal Research. 34 (1), 30-36 (2018).</li></ol>

결과에서 볼 수 있듯이 CLM은 눈에서 리포솜의 안구 분포를 이미지화하는 간단하고 실행 가능한 방법을 제공합니다. 앞서 CLM의 사용을 통해 시간이 지남에 따라 마우스 눈 내의 다양한 리포소말 제형의 국소화를 특징으로 하는 것을 입증하였다1. 비침습적 응용 프로그램의 경우 CLM은 리포솜이 동일한 동물의 눈에 어떻게 분포되는지에 대한 통찰력을 위해 전방 안구 표면의 실시?...

혈액 정리, 조직 분포 및 살아있는 시스템에서 약물의 표적 점유율은 생체 내 약물 처분에 대한 이해를 위한 기둥입니다. 전임상 동물 모델에서, 이러한 매개 변수는 전형적으로 약물 투여 후 특정 시점에서 빈번한 혈액 및 조직 샘플링에 의해 평가된다. 그러나, 이 절차는 일반적으로 침략적입니다, 수시로 비 생존 측정을 포함하고, 통계적인 전원을 위한 큰 동물 집단을 필요로 합니다. 동물의 과도한 사용에 대한 윤리적 우려와 함께 추가 비용과 시간이 발생할 수 있습니다. 그 결과, 비침습적 이미징은 빠르게 바이오 유통 연구에서 필수적인 단계가 되고 있습니다. 공초점 레이저 미세 내시경검사(CLM1,2)는 높은 감도와 고해상도를 가진 살아있는 동물의 눈에 치료제의 스파티오-측두형 분포를 비침습적으로 이미지화하기 위해 안구 응용 분야에 적합합니다1,3,4.
CLM은 DDS 및 약물 생체 이용률의 포괄적 인 정량화 전에 리포솜과 같은 안구 약물 전달 시스템 (DDS)의 강력한 선별을 촉진 할 수있는 잠재력을 가지고 있습니다. 리포솜은 물리화학적 및 생물학적 특성5,6,7,8,9,10,11을 조정하여 다양한 치료화물을 캡슐화하고 약물 방출 및 작용 기간의 조직 부위를 제어하는 유연성에 매력적입니다. 리포솜은 단일클론 항체 bevacizumab12와 같은 대형 분자의 전달을 위한 안구 응용 분야에서 사용되어 왔으며, 사이클로스포린13 및 간시클로비르14와 같은 작은 분자가 사용되어 왔다. 약물로 적재된 리포솜은 비리포소말 "무료 약물" 제형에 비해 생물학적 반감기와 장기간치료 효과가 있습니다. 그러나, 안구 조직의 약물 분포는 전형적으로 눈의 유체 성분에 있는 약물 농도에서 추정됩니다 (즉, 혈액, 수성 유머 및 유리체 humor15,16,17). 적재된 약물 화물의 초기 생체 내 운명은 나노캐리어 자체의 특성에 의해 정의되기 때문에, 형광 리포솜의 CLM 이미징은 조직 표적화 및 시투 조직 거주 시간에 대한 약물의 대리역할을 할 수 있다. 더욱이, CLM을 가진 납품의 시각적 증거는 DDS 재설계를 조종하고, 약의 치료 이득을 평가하고, 아마 불리한 생물학 사건을 예측할 수 있습니다 (예를 들어, 시간의 연장된 기간 동안 DDS의 바람직하지 않은 현지화로 인한 조직 독성).
본원에서, 단계별 절차는 이중 대역 CLM 시스템을 가진 살아있는 마우스에서 리포솜의 안구 생체 분포를 연구하는 방법에 대해 상세하게 설명된다. 이 특정 CLM 시스템은 8 프레임 / s의 주파수와 함께 실시간으로 2 색 형광 (488 nm 및 660 nm에서 녹색 및 빨간색 여기 레이저 포함)을 감지 할 수 있습니다. 검출 프로브를 눈에 물리적으로 배치함으로써, 프로토콜은 2%의 에반스 블루(EB) 염료를 가진 마우스에 있는 정맥 내(IV)에서 하반수 투여 시 녹색 형광 리포좀의 이미지 수집 및 분석을 보여줍니다. EB 염료는 적색 형광 채널에서 혈관 구조를 시각화하는 데 도움이됩니다. 우리는 인지질 POPC (즉, 1-팔미토일-2-올레오일-글리페로-3-인포콜린)로 구성된 100 nm 중성 리포솜을 평가하는 연구에서 대표적인 결과를 보여주고 형광에 태그된 인지질 Fl-DHPE (즉, 1.e., doped)를 보여줍니다. N-(플루오레세인-5-티오카바모일)-1,2-디헥사-데카노일센-글리케로-3-인포에탄놀라민) 95% POPC의 비율: 5% Fl-DHPE (그림 1B ). CLM은 EB 염색 안구 조직 경계의 묘사에 의해 15 μm 축 및 3.30 μm 측삭 분해능에서 녹색 형광 태그 리포솜을 캡처할 수 있다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.08 &#181;m polycarbonate filter</td>
			<td>Whatman, USA</td>
			<td>110604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m syringe filter</td>
			<td>Fisherbrand, Ireland</td>
			<td>09-720-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5% Proxymetacaine hydrochloride sterile opthalmic solution</td>
			<td>Alcon, Singapore</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L Glass Syringe</td>
			<td>Hamilton, USA</td>
			<td>65460-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-Palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (POPC)</td>
