Name: 3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue
Uploaded: 2021-07-16T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av The São Paulo Research Foundation (FAPESP), tilskuddsnummer 2018/23039-3 og 2018/12605-8; Nasjonalt råd for vitenskapelig og teknologisk utvikling (CNPq), tilskuddstall 465656/2014-5 og 309679/2018-4; koordinering for forbedring av høyere utdanningspersonell (CAPES), finanskode 001.

Alle prosedyrene som involverte dyr fulgte internasjonale retningslinjer for dyrebruk i forskning (http://www.iclas.org) og ble godkjent av Komiteen for etikk i forskning på Universidade Federal de São Paulo (CEUA 2019 / 9292090519).
1. Mus hjerne disseksjon
<ol><li>Overfør 10 ml kald Hanks Buffered Salt Solution (HBSS) til en 100 mm kulturrett og 1 ml til en 1,5 ml mikrotube. Forbered en mikrotube per dyr. MERK: Både kulturretten og mikrorøret må holdes på is.</li>
	<li>Forbered a...

3D bioprinting-teknologien har dukket opp som et biofabrikasjonsalternativ som gjør det mulig å konstruere raffinerte konstruksjoner som strukturelt og fysiologisk ligner innfødt vev22, inkludert hjernen23. Biofabrikasjonen av nevrallignende vev gir mulighet for in vitro innfødt mikromiljøet modellering, som er et viktig verktøy for å forstå de cellulære og molekylære mekanismene forbundet med utvikling og behandling av mange sykdommer som påvirker CNS<s...

