Name: an optimized o9-1/hydrogel system for studying mechanical signals in neural crest cells
Uploaded: 2021-08-13T13:00:00
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テキサス大学ヘルスサイエンスセンターの原子間力顕微鏡-UTコア施設の運営者であるアナ・マリア・ザスケ博士は、このプロジェクトでAFMに貢献した専門知識を持ってくれたことに感謝します。また、国立衛生研究所(K01DE026561、R03DE025873、R01DE029014、R56HL142704、R01HL142704)からJ.Wangへの資金源に感謝します。

1. ヒドロゲル調製物
注:すべてのステップは、無菌を維持するために使用する前にエタノールと紫外線(UV)滅菌で消毒された細胞培養フードで行う必要があります。ピンセットやピペットなどの工具にはエタノールを散布する必要があります。緩衝液はまた無菌濾過されなければならない。
<ol><li>アミノシランコーティングガラスカバーリップの調製<ol>
<li>所望の数のガ?...

現在の研究の目的は、NCCにおける機械的信号の影響をよりよく理解するための効果的かつ効率的な インビトロ システムを提供することです。上記のステップバイステップのプロトコルに従うだけでなく、研究者はO9-1 NCCの細胞培養がヒドロゲルの調製に使用されるガラスカバーリップの種類によって影響を受けることを覚えておいてください。例えば、特定のタイプのガラスカバース...

