Name: 3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue
Uploaded: 2021-07-16T13:30:00
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이 작품은 상파울루 연구 재단 (FAPESP), 교부금 번호 2018/23039-3 및 2018/12605-8에 의해 지원되었다; 국가 과학 기술 개발 위원회 (CNPq), 465656/2014-5 및 309679/2018-4를 부여; 및 고등 교육 인력 개선 조정 (CAPES), 금융 코드 001.

동물과 관련된 모든 절차는 연구 (http://www.iclas.org)에서 동물 사용에 대한 국제 지침을 따랐으며 대학 연방 드 상파울루 (CEUA 2019 / 9292090519)의 연구 윤리위원회의 승인을 받았습니다.
1. 마우스 뇌 해부
<ol><li>차가운 행크스 버퍼드 솔트 솔루션(HBSS)을 100mm 배양 접시에 10mL, 1mL을 1.5mL 마이크로튜브로 옮춥니다. 동물당 마이크로튜브 1개를 준비합니다. 참고: 문화 접시와 마이크...

3D 바이오프린팅 기술은 구조적으로 생리적으로뇌(23)를포함한 토착조직(22)과유사한 정제 된 구조의 엔지니어링을 허용하는 생체 제작 대안으로 부상했습니다. 신경과 같은 조직의 생체 제조는 CNS 11에영향을 미치는 많은 질병의 개발 및 치료와 관련된 세포 및 분자 메커니즘을 이해하는 중요한 도구인 체외 네이티브 미세 환경 모델링?...

성상 세포는 중추 신경계에서 가장 풍부한 세포 유형 (CNS) 뇌 항상성에 중요한 역할을한다. 지속적인 신경 지원 이외에, 성상 세포는 신경 전달 물질 섭취량을 조절에 대 한 책임, 혈액-뇌 장벽 무결성유지,신경 시 냅 토 발생1,2조절. 성상 세포는 또한 CNS 염증에 필수적인 역할을, 점성 반응 성 반응성 점성구체3,4로이어지는 과정에서 뇌에 부상에반응,퇴행성 에이전트에 건강한 조직 박람회를 방지하는 신경교 흉터를 형성5. 이 이벤트는 성상세포의 유전자 발현, 형태학 및 기능6,7의변화를 초래한다. 따라서, 성상 세포 ' 기능을 관련 된 연구는 신경 질환을 치료 하는 치료의 개발에 대 한 도움이 됩니다.
체외 모델은 신경 상해와 관련된 메커니즘을 연구하는 데 매우 중요하며, 피질 성상세포의 성공적인 격리 및 2차원 (2D) 문화가 확립되었지만8,이 모델은 네이티브 세포 동작을 모방하고 뇌의 복잡성을 재현하는 현실적인 환경을 제공하지 못합니다9 . 2D 조건에서, 가난한 기계적 및 생화학적 지원, 낮은 세포 세포 및 세포 매트릭스 상호 작용 및 기저 -정격 극성의 부재로 이어지는 세포 평탄화, 세포 신호 역학 및 변경 된 세포 형태및 유전자 발현으로 이어지는 실험 결과에 영향을 미치며, 이는 치료10에대한 반응을 타협한다. 따라서 결과를 클리닉으로 변환하는 것을 목표로 보다 현실적인 신경 환경을 제공하는 대안을 개발하는 것이 중요합니다.
3차원(3D) 세포 배양은 CNS11을포함한 장기 및 조직의 충실도 특징이 증가함에 따라 재구성되는 고급 모델을 나타낸다. 신경교 배양에 관해서는, 3D 모델은 성상세포 형태, 세포 기저-정성 극성 및 세포 신호12,13의유지에 기여한다. 3D 바이오프린팅 기술은 세포와 생체 물질을 사용하여 토착 조직의 구조와 특성을 재현하여 3D 살아있는 조직을 통제방식으로 바이오 패브릭화하는 강력한 도구로 떠올랐습니다. 이 기술의 사용은 결과 예측의 실질적인 개선을 주도하고 CNS14,15,16에적용되는 재생 의학에 기여하고있다.
여기에 설명된 프로토콜은 피질 성상세포의 격리및 배양에 대해 자세히 설명합니다. 이 프로토콜은 또한 글라틴/젤라틴 메타크라이로일(GelMA)/피브리노겐에 내장된 생체 인쇄 성상세포에 대한 재현 가능한 방법을 자세히 설명하며, 라미닌으로 보충된다. 이 작품에서, 압출 계 바이오프린터는 1 x 106 세포/mL의 밀도로 피질 성상세포를 포함하는 생체 재료 조성물을 인쇄하는 데 사용되었다. 생체 프린팅 전단 응력은 인쇄 속도를 제어하여 최소화되었고, 성상세포는 공정 후 높은 생존력을 보였다. 생체 인쇄 구조는 1주 동안 배양되었고, 성상세포는 하이드로겔 내에서 확산, 부착 및 생존할 수 있었고, 성상체 형태를 유지하고 특정 마커 신경교 세동산성 단백질(GFAP)4를발현하였다.
이 절차는 피스톤 중심의 압출 기반 바이오 프린터와 호환되며 다양한 소스에서 파생된 성상 세포에 사용할 수 있습니다. 여기에서 제안된 3D 생체 인쇄 모형은 건강한 조직에 있는 성상세포 기능에 관련되었던 기계장치의 연구 및 신경 병리학 및 처리 발달의 진행을 이해하는 것과 같은 신경 공학 응용의 넓은 범위에 적합합니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>3D Bioprinter</td>
			<td>3D Biotechnology Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Extrusion-based bioprinter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-tip forceps</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>6--30</td>
			<td>Forceps for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td>Protease free, fatty acid free, essentially globulin free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>156340</td>
			<td>Culture flask T25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>352340</td>
			<td>Cell strainer 40 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Confocal TCS SP8 microscopy coupled with an Olympus FluoView 300 confocal system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651, 339652</td>
			<td>Sterile tubes of 15 mL and 50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab224589</td>
			<td>DAPI staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12500062</td>
			<td>DMEM/F-12 50/50, 1X (Dulbecco&#39;s Mod. Of Eagle&#39;s Medium/Ham&#39;s F12 50/50 Mix) with L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dyalisis tubing</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9527</td>
			<td>Molecular weight cut-off = 14 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-15-5</td>
			<td>Reagent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12657011</td>
			<td>Research Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9001-32-5</td>
			<td>Fibrinogen cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9000-70-8</td>
			<td>Gelatin powder from porcine skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td>Glycine powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>14175095</td>
			<td>No calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-85-9</td>
			<td>L-Glutamine crystalline powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>114956-81-9</td>
			<td>Laminin 1-2 mg/mL L in 50 mM Tris-HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live dead kit cell imaging kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R37601</td>
			<td>Green fluorescence in live cells (ex/em 488 nm/515 nm). Red fluorescence in dead cells (ex/em 570 nm/602 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methacrylic anhydride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>760-93-0</td>
			<td>For GelMA preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>Microtubes of 1,5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 22G</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1362045</td>
			<td>Sterile blunt needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissor</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>05--02</td>
			<td>Sharp scissor for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td>Paraformaldehyde powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15070063</td>
			<td>Pen Strep (5,000 Units/ mL Penicillin; 5,000 ug/mL Streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>430591, 430588</td>
			<td>Sterile petri dishes of 35 and 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab176753</td>
			<td>iFluor 488 reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoinitiator</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>106797-53-9</td>
			<td>2-Hydroxy-4&#8242;-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>10010023</td>
			<td>PBS 1 x, culture grade, no calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>25988-63-0</td>
			<td>Poly-L-lysine hydrobromide mol wt 30,000-70,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antobody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab4674</td>
			<td>Chicken polyclonal to GFAP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab150176</td>
			<td>Alexa fluor 594 anti-chicken</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>V973-70</td>
			<td>Number 24 cement spatula previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>3000038</td>
			<td>Microscope for brain dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>1222C84</td>
			<td>Sterile syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 2 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-740-105</td>
			<td>Polypropylene filter for sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002--04-4</td>
			<td>Thrombin cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Laboratory grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15400054</td>
			<td>Trypsin no phenol red 1 x diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15040066</td>
			<td>Versene Solution (0.48 mM) formulated as 0.2 g EDTA(Na4) per liter of PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>144530</td>
			<td>Sterile 24-well plate</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue

성상 세포는 중추 신경계 (CNS)에서 필수적인 역할을하는 신경 교세포이며 신경 지원 및 기능을 포함합니다. 이 세포는 또한 신경 상해에 반응하고 퇴행성 사건에서 조직을 보호하기 위하여 행동합니다. 성상 세포 '기능의 체외 연구에서 이러한 이벤트에 관련 된 메커니즘을 해명 하 고 신경 장애를 치료 하는 치료 개발에 기여 하는 것이 중요 하다. 이 프로토콜은 3D 바이오프린팅 성상세포-라덴 바이오잉크에 의해 성상세포가 풍부한 신경과 같은 조직 구조를 바이오패브릭화하는 방법을 설명합니다. 압출 기반 3D 바이오 프린터는이 작업에 사용되었고, 성상 세포는 C57Bl/6 마우스 새끼의 뇌 코르티체에서 추출되었다. 바이오잉크는 3번 통로까지 피질 성상세포를 젤라틴, 젤라틴-메타크라이로일(GelMA), 피브리노겐으로 구성된 생체재료 용액에 혼합하여 최적의 생체 인쇄 조건을 제시하였다. 3D 바이오프린팅 조건은 세포 스트레스를 최소화하여, 74.08%± 세포가 생체 인쇄 직후 실행 가능했던 공정 중 성상세포의 높은 생존가능성에 기여했습니다. 인큐베이션 1주 후, 성상세포의 생존가능성은 3.00%± 83.54%로 크게 증가하여 3D 구조가 세포 성장에 적합한 미세환경을 나타낸다는 것을 나타낸다. 생체 물질 조성은 세포 부착을 허용하고 성상체 행동을 자극, 세포는 특정 성상 세포 마커 신경교 세동 산성 단백질을 표현 (GFAP) 전형적인 성상체 형태를 소유. 이 재현 가능한 프로토콜은 세포의 기본 미세 환경과 유사한 성상 세포가 풍부한 3D 신경과 유사한 조직을 생체 제작하는 귀중한 방법을 제공하며, 성상세포기능및 신경질환과 관련된 메커니즘과의 관계를 이해하는 것을 목표로 하는 연구자들에게 유용합니다.

이 작품은 3D 바이오 프린팅 기술을 사용하여 층별 1차 성상세포-라덴 젤라틴/GelMA/fibrinogen bioink를 증착하는 것을 목표로 했습니다. 성상세포는 생생물성분에 첨가된 마우스새끼(도 1)의대뇌 피질으로부터 추출및 분리되어 살아있는 3D 구조의 생체 제작을 가능하게 하였다.
컴퓨터 지원 설계(CAD)는 G-code(보충파일)를1mm의 기공을 가진 정사각형 ...

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3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue

여기서 우리는 중추 신경계에 있는 성상세포의 기능 및 신경질 세포와 관련시키는 기계장치를 연구하기 위하여 신경같이 조직을 biofabricating을 위한 3D 생물 인쇄 murine 피질 성상 세포의 방법을 보고합니다.

신경과 같은 조직을 위한 Murine 피질 성상 세포의 3D 생물 인쇄

Astrocytes are glial cells with an essential role in the central nervous system (CNS), including neuronal support and functionality. These cells also ...

성상 세포의 3D 생체 인쇄는 신경 조직 공학의 진보를 나타내며, 신경 질환과 관련된 메커니즘을 이해하는 데 유용한 체외 모델의 생체 제작을 허용합니다. 3D 바이오프린팅의 주요 장점은 조직의 생화학적 및 기계적 특징을 모방한 세포 외래 구조를 바이오패브릭화하여 건강과 질병의 세포 역학에 대한 이해를 높이는 것입니다. 이 프로토콜은 천연 폴리머 및 세포외 매트릭스 구성 요소로 구성된 바이오 잉크의 3D 바이오 프린팅을 기반으로 다른 연조직의 생체 제작에 적용될 수 있다.우선 안락사 된 마우스에서 분리 된 피질 조직을 곡선 된 마이크로 가위로 작은 조각으로 자른다. 위아래로 파이프를 통해 HBSS의 1 밀리리터로 티슈 조각을 세 번 씻으라. 세 번째로 추가 된 HBSS를 제거 한 후, 0.05 %의 1 밀리리터를 추가하고 섭씨 37도에서 5 분 동안 조직을 배양하십시오.기계적 조직 해리의 경우 조직 트립신 혼합물을 15번 위아래로 부드럽게 피펫합니다. 다음으로, 해리된 혼합물을 15밀리리터 원추형 튜브로 옮기고 동일한 양의 FBS를 추가하여 트립신 활성을 중화시합니다. 0.4 마이크로미터 셀 스트레이너 필터를 통해 서스펜션을 필터링하여 분리되지 않은 조각을 제거합니다.성상 세포 배지의 1 밀리 리터로 필터를 세척하십시오. 원심분리에 의해 여과된 세포 현탁액을 펠릿다운한다. 상체를 폐기한 후, 성상세포 배양 배지의 1밀리리터에서 세포 펠릿을 중단한다.세포 현탁액을 T25 배양 플라스크로 전송합니다. 총 중간 크기 3.5 밀리리터를 구성하고 세포를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%로 배양합니다. 밀리리터당 3밀리그램의 최종 농도에서 피브리노겐을 얻기 위해 밀리리터 피브리노겐 용액당 0.9 밀리리터를 젤라틴-젤라틴 메타크릴 용액으로 옮길 수 있습니다.최종 농도0.5%의 부피중량에서 사진 시인을 획득하려면, 준비된 젤라틴-젤라틴 메타크라이로일 피브리노겐 용액에 0.015 그램의 사진 시인을 추가한다. 소용돌이 를 피한 후, PI 저하를 방지하기 위해 빛으로부터 보호, 섭씨 40도에서 솔루션을 유지합니다. 다음으로 0.2 마이크로미터 필터를 통해 용액을 멸균 15 밀리리터 원내 튜브로 필터링합니다.생체 재료 용액의 980 마이크로리터를 15 밀리리터 원내 튜브로 이송합니다. 밀리리터 당 2 마이크로그램의 최종 농도에서 라미닌을 얻기 위해, 바이오 잉크를 함유 한 튜브에 희석 된 라미닌 20 마이크로 리터를 추가합니다. 위아래로 파이프를 사용하여 부드럽게 섞어 거품을 피하고 세포와 섞을 준비가 될 때까지 바이오 잉크 용액을 섭씨 37도에서 유지합니다.5 분 동안 0.05 %의 트립신으로 기본 성상 세포를 시도하고 1 대 1의 비율로 FPS로 트립신 활동을 중화시합니다. 그런 다음 세포를 15 밀리리터 원물 튜브 및 원심분리기로 5분 동안 200배 G로 이송합니다. 세포를 계산한 후, 입증된 바와 같이 6세포에서 6세포로 1회 10을 이송한다.튜브에 상체의 200 마이크로 리터만 두고 원적 튜브의 바닥을 부드럽게 눌러 세포 펠릿을 중단하십시오. 밀리리터당 6개의 세포에 1회 10의 최종 농도를 얻으려면, 젤라틴-젤라틴 메타크라이로일 피브리노겐 용액의 1밀리리터를 세포를 포함하는 튜브로 옮기고 부드럽게 위아래로 피펫팅하여 균질화한다. 1000 마이크로리터 파이펫을 사용하여 젤라틴-젤라틴 메타크라이로일 피브리노겐 바이오 잉크 용액에 배치된 성상세포를 5밀리리터 플라스틱 주사기로 천천히 전달하여 거품 형성을 피하십시오.멸균 22 게이지 무딘 바늘을 주사기에 연결합니다. 바이오 프린터를 15분 동안 UV 광에 노출한 다음 바이오 프린터를 70%에탄올로 닦은 다음 주사기를 바이오 프린터 인쇄 헤드에 연결하고 바이오 잉크를 수동으로 플러시하여 남은 거품을 제거합니다. 바이오 프린팅을 수행하기 위해, 바이오 프린터 테이블에 35 밀리미터 배양 접시에 배치, 바늘을 배치 0.1 밀리미터 멀리 배양 접시 표면에서 바늘을 배치하고 인쇄 "버튼을 누릅니다.바이오 프린팅이 끝나면 주사기가 접시에서 벗어나 문화 요리를 닫아야 합니다. 젤라틴 메타크라이로일 크로스 링크용 UV 빛 아래에 문화 접시를 놓습니다. 멸균 주걱을 사용하여 생체 인쇄 구조를 24 웰 플레이트로 옮기.500 마이크로리터의 혈소판 염화물 용액을 추가하고 30분 동안 방치하여 피브린의 교차 연결을 허용합니다. 교차 연결 용액을 제거 한 후, PBS의 두 밀리리터로 구조를 세척 한 다음 성상 세포 배양 배지의 1 밀리리터로 PBS를 교체하십시오. 섭씨 37도, 이산화탄소 5%로 배양하고 3일마다 배지를 바꿉니다.주걱을 사용하여 생체 인쇄 구조를 35mm 배양 접시로 옮기하십시오. PBS의 1 밀리리터로 구조를 세척합니다. 살아있는 죽은 시약의 100 마이크로 리터를 구성 위에 입금하고 30 분 동안 섭씨 37도에서 유지하여 빛으로부터 보호하십시오.살아있는 죽은 시약을 제거 한 후, 입증 된 대로 PBS로 구조를 씻어. 시료를 공초점 접시로 옮기고 이미지 획득을 위해 488 및 570 나노미터 의 여기를 사용하여 공초점 현미경하에서 구체 내의 세포를 관찰한다. 3D 바이오프린팅 후, 생체 인쇄 스캐폴드의 무결성을 추정하고 생체 재료 내에 포획된 세포로 잘 정의된 구조의 형성을 관찰하였다.바이오 프린팅 및 교차 연결 과정 후, 대부분의 세포는 구조가 성상세포 배지로 배양되었을 때 둥근 형태를 제시했습니다. 생체 인쇄 된 스캐폴드는 7 일 간의 배양 후 무결성을 유지했으며 일부 둥근 세포가 관찰되었지만 많은 성상 세포가 구조 전체에 퍼져 성상 세포 형태와 상호 연결을 제시합니다. 세포 생존력은 생체 인쇄 직후 평가되었고, 결과는 더 낮은 속도로 실행 가능한 세포가 전체 세포의 최대 74%를 나타내며, 더 높은 속도로 생체 인쇄된 세포보다 훨씬 높은 것으로 나타났습니다.생체 인쇄 성상세포의 생존가능성은 2D 배양 성상세포로 정상화되었고, 그 결과는 7일째에 생체 인쇄성 성상세포가 생존가능성을 크게 증가시켰다는 것을 나타냈다. 생체 인쇄 직후, 성상 세포는 둥근 형태를 보여주고 죽은 분석체를 살아. 1 주일 후, 성상 세포는 구조 전체에 확산 및 세포의 뚜렷한 형태를 제시, 2D 배양과 동일.3D 생체 인쇄 성상 세포는 면역 형광을 특징으로했다. 생체 인쇄 구조에서 7 일 간의 배양 후 별모양의 형태를 가진 고밀도 성상세포가 관찰되었습니다. 생체 인쇄 성상세포 세포는 특정 성상세포 마커 신경교 섬유산성 단백질을 발현하여 7일간의 생체 인쇄 후 성상세포 표현형의 유지를 나타내며, 이러한 결과는 바이오 잉크 조성이 성상세포의 접착력, 확산 및 성장을 촉진하기 위한 생체 적합성 마이크로환경을 제공했음을 나타낸다.생체 인쇄 성상세포에 의한 특정 유전자 및 세포 마커 발현의 평가는 특정 자극 에 따른 성상세포 반응성, 신경 조직 과 같은 기능의 증거를 제공할 것이다. 이 프로토콜은 생체 분자에 있는 세포의 다른 모형으로 구성된 더 복잡한 신경 같이 구조물의 biofabrication를 위한 도로를 포장합니다, 특정 신경생성 틈새 의 모방을 허용하.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

손쥐 모델에서 창자의 조직 공학

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to ...

연구

생체공학

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

인간의 3 차원의 조직 공학<em&gt; 시험관</em&gt; 종양 테스트 시스템

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

조직 공학 : 계층화 된 세포 시트의 전달을위한 다세포 3D 비계 건설

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

혈관 조직 재생을위한 엔지니어링 3D Cellularized 콜라겐 젤

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

3D Bioprinting을 이용한 Spheroids의 기계적 통합을 보여주는 심장 조직의 생성

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Isolation of Murine Adipose Tissue-derived Microvascular Fragments as Vascularization Units for Tissue Engineering

조직 공학 혈관 신생 단위로 쥐 지방 조직 유래 미세 혈관 조각의 분리

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

공학에 대 한 미세 Bioprinting 나가도록 조직 및 Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

연골과 피부 조직 아날로그 소설 수동 Bioink Precellularization에 대 한 단위 기술 혼합을 이용 하 여 Bioprinting

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...

Protocols of 3D Bioprinting of Gelatin Methacryloyl Hydrogel Based Bioinks

젤라틴 메타크릴 하이드로겔 기반 바이오잉크의 3D 바이오프린팅 프로토콜

Gelatin methacryloyl (GelMA) has become a popular biomaterial in the field of bioprinting. The derivation of this material is gelatin, which is hydrolyzed ...