Name: targeting the corticospinal tract in neonatal rats with a double-viral vector using combined brain and spine surgery
Uploaded: 2021-06-30T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Targeting the Corticospinal Tract in Neonatal Rats with a Double-Viral Vector using Combined Brain and Spine Surgery at JoVE.com

Эта работа финансировалась за счет стипендиального гранта от Shriners Hospitals for Children SHC-84706.

Все следующие хирургические процедуры и процедуры по уходу за животными были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Университета Темпл. Описанный протокол представляет собой операцию по выживанию, и животные были в конечном итоге усыплены путем внутрибрюшинной инъекци...

<ol>
	<li>Parent, S., Mac-Thiong, J., Roy-Beaudry, M., Sosa, J. F., Labelle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+cord+injury+in+the+pediatric+population:+A+systematic+review+of+the+literature.">Spinal cord injury in the