神経堤細胞(NCC)は、脊椎動物胚発生時の幹細胞群であり、様々な臓器や組織の発達に寄与する著しい能力を有する。NCCは、NCC1,2の軸方向起点の位置や局所的環境誘導に応じて、感覚ニューロン、軟骨、骨、メラノサイト、平滑筋細胞を含む異なる細胞タイプに分化することができる。広範囲の細胞型に分化する能力を持つ、神経堤(NC)の発達の任意の段階で調節不全を引き起こす遺伝的異常は、多数の先天性疾患に至る可能性がある2。例えば、NCCの形成、移動、および発達中の摂動は、神経経皮症1,3として総称して知られる発達障害につながる。これらの疾患は、NCC形成における障害による頭蓋顔面欠損(トレチャー・コリンズ症候群など)から、黒色腫3、4、5、6に見られるようにNCC転移性回遊能力に起因する様々な癌の発症まで多岐にわたる。過去数十年にわたり、研究者は開発および疾患におけるNCCの役割とメカニズムについて顕著な発見を行い、その大半は化学信号7,8に焦点を当てています。最近では、機械的信号は、NCC開発9、10において重要だが十分に理解されていない役割を果たしていることが示されている。
NCCの環境的な手掛かりは、NCC分化を様々な細胞タイプに規制するなど、開発中に重要な役割を果たします。環境の手掛かり、例えば、物理的な手がかりは、機能多様化などの極めて重要な行動および細胞応答に影響を与える。メカノトランスダクションは、細胞が様々な生物学的プロセスを維持するためにそれらの手がかりを感知し、応答することを可能にする2.NCCは、隣接する細胞および細胞外マトリックス(ECM)のような異なる基質に囲まれており、恒常性を維持し、運命決定、増殖、およびアポトーシス11を通じて変化に適応するために機械的刺激を生じさせることができる。メカノトランスダクションは、機械的細胞外刺激の感覚成分が生じる形質膜から始まり、細胞12の細胞内調節をもたらす。インテグリン、焦点接着、および、剪断力、応力、および周囲の基質の剛性などの機械的信号を、細胞応答12を生成する化学信号に、プラズマ膜リレーの接合部。細胞膜から最終的な細胞調節への化学信号の中継は、分化などの生物の重要なプロセスを確定するために異なるシグナル伝達経路を介して行われます。
いくつかの研究は、基質剛性からの機械的シグナル伝達が細胞分化13、14に役割を果たしていることを示唆している。例えば、これまでの研究では、脳組織と同様の硬直性を有する軟質基質上で成長した間葉系幹細胞(MCC)(0.1〜1.0kPa)が神経細胞分化15,16を生じることが示されている。しかし、筋肉の剛性を模倣した8-17 kPa基質上で増殖するとより多くのMSCが筋細胞様細胞に分化し、一方、MSCを硬質基質上で培養した際に骨芽細胞様分化が観察された(25-40kPa)15,16。メカノトランスダクションの意義は、癌、心血管疾患、骨粗鬆症17、18、19を含む重篤な発達上の欠陥および疾患につながる可能性のある機械的シグナル伝達経路の不規則性および異常によって強調される。癌では、正常な乳房組織は軟らかく、乳房癌のリスクは、硬く、密な乳房組織、乳房腫瘍15に似た環境において増加する。この知見により、生体信号がNCC開発に及ぼす影響を、in vitroシステムを通じて基質剛性を簡単に操作することで研究することができ、NC関連疾患の進行と病因の基礎を理解する上でさらなる利点と可能性を提供します。
NCCにおける機械的信号の影響を調べ、従来公表された方法の最適化と異なる機械的信号20,21に対するNCCの応答評価に基づくNCCの効率的なインビトロシステムを確立した。ヒドロゲルの剛性の調製とNCCにおける機械的シグナリングの影響の評価を行うための詳細なプロトコルが提供されました。これを達成するために、O9-1 NCCは、硬い対ソフトヒドロゲルに応答して効果と変化を研究するためにNCモデルとして利用されています。O9-1 NCCは、8.5日目にマウス胚(E)から分離された安定したNC細胞株です。O9-1 NCC は、定義された分化メディア22の各種 NC 由来細胞タイプに分化できるため、インビボで NCC を模倣しています。NCCの機械的シグナル伝達を研究するために、マトリックス基質を、所望の剛性を達成するために、所望の剛性を達成するために、アクリルアミドおよびビスアクリルアミド溶液の様々な濃度から調整可能な弾性で作製した、生物学的基質剛性20、21、23と相関する。NCC用マトリックス基板の条件を最適化するために、具体的にはO9-1細胞は、以前に公開されたプロトコル20から改変を行った。このプロトコルで行われた1つの変更は、コラーゲンIのヒドロゲルをインキュベートし、50mM HEPESの代わりに0.2%の酢酸に希釈し、一晩で37°Cで行った。酢酸の低pHは均質な分布と高いコラーゲンIの組み込みをもたらし、したがってECMタンパク質24のより均一な付着を可能にする。また、ウシ胎児血清(FBS)との組み合わせは、インキュベーターにヒドロゲルを貯蔵する前に、それぞれリン酸緩衝液生理食塩水(PBS)で10%および5%の濃度で使用した。10%25の濃度で細胞増殖および分化を促進する能力のために、FBSへの追加サプリメントとして馬血清を使用した。
この方法により、生物環境をECMタンパク質コーティング(例えば、コラーゲンI)によって模倣し、NCCが成長し、20,21を生き残るための正確なインビトロ環境を作り出した。調製されたヒドロゲルの剛性を原子間力顕微鏡(AFM)を介して定量的に分析した、弾性率26を描写するよく知られた技術である。NCCに対する異なる剛性レベルの影響を研究するために、野生型O9-1細胞を培養し、フィラメントアクチン(F-アクチン)に対する免疫蛍光(IF)染色用のヒドロゲルに調製し、基質剛性の変化に応じて細胞接着および形態の違いを示した。このインビトロシステムを利用して、NCCにおける機械的シグナル伝達の役割と他の化学信号との相互作用を研究し、NCCと機械的シグナル伝達の関係を深く理解することができます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12 mm #1 Corning 0211 Glass Coverslip</td>
			<td>Chemglass Life Sciences</td>
			<td>CLS-1763-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2% Bis-Acrylamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M1533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24-well plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>662165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mm #1 Corning 0211 Glass Coverslip</td>
			<td>Chemglass Life Sciences</td>
			<td>CLS-1763-025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-aminopropyl triethoxysilane (APTS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A3648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-well cell culture plate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>179830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>J61899-AP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% Acrylamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A4058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50% glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well cell culture plate</td>
			<td>Greiner Bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM cantilever (spherical bead)</td>
			<td>Novascan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM software</td>
			<td>Catalyst NanoScope</td>
			<td></td>
			<td>Model: 8.15 SR3R1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Persulfate (APS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>248614</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-AP-2&#945; Antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-12726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Vinculin antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab129002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atomic Force Microscopy (AFM) Bioscope Catalyst</td>
			<td>Bruker Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen type I (100mg)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethylsilane (DCMS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>440272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-017-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-010-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Model DMi8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G mounting medium</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0100-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-030-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iScript Reverse Transcription Supermix</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1708841</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin antibiotic</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>15140148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy micro kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 1x PBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30256.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile deionized water</td>
			<td>Hardy Diagnostics</td>
			<td>U284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sulfo-SANPAH</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>22589</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR green</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4472908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEMED</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P9416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an optimized o9-1/hydrogel system for studying mechanical signals in neural crest cells

神経堤細胞(NCC)は、さまざまな臓器や組織を生み出す幅広い細胞型に移行し、分化することができる脊椎動物胚多能細胞です。組織の剛性は、機械的な力、NCC分化に重要な役割を果たす物理的な手がかりを生成します。しかし、メカニズムは不明のままです。ここで説明する方法は、様々な剛性のポリアクリルアミドヒドロゲルの最適化された生成、そのような剛性の正確な測定、 および生体NCCを 模倣するNCCラインであるO9-1細胞における機械的信号の影響の評価に関する詳細な情報を提供する。
ヒドロゲルの剛性を原子間力顕微鏡(AFM)を用いて測定し、それに応じて異なる剛性レベルを示した。様々な剛性のヒドロゲルに培養されたO9-1 NCCは、ストレス線維の異なる細胞形態および遺伝子発現を示し、機械的シグナル変化によって引き起こされる生物学的効果が異なっている。さらに、ヒドロゲル剛性を変化させることで、ゲル剛性を変化させ、NCCの分子および遺伝的調節を分析することによって機械的シグナル伝達を操作する効率的な インビトロ システムをもたらしたことが確立 された。したがって、この in vitro システムは、NCCにおける機械的シグナル伝達の役割と化学シグナルとの相互作用を研究するための強力なツールであり、研究者は神経堤の発達と疾患の分子および遺伝的メカニズムをよりよく理解するのに役立ちます。

AFMとヘルツモデルによるヒドロゲル調製と剛性評価 ここでは、アクリルアミドとビスアクリルアミドの比率を調節することによって、様々な剛性のポリアクリルアミドヒドロゲルを生成するための詳細なプロトコルが提供される。しかし、ポリアクリルアミドヒドロゲルは、ECMタンパク質の不足のために細胞の接着の準備ができていません。このように、スルホ-SANPAHは、リン...

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An Optimized O9-1/Hydrogel System for Studying Mechanical Signals in Neural Crest Cells

多能O9-1神経堤細胞と様々な剛性のポリアクリルアミドヒドロゲルを使用して 、インビトロで 機械的信号を研究するための詳細なステップバイステッププロトコルについて説明します。

神経堤細胞の機械的信号を研究するための最適化されたO9-1/ヒドロゲルシステム

Neural crest cells (NCCs) are vertebrate embryonic multipotent cells that can migrate and differentiate into a wide array of cell types that give rise to ...

この方法は、神経堤細胞の機械的シグナル伝達と化学シグナルとの相互作用の研究に役立つ。また、疾患における神経堤の発達の分子および遺伝的メカニズムを助けることができる。ガラスカバースリップを転送することは最も困難であるため、それらを壊して落とさないようにゆっくりと注意深く転送します。この手順を実証することは、私と私の研究室の博士研究員であるシェリー・ジャオ博士です。まず、所望の数のガラスカバースリップを実験室のワイプの上に置くことから始めます。その後、アルコールバーナーの炎を通して前後に通過させることによって、各カバースリップを殺菌します。カバーが冷めると、約200マイクロリットル、25ミリメートルカバースリップでカバースリップをカバーし、800マイクロリットルの0.1モル水酸化ナトリウムをカバーします。5分後、水酸化ナトリウムを吸引し、カバースリップを5分間空気乾燥させて均一なフィルムを形成する。カバースリップが乾燥したら、12ミリメートルカバースリップに約18マイクロリットルのアミノプロピルトリエトキシシランまたはAPTSを加え、25ミリメートルカバースリップにAPTSを150マイクロリットル加えます。吸気アクセスAPTSは、残留APTSが5分間乾燥することを可能にする。その後、滅菌脱イオン水にそれぞれ5分間浸して、カバーを3回すすいでください。洗ったカバースリップを新鮮なペトリ皿に移し、反応性側を上に向けます。そして、カバースリップを30分間十分な0.5%グルタルアルデヒドに浸して治療します。グルタルアルデヒドを吸引した後、カバースリップを脱イオン水で3分間一度すすいで、反応性側を上げてカバースリップを空気乾燥させます。シリコン化カバースリップを準備するには、パラフィルムが並ぶペトリ皿にアミノシランコーティングカバースリップと同数のカバースリップを配置します。その後、12ミリメートルのカバースリップを40マイクロリットルで、25ミリメートルのカバースリップを150マイクロリットルのジクロロメタンシランまたはDCMSで5分間処理します。反応性カバースリップを実験室の拭き取りに上に置く前に、滅菌脱イオン水でカバースリップを1分間1回洗います。ヒドロゲルを調製するために、ピペットは乾燥したアミノシラン被覆伝票上に作りたてのアクリルアミドゲル溶液を作製した。湾曲したピンセットを使用して、処理された側がゲル溶液に触れ、2つのカバースリップ間でゲル溶液を挟み込んで、直ちにDCMS処理カバースリップをゲル溶液の上に移す。ゲルが重合されたら、DCMS処理カバースリップを湾曲したピンセットで分離し、ゲルをアミノシランコーティングカバースリップに取り付けたままにします。次に、12ミリメートルのカバースリップを、500マイクロリットルの無菌PBSまたは脱イオン水で覆われた所定の4ウェルまたは24ウェルプレートに付いたヒドロゲルと共に、2ミリリットルの無菌PBSまたは脱イオン水で覆われた6ウェルプレートに30分間沈殿します。過剰なアクリルアミド溶液を除去した後、ヒドロゲルを滅菌PBSまたは脱イオン水で室温で30分間保存します。その後、ゲルを完全に覆うためにスルフォ・スクシニマイジルまたはスルフォ-SUNPAH溶液を添加する前に、PBSまたはウェルプレートから脱イオン水を吸引した。そして、15ワット、365ナノメートルの紫外線の下に溶液とゲルを10分間覆います。プレートを傾けることによって溶液ごとのSulfo-SANPAHのできるだけ多くを集める。そして、ゲルを15ミリモルHEPESで2〜3回洗浄します。1ミリリットル当たり15ミリグラムを加えるコラーゲン1を0.2%酢酸で希釈し、ヒドロゲルを含む各ウェルに。そして、摂氏37度と5%の二酸化炭素で一晩ゲルをインキュベートします。翌日、37°Cおよび5%の二酸化炭素で10%馬血清および5%FBSを含むPBSでヒドロゲルをインキュベートする前に、原稿に記載されているとおりに洗浄を行う。2時間のインキュベーションの後、10%FBSと1%ペニシリンストレプトマイシンを用いた無菌濾過DMEMの500マイクロリットルを各ウェルに加え、ゲルを摂氏37度と5%の二酸化炭素で保存します。細胞培養が整うまで、約10〜4番目の09〜1細胞をバゼル培地で2乗にしてプレートします。ピンセットを使用してカバースリップを新しいプレートに輸送し、プレート上で直接成長した細胞からの偽信号を最小限に抑えます。次いで、500マイクロリットルの4%パラホルムアルデヒドを10分間使用して細胞を固定してから、室温で500マイクロリットルの0.1%トリトンX-100で細胞を処理します。15分後、10%ロバ血清の250マイクロリットルで細胞を歩きます。フェロジピンでF-アクチンの細胞を10%ロバ血清の250マイクロリットルで1〜400の希釈で染色し、続いてDAPIを10分間インキュベートする。各ウェルに3〜4滴の取り付け培地を加える前に、PBSで細胞を2分間洗います。蛍光顕微鏡では、個々のチャネルと結合チャネルを生成するヒドロゲルサンプルあたり少なくとも3つのランダムフレームの画像をキャプチャします。原子間力顕微鏡またはAFMによるヒドロゲルの剛性評価では、AFMプローブからの必要な力が少なかったため、力曲線の傾きは軟質ヒドロゲルにとって緩やかであった。しかし、硬いヒドロゲルでは、生成された斜面ははるかに急でした。AFM測定は、ヤングの弾性率からキロパスカルでのヒドロゲルの平均剛性を計算するために使用されました。P19および09-1細胞の増殖特性は、制御および改変ゲル系の1キロパスカルおよび40キロパスカルヒドロゲルで観察された。元のゲル系で増殖した09-1細胞は、死んだ細胞の数が多くなった。対照的に、改変ゲル系で増殖した09-1細胞は、最小限の丸い細胞で示される小さな細胞甲板を有するヒドロゲル基板への健全な細胞増殖および十分な付着を示した。両方のヒドロゲル系にメッキされたP19細胞は、過剰な丸い浮遊細胞と細胞基板のアタッチメントの欠如を示した。修飾されたヒドロゲル系との神経堤細胞またはNCCの相溶性を、AP−2に対する免疫蛍光染色法によって評価した。修飾されたヒドロゲル系上でめっきされた09-1細胞におけるAP−2発現の有意な増加が観察された。さらに、09-1細胞は、ストレス繊維の様々な量を通じて低剛性ヒドロゲルまたは高剛性ヒドロゲルに基づいて異なる形態を示した。40キロパスカルヒドロゲルで増殖した09-1細胞における抗ビンクリン発現は、軟質基質上で増殖した細胞が硬質基質よりも最小限の焦点付加複合体を形成することを反映して、1キロパスカルヒドロゲルで増殖したものよりも高かった。アクリルアミドが細胞に有毒であるため、ヒドロゲルの重合には適切な待ち時間が重要です。より良い結果を確実にするために、少なくとも30分間、水をPBSまたは脱イオン水に浸します。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

共培養系における神経結合の形成を評価するための光遺伝学的アプローチ

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

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鶏の胚内の神経堤細胞と血管の二重標識は、ひよこGFP 神経管移植とカルボシアニンDyI注射を用いた

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Basicおよび前臨床研究のための密閉型細胞培養系でヒト多能性および神経幹細胞を培養します

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

A Standardized Approach for Multispecies Purification of Mammalian Male Germ Cells by Mechanical Tissue Dissociation and Flow Cytometry

機械的組織解離およびフローサイトメトリーによる哺乳動物雄胚細胞のマルチシード精製のための標準的アプローチ

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) has been one of the methods of choice to isolate enriched populations of mammalian testicular germ cells. ...

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リアルタイムで開発を可視化する多光子タイムラプス イメージング: ゼブラフィッシュ胚の神経堤細胞の可視化

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

生活そのままゼブラフィッシュの単一セルの光電

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

体節誘導体誘導される人間からの体外世代多能性幹細胞します。

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells

ヒト誘導多能性幹細胞由来神経細胞の治療移植によるマウス脳損傷の制御された皮質衝撃モデル

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Disease pathology due to TBI progresses from the primary mechanical ...

Dissection, Culture and Analysis of Primary Cranial Neural Crest Cells from Mouse for the Study of Neural Crest Cell Delamination and Migration

神経クレスト細胞の形成と移動の研究のためのマウスからの原発性頭蓋神経クレスト細胞の解剖、培養および分析

Over the past several decades there has been an increased availability of genetically modified mouse models used to mimic human pathologies. However, the ...

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Neural Crest Original Adipose-Derived Stem Cells from Periaortic Adipose Tissue

神経紋の分離、培養、脂肪形成誘導、周食脂肪組織由来の脂肪由来幹細胞

An excessive amount of adipose tissue surrounding the blood vessels (perivascular adipose tissue, also known as PVAT) is associated with a high risk of ...