Name: 3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue
Uploaded: 2021-07-16T13:30:00
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Este trabalho foi apoiado pela Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), números de bolsas 2018/23039-3 e 2018/12605-8; Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), números de bolsas 465656/2014-5 e 309679/2018-4; e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), código financeiro 001.

Todos os procedimentos envolvendo animais seguiram diretrizes internacionais para uso de animais em pesquisa (http://www.iclas.org) e foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de São Paulo (CEUA 2019/9292090519).
1. Dissecção cerebral de camundongos
<ol><li>Transfira 10 mL de solução de sal tampão hanks frio (HBSS) para um prato de cultura de 100 mm e 1 mL para um microtubo de 1,5 mL. Prepare um microtubo por animal. NOTA: Tanto o prato de cultura qu...

A tecnologia de bioimpressão 3D surgiu como uma alternativa de biofabricação que permite a engenharia de construtos refinados que se assemelham estrutural e fisiologicamente aos tecidos nativos22, incluindo o cérebro23. A biofabricação de tecidos neurais permite a modelagem in vitro de microambientes nativos, sendo uma importante ferramenta para a compreensão dos mecanismos celulares e moleculares associados ao desenvolvimento e tratamento de muitas doenças...

Os astrócitos são o tipo celular mais abundante no Sistema Nervoso Central (SNC) e desempenham um papel fundamental na homeostase cerebral. Além do suporte neuronal duradouro, os astrócitos são responsáveis por modular a absorção de neurotransmissores, manter a integridade da barreira hematoencefálica e regular a sinapstogênese neuronal1,2. Os astrócitos também têm um papel essencial na inflamação do SNC, respondendo a lesões no cérebro em um processo que leva à reatividade astrocativa ou astrogliose reativa3,4, formando uma cicatriz gliar que impede a exposição saudável do tecido aos agentes degenerativos5. Este evento resulta em mudanças na expressão genética dos astrócitos, morfologia e função6,7. Portanto, estudos envolvendo a funcionalidade dos astrócitos são úteis para o desenvolvimento de terapias para tratar distúrbios neurológicos.
Modelos in vitro são cruciais para estudar mecanismos relacionados a lesões neurológicas, e embora o isolamento bem sucedido e a cultura bidimensional (2D) dos astrócitos cortical tenham sido estabelecidos8,este modelo não fornece um ambiente realista que imita o comportamento celular nativo e para reproduzir a complexidade do cérebro9 . Em condição 2D, o fraco suporte mecânico e bioquímico, as interações de células baixas e matriz celular e o achatamento celular, levando à ausência de polaridade basal-apical, afetam a dinâmica de sinalização celular e os desfechos experimentais levando à alteração da morfologia celular e expressão genética, que comprometem a resposta aos tratamentos10. Por isso, é fundamental desenvolver alternativas que proporcionem um ambiente neural mais realista, visando traduzir os resultados para a clínica.
A cultura celular tridimensional (3D) representa um modelo mais avançado que recapitula com características de fidelidade aumentadas de órgãos e tecidos, incluindo o CNS11. Em relação à cultura gliana, os modelos 3D contribuem para a manutenção da morfologia dos astrócitos, polaridade basal-apical celular e sinalização celular12,13. A tecnologia de bioimpressão 3D surgiu como uma poderosa ferramenta para biofabritor tecidos vivos 3D de forma controlada, usando células e biomateriais para recriar a estrutura e propriedades dos tecidos nativos. O uso dessa tecnologia levou a uma melhoria substancial da previsão de resultados e contribuiu para a medicina regenerativa aplicada ao CNS14,15,16.
O protocolo descrito aqui detalha o isolamento e a cultura dos astrócitos cortical. O protocolo também detalha um método reprodutível para bioimpressão de astrócitos embutidos em gelatina/gelatina methacryloyl (GelMA)/fibrinogen, complementado com laminina. Neste trabalho, uma bioimpressora baseada em extrusão foi usada para imprimir a composição biomaterial contendo astrócitos cortical a uma densidade de 1 x106 células/mL. O estresse da tesoura de bioimpressão foi minimizado pelo controle da velocidade de impressão, e os astrócitos apresentaram alta viabilidade após o processo. Construções bioimpressadas foram cultivadas por 1 semana, e os astrócitos foram capazes de se espalhar, anexar e sobreviver dentro do hidrogel, mantendo a morfologia astróctica e expressando um marcador específico de proteína ácida fibrilar (GFAP)4.
Este procedimento é compatível com bioimpressoras baseadas em extrusão orientadas por pistão e pode ser usado para bioimpressão de astrócitos derivados de diferentes fontes. O modelo bioimpresso 3D proposto aqui é adequado para uma ampla gama de aplicações de engenharia neural, como estudos dos mecanismos envolvidos na funcionalidade de astrócitos em tecidos saudáveis e compreensão da progressão de patologias neurológicas e desenvolvimento do tratamento.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3D Bioprinter</td>
			<td>3D Biotechnology Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Extrusion-based bioprinter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-tip forceps</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>6--30</td>
			<td>Forceps for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td>Protease free, fatty acid free, essentially globulin free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>156340</td>
			<td>Culture flask T25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>352340</td>
			<td>Cell strainer 40 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Confocal TCS SP8 microscopy coupled with an Olympus FluoView 300 confocal system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651, 339652</td>
			<td>Sterile tubes of 15 mL and 50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab224589</td>
			<td>DAPI staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12500062</td>
			<td>DMEM/F-12 50/50, 1X (Dulbecco&#39;s Mod. Of Eagle&#39;s Medium/Ham&#39;s F12 50/50 Mix) with L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dyalisis tubing</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9527</td>
			<td>Molecular weight cut-off = 14 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-15-5</td>
			<td>Reagent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12657011</td>
			<td>Research Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9001-32-5</td>
			<td>Fibrinogen cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9000-70-8</td>
			<td>Gelatin powder from porcine skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td>Glycine powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>14175095</td>
			<td>No calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-85-9</td>
			<td>L-Glutamine crystalline powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>114956-81-9</td>
			<td>Laminin 1-2 mg/mL L in 50 mM Tris-HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live dead kit cell imaging kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R37601</td>
			<td>Green fluorescence in live cells (ex/em 488 nm/515 nm). Red fluorescence in dead cells (ex/em 570 nm/602 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methacrylic anhydride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>760-93-0</td>
			<td>For GelMA preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>Microtubes of 1,5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 22G</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1362045</td>
			<td>Sterile blunt needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissor</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>05--02</td>
			<td>Sharp scissor for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td>Paraformaldehyde powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15070063</td>
			<td>Pen Strep (5,000 Units/ mL Penicillin; 5,000 ug/mL Streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>430591, 430588</td>
			<td>Sterile petri dishes of 35 and 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab176753</td>
			<td>iFluor 488 reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoinitiator</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>106797-53-9</td>
			<td>2-Hydroxy-4&#8242;-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>10010023</td>
			<td>PBS 1 x, culture grade, no calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>25988-63-0</td>
			<td>Poly-L-lysine hydrobromide mol wt 30,000-70,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antobody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab4674</td>
			<td>Chicken polyclonal to GFAP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab150176</td>
			<td>Alexa fluor 594 anti-chicken</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>V973-70</td>
			<td>Number 24 cement spatula previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>3000038</td>
			<td>Microscope for brain dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>1222C84</td>
			<td>Sterile syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 2 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-740-105</td>
			<td>Polypropylene filter for sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002--04-4</td>
			<td>Thrombin cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Laboratory grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15400054</td>
			<td>Trypsin no phenol red 1 x diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15040066</td>
			<td>Versene Solution (0.48 mM) formulated as 0.2 g EDTA(Na4) per liter of PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>144530</td>
			<td>Sterile 24-well plate</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue

Os astrócitos são células gliais com um papel essencial no sistema nervoso central (SNC), incluindo suporte neuronal e funcionalidade. Essas células também respondem a lesões neurais e agem para proteger o tecido de eventos degenerativos. Estudos in vitro da funcionalidade dos astrócitos são importantes para elucidar os mecanismos envolvidos nesses eventos e contribuir para o desenvolvimento de terapias para tratar distúrbios neurológicos. Este protocolo descreve um método para biofabricar uma estrutura de tecido neural rica em astrócitos por bioimizades 3D carregados de astrócitos. Uma bioimpressora 3D baseada em extrusão foi usada neste trabalho, e os astrócitos foram extraídos dos cortices cerebrais dos filhotes de C57Bl/6. O bioink foi preparado pela mistura de astrócitos cortical de até a passagem 3 para uma solução biomaterial composta de gelatina, gelatina-methacryloyl (GelMA) e fibrinogênio, complementado com laminina, que apresentava condições ótimas de bioimpressão. As condições de bioimpressão 3D minimizaram o estresse celular, contribuindo para a alta viabilidade dos astrócitos durante o processo, em que 74,08% ± 1,33% das células eram viáveis logo após a bioimpressão. Após 1 semana de incubação, a viabilidade dos astrócitos aumentou significativamente para 83,54% ± 3,00%, indicando que o construto 3D representa um microambiente adequado para o crescimento celular. A composição do biomatélmico permitiu o apego celular e estimulou o comportamento astrócito, com células expressando os astrócitos específicos marcador de proteína ácida fibrilar glicial (GFAP) e possuindo morfologia astróctica típica. Este protocolo reprodutível fornece um método valioso para biofabricar tecido neural 3D rico em astrócitos que se assemelha ao microambiente nativo das células, útil para pesquisadores que visam entender a funcionalidade dos astrócitos e sua relação com os mecanismos envolvidos em doenças neurológicas.

Este trabalho teve como objetivo desenvolver um tecido neural usando a tecnologia de bioimpressão 3D para depositar gelatina carregada de astrócitos primários de camada por camada/GelMA/fibrinogen bioink. Os astrócitos foram extraídos e isolados do córtex cerebral de filhotes de camundongos(Figura 1),adicionados a uma composição biomaterial, permitindo a biofabricação de uma construção 3D viva.
O design auxiliado por computador (CAD) foi desenvolvido u...

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3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue

Aqui relatamos um método de bioimpressão 3D de astrócitos cortical de murina para biofabricagem de tecidos neurais para estudar a funcionalidade dos astrócitos no sistema nervoso central e os mecanismos que envolvem células gliais em doenças neurológicas e tratamentos.

Bioimpressão 3D de astrócitos cortical de murina para engenharia de tecido neural

Astrocytes are glial cells with an essential role in the central nervous system (CNS), including neuronal support and functionality. These cells also ...

A bioimpressão 3D de astrócitos representa um avanço na engenharia de tecidos neurológicos, permitindo a biofabariação de modelos in vitro que são úteis para entender os mecanismos envolvidos em doenças neurológicas. A principal vantagem da bioimpressão 3D é biofabritar estruturas adjuntas celulares que imitam as características bioquímicas e mecânicas dos tecidos, proporcionando uma melhor compreensão da dinâmica celular em saúde e doenças. Este protocolo pode ser aplicado à biofabização de outros tecidos moles, pois é baseado na bioimpressão 3D de uma bioind tinta composta de polímeros naturais e componentes de matriz extracelular.Para começar, corte o tecido cortical isolado do rato eutanizado em pequenos pedaços com uma micro tesoura curvada. Lave os pedaços de tecido três vezes com um mililitro de HBSS, encanar para cima e para baixo. Depois de remover o HBSS adicionado pela terceira vez, adicione um mililitro de 0,05% de trippsina e incuba o tecido por cinco minutos a 37 graus Celsius.Para dissociação de tecido mecânico, pipeta suavemente a mistura de trippsina tecidual para cima e para baixo 15 vezes. Em seguida, transfira a mistura dissociada para um tubo cônico de 15 mililitros e adicione um volume igual de FBS para neutralizar a atividade de trippsina. Filtre a suspensão através de um filtro de coador de células de 0,4 micrômetros para remover fragmentos não dissociados.Lave o filtro com um mililitro de meio de astrócito. Pelota para baixo a suspensão celular filtrada por centrifugação. Depois de descartar o supernatante, suspenda a pelota celular em um mililitro do meio de cultura de astrócitos.Transfira a suspensão da célula para um frasco de cultura T25. Compõem o volume médio total de 3,5 mililitros e incubam as células a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Para obter o fibrinogênio na concentração final de três miligramas por mililitro, transfira 0,9 mililitros de 10 miligramas por solução de fibrinogeniliter para a solução de methacryloyl gelatina-gelatina.Para obter o iniciador fotográfico na concentração final de 0,5% de peso em volume, adicione 0,015 gramas de iniciador fotográfico à solução preparada de fibrinogen de gelatina-gelatina. Após o vórtice, mantenha a solução a 40 graus Celsius, protegida da luz para evitar a degradação do PI. Em seguida, filtre a solução através de um filtro de 0,2 micrômetros em um tubo cônico estéril de 15 mililitros.Transfira 980 microliters da solução biomaterial para um tubo cônico de 15 mililitros. Para obter a laminina na concentração final de dois microgramas por mililitro, adicione 20 microliters de laminina diluída ao tubo contendo biointa. Misture suavemente por pipetting para cima e para baixo, evitando bolhas e mantenha a solução de bio tinta a 37 graus Celsius até ficar pronta para se misturar com as células.Trypsinize os astrócitos primários com 0,05% de trippsina por 5 minutos e neutralize a atividade de trippsina com FPS em uma proporção de um para um. Em seguida, transfira as células para um tubo cônico de 15 mililitros e centrífuga a 200 vezes G por cinco minutos. Após contar as células, transfira 1 vezes 10 para as 6 células para um tubo cônico diferente e centrífuga como demonstrado.Deixe apenas 200 microlitres do supernatante no tubo e suspenda a pelota celular tocando suavemente o fundo do tubo cônico. Para obter uma concentração final de 1 vezes 10 a 6 células por mililitro, transfira um mililitro de solução de fibrinogen de gelatina-gelatina para o tubo contendo as células e homogeneize-se gentilmente tubos para cima e para baixo. Use uma pipeta de 1000 microliter para transferir lentamente os astrócitos colocados em gelatina-gelatina fibrinogen biobrinogen bio-ink solução para uma seringa plástica de cinco mililitros, evitando a formação de bolhas.Conecte uma agulha cega estéril de calibre 22 à seringa. Exponha a bioimpressora à luz UV por 15 minutos e, em seguida, limpe a bioimpressora com 70% de etanol, em seguida, conecte a seringa à cabeça de impressão bioimpressora e lave manualmente a tinta biológica para remover as bolhas restantes. Para realizar a bioimpressão, coloque em um prato de cultura de 35 milímetros na mesa bioimpressora, posicione a agulha a 0,1 milímetros da superfície do prato de cultura para permitir o movimento da agulha e pressione o botão Imprimir".Uma vez que a bioimpressão acabou, certifique-se de que a seringa se afasta do prato e feche o prato de cultura. Coloque o prato de cultura sob luz UV para gelatina methacryloyl cross-linking. Use uma espátula estéril para transferir a construção bioimpressora para uma placa de 24 poços.Adicione 500 microliters de solução de cloreto de cálcio de trombina e deixe por 30 minutos para permitir a ligação cruzada de fibrinas. Depois de remover a solução de ligação cruzada, lave a construção com dois mililitros de PBS e substitua o PBS por um mililitro de meio de cultura de astrócitos. Incubar a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono e alterar o meio a cada três dias.Use uma espátula para transferir a construção bioimpressora para um prato de cultura de 35 milímetros. Lave a construção com um mililitro de PBS. Deposite 100 microlitres do reagente morto vivo sobre a construção e mantenha-o a 37 graus Celsius por 30 minutos, mantendo-o protegido da luz.Depois de remover o reagente morto vivo, lave a construção com PBS como demonstrado. Transfira a amostra para um prato confocal e observe as células dentro do construto sob um microscópio confocal usando excitação de 488 e 570 nanômetros para aquisição de imagem. Após a bioimpressão 3D, a integridade do andaime bioimpresso foi estimada e a formação de uma estrutura bem definida foi observada com células presas dentro do biomamaterial.Após a bioimpressão e os processos de ligação cruzada, a maioria das células apresentava morfologia redonda quando a construção era incubada com um meio de astrócito. Os andaimes bioimpressos mantiveram a integridade após sete dias de incubação, e embora algumas células redondas tenham sido observadas, muitos astrócitos se espalharam por toda a construção, apresentando morfologia astróctica e interconexão. A viabilidade celular foi avaliada logo após a bioimpressão e os resultados mostraram que, na velocidade mais baixa, as células viáveis representavam até 74% do total das células, sendo significativamente maiores do que as células bioimpressionadas em maior velocidade.A viabilidade dos astrócitos bioimpressados foi normalizada para astrócitos cultivados em 2D e os resultados indicaram que, no sétimo dia, os astrócitos bioimpressos tiveram significativamente maior viabilidade. Imediatamente após a bioimpressão, os astrócitos mostraram morfologia redonda e ensaio morto vivo. Após uma semana, os astrócitos se espalharam por toda a construção e apresentaram uma morfologia distinta das células, idêntica à cultura 2D.Os astrócitos bioimpressados 3D foram caracterizados por imunofluorescência. Após sete dias de incubação na construção bioimpressora, foram observados astrócitos altamente densos com uma morfologia semelhante a uma estrela. As células astrócitos bioimpressas expressas os astrócitos específicos marcador gliais fibrillary acidic protein indica retenção de fenótipo astrócito após sete dias de bioimpressão, e esses resultados indicam que a composição da bioinkina forneceu um microambiente biocompatível para promover a adesão, disseminação e crescimento dos astrócitos.A avaliação de genes específicos e marcadores celulares expressados pelos astrócitos bioimpressas forneceria evidências da função neuro tecido, como a reatividade do astrocito após estímulos específicos. Este protocolo abre caminho para a biofabização de estruturas neurogênicas mais complexas compostas de diferentes tipos de células em biomoléculas, permitindo a imitação de nichos neurogênicos específicos.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

Engenharia de Tecidos do Intestino num modelo murino

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to ...

Bioengenharia

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

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Engenharia de Tecidos de um 3D Humano<em&gt; In vitro</em&gt; Sistema de Teste de Tumor

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

Engenharia de Tecidos: Construção de um multicelular 3D andaime para a entrega de camadas celulares Sheets

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

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Criação de tecido cardíaco exibindo integração mecânica de esferóides usando 3D Bioprinting

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Bioprinting da cartilagem e Analogs de tecido de pele utilizando um romance passiva unidade técnica de mistura para Bioink Precellularization

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Protocols of 3D Bioprinting of Gelatin Methacryloyl Hydrogel Based Bioinks

Protocolos de bioimpressão 3D de bioinks baseados em hidrogel de gelatina

Gelatin methacryloyl (GelMA) has become a popular biomaterial in the field of bioprinting. The derivation of this material is gelatin, which is hydrolyzed ...