Name: 3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue
Uploaded: 2021-07-16T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about 3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue at JoVE.com

Detta arbete stöddes av São Paulo Research Foundation (FAPESP), bidragsnummer 2018/23039-3 och 2018/12605-8; Nationella rådet för vetenskaplig och teknisk utveckling (CNPq), bidragsnummer 465656/2014-5 och 309679/2018-4; samordning för förbättring av personal inom högre utbildning (CAPES), finansiell kod 001.

Alla djurs försök följde internationella riktlinjer för djuranvändning inom forskning (http://www.iclas.org) och godkändes av Kommittén för etik vid Universidade Federal de São Paulo (CEUA 2019 / 9292090519).
1. Möss hjärn dissekering
<ol><li>Överför 10 ml kall hanks buffrad saltlösning (HBSS) till en 100 mm odlingsfat och 1 ml till ett 1,5 ml mikrorör. Förbered ett mikrorör per djur. OBS: Både odlingsfatet och mikrotuben måste förvaras på is.</li>
	<li>Förbered astr...

3D-bioprinting-tekniken har dykt upp som ett biofabriceringsalternativ som möjliggör teknik av raffinerade konstruktioner som strukturellt och fysiologiskt liknar inhemska vävnader22, inklusive hjärnan23. Biofabriceringen av neurala-liknande vävnader möjliggör in vitro infödda mikromiljömodellering, vilket är ett viktigt verktyg för att förstå de cellulära och molekylära mekanismerna i samband med utveckling och behandling av många sjukdomar som på...