			<td>Avanti, USA</td>
			<td>850457</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>32 G needle (Hamilton, 0.5&#8221; PT4)</td>
			<td>Hamilton, USA</td>
			<td>7803-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Temperature Controller with heating plate (15 cm x 20 cm)</td>
			<td>WPI, USA</td>
			<td>ATC 2000 &#38; 61800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellvizio Dual Band, S1500 Probe and Quantikit (Calibration kit in step 3.5)</td>
			<td>Mauna Kea Technologies, France</td>
			<td></td>
			<td>Tip diameter: 1.5 mm, field of view: 600 &#181;m x 500 &#181;m, axial resolution: 15 &#181;m, lateral resolution: 3.3 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma Aldrich, USA</td>
			<td>472476</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Tweezers #5, Dumostar</td>
			<td>WPI, USA</td>
			<td>500233</td>
			<td>11 cm, Straight, 0.1 mm x 0.06 mm Tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans Blue</td>
			<td>Sigma Aldrich, USA</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fusidic acid eye drop</td>
			<td>LEO Pharma, Denmark</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health, USA</td>
			<td></td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer Nano ZS</td>
			<td>Malvern Panalytical, UK</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma Aldrich, USA</td>
			<td>179337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Extruder</td>
			<td>Avanti, USA</td>
			<td>610020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-(fluorescein-5-thiocarbamoyl)-1,2-dihexadecanoylsn-glycero-3-phosphoethanolamine (triethylammonium salt) (FL-DHPE)</td>
			<td>Invitrogen, USA</td>
			<td>F362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Gibco, USA</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope System with table clamp stand</td>
			<td>Olympus, Tokyo, Japan</td>
			<td>SZ51 &#38; SZ2-STU3</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatio-temporal in vivo imaging of ocular drug delivery systems using fiberoptic confocal laser microendoscopy

수축기 주사는 각막및 결막과 같은 전방 안구 장벽을 우회하는 쉬운 트랜스 경피성 접근으로 인해 안구 약물을 투여하는 매력적인 경로입니다. 구축 주사 시 약물의 치료 효과 및 약동학은 일부 연구에서 설명되었지만 약물 또는 약물 전달 시스템 (DDS)의 안구 분포를 평가하는 것은 거의 없습니다. 후자는 원하는 안구 국소화 및 작용 기간(예: 급성 대 장시간)을 달성하기 위해 내구 DDS 설계 및 약물 생체 이용률의 최적화에 매우 중요합니다. 이 연구는 섬유섬유 공초점 레이저 미세 내시경 검사(CLM)를 사용하여 항결체 주입 후 살아있는 마우스에서 실시간으로 형광 리포좀의 안구 분포를 질적으로 연구합니다. 현미경 수준에서 조직의 생체 내육검사를 위해 설계되고, 이것은 또한 수축 주사 후 눈에 주사의 주체의 현수체 분포를 연구하는 CLM 이미징 방법의 첫 번째 전체 설명이다.

