Name: 3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue
Uploaded: 2021-07-16T13:30:00
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Ce travail a été soutenu par la Fondation de recherche de São Paulo (FAPESP), numéros de subvention 2018/23039-3 et 2018/12605-8; Conseil national pour le développement scientifique et technologique (CNPq), numéros de subvention 465656/2014-5 et 309679/2018-4; et Coordination pour l’amélioration du personnel de l’enseignement supérieur (CAPES), code financier 001.

Toutes les procédures impliquant des animaux ont suivi les directives internationales pour l’utilisation des animaux dans la recherche (http://www.iclas.org) et ont été approuvées par le Comité d’éthique de la recherche de l’Universidade Federal de São Paulo (CEUA 2019 / 9292090519).
1. Dissection cérébrale de souris
<ol><li>Transférer 10 mL de solution saline tamponnée Hanks froide (HBSS) dans une boîte de culture de 100 mm et 1 mL dans un microtube de 1,5 mL. Préparez un...

La technologie de bio-impression 3D est apparue comme une alternative de biofabrication qui permet l’ingénierie de constructions raffinées qui ressemblent structurellement et physiologiquement à des tissus natifs22, y compris le cerveau23. La biofabrication de tissus de type neuronal permet une modélisation in vitro du microenvironnement natif, étant un outil important pour comprendre les mécanismes cellulaires et moléculaires associés au développement e...

Les astrocytes sont le type de cellule le plus abondant dans le système nerveux central (SNC) et jouent un rôle clé dans l’homéostasie cérébrale. En plus de supporter le neurone, les astrocytes sont responsables de la modulation de l’absorption des neurotransmetteurs, du maintien de l’intégrité de la barrière hémato-encéphalique et de la régulation de la synaptogenèse neuronale1,2. Les astrocytes ont également un rôle essentiel dans l’inflammation du SNC, répondant aux lésions cérébrales dans un processus qui conduit à la réactivité astrocitaire ou à l’astrogliose réactive3,4 , formant une cicatriceglialequi empêche l’exposition des tissus sains aux agents dégénératifs5. Cet événement entraîne des changements dans l’expression génique, la morphologie et la fonction des astrocytes6,7. Par conséquent, les études portant sur la fonctionnalité des astrocytes sont utiles pour le développement de thérapies pour traiter les troubles neurologiques.
Les modèles in vitro sont cruciaux pour étudier les mécanismes liés aux lésions neurologiques, et bien que l’isolement réussi et la culture bidimensionnelle (2D) des astrocytes corticaux aient été établis8,ce modèle ne parvient pas à fournir un environnement réaliste qui imite le comportement des cellules natives et à reproduire la complexité du cerveau9 . Dans l’état 2D, le faible soutien mécanique et biochimique, les faibles interactions cellule-cellule et cellule-matrice, et l’aplatissement cellulaire conduisant à l’absence de polarité baso-apicale, affectent la dynamique de signalisation cellulaire et les résultats expérimentaux conduisant à une altération de la morphologie cellulaire et de l’expression des gènes, qui compromettent la réponse aux traitements10. Par conséquent, il est crucial de développer des alternatives qui fournissent un environnement neuronal plus réaliste, visant à traduire les résultats à la clinique.
La culture cellulaire tridimensionnelle (3D) représente un modèle plus avancé qui récapitule avec des caractéristiques de fidélité accrues des organes et des tissus, y compris leSNC 11. En ce qui concerne la culture gliale, les modèles 3D contribuent au maintien de la morphologie des astrocytes, de la polarité baso-apicale cellulaire et de la signalisation cellulaire12,13. La technologie de bio-impression 3D est apparue comme un outil puissant pour biofabriquer des tissus vivants 3D de manière contrôlée en utilisant des cellules et des biomatériaux pour recréer la structure et les propriétés des tissus natifs. L’utilisation de cette technologie a conduit à une amélioration substantielle de la prédiction des résultats et a contribué à la médecine régénérative appliquée au SNC14,15,16.
Le protocole décrit ici détaille l’isolement et la culture des astrocytes corticaux. Le protocole détaille également une méthode reproductible pour bioimprimer des astrocytes incorporés dans de la gélatine / méthacryloyle de gélatine (GelMA) / fibrinogène, complétés par de la laminine. Dans ce travail, une bioimprimante à base d’extrusion a été utilisée pour imprimer la composition de biomatériau contenant des astrocytes corticaux à une densité de 1 x 106 cellules / mL. La contrainte de cisaillement de la bio-impression a été minimisée en contrôlant la vitesse d’impression, et les astrocytes ont montré une viabilité élevée après le processus. Les constructions bioimprimées ont été cultivées pendant 1 semaine, et les astrocytes ont pu se propager, se fixer et survivre dans l’hydrogel, en maintenant la morphologie astrocytaire et en exprimant un marqueur spécifique de la protéine acide fibrillaire gliale (GFAP)4.
Cette procédure est compatible avec les bioimprimantes à base d’extrusion à piston et peut être utilisée pour bioimprimer des astrocytes dérivés de différentes sources. Le modèle bioimprimé en 3D proposé ici convient à un large éventail d’applications d’ingénierie neuronale, telles que l’étude des mécanismes impliqués dans la fonctionnalité des astrocytes dans les tissus sains et la compréhension de la progression des pathologies neurologiques et du développement de traitements.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>3D Bioprinter</td>
			<td>3D Biotechnology Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Extrusion-based bioprinter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-tip forceps</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>6--30</td>
			<td>Forceps for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td>Protease free, fatty acid free, essentially globulin free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>156340</td>
			<td>Culture flask T25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>352340</td>
			<td>Cell strainer 40 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Confocal TCS SP8 microscopy coupled with an Olympus FluoView 300 confocal system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651, 339652</td>
			<td>Sterile tubes of 15 mL and 50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab224589</td>
			<td>DAPI staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12500062</td>
			<td>DMEM/F-12 50/50, 1X (Dulbecco&#39;s Mod. Of Eagle&#39;s Medium/Ham&#39;s F12 50/50 Mix) with L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dyalisis tubing</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9527</td>
			<td>Molecular weight cut-off = 14 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-15-5</td>
			<td>Reagent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12657011</td>
			<td>Research Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9001-32-5</td>
			<td>Fibrinogen cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9000-70-8</td>
			<td>Gelatin powder from porcine skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td>Glycine powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>14175095</td>
			<td>No calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-85-9</td>
			<td>L-Glutamine crystalline powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>114956-81-9</td>
			<td>Laminin 1-2 mg/mL L in 50 mM Tris-HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live dead kit cell imaging kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R37601</td>
			<td>Green fluorescence in live cells (ex/em 488 nm/515 nm). Red fluorescence in dead cells (ex/em 570 nm/602 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methacrylic anhydride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>760-93-0</td>
			<td>For GelMA preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>Microtubes of 1,5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 22G</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1362045</td>
			<td>Sterile blunt needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissor</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>05--02</td>
			<td>Sharp scissor for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td>Paraformaldehyde powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15070063</td>
			<td>Pen Strep (5,000 Units/ mL Penicillin; 5,000 ug/mL Streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>430591, 430588</td>
			<td>Sterile petri dishes of 35 and 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab176753</td>
			<td>iFluor 488 reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoinitiator</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>106797-53-9</td>
			<td>2-Hydroxy-4&#8242;-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>10010023</td>
			<td>PBS 1 x, culture grade, no calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>25988-63-0</td>
			<td>Poly-L-lysine hydrobromide mol wt 30,000-70,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antobody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab4674</td>
			<td>Chicken polyclonal to GFAP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab150176</td>
			<td>Alexa fluor 594 anti-chicken</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>V973-70</td>
			<td>Number 24 cement spatula previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>3000038</td>
			<td>Microscope for brain dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>1222C84</td>
			<td>Sterile syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 2 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-740-105</td>
			<td>Polypropylene filter for sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002--04-4</td>
			<td>Thrombin cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Laboratory grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15400054</td>
			<td>Trypsin no phenol red 1 x diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15040066</td>
			<td>Versene Solution (0.48 mM) formulated as 0.2 g EDTA(Na4) per liter of PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>144530</td>
			<td>Sterile 24-well plate</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue

Les astrocytes sont des cellules gliales ayant un rôle essentiel dans le système nerveux central (SNC), y compris le soutien et la fonctionnalité neuronals. Ces cellules répondent également aux lésions neurales et agissent pour protéger le tissu contre les événements dégénératifs. Les études in vitro de la fonctionnalité des astrocytes sont importantes pour élucider les mécanismes impliqués dans de tels événements et contribuer au développement de thérapies pour traiter les troubles neurologiques. Ce protocole décrit une méthode pour biofabriquer une structure tissulaire de type neuronal riche en astrocytes par bioimpression 3D d’une bioencaire chargée d’astrocytes. Une bioimprimante 3D à base d’extrusion a été utilisée dans ce travail, et les astrocytes ont été extraits des cortex cérébraux des chiots de souris C57Bl / 6. La bioencentaire a été préparée en mélangeant des astrocytes corticaux jusqu’au passage 3 à une solution de biomatériau composée de gélatine, de gélatine-méthacryloyle (GelMA) et de fibrinogène, complétée par de la laminine, qui présentait des conditions optimales de bioimpression. Les conditions de bio-impression 3D ont minimisé le stress cellulaire, contribuant à la haute viabilité des astrocytes pendant le processus, dans lequel 74,08% ± 1,33% des cellules étaient viables juste après la bioimpression. Après 1 semaine d’incubation, la viabilité des astrocytes a considérablement augmenté à 83,54% ± 3,00%, ce qui indique que la construction 3D représente un microenvironnement approprié pour la croissance cellulaire. La composition du biomatériau a permis l’attachement cellulaire et stimulé le comportement astrocytaire, les cellules exprimant la protéine acide fibrillaire gliale marqueur astrocytaire spécifique des astrocytes (GFAP) et possédant une morphologie astrocytaire typique. Ce protocole reproductible fournit une méthode précieuse pour biofabriquer des tissus de type neuronal 3D riches en astrocytes qui ressemblent au microenvironnement natif des cellules, utile aux chercheurs qui visent à comprendre la fonctionnalité des astrocytes et leur relation avec les mécanismes impliqués dans les maladies neurologiques.

Ce travail visait à développer un tissu de type neuronal en utilisant la technologie de bio-impression 3D pour déposer couche par couche de gélatine primaire chargée d’astrocytes / GelMA / fibrinogène bioink. Les astrocytes ont été extraits et isolés du cortex cérébral de chiots souris(Figure 1),ajoutés à une composition de biomatériaux, permettant la biofabrication d’une construction 3D vivante.
La conception assistée par ordinateur (CAO) a ét...

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3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue

Nous rapportons ici une méthode de bioimpression 3D d’astrocytes corticaux murins pour la biofabrication de tissus de type neuronal afin d’étudier la fonctionnalité des astrocytes dans le système nerveux central et les mécanismes impliquant les cellules gliales dans les maladies neurologiques et les traitements.

Bioimpression 3D d’astrocytes corticaux murins pour l’ingénierie de tissus de type neural

Astrocytes are glial cells with an essential role in the central nervous system (CNS), including neuronal support and functionality. These cells also ...

La bioimpression 3D des astrocytes représente une avancée dans l’ingénierie des tissus neurologiques, permettant la biofabrication de modèles in vitro utiles pour comprendre les mécanismes impliqués dans les maladies neurologiques. Le principal avantage de la bioimpression 3D est de biofabriquer des structures d’appoint cellulaires qui imitent les caractéristiques biochimiques et mécaniques des tissus, offrant ainsi une meilleure compréhension de la dynamique cellulaire dans la santé et la maladie. Ce protocole peut être appliqué à la biofabrication d’autres tissus mous, car il est basé sur la bio-impression 3D d’une bio-encre composée de polymères naturels et de composants de matrice extracellulaire.Pour commencer, coupez le tissu cortical isolé de la souris euthanasiée en petits morceaux avec un micro-ciseau incurvé. Lavez les morceaux de tissu trois fois avec un millilitre de HBSS en pipetant de haut en bas. Après avoir retiré HBSS ajouté pour la troisième fois, ajouter un millilitre de 0,05% de trypsine et incuber le tissu pendant cinq minutes à 37 degrés Celsius.Pour la dissociation mécanique des tissus, pipettez doucement le mélange de trypsine tissulaire de haut en bas 15 fois. Ensuite, transférez le mélange dissocié dans un tube conique de 15 millilitres et ajoutez un volume égal de FBS pour neutraliser l’activité de la trypsine. Filtrer la suspension à travers un filtre de crépine de cellule de 0,4 micromètre pour éliminer les fragments non dissociés.Lavez le filtre avec un millilitre de milieu astrocytaire. Pelletez la suspension cellulaire filtrée par centrifugation. Après avoir éliminé le surnageant, suspendez la pastille cellulaire dans un millilitre de milieu de culture d’astrocytes.Transférer la suspension cellulaire dans une fiole de culture T25. Constituer un volume moyen total de 3,5 millilitres et incuber les cellules à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone. Pour obtenir le fibrinogène à la concentration finale de trois milligrammes par millilitre, transférer 0,9 millilitre de 10 milligrammes par millilitre de solution de fibrinogène dans la solution de méthacryloyle de gélatine-gélatine.Pour obtenir le photo-initiateur à la concentration finale de 0,5% poids par volume, ajouter 0,015 gramme de photo-initiateur à la solution préparée de gélatine-géthacryloyl fibrinogène. Après le vortex, maintenez la solution à 40 degrés Celsius, à l’abri de la lumière pour éviter la dégradation de l’IP. Ensuite, filtrez la solution à travers un filtre de 0,2 micromètre dans un tube conique stérile de 15 millilitres.Transférer 980 microlitres de la solution de biomatériau dans un tube conique de 15 millilitres. Pour obtenir la laminine à la concentration finale de deux microgrammes par millilitre, ajouter 20 microlitres de laminine diluée au tube contenant de la bio-encre. Mélanger doucement en pipetant de haut en bas, en évitant les bulles et en maintenant la solution de bio-encre à 37 degrés Celsius jusqu’à ce qu’elle soit prête à être mélangée avec les cellules.Trypsiniser les astrocytes primaires avec 0,05% de trypsine pendant 5 minutes et neutraliser l’activité de la trypsine avec FPS à un rapport de un à un. Ensuite, transférez les cellules dans un tube conique de 15 millilitres et centrifugez à 200 fois G pendant cinq minutes. Après avoir compté les cellules, transférer 1 fois 10 aux 6 cellules dans un tube conique différent et centrifuger comme démontré.Ne laissez que 200 microlitres du surnageant dans le tube et suspendez la pastille cellulaire en tapotant doucement le fond du tube conique. Pour obtenir une concentration finale de 1 fois 10 aux 6 cellules par millilitre, transférer un millilitre de solution de gélatine-géthacryloyl fibrinogène dans le tube contenant les cellules et homogénéiser en pipetant doucement de haut en bas. Utilisez une pipette de 1000 microlitres pour transférer lentement les astrocytes déposés dans une solution de bio-encre de méthacryloyl fibrinogène gélatine-gélatine dans une seringue en plastique de cinq millilitres, évitant ainsi la formation de bulles.Connectez une aiguille émoussée stérile de calibre 22 à la seringue. Exposez la bioimprimante à la lumière UV pendant 15 minutes, puis essuyez la bioimprimante avec de l’éthanol à 70%, puis connectez la seringue à la tête d’impression de la bioimprimante et rincez manuellement la bio-encre pour éliminer les bulles restantes. Pour effectuer la bioimpression, placez à 35 millimètres le plat de culture sur la table de la bioimprimante, placez l’aiguille à 0,1 millimètre de la surface du plat de culture pour permettre le mouvement de l’aiguille et appuyez sur le bouton Imprimer.Une fois la bioimpression terminée, assurez-vous que la seringue s’éloigne du plat et ferme le plat de culture. Placez le plat de culture sous la lumière UV pour la réticulation de gélatine méthacryloyle. Utilisez une spatule stérile pour transférer la construction bioimprimée sur une plaque de 24 puits.Ajouter 500 microlitres de solution de chlorure de calcium de thrombine et laisser agir pendant 30 minutes pour permettre la réticulation de la fibrine. Après avoir retiré la solution de réticulation, laver la construction avec deux millilitres de PBS, puis remplacer le PBS par un millilitre de milieu de culture d’astrocytes. Incuber à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone et changer le milieu tous les trois jours.Utilisez une spatule pour transférer la construction bioimprimée dans un plat de culture de 35 millimètres. Lavez la construction avec un millilitre de PBS. Déposez 100 microlitres du réactif mort vivant sur la construction et maintenez-le à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes, en le protégeant de la lumière.Après avoir retiré le réactif mort vivant, lavez la construction avec PBS comme démontré. Transférez l’échantillon dans une boîte confocale et observez les cellules de la construction sous un microscope confocal en utilisant une excitation de 488 et 570 nanomètres pour l’acquisition d’images. Après la bioimpression 3D, l’intégrité de l’échafaudage bioimprimé a été estimée et la formation d’une structure bien définie a été observée avec des cellules piégées dans le biomatériau.Après des processus de bio-impression et de réticulation, la plupart des cellules présentaient une morphologie ronde lorsque la construction était incubée avec un milieu astrocytaire. Les échafaudages bioimprimés ont maintenu leur intégrité après sept jours d’incubation, et bien que certaines cellules rondes aient été observées, de nombreux astrocytes se sont répandus dans toute la construction, présentant une morphologie astrocytaire et une interconnexion. La viabilité cellulaire a été évaluée juste après la bioimpression et les résultats ont montré qu’à la vitesse inférieure, les cellules viables représentaient jusqu’à 74% du total des cellules, étant significativement plus élevées que les cellules bioimprimées à une vitesse plus élevée.La viabilité des astrocytes bioimprimés a été normalisée en astrocytes cultivés en 2D et les résultats ont indiqué que le septième jour, les astrocytes bioimprimés avaient considérablement augmenté la viabilité. Immédiatement après la bioimpression, les astrocytes ont montré une morphologie ronde et un test mort vivant. Après une semaine, les astrocytes se sont répandus dans toute la construction et ont présenté une morphologie distincte des cellules, identique à la culture 2D.Les astrocytes bioimprimés en 3D ont été caractérisés par immunofluorescence. Après sept jours d’incubation dans la construction bioimprimée, des astrocytes très denses avec une morphologie en forme d’étoile ont été observés. Les cellules astrocytaires bioimprimées ont exprimé le marqueur spécifique des astrocytes, la protéine acide fibrillaire gliale indique la rétention du phénotype astrocytaire après sept jours de bioimpression, et ces résultats indiquent que la composition de la bio-encre a fourni un microenvironnement biocompatible pour favoriser l’adhésion, la propagation et la croissance des astrocytes.L’évaluation de gènes spécifiques et de marqueurs cellulaires expression par les astrocytes bioimprimés fournirait des preuves de la fonction de type neurochocôt, telle que la réactivité astrocytaire suivant des stimuli spécifiques. Ce protocole ouvre la voie à la biofabrication de structures neuro-semblables plus complexes composées de différents types de cellules dans des biomolécules, permettant d’imiter des niches neurogènes spécifiques.

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