Astrocyter är den vanligaste celltypen i centrala nervsystemet (CNS) och spelar en nyckelroll i hjärnans homeostas. Förutom bestående neuronalt stöd är astrocyter ansvariga för att modulera signalsubstanser upptag, upprätthålla blod - hjärnbarriärens integritet och reglera neuronal synaptogenes1,2. Astrocyter har också en viktig roll i CNS-inflammation, som svarar på skador på hjärnan i en process som leder till astrocitär reaktivitet eller reaktiv astroglios3,4, som bildar ett gliaärr som förhindrar hälsosam vävnadsutställning till degenerativa medel5. Denna händelse resulterar i förändringar i astrocyternas genuttryck, morfologi och funktion6,7. Därför är studier som involverar astrocyters funktionalitet till hjälp för utvecklingen av terapier för att behandla neurologiska störningar.
In vitro-modeller är avgörande för att studera mekanismer relaterade till neurologiska skador, och även om framgångsrik isolering och tvådimensionell (2D) kultur av kortikala astrocyter har etablerats8, misslyckas denna modell med att ge en realistisk miljö som efterliknar infödda cellbeteenden och reproducerar hjärnans komplexitet9 . I 2D-tillstånd påverkar det dåliga mekaniska och biokemiska stödet, lågcells- och cellmatrisinteraktioner och cellutplattande som leder till frånvaron av basala-apisk polaritet cellsignaleringsdynamik och experimentella resultat som leder till förändrad cellmorfologi och genuttryck, vilket äventyrar svaret på behandlingar10. Därför är det viktigt att utveckla alternativ som ger en mer realistisk neural miljö, som syftar till att översätta resultaten till kliniken.
Tredimensionell (3D) cellkultur representerar en mer avancerad modell som rekapitulerar med ökade trohetsegenskaper hos organ och vävnader, inklusive CNS11. När det gäller gliakultur bidrar 3D-modeller till upprätthållandet av astrocytermorfologi, cell basala-apisk polaritet och cellsignalering12,13. 3D-bioprinting-tekniken framträdde som ett kraftfullt verktyg för att biofabricera 3D-levande vävnader på ett kontrollerat sätt genom att använda celler och biomaterial för att återskapa strukturen och egenskaperna hos inhemska vävnader. Användningen av denna teknik har lett till en betydande förbättring av resultatprognosen och har bidragit till regenerativ medicin som tillämpas på CNS14,15,16.
Protokollet som beskrivs här beskriver isoleringen och kulturen av när astrocyter. Protokollet beskriver också en reproducerbar metod för bioprint astrocyter inbäddade i gelatin/gelatin metakryloyl (GelMA)/fibrinogen, kompletterad med laminin. I detta arbete användes en extruderingsbaserad bioprinter för att skriva ut biomaterialkompositionen som innehåller näraly astrocyter med en densitet av 1 x 106 celler/ml. Bioprinting skjuvning stress minimerades genom att kontrollera utskriftshastigheten, och astrocyter visade hög livskraft efter processen. Bioprintade konstruktioner odlades i 1 vecka, och astrocyter kunde sprida, fästa och överleva inom hydrogelen, upprätthålla den astrocytiska morfologin och uttrycka en specifik markör glia fibrillary surt protein (GFAP)4.
Denna procedur är kompatibel med kolvdrivna extruderingsbaserade bioprinters och kan användas för att bioprint astrocyter som härrör från olika källor. Den 3D-bioprintade modellen som föreslås här är lämplig för ett brett spektrum av neurala tekniska tillämpningar, såsom studier av mekanismerna som är involverade i astrocytfunktionalitet i friska vävnader och förståelse för progressionen av neurologiska patologier och behandlingsutveckling.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3D Bioprinter</td>
			<td>3D Biotechnology Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Extrusion-based bioprinter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-tip forceps</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>6--30</td>
			<td>Forceps for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td>Protease free, fatty acid free, essentially globulin free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10043-52-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flask</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>156340</td>
			<td>Culture flask T25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>352340</td>
			<td>Cell strainer 40 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Confocal TCS SP8 microscopy coupled with an Olympus FluoView 300 confocal system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339651, 339652</td>
			<td>Sterile tubes of 15 mL and 50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab224589</td>
			<td>DAPI staining solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12500062</td>
			<td>DMEM/F-12 50/50, 1X (Dulbecco&#39;s Mod. Of Eagle&#39;s Medium/Ham&#39;s F12 50/50 Mix) with L-glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dyalisis tubing</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9527</td>
			<td>Molecular weight cut-off = 14 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-15-5</td>
			<td>Reagent grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>12657011</td>
			<td>Research Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9001-32-5</td>
			<td>Fibrinogen cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9000-70-8</td>
			<td>Gelatin powder from porcine skin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-40-6</td>
			<td>Glycine powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>14175095</td>
			<td>No calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>56-85-9</td>
			<td>L-Glutamine crystalline powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>114956-81-9</td>
			<td>Laminin 1-2 mg/mL L in 50 mM Tris-HCl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live dead kit cell imaging kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R37601</td>
			<td>Green fluorescence in live cells (ex/em 488 nm/515 nm). Red fluorescence in dead cells (ex/em 570 nm/602 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methacrylic anhydride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>760-93-0</td>
			<td>For GelMA preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtubes</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>Microtubes of 1,5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 22G</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1362045</td>
			<td>Sterile blunt needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissor</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>05--02</td>
			<td>Sharp scissor for brain dissection previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30525-89-4</td>
			<td>Paraformaldehyde powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15070063</td>
			<td>Pen Strep (5,000 Units/ mL Penicillin; 5,000 ug/mL Streptomycin)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>430591, 430588</td>
			<td>Sterile petri dishes of 35 and 100 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab176753</td>
			<td>iFluor 488 reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoinitiator</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>106797-53-9</td>
			<td>2-Hydroxy-4&#8242;-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer saline (PBS)</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>10010023</td>
			<td>PBS 1 x, culture grade, no calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>25988-63-0</td>
			<td>Poly-L-lysine hydrobromide mol wt 30,000-70,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antobody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab4674</td>
			<td>Chicken polyclonal to GFAP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab150176</td>
			<td>Alexa fluor 594 anti-chicken</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>V973-70</td>
			<td>Number 24 cement spatula previously sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>3000038</td>
			<td>Microscope for brain dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>1222C84</td>
			<td>Sterile syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 2 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>09-740-105</td>
			<td>Polypropylene filter for sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002--04-4</td>
			<td>Thrombin cristalline powder from bovine plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Laboratory grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15400054</td>
			<td>Trypsin no phenol red 1 x diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Versene solution</td>
			<td>Gibco; Life Technologies Corporation</td>
			<td>15040066</td>
			<td>Versene Solution (0.48 mM) formulated as 0.2 g EDTA(Na4) per liter of PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Well plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>144530</td>
			<td>Sterile 24-well plate</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d bioprinting of murine cortical astrocytes for engineering neural-like tissue

