Name: 3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue
Uploaded: 2021-07-16T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af The São Paulo Research Foundation (FAPESP), bevillingsnumrene 2018/23039-3 og 2018/12605-8; Det Nationale Råd for Videnskabelig og Teknologisk Udvikling (CNPq), tilskudsnumre 465656/2014-5 og 309679/2018-4; koordinering til forbedring af personale på de videregående uddannelser (CAPES), finansiel kode 001.

Alle procedurer vedrørende dyr fulgte internationale retningslinjer for dyrebrug i forskning (http://www.iclas.org) og blev godkendt af Udvalget for Etik i Forskning i Universidade Federal de São Paulo (CEUA 2019 / 9292090519).
1. Mus hjerne dissektion
<ol><li>Overfør 10 mL kold Hanks Buffered Salt Solution (HBSS) til en 100 mm kulturskål og 1 mL til en 1,5 mL microtube. Forbered en mikrotube pr. Dyr. BEMÆRK: Både kulturskålen og mikrotuben skal opbevares på is.</li>
	<li>Forbered...

3D bioprinting-teknologien har vist sig som et biofabricationalternativ, der gør det muligt at konstruere raffinerede konstruktioner, der strukturelt og fysiologisk ligner indfødte væv22, herunder hjernen23. Biofabrication af neurale-lignende væv giver mulighed for in vitro native mikromiljø modellering, er et vigtigt redskab til at forstå de cellulære og molekylære mekanismer forbundet med udvikling og behandling af mange sygdomme, der påvirker CNS<sup cl...

Astrocytter er den mest rigelige celletype i centralnervesystemet (CNS) og spiller en central rolle i hjernen homøostase. Ud over vedvarende neuronal støtte, astrocytter er ansvarlige for modulerende neurotransmittere optagelse, opretholde blod - hjerne barriere integritet, og regulere neuronal synaptogenese1,2. Astrocytter har også en væsentlig rolle i CNS-inflammation, der reagerer på skader på hjernen i en proces, der fører til astrocitær reaktivitet eller reaktiv astrogliose3,4, danner et glimt ar, der forhindrer sund vævsudposition til degenerative stoffer5. Denne hændelse resulterer i ændringer i astrocytters genekspression, morfologi og funktion6,7. Derfor er undersøgelser, der involverer astrocytter funktionalitet, nyttige til udvikling af behandlinger til behandling af neurologiske lidelser.
In vitro-modeller er afgørende for at studere mekanismer relateret til neurologiske skader, og selvom vellykket isolation og todimensionel (2D) kultur af kortikale astrocytter er blevet etableret8, giver denne model ikke et realistisk miljø, der efterligner indfødte celleadfærd og reproducerer kompleksiteten af hjernen9 . I 2D-tilstand påvirker den dårlige mekaniske og biokemiske støtte, lav cellecelle- og cellematrixinteraktioner og celleudfladning, der fører til fravær af basal-apikal polaritet, cellesignaldynamik og eksperimentelle resultater, der fører til ændret cellemorfologi og genekspression, hvilket kompromitterer reaktionen på behandlinger10. Derfor er det afgørende at udvikle alternativer, der giver et mere realistisk neuralt miljø, der sigter mod at oversætte resultaterne til klinikken.
Tredimensionel (3D) cellekultur repræsenterer en mere avanceret model, der opsummerer med øgede troskabsfunktioner i organer og væv, herunder CNS11. Med hensyn til glialkultur bidrager 3D-modeller til vedligeholdelse af astrocyttermorfologi, celle basal-apikal polaritet og cellesignalering12,13. 3D bioprinting-teknologien opstod som et kraftfuldt værktøj til at biofabricate 3D levende væv på en kontrolleret måde ved at bruge celler og biomaterialer til at genskabe strukturen og egenskaberne af indfødte væv. Brugen af denne teknologi har ført til en betydelig forbedring af resultaterne forudsigelse og har bidraget til regenerativ medicin anvendes til CNS14,15,16.
Protokollen beskrevet her beskriver isolation og kultur kortikale astrocytter. Protokollen beskriver også en reproducerbar metode til bioprint astrocytter indlejret i gelatine / gelatine methacryloyl (GelMA) / fibrinogen, suppleret med laminin. I dette værk blev en ekstruderingsbaseret bioprinter brugt til at udskrive biomaterialesammensætningen, der indeholder kortikale astrocytter med en massefylde på 1 x 106 celler/mL. Bioprinting forskydningsstress blev minimeret ved at kontrollere udskrivningshastigheden, og astrocytter viste høj levedygtighed efter processen. Bioprintede konstruktioner blev kultiveret i 1 uge, og astrocytter var i stand til at sprede, vedhæfte og overleve inden for hydrogelen, opretholde den astrocytiske morfologi og udtrykke en bestemt markør glial fibrillary surt protein (GFAP)4.
Denne procedure er kompatibel med stempeldrevne ekstruderingsbaserede bioprintere og kan bruges til bioprint astrocytter afledt af forskellige kilder. Den 3D bioprintede model, der foreslås her, er velegnet til en bred vifte af neurale tekniske applikationer, såsom undersøgelser af de mekanismer, der er involveret i astrocytterfunktionalitet i sundt væv og forståelse af udviklingen af neurologiske patologier og behandlingsudvikling.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3D Bioprinter</td>
			<td>3D Biotechnology Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Extrusion-based bioprinter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-tip forceps</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>6--30</td>
			<td>Forceps for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td>Protease free, fatty acid free, essentially globulin free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>156340</td>
			<td>Culture flask T25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>352340</td>
			<td>Cell strainer 40 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Confocal TCS SP8 microscopy coupled with an Olympus FluoView 300 confocal system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651, 339652</td>
			<td>Sterile tubes of 15 mL and 50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab224589</td>
			<td>DAPI staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12500062</td>
			<td>DMEM/F-12 50/50, 1X (Dulbecco&#39;s Mod. Of Eagle&#39;s Medium/Ham&#39;s F12 50/50 Mix) with L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dyalisis tubing</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9527</td>
			<td>Molecular weight cut-off = 14 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-15-5</td>
			<td>Reagent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12657011</td>
			<td>Research Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9001-32-5</td>
			<td>Fibrinogen cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9000-70-8</td>
			<td>Gelatin powder from porcine skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td>Glycine powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>14175095</td>
			<td>No calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-85-9</td>
			<td>L-Glutamine crystalline powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>114956-81-9</td>
			<td>Laminin 1-2 mg/mL L in 50 mM Tris-HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live dead kit cell imaging kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R37601</td>
			<td>Green fluorescence in live cells (ex/em 488 nm/515 nm). Red fluorescence in dead cells (ex/em 570 nm/602 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methacrylic anhydride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>760-93-0</td>
			<td>For GelMA preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>Microtubes of 1,5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 22G</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1362045</td>
			<td>Sterile blunt needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissor</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>05--02</td>
			<td>Sharp scissor for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td>Paraformaldehyde powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15070063</td>
			<td>Pen Strep (5,000 Units/ mL Penicillin; 5,000 ug/mL Streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>430591, 430588</td>
			<td>Sterile petri dishes of 35 and 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab176753</td>
			<td>iFluor 488 reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoinitiator</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>106797-53-9</td>
			<td>2-Hydroxy-4&#8242;-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>10010023</td>
			<td>PBS 1 x, culture grade, no calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>25988-63-0</td>
			<td>Poly-L-lysine hydrobromide mol wt 30,000-70,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antobody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab4674</td>
			<td>Chicken polyclonal to GFAP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab150176</td>
			<td>Alexa fluor 594 anti-chicken</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>V973-70</td>
			<td>Number 24 cement spatula previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>3000038</td>
			<td>Microscope for brain dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>1222C84</td>
			<td>Sterile syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 2 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-740-105</td>
			<td>Polypropylene filter for sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002--04-4</td>
			<td>Thrombin cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Laboratory grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15400054</td>
			<td>Trypsin no phenol red 1 x diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15040066</td>
			<td>Versene Solution (0.48 mM) formulated as 0.2 g EDTA(Na4) per liter of PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>144530</td>
			<td>Sterile 24-well plate</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue

Astrocytter er gliaceller med en væsentlig rolle i centralnervesystemet (CNS), herunder neuronal støtte og funktionalitet. Disse celler reagerer også på neurale skader og virker for at beskytte vævet mod degenerative hændelser. In vitro-undersøgelser af astrocytters funktionalitet er vigtige for at belyse de mekanismer, der er involveret i sådanne hændelser, og bidrage til at udvikle behandlinger til behandling af neurologiske lidelser. Denne protokol beskriver en metode til biofabricate en neural-lignende væv struktur rig på astrocytter ved 3D bioprinting astrocytter-laden bioink. En ekstruderingsbaseret 3D-bioprinter blev brugt i dette arbejde, og astrocytter blev udvundet fra C57Bl/6 mus hvalpe hjerne cortices. Bioinken blev fremstillet ved at blande kortikale astrocytter fra op til passage 3 til en biomaterialeopløsning bestående af gelatine, gelatine-methacryloyl (GelMA) og fibrinogen, suppleret med laminin, som præsenterede optimale bioprinting betingelser. 3D-bioprintforholdene minimerede cellestress og bidrog til astrocytternes høje levedygtighed under processen, hvor 74,08% ± 1,33% af cellerne var levedygtige lige efter bioprinting. Efter 1 uges inkubation steg astrocytternes levedygtighed betydeligt til 83,54% ± 3,00%, hvilket indikerer, at 3D-konstruktionen repræsenterer et passende mikromiljø til cellevækst. Den biomateriale sammensætning tilladt celle vedhæftet fil og stimuleret astrocytisk adfærd, med celler, der udtrykker de specifikke astrocytter markør glial fibrillary surt protein (GFAP) og besidder typisk astrocytisk morfologi. Denne reproducerbare protokol giver en værdifuld metode til biofabricate 3D neural-lignende væv rig på astrocytter, der ligner cellernes indfødte mikromiljø, nyttigt for forskere, der har til formål at forstå astrocytter funktionalitet og deres forhold til de mekanismer, der er involveret i neurologiske sygdomme.

Dette arbejde havde til formål at udvikle en neural-lignende væv ved hjælp af 3D bioprinting teknologi til at deponere lag-for-lag primære astrocytter-laden gelatine / GelMA / fibrinogen bioink. Astrocytter blev ekstraheret og isoleret fra hjernebarken hos mus hvalpe (Figur 1), føjet til en biomateriale sammensætning, så biofabrikation af en levende 3D-konstruktion.
Det computerstøttede design (CAD) blev udviklet ved hjælp af G-koden (supplerende ...

Watch this Scientific Journal Video about 3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue at JoVE.com

3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue

Her rapporterer vi en metode til 3D bioprinting murine kortikale astrocytter til biofabricating neural-lignende væv til at studere funktionaliteten af astrocytter i centralnervesystemet og de mekanismer, der involverer gliaceller i neurologiske sygdomme og behandlinger.

3D Bioprinting af Murine Kortikale Astrocytter til Engineering Neural-lignende Væv

Astrocytes are glial cells with an essential role in the central nervous system (CNS), including neuronal support and functionality. These cells also ...

3D bioprinting af astrocytter repræsenterer et fremskridt inden for neurovævsteknik, der gør det muligt at biofabrication af in vitro-modeller, der er nyttige til at forstå de mekanismer, der er involveret i neurologisk sygdom. Den største fordel ved 3D bioprint er at biofabricate celle adjungeret strukturer, der efterligner vævenes biokemiske og mekaniske funktioner, hvilket giver en bedre forståelse af celledynamik i sundhed og sygdom. Denne protokol kan anvendes på biofabrication af andre bløde væv, da den er baseret på 3D bioprinting af en bioblæk bestående af naturlige polymerer og ekstracellulære matrixkomponenter.Til at begynde med skære kortikale væv isoleret fra den aflivede mus i små stykker med en buet mikro saks. Vask vævsstykkerne tre gange med en milliliter HBSS ved at pipetter op og ned. Efter fjernelse af HBSS tilsat for tredje gang, tilsæt en milliliter på 0,05% trypsin og inkuberer vævet i fem minutter ved 37 grader Celsius.For mekanisk væv dissociation, forsigtigt pipette væv trypsin blandingen op og ned 15 gange. Overfør derefter den dissocierede blanding til et 15 milliliter konisk rør og tilsæt en lige stor mængde FBS for at neutralisere trypsinaktivitet. Filtrer affjedringen gennem et 0,4 mikrometer cellestivefilter for at fjerne ikke-dissocierede fragmenter.Vask filteret med en milliliter astrocytter medium. Pellet ned den filtrerede celle suspension ved centrifugering. Efter at have kasseret supernatanten suspenderes cellepillen i en milliliter astrocytter kulturmedium.Overfør celleaffjedringen til en T25-kulturkolbe. Udgør total medium volumen på 3,5 milliliter og inkubere cellerne ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid. For at opnå fibrinogen ved den endelige koncentration af tre milligram pr. milliliter overføres 0,9 milliliter på 10 milligram pr. milliliter fibrinogenopløsning til gelatinegelatine methacryloylopløsningen.For at opnå foto initiator ved den endelige koncentration af 0,5% vægt efter volumen, tilføje 0,015 gram foto initiator til den forberedte gelatine-gelatine methacryloyl fibrinogen opløsning. Efter hvirvlen skal opløsningen holdes ved 40 grader Celsius, beskyttet mod lys for at undgå PI-nedbrydning. Derefter filtreres opløsningen gennem et 0,2 mikrometerfilter i et sterilt 15 milliliter konisk rør.Overfør 980 mikroliter af biomaterialeopløsningen til et 15 milliliter konisk rør. For at opnå laminin ved den endelige koncentration af to mikrogram pr. milliliter tilsættes 20 mikroliter fortyndet laminin til røret, der indeholder bioblæk. Bland forsigtigt ved pipetter op og ned, undgå bobler og holde bio-blæk løsning på 37 grader Celsius indtil klar til at få blandet med cellerne.Trypsinize den primære astrocytter med 0,05% trypsin i 5 minutter og neutralisere trypsin aktivitet med FPS i et forhold på en til en. Overfør derefter cellerne til et 15 milliliter konisk rør og centrifuge ved 200 gange G i fem minutter. Efter optælling af cellerne overføres 1 gange 10 til de 6 celler til et andet konisk rør og centrifuge som demonstreret.Lad kun 200 mikroliter af supernatanten i røret og suspendere cellepillen ved forsigtigt at trykke på bunden af det koniske rør. For at opnå en endelig koncentration på 1 gange 10 til de 6 celler pr. milliliter overføres en milliliter gelatinemethacryloyl fibrinogenopløsning til røret, der indeholder cellerne, og homogeniseres ved forsigtigt at pipetter op og ned. Brug en 1000 mikroliter pipette til langsomt at overføre astrocytter lagt i gelatine-gelatine methacryloyl fibrinogen bio-blæk løsning til en fem milliliter plast sprøjte, undgå boble dannelse.Tilslut en steril 22 gauge stump nål til sprøjten. Udsæt bioprinteren for UV-lys i 15 minutter, og tør derefter bioprinteren af med 70 % ethanol, tilslut sprøjten til bioprinterens printhoved, og skyl bioblæk manuelt for at fjerne de resterende bobler. For at udføre bioprint skal du placere ved 35 millimeter kulturskål på bioprinterbordet, placere nålen 0,1 millimeter væk fra kulturskålens overflade for at tillade bevægelse af nålen og trykke på printknappen.Når bioprintet er overstået, skal du sørge for, at sprøjten bevæger sig væk fra fadet og lukke kulturskålen. Placer kulturretten under UV-lys til gelatine methacryloyl cross-linking. Brug en steril spatel til at overføre den bioprintede konstruktion til en 24 brøndplade.Tilsæt 500 mikroliter af thrombin calciumchloridopløsning og lad i 30 minutter tillade fibrin krydsbinding. Når du har fjernet krydskædningsopløsningen, skal du vaske konstruktionen med to milliliter PBS og derefter erstatte PBS med en milliliter astrocytter kulturmedium. Inkuber ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid og skift mediet hver tredje dag.Brug en spatel til at overføre den bioprintede konstruktion til en 35 millimeter kulturskål. Vask konstruktionen med en milliliter PBS. Aflejr 100 mikroliter af det levende døde reagens over konstruktionen og hold det på 37 grader Celsius i 30 minutter, så det holdes beskyttet mod lys.Efter fjernelse af det levende døde reagens skal konstruktionen vaskes med PBS som demonstreret. Prøven overføres til en konfokal skål, og cellerne i konstruktionen observeres under et konfokalt mikroskop ved hjælp af 488 og 570 nanometer excitation for billederhvervelse. Efter 3D bioprint blev integriteten af det bioprintede stillads estimeret, og dannelsen af en veldefineret struktur blev observeret med celler fanget i biomaterialet.Efter bioprinting og krydskædningsprocesser præsenterede de fleste celler rund morfologi, da konstruktionen blev inkuberet med et astrocyt medium. De bioprintede stilladser bevarede integriteten efter syv dages inkubation, og selv om nogle runde celler blev observeret, spredte mange astrocytter sig over hele konstruktionen og præsenterede astrocytisk morfologi og sammenkobling. Cellens levedygtighed blev evalueret lige efter bioprinting, og resultaterne viste, at levedygtige celler ved den lavere hastighed repræsenterede op til 74% af de samlede celler, hvilket var betydeligt højere end celler bioprintet ved højere hastighed.Levedygtigheden af bioprintede astrocytter blev normaliseret til 2D-dyrkede astrocytter, og resultaterne indikerede, at de bioprintede astrocytter på den syvende dag havde øget levedygtigheden betydeligt. Umiddelbart efter bioprinting, astrocytter viste runde morfologi og levende døde assay. Efter en uge spredte astrocytterne sig over hele konstruktionen og præsenterede en særskilt morfologi af celler, der er identiske med 2D-kultur.3D bioprintede astrocytter var karakteriseret ved immunfluorescence. Efter syv dages inkubation i den bioprintede konstruktion blev meget tætte astrocytter med en stjernelignende morfologi observeret. De bioprintede astrocytceller udtrykte de specifikke astrocytter markør glial fibrillary surt protein indikerer tilbageholdelse af astrocytisk fænotype efter syv dages bioprint, og disse resultater tyder på, at bio-blæk sammensætning forudsat en biokompatibil mikromiljø til fremme af astrocytter'vedhæftning, spredning og vækst.Evalueringen af specifikke gener og cellemarkører udtryk af bioprintede astrocytter ville give bevis for neuro væv-lignende funktion, såsom astrocytary reaktivitet efter specifikke stimuli. Denne protokol baner vejen for biofabrication af mere komplekse neurolignende strukturer bestående af forskellige typer celler i biomolekyler, hvilket gør det muligt at efterligne specifikke neurogene nicher.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

Tissue Engineering af tarmen i en murin model

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to ...

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering af et menneske 3D<em&gt; In vitro</em&gt; Tumor Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

Tissue Engineering: Opførelse af en multicellulært 3D Stillads for levering af Layered celleark

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

Engineering 3D Cellularized kollagengeler for Vascular Tissue Regeneration

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

Oprettelse af hjertevæv, der udviser mekanisk integration af sfæroider ved hjælp af 3D bioprinting

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Isolation of Murine Adipose Tissue-derived Microvascular Fragments as Vascularization Units for Tissue Engineering

Isolering af murine fedtvæv-afledte mikrovaskulær Fragmenter som Vaskularisering Enheder til Tissue Engineering

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

Mikrofluid Bioprinting for Engineering vaskulariserede væv og Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

Bioprinting af brusk og huden væv analoger udnytter en roman passiv blanding enhed teknik for Bioink Precellularization

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...

Protocols of 3D Bioprinting of Gelatin Methacryloyl Hydrogel Based Bioinks

Protokoller af 3D Bioprinting af gelatine Methacryloyl hydrogel baserede Bioinks

Gelatin methacryloyl (GelMA) has become a popular biomaterial in the field of bioprinting. The derivation of this material is gelatin, which is hydrolyzed ...