이 프로토콜은 경내 주입을 통해 투여된 녹색 형광 리포솜의 스파티오 측두엽 안구 분포를 평가하기 위해 CLM의 유용성을 입증한다. CLM 시스템의 듀얼 컬러 기능(488nm 및 660 nm 포크 파장)을 사용하기 위해 주입할 100nm 중립 POPC 리포솜은 5% Fl-DHPE( 도 1B에 도시됨)로 도핑되었고, EB는 눈의 랜드마크를 식별하기 위해 IV를 주입하였다. 에피클레라의 얇은 층과 결막의 존재는 모두 ?...

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Spatio-Temporal In Vivo Imaging of Ocular Drug Delivery Systems using Fiberoptic Confocal Laser Microendoscopy

우리는 경내 주입 후 눈에 리포좀의 스파티오 측두분포를 비침습적으로 연구하기 위해 광섬유 공초점 레이저 미세 내시경 검사(CLM)의 사용을 위한 프로토콜을 제시한다.

광섬유 공초점 레이저 미세 내시경 검사를 사용하여 안구 약물 전달 시스템의 생체 내 측두 체 이미징

Subconjunctival injection is an attractive route to administer ocular drugs due to easy trans-scleral access that bypasses anterior ocular barriers, such ...

이 프로토콜은 수정이 최적의 약물 전달 시스템을 설계하는 데 중요한 조직 거주 시간에 미치는 영향을 더 잘 이해하기 위해 새로운 제제의 검사를 용이하게합니다. 이 기술은 비침습적이며 실시간 이미징을 허용하여 샘플링을 위해 동물의 과도한 사용을 줄입니다. 약물 전달 시스템은 단순히 하나의 나노 담체에 치료 약물 및 이미징 moiety를 포함시켜 이미징 및 치료 응용 프로그램을 위해 재설계 될 수 있습니다.이것은 암과 전염병 치료에 유용한 응용 프로그램이 있습니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 선임 연구원 인 라샤 Msallam이 될 것입니다. 우선, 수축 주사 2시간 전에, 에반스 블루또는 EB킬로그램당 2.5밀리그램의 꼬리를 통해 마우스를 정맥내로 주입한다. 5%의 이소플루란으로 마우스를 분리한 후 마우스를 코 콘으로 옮기고 가열 패드에 진정된 마우스를 유지합니다.그런 다음, 주입 할 눈 근처 수염을 손질. 눈에 직접 0.5%의 프록시메타카인 염산염 용액을 주입합니다. 다음으로, 형광 리포솜이 장착된 32게이지 바늘을 장착한 10마이크로리터 유리 주사기를 적재하고 기포가 주사기에 존재하지 않도록 합니다.트위저를 사용하여 결막을 들어 올리고 천천히 리포솜을 하위 경련 공간에 주입한 다음 바늘을 천천히 철회하여 다시 흐르지 못하게 합니다. 형광 리포솜으로 채워진 결점의 형성을 보장합니다. 눈에 1% 퍼지산 드롭을 관리하고 의식을 되찾을 때까지 마우스를 모니터링합니다.CLM 시스템을 켭분입니다. 프로브를 CLM 시스템에 연결합니다. 이 시점에서 필드 오브 뷰 및 수집 파일의 위치를 선택합니다.레이저 강도를 조정하여 형광 DHPE에 대한 형광 검출이 선형 범위에 있는지 확인하고, 서로 다른 시점에서 촬영한 이미지 간의 비교를 위해 강도를 일관되게 유지합니다. 시스템이 15분 동안 워밍업된 후 각 레이저에 대한 클렌징, 헹구기 및 플루오로-4 솔루션을 포함하는 교정 키트를 사용하여 제조업체의 지침에 따라 시스템을 교정합니다. 간단히 말해서, 클렌징 바이알에 각각 5초 동안 팁을 침지한 다음 헹구는 바이알에 침지하여 교정을 시작합니다.