Astrocyter är gliaceller med en viktig roll i centrala nervsystemet (CNS), inklusive neuronalt stöd och funktionalitet. Dessa celler svarar också på neurala skador och verkar för att skydda vävnaden från degenerativa händelser. In vitro-studier av astrocyternas funktionalitet är viktiga för att belysa de mekanismer som är involverade i sådana händelser och bidra till att utveckla terapier för att behandla neurologiska störningar. Detta protokoll beskriver en metod för att biofabricera en neural-liknande vävnad struktur rik på astrocyter genom 3D bioprinting astrocyter-lastad bioink. En extrudering-baserade 3D bioprinter användes i detta arbete, och astrocyter extraherades från C57Bl/6 möss pups hjärnan cortices. Bioinken förbereddes genom att blanda när astrocyter från upp till passage 3 till en biomaterial lösning bestående av gelatin, gelatin-metakryloyl (GelMA) och fibrinogen, kompletterad med laminin, som presenterade optimala bioprinting villkor. 3D bioprinting villkor minimerade cell stress, bidrar till hög livskraft av astrocyterna under processen, där 74,08% ± 1,33% av cellerna var livskraftiga direkt efter bioprintning. Efter 1 veckas inkubation ökade astrocyternas livskraft signifikant till 83,54% ± 3,00%, vilket indikerar att 3D-konstruktionen representerar en lämplig mikromiljö för celltillväxt. Biomaterial kompositionen tillät cellfäste och stimulerat astrocytiskt beteende, med celler som uttrycker den specifika astrocytmarkören glia fibrillary acidic protein (GFAP) och har typisk astrocytisk morfologi. Detta reproducerbara protokoll ger en värdefull metod för att biofabricera 3D neuralliknande vävnad rik på astrocyter som liknar cellernas inhemska mikromiljö, användbar för forskare som syftar till att förstå astrocyternas funktionalitet och deras relation till mekanismerna som är involverade i neurologiska sjukdomar.

Detta arbete syftade till att utveckla en neuralliknande vävnad med hjälp av 3D-bioprinting-tekniken för att deponera lager för lager primär astrocyt-laddad gelatin / GelMA / fibrinogen bioink. Astrocyter extraherades och isolerades från hjärnbarken hos mössvalpar (figur 1), lades till en biomaterialkomposition, vilket möjliggör biofabricering av en levande 3D-konstruktion.
Den datorstödda designen (CAD) utvecklades med hjälp av G-koden (Komple...

Watch this Scientific Journal Video about 3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue at JoVE.com

3D Bioprinting of Murine Cortical Astrocytes for Engineering Neural-Like Tissue

Här rapporterar vi en metod för 3D bioprinting murine när astrocyter för biofabricating neural-liknande vävnader att studera funktionaliteten hos astrocyter i centrala nervsystemet och mekanismerna som involverar gliaceller i neurologiska sjukdomar och behandlingar.

3D Bioprinting av Murine Cortical Astrocytes för engineering neural-liknande vävnad

Astrocytes are glial cells with an essential role in the central nervous system (CNS), including neuronal support and functionality. These cells also ...