Astrocytter er den mest tallrike celletypen i Sentralnervesystemet (CNS) og spiller en nøkkelrolle i hjernens homeostase. I tillegg til varig nevronstøtte er astrocytter ansvarlige for modulering av nevrotransmittere opptak, opprettholde blod-hjerne barriere integritet, og regulere nevronal synaptogenesis1,2. Astrocytter har også en viktig rolle i CNS-betennelse, som reagerer på skader på hjernen i en prosess som fører til astrocitær reaktivitet eller reaktiv astrogliose3,4, danner et glial arr som forhindrer sunn vevsutstilling til degenerative midler5. Denne hendelsen resulterer i endringer i astrocytters genuttrykk, morfologi og funksjon6,7. Derfor er studier som involverer astrocytters funksjonalitet nyttig for utvikling av terapier for å behandle nevrologiske lidelser.
In vitro-modeller er avgjørende for å studere mekanismer relatert til nevrologiske skader, og selv om vellykket isolasjon og todimensjonal (2D) kultur av kortikale astrocytter er etablert8, klarer denne modellen ikke å gi et realistisk miljø som etterligner innfødt celleadferd og for å reprodusere kompleksiteten i hjernen9. . I 2D-tilstand påvirker dårlig mekanisk og biokjemisk støtte, lavcelle- og cellematriseinteraksjoner og cellesammenslåing fraværet av basal-apikal-polaritet, påvirker cellesignaldynamikk og eksperimentelle resultater som fører til endret cellemorfologi og genuttrykk, som kompromitterer responsen på behandlinger10. Derfor er det avgjørende å utvikle alternativer som gir et mer realistisk nevralt miljø, med sikte på å oversette resultatene til klinikken.
Tredimensjonal (3D) cellekultur representerer en mer avansert modell som rekapitulerer med økte troskapsegenskaper i organer og vev, inkludert CNS11. Når det gjelder glialkultur, bidrar 3D-modeller til vedlikehold av astrocytter morfologi, cellebasal-apikal polaritet og cellesignalering12,13. 3D bioprinting teknologi dukket opp som et kraftig verktøy for biofabricate 3D levende vev på en kontrollert måte ved hjelp av celler og biomaterialer for å gjenskape strukturen og egenskapene til innfødte vev. Bruken av denne teknologien har ført til en betydelig forbedring av resultatprediksjon og har bidratt til regenerativ medisin anvendt på CNS14,15,16.
Protokollen som er beskrevet her beskriver isolasjonen og kulturen til kortikale astrocytter. Protokollen beskriver også en reproduserbar metode for bioprint astrocytter innebygd i gelatin / gelatin methacryloyl (GelMA) / fibrinogen, supplert med laminin. I dette arbeidet ble en ekstruderingsbasert bioprinter brukt til å trykke den biomateriale sammensetningen som inneholder kortikale astrocytter med en tetthet på 1 x 106 celler / ml. Bioprinting skjær stress ble minimert ved å kontrollere utskriftshastigheten, og astrocytter viste høy levedyktighet etter prosessen. Bioprinted konstruksjoner ble dyrket i 1 uke, og astrocytter var i stand til å spre, feste og overleve i hydrogelen, opprettholde astrocytisk morfologi og uttrykke en bestemt markør glial fibrillary surt protein (GFAP)4.
Denne prosedyren er kompatibel med stempeldrevne ekstruderingsbaserte bioprintere og kan brukes til å biotrykke astrocytter avledet fra forskjellige kilder. Den 3D bioprinted modellen foreslått her er egnet for et bredt spekter av nevrale ingeniørapplikasjoner, for eksempel studier av mekanismene involvert i astrocytter funksjonalitet i sunt vev og forstå utviklingen av nevrologiske patologier og behandlingsutvikling.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3D Bioprinter</td>
			<td>3D Biotechnology Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Extrusion-based bioprinter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-tip forceps</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>6--30</td>
			<td>Forceps for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td>Protease free, fatty acid free, essentially globulin free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>156340</td>
			<td>Culture flask T25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>352340</td>
			<td>Cell strainer 40 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Confocal TCS SP8 microscopy coupled with an Olympus FluoView 300 confocal system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651, 339652</td>
			<td>Sterile tubes of 15 mL and 50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab224589</td>
			<td>DAPI staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12500062</td>
			<td>DMEM/F-12 50/50, 1X (Dulbecco&#39;s Mod. Of Eagle&#39;s Medium/Ham&#39;s F12 50/50 Mix) with L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dyalisis tubing</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9527</td>
			<td>Molecular weight cut-off = 14 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-15-5</td>
			<td>Reagent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12657011</td>
			<td>Research Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9001-32-5</td>
			<td>Fibrinogen cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9000-70-8</td>
			<td>Gelatin powder from porcine skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td>Glycine powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>14175095</td>
			<td>No calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-85-9</td>
			<td>L-Glutamine crystalline powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>114956-81-9</td>
			<td>Laminin 1-2 mg/mL L in 50 mM Tris-HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live dead kit cell imaging kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R37601</td>
			<td>Green fluorescence in live cells (ex/em 488 nm/515 nm). Red fluorescence in dead cells (ex/em 570 nm/602 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methacrylic anhydride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>760-93-0</td>
			<td>For GelMA preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>Microtubes of 1,5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 22G</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1362045</td>
			<td>Sterile blunt needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissor</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>05--02</td>
			<td>Sharp scissor for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td>Paraformaldehyde powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15070063</td>
			<td>Pen Strep (5,000 Units/ mL Penicillin; 5,000 ug/mL Streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>430591, 430588</td>
			<td>Sterile petri dishes of 35 and 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab176753</td>
			<td>iFluor 488 reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoinitiator</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>106797-53-9</td>
			<td>2-Hydroxy-4&#8242;-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>10010023</td>
			<td>PBS 1 x, culture grade, no calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>25988-63-0</td>
			<td>Poly-L-lysine hydrobromide mol wt 30,000-70,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antobody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab4674</td>
			<td>Chicken polyclonal to GFAP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab150176</td>
			<td>Alexa fluor 594 anti-chicken</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>V973-70</td>
			<td>Number 24 cement spatula previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>3000038</td>
			<td>Microscope for brain dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>1222C84</td>
			<td>Sterile syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 2 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-740-105</td>
			<td>Polypropylene filter for sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002--04-4</td>
			<td>Thrombin cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Laboratory grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15400054</td>
			<td>Trypsin no phenol red 1 x diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15040066</td>
			<td>Versene Solution (0.48 mM) formulated as 0.2 g EDTA(Na4) per liter of PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>144530</td>
			<td>Sterile 24-well plate</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue

Astrocytter er glialceller med en viktig rolle i sentralnervesystemet (CNS), inkludert nevronal støtte og funksjonalitet. Disse cellene reagerer også på nevrale skader og virker for å beskytte vevet mot degenerative hendelser. In vitro-studier av astrocytters funksjonalitet er viktig for å belyse mekanismene som er involvert i slike hendelser og bidra til å utvikle terapier for å behandle nevrologiske lidelser. Denne protokollen beskriver en metode for å biofabrikkere en nevrallignende vevsstruktur rik på astrocytter ved 3D-bioprinting astrocytter-ladet bioink. En ekstruderingsbasert 3D-bioprinter ble brukt i dette arbeidet, og astrocytter ble ekstrahert fra C57Bl/6 mus valpenes hjerne kortikaler. Bioink ble tilberedt ved å blande kortikale astrocytter fra opptil passasje 3 til en biomaterialeløsning sammensatt av gelatin, gelatin-methacryloyl (GelMA) og fibrinogen, supplert med laminin, som presenterte optimale bioprintforhold. 3D-bioprintforholdene minimert cellestress, noe som bidro til den høye levedyktigheten til astrocyttene under prosessen, der 74,08% ± 1,33% av cellene var levedyktige rett etter bioprinting. Etter 1 uke med inkubasjon økte levedyktigheten til astrocytter betydelig til 83,54% ± 3,00%, noe som indikerer at 3D-konstruksjonen representerer et passende mikromiljø for cellevekst. Den biomaterialeriale sammensetningen tillot celletilknytning og stimulert astrocytisk oppførsel, med celler som uttrykker den spesifikke astrocyttene markør glial fibrillary acidic protein (GFAP) og har typisk astrocytisk morfologi. Denne reproduserbare protokollen gir en verdifull metode for biofabricate 3D nevrallignende vev rik på astrocytter som ligner cellenes innfødte mikromiljø, nyttig for forskere som tar sikte på å forstå astrocytters funksjonalitet og deres forhold til mekanismene som er involvert i nevrologiske sykdommer.

Dette arbeidet hadde som mål å utvikle et nevralt lignende vev ved hjelp av 3D-bioprintingsteknologien for å deponere lag for lag primær astrocytter-ladet gelatin / GelMA / fibrinogen bioink. Astrocytter ble ekstrahert og isolert fra hjernebarken til muspupper (figur 1), lagt til en biomaterialesammensetning, slik at biofabrikasjonen av en levende 3D-konstruksjon.
Den datamaskinassisterte designen (CAD) ble utviklet ved hjelp av G-koden (Supplemental f...

Watch this Scientific Journal Video about 3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue at JoVE.com

3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue

Her rapporterer vi en metode for 3D bioprinting murine kortikale astrocytter for biofabricating nevral-lignende vev for å studere funksjonaliteten til astrocytter i sentralnervesystemet og mekanismene som involverer glialceller i nevrologiske sykdommer og behandlinger.

3D Bioprinting av Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Lignende Vev

Astrocytes are glial cells with an essential role in the central nervous system (CNS), including neuronal support and functionality. These cells also ...

3D bioprinting av astrocytter representerer et fremskritt innen nevrovevsteknikk, slik at biofabrikasjon av in vitro-modeller som er nyttige for å forstå mekanismene som er involvert i nevrologisk sykdom. Den største fordelen med 3D bioprinting er å biofabrikkere celleadjunktstrukturer som etterligner vevets biokjemiske og mekaniske egenskaper, noe som gir en bedre forståelse av celledynamikk i helse og sykdom. Denne protokollen kan brukes på biofabrikasjon av andre bløtvev, da den er basert på 3D-bioprinting av en bio-blekk sammensatt av naturlige polymerer og ekstracellulære matrisekomponenter.Til å begynne med, kutt det kortikale vevet isolert fra den euthanized musen i små biter med en buet mikrosaks. Vask vevstykkene tre ganger med en milliliter HBSS ved å pipettere opp og ned. Etter å ha fjernet HBSS lagt til for tredje gang, legg til en milliliter på 0,05% trypsin og inkuber vevet i fem minutter ved 37 grader Celsius.For mekanisk vev dissosiasjon, forsiktig pipette vev trypsin blanding opp og ned 15 ganger. Deretter overfører du den dissosierte blandingen til et 15 milliliter konisk rør og legger til et likt volum FBS for å nøytralisere trypsinaktivitet. Filtrer suspensjonen gjennom et 0,4 mikrometer cellesilfilter for å fjerne ikke-dissosierte fragmenter.Vask filteret med en milliliter astrocytter medium. Pellet ned den filtrerte cellefjæringen ved sentrifugering. Etter å ha kastet supernatanten, suspendere cellepelleten i en milliliter astrocytter kulturmedium.Overfør cellefjæringen til en T25-kulturflaske. Utgjør totalt middels volum på 3,5 milliliter og inkuberer cellene ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. For å oppnå fibrinogen ved den endelige konsentrasjonen av tre milligram per milliliter, overfør 0,9 milliliter 10 milligram per milliliter fibrinogenoppløsning til gelatin-gelatinmetakryloyloppløsningen.For å oppnå fotoinitiatoren ved den endelige konsentrasjonen på 0,5% vekt etter volum, tilsett 0,015 gram fotoinitiator til den tilberedte gelatin-gelatinmetakryloylfibrinogenoppløsningen. Etter virveling, hold løsningen ved 40 grader Celsius, beskyttet mot lys for å unngå PI-nedbrytning. Deretter filtrerer du løsningen gjennom et 0,2 mikrometer filter i et sterilt 15 milliliter konisk rør.Overfør 980 mikroliter av biomaterialeløsningen til et 15 milliliter konisk rør. For å oppnå laminin ved den endelige konsentrasjonen av to mikrogram per milliliter, tilsett 20 mikroliter fortynnet laminin til røret som inneholder bioblekk. Bland forsiktig ved å pipettere opp og ned, unngå bobler og hold bioblekkløsningen på 37 grader Celsius til den er klar til å blandes med cellene.Prøv å inspisere de primære astrocyttene med 0,05 % trypsin i 5 minutter og nøytraliser trypsinaktiviteten med FPS med et forhold mellom ett og ett. Overfør deretter cellene til et 15 milliliter konisk rør og sentrifuge ved 200 ganger G i fem minutter. Etter å ha talt cellene, overfør 1 ganger 10 til de 6 cellene til et annet konisk rør og sentrifuge som demonstrert.La bare 200 mikroliter av supernatanten ligge i røret og suspendere cellepelleten ved å trykke forsiktig på bunnen av det koniske røret. For å oppnå en endelig konsentrasjon på 1 ganger 10 til 6 celler per milliliter, overfør en milliliter gelatin-gelatin methacryloylfibrinogenløsning til røret som inneholder cellene og homogenisere ved å forsiktig pipettere opp og ned. Bruk en 1000 mikroliter pipette for sakte å overføre astrocytter lagt i gelatin-gelatin methacryloyl fibrinogen bio-blekk løsning til en fem milliliter plast sprøyte, unngå boble formasjon.Koble en steril 22 gauge stump kanyle til sprøyten. Utsett bioprinteren for UV-lys i 15 minutter, og tørk deretter bioprinteren med 70% etanol, koble deretter sprøyten til bioprinterens skrivehode og skyll bioblekk manuelt for å fjerne de resterende boblene. For å utføre bioprinting, plasser på 35 millimeter kulturrett på bioprinterbordet, plasser nålen 0,1 millimeter bort fra kulturfatoverflaten for å tillate bevegelse av nålen og trykk på Print"-knappen.Når bioprintingen er over, må du sørge for at sprøyten beveger seg bort fra retten og lukker kulturretten. Plasser kulturretten under UV-lys for gelatin methacryloyl krysskobling. Bruk en steril slikkepott til å overføre den biotrykte konstruksjonen til en 24 brønnplate.Tilsett 500 mikroliter trombinkalsiumkloridoppløsning og la det stå i 30 minutter for å tillate fibrin krysskobling. Etter å ha fjernet krysskoblingsløsningen, vask konstruksjonen med to milliliter PBS, og erstatt deretter PBS med en milliliter astrocytterkulturmedium. Inkuber ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid og bytt medium hver tredje dag.Bruk en slikkepott til å overføre den biotrykte konstruksjonen til en 35 millimeter kulturrett. Vask konstruksjonen med en milliliter PBS. Deponer 100 mikroliter av det levende døde reagenset over konstruksjonen og hold det på 37 grader Celsius i 30 minutter, og hold det beskyttet mot lys.Etter å ha fjernet det levende døde reagenset, vask konstruksjonen med PBS som demonstrert. Overfør prøven til en konfokal tallerken og observere cellene i konstruksjonen under et konfokalt mikroskop ved hjelp av 488 og 570 nanometer eksitasjon for bildeoppkjøp. Etter 3D-bioprinting ble integriteten til det biotrykte stillaset estimert og dannelsen av en veldefinert struktur ble observert med celler fanget i biomaterialet.Etter bioprinting og krysskoblingsprosesser presenterte de fleste celler rund morfologi da konstruksjonen ble inkubert med et astrocyttmedium. De biotrykte stillasene opprettholdt integriteten etter syv dager med inkubasjon, og selv om noen runde celler ble observert, spredte mange astrocytter seg gjennom hele konstruksjonen, og presenterte astrocytisk morfologi og sammenkobling. Celle levedyktigheten ble evaluert rett etter bioprinting og resultatene viste at med lavere hastighet representerte levedyktige celler opptil 74% av totale celler, og var betydelig høyere enn celler bioprinted med høyere hastighet.Levedyktigheten til biotrykte astrocytter ble normalisert til 2D-dyrkede astrocytter, og resultatene indikerte at på den syvende dagen hadde de biotrykte astrocyttene økt levedyktigheten betydelig. Umiddelbart etter bioprintingen viste astrocyttene rund morfologi og levende død analyse. Etter en uke spredte astrocyttene seg gjennom hele konstruksjonen og presenterte en distinkt morfologi av celler, identisk med 2D-kultur.De 3D bioprinted astrocytter var preget av immunfluorescence. Etter syv dager med inkubasjon i den biotrykte konstruksjonen ble det observert svært tette astrocytter med en stjernelignende morfologi. De biotrykte astrocyttcellene uttrykte den spesifikke astrocyttermarkøren glial fibrillary acidic protein indikerer tilbakeholdelse av astrocytisk fenotype etter syv dager med bioprinting, og disse resultatene indikerer at bio-blekksammensetningen ga et biokompatibelt mikromiljø for å fremme astrocytters vedheft, spredning og vekst.Evalueringen av spesifikke gener og cellemarkører uttrykk av bioprinted astrocytter ville gi bevis på nevrovev-lignende funksjon, slik astrocytær reaktivitet etter spesifikke stimuli. Denne protokollen baner vei for biofabrikasjon av mer komplekse nevrolignende strukturer sammensatt av forskjellige typer celler i biomolekyler, slik at etterligning av spesifikke nevrogene nisjer.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

Tissue Engineering av tarmen i en murine modell

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to ...

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering av en menneskelig 3D<em&gt; In vitro</em&gt; Tumor Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

Tissue Engineering: Bygging av en Flercellede 3D Stillas for levering av Lagdelte Cell Sheets

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

Ingeniør 3D Cellularized Kollagen Geleer til Vaskulær Tissue Regeneration

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

Opprettelse av hjertevæv som viser mekanisk integrasjon av sfæroider ved hjelp av 3D bioprinting

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Isolation of Murine Adipose Tissue-derived Microvascular Fragments as Vascularization Units for Tissue Engineering

Isolering av Murine fettvev-avledet mikrovaskulær Fragmenter som vaskularisering Enheter for Tissue Engineering

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

Microfluidic Bioprinting for utvikling Stangeriaceae vev og Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

Bioprinting brusk og huden vev Analogs utnytte en roman passiv miksing enhet teknikk for Bioink Precellularization

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...

Protocols of 3D Bioprinting of Gelatin Methacryloyl Hydrogel Based Bioinks

Protokoller av 3D Bioprinting av gelatin Methacryloyl hydrogel basert Bioinks

Gelatin methacryloyl (GelMA) has become a popular biomaterial in the field of bioprinting. The derivation of this material is gelatin, which is hydrolyzed ...