배경 녹화를 위해 팁을 공중에 남겨두고 프로브의 다양한 섬유에서 배경 값을 정상화하여 이미지 균일성을 보장합니다. 다시, 클렌징 유리병에 5 초 동안 팁을 담그고 헹기 유리병에 담급. 다음으로, 신호 값을 정상화하기 위해 5초 동안 플루오로-4 488-나노미터를 함유한 바이알에 팁을 침수한다.클렌징 바이알에서 5초 동안 팁 침지와 헹구는 바이알을 반복합니다. 이전 단계에서 기록된 형광 신호가 사라질 때까지 헹구는 유리병에 팁을 보관하십시오. 이어서, 플루오로-4 660나노미터를 함유하는 바이알에서 팁을 전달하여 프로브내의 상이한 섬유로부터 신호 값을 정상화한다.보정 후 프로브 배경에 대한 값이 100 미만인지 확인합니다. 그렇지 않으면 면 팁 어플리케이터로 프로브를 반복 세척하십시오. 가열 패드가 부착 된 동물 온도 컨트롤러를 켜고 온도를 섭씨 37도로 조정합니다.수술 커튼으로 가열 패드를 덮은 후 가열 패드에 코 콘을 고정합니다. 유도 챔버에서 5%이소플루란을 사용하여 마우스를 분리한 후 마우스를 코 콘으로 옮기고 가열 패드에 진정된 마우스를 유지합니다. 이어서, 마취제 0.5%의 프록시메타카인 염산염 용액을 눈에 주입한다.안구 표면을 세척하고 렌즈의 결정화를 피하기 위해 식염수 방울을 떨어 뜨려 눈을 윤활하게하십시오. 이어서, 현미경의 안면을 회전시키고 조정하여 마우스 눈을 인체공학적으로 0.67배 배율로 직접 초점으로 본다. 레이저를 켜고 프로브를 눈 부위에 직접 펜처럼 배치하여 이미지화합니다.그런 다음, 관심 영역에서 눈의 형광을 관찰하기 위해 수집 기록을 시작합니다. 모든 영역이 눈 맵에 따라 플래그를 지정하고 레이블이 지정되어 정확한 프레임에서 정확한 프로브 위치를 알 때 레코딩을 중지합니다. 수집 파일은 이전에 선택한 위치에 있는 비디오 파일로 자동으로 저장됩니다.형광 화상 진찰은 clera와 각막 지구 사이 명백한 분화를 밝혔습니다. 에피클레라와 결막의 높은 혈관화는 eb를 가진 빨갛게 얼룩진 clera 지구를 일으키는 원인이 되었습니다. 혈관이 없는 각막은 검은 색으로 나타났다. 반두와 클레라의 대조 형광은 7 일 연구에서 관찰되었다.플루오레세인 염료 주입 대조군 마우스는 리포솜 유래 형광의 특이성을 확인하였다. 형광 강도는 1 일과 3 일에 높았다. 녹색 형광은 시간이 지남에 따라 림푸스와 clera 영역의 리포솜 감소를 추진했다.현세적 팔다리와 우수한 팔다리 지역에서 1일부터 3일까지 의형신호의 차이는 현세적 인 사지 부위, 특히 각막 주변지역에 중립적 인 리포좀을 선호하는 것을 나타내는 중요하지 않았다. 주사 후 날에 현세및 우수한 부위의 경우, 클론의 형광은 림푸스보다 6배 높았다. 셋째와 일곱 번째 날에 의해, 리포솜은 안구 통관 메커니즘에 기인하는 시간적 및 우수한 지역에 있는 경막에서 현저하게 감소되었습니다.가장 낮은 양의 형광은 주입 부위로부터의 거리로 인해 비강 및 열등한 지역에서 검출되었다. 레코딩이 중지되기 전에 눈 맵에 따라 플렉 프레임을 레이블지정하는 것이 중요합니다. 레이저 강도를 일관되게 유지하고 다양한 실험에서 적절한 비교를 위해 최대 배경 값을 정의합니다.납 제형의 식별에 따라, 동물에 대한 포괄적인 약동및 생체 분배 연구는 약물의 생체 이용률을 연구하고, 그들의 제형의 치료 효능을 검증하기 위하여 수행될 수 있다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Spatio-Temporal In Vivo Imaging of Ocular Drug Delivery Systems using Fiberoptic Confocal Laser Microendoscopy