3D bioprinting av astrocyter representerar ett framsteg inom neuro vävnadsteknik, vilket möjliggör biofabricering av in vitro-modeller som är användbara för att förstå mekanismerna som är involverade i neurologisk sjukdom. Den största fördelen med 3D-bioprinting är att biofabricera celltilläggsstrukturer som efterliknar vävnadernas biokemiska och mekaniska egenskaper, vilket ger en bättre förståelse för celldynamiken i hälsa och sjukdom. Detta protokoll kan tillämpas på biofabricering av andra mjuka vävnader, eftersom det är baserat på 3D-bioprinting av ett biobläck bestående av naturliga polymerer och extracellulära matriskomponenter.Till att börja med skär du den kortikala vävnaden isolerad från den avlivade musen i små bitar med en krökt mikrosax. Tvätta vävnadsbitarna tre gånger med en milliliter HBSS genom att pipettera upp och ner. Efter att ha tagit bort HBSS tillsatt för tredje gången, tillsätt en milliliter på 0,05% trypsin och inkubera vävnaden i fem minuter vid 37 grader Celsius.För mekanisk vävnadsdissociation, pipetten försiktigt vävnads trypsinblandningen upp och ner 15 gånger. Överför sedan den dissocierade blandningen till ett koniskt rör på 15 milliliter och tillsätt en lika stor volym FBS för att neutralisera trypsinaktiviteten. Filtrera suspensionen genom ett 0,4 mikrometer cellsilfilter för att ta bort icke-dissocierade fragment.Tvätta filtret med en milliliter astrocytermedium. Pellet ner den filtrerade cell suspensionen genom centrifugering. Efter att ha kasserat supernatanten, suspendera cellpelleten i en milliliter astrocytkulturmedium.Överför cellfjädringen till en T25-odlingskolv. Utgör den totala medelvolymen på 3,5 milliliter och inkuberar cellerna vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid. För att erhålla fibrinogen vid den slutliga koncentrationen av tre milligram per milliliter, överför 0,9 milliliter 10 milligram per milliliter fibrinogenlösning till gelatin-gelatin metakryloyllösningen.För att erhålla fotoinitiatorn vid den slutliga koncentrationen av 0,5% vikt i volym, tillsätt 0,015 gram fotoinitiator till den beredda gelatin-gelatin metakryloylfibrinogenlösningen. Efter virvel, håll lösningen vid 40 grader Celsius, skyddad från ljus för att undvika PI-nedbrytning. Filtrera sedan lösningen genom ett 0,2 mikrometerfilter till ett sterilt koniskt rör på 15 milliliter.Överför 980 mikroliter av biomateriallösningen till ett koniskt rör på 15 milliliter. För att erhålla lamininen vid den slutliga koncentrationen av två mikrogram per milliliter, tillsätt 20 mikroliter utspädd laminin till röret som innehåller biobläck. Blanda försiktigt genom pipettering upp och ner, undvik bubblor och håll biobläcklösningen på 37 grader Celsius tills den är redo att blandas med cellerna.Trypsinize de primära astrocyterna med 0,05%trypsin i 5 minuter och neutralisera trypsinaktiviteten med FPS i ett förhållande av en till en. Överför sedan cellerna till ett koniskt rör på 15 milliliter och centrifug vid 200 gånger G i fem minuter. Efter att ha räknat cellerna, överför 1 gånger 10 till de 6 cellerna till ett annat koniskt rör och centrifug som visats.Lämna endast 200 mikroliter av supernatanten i röret och suspendera cellpelleten genom att försiktigt knacka på botten av det koniska röret. För att få en slutlig koncentration på 1 gånger 10 till de 6 cellerna per milliliter, överför en milliliter gelatin-gelatin metakryloylfibrinogenlösning till röret som innehåller cellerna och homogenisera genom att försiktigt pipettera upp och ner. Använd en 1000 mikroliter pipett för att långsamt överföra astrocyterna som läggs i gelatin-gelatin metakryloyl fibrinogen biobläcklösning till en fem milliliter plastspruta, vilket undviker bubbelbildning.Anslut en steril 22 gauge trubbig nål till sprutan. Utsätt bioprintern för UV-ljus i 15 minuter och torka sedan av bioprintern med 70 % etanol, anslut sedan sprutan till bioprinterns skrivarhuvud och spola biobläcket manuellt för att ta bort de återstående bubblorna. För att utföra bioprinting, placera vid 35 millimeters odlingsfat på bioprinterbordet, placera nålen 0,1 millimeter bort från odlingsfatets yta för att tillåta nålens rörelse och tryck på Print"-knappen.När bioprintningen är över, se till att sprutan rör sig bort från skålen och stäng odlingsfatet. Placera odlingsfatet under UV-ljus för gelatin metakryloyl korslänkning. Använd en steril spatel för att överföra den biotryckta konstruktionen till en 24-brunnsplatta.Tillsätt 500 mikroliter trombinkalciumkloridlösning och lämna i 30 minuter för att tillåta fibrin korslänkning. Efter att ha tagit bort korslänkningslösningen, tvätta konstruktionen med två milliliter PBS och byt sedan ut PBS med en milliliter astrocytkulturmedium. Inkubera vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid och byt medium var tredje dag.Använd en spatel för att överföra den biotryckta konstruktionen till en 35 millimeters odlingsfat. Tvätta konstruktionen med en milliliter PBS. Sätt 100 mikroliter av det levande döda reagenset över konstruktionen och håll det på 37 grader Celsius i 30 minuter, vilket håller det skyddat från ljus.Efter att ha tagit bort det levande döda reagenset, tvätta konstruktionen med PBS som visats. Överför provet till en konfokal skål och observera cellerna i konstruktionen under ett konfokalt mikroskop med hjälp av 488 och 570 nanometer excitation för bildförvärv. Efter 3D bioprinting uppskattades integriteten hos den bioprintade ställningen och bildandet av en väldefinierad struktur observerades med celler som fastnat i biomaterialet.Efter bioprinting och korslänkning processer, de flesta celler presenteras rund morfologi när konstruktionen inkuberades med en astrocyt medium. De bioprintade byggnadsställningarna behöll integriteten efter sju dagars inkubation, och även om vissa runda celler observerades, spred sig många astrocyter över hela konstruktionen och presenterade astrocytisk morfologi och sammanlänkning. Cellens livskraft utvärderades direkt efter bioprinting och resultaten visade att med lägre hastighet representerade livskraftiga celler upp till 74% av de totala cellerna, vilket var betydligt högre än celler bioprintade med högre hastighet.Livskraften hos bioprintade astrocyter normaliserades till 2D odlade astrocyter och resultaten visade att på den sjunde dagen hade de bioprintade astrocyterna avsevärt ökad livskraft. Omedelbart efter bioprintingen visade astrocyterna rund morfologi och levande död analys. Efter en vecka spred sig astrocyterna över hela konstruktionen och presenterade en distinkt morfologi av celler, identiska med 2D-kulturen.3D bioprinted astrocyter präglades av immunofluorescens. Efter sju dagars inkubation i den bioprintade konstruktionen observerades mycket täta astrocyter med en stjärnliknande morfologi. De bioprintade astrocytcellerna uttryckte den specifika astrocytmarkören glia fibrillary surt protein indikerar bevarande av astrocytisk fenotyp efter sju dagars bioprinting, och dessa resultat indikerar att bio-bläck kompositionen gav en biokompatibel mikromiljö för att främja astrocyternas vidhäftning, spridning och tillväxt.Utvärderingen av specifika gener och cellmarkörer uttryck av bioprinted astrocyter skulle ge bevis på neuro vävnad-liknande funktion, såsom astrocytary reaktivitet efter specifika stimuli. Detta protokoll banar väg för biofabricering av mer komplexa neuroliknande strukturer som består av olika typer av celler i biomolekyler, vilket möjliggör härmning av specifika neurogena nischer.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

Vävnadsteknik av tarmen i en murin modell

Tissue-engineered small intestine (TESI) has successfully been used to rescue Lewis rats after massive small bowel resection, resulting in return to ...

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering av en Human 3D<em&gt; In vitro</em&gt; Tumör Test System

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

Tissue Engineering: Konstruktion av en flercellig 3D Scaffold för Leverans av Layered Cell Sheets

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

Engineering 3D Cellularized Collagen Gels for Vascular Tissue Regeneration

Ingenjörs 3D Cellularized kollagengeler för kärlvävnad Regeneration

Synthetic materials are known to initiate clinical complications such as inflammation, stenosis, and infections when implanted as vascular substitutes. ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

Skapande av hjärtvävnad som visar mekanisk integration av sfäroider med 3D bioprinting

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Isolation of Murine Adipose Tissue-derived Microvascular Fragments as Vascularization Units for Tissue Engineering

Isolering av murina adipos vävnad Microvascular Fragment som Vaskularisering Aggregat för Tissue Engineering

A functional microvascular network is of pivotal importance for the survival and integration of engineered tissue constructs. For this purpose, several ...

Microfluidic Bioprinting for Engineering Vascularized Tissues and Organoids

Simuleras Bioprinting för Engineering vaskulariserad vävnad och Organoids

Engineering vascularized tissue constructs and organoids has been historically challenging. Here we describe a novel method based on microfluidic ...

Bioprinting of Cartilage and Skin Tissue Analogs Utilizing a Novel Passive Mixing Unit Technique for Bioink Precellularization

Bioprinting av brosk och hud vävnad analoger utnyttja en roman passiv enhet blandningsteknik för Bioink Precellularization

Bioprinting is a powerful technique for the rapid and reproducible fabrication of constructs for tissue engineering applications. In this study, both ...

Protocols of 3D Bioprinting of Gelatin Methacryloyl Hydrogel Based Bioinks

Protokoll för 3D Bioprinning av gelatin Methacryloyl hydrogel baserade Bioinks

Gelatin methacryloyl (GelMA) has become a popular biomaterial in the field of bioprinting. The derivation of this material is gelatin, which is hydrolyzed ...