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

고해상도 광섬유 Microendoscopy에 대한 현장에서 세포 이미징

Many biological and clinical studies require the longitudinal study and analysis of morphology and function with cellular level resolution.  ...

연구

생체공학

Video-rate Scanning Confocal Microscopy and Microendoscopy

비디오 - 속도 검색 공촛점 현미경과 Microendoscopy

Confocal microscopy has become an invaluable tool in biology and the biomedical sciences, enabling rapid, high-sensitivity, and high-resolution optical ...

Spatio-Temporal Manipulation of Small GTPase Activity at Subcellular Level and on Timescale of Seconds in Living Cells

리빙 셀의 Subcellular 수준과 초 Timescale에 작은 GTPase 활동의 Spatio-시간적 조작

Dynamic regulation of the Rho family of small guanosine triphosphatases (GTPases) with great spatiotemporal precision is essential for various cellular ...

Self-reporting Scaffolds for 3-Dimensional Cell Culture

3 차원 세포 배양을위한 자기보고 발판

Culturing cells in 3D on appropriate scaffolds is thought to better mimic the in vivo microenvironment and increase cell-cell interactions. The resulting ...

Models and Methods to Evaluate Transport of Drug Delivery Systems Across Cellular Barriers

모델 및 세포 장벽에 걸쳐 약물 전달 시스템의 전송을 평가하는 방법

Sub-micrometer carriers (nanocarriers; NCs) enhance efficacy of drugs by improving solubility, stability, circulation time, targeting, and release. ...

A Label-free Technique for the Spatio-temporal Imaging of Single Cell Secretions

단일 세포 분비물의 공간 - 시간 영상의 레이블이없는 기술

Inter-cellular communication is an integral part of a complex system that helps in maintaining basic cellular activities. As a result, the malfunctioning ...

Multimodal Imaging and Spectroscopy Fiber-bundle Microendoscopy Platform for Non-invasive, In Vivo Tissue Analysis

Multimodal Imaging and Spectroscopy Fiber-bundle Microendoscopy Platform for Non-invasive, In Vivo Tissue Analysis

멀티 모달 이미징 및 비 침습적에 대한 분광학 섬유 다발 Microendoscopy 플랫폼,<em&gt; 생체</em&gt; 조직 분석

Recent fiber-bundle microendoscopy techniques enable non-invasive analysis of in vivo tissue using either imaging techniques or a combination of ...

Manufacture and Drug Delivery Applications of Silk Nanoparticles

실크 나노 입자의 제조 및 약물 전달 응용 프로그램

Silk is a promising biopolymer for biomedical and pharmaceutical applications due to its outstanding mechanical properties, biocompatibility and ...

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

3 보완 방법을 사용 하 여 태 반 대상 약물 전달의 안전과 효율성의 종합 평가

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Preparing Protein Producing Synthetic Cells using Cell Free Bacterial Extracts, Liposomes and Emulsion Transfer

세포가 없는 세균 추출물, 리포좀 및 에멀젼 전달을 사용하여 합성 세포를 생산하는 단백질 을 준비합니다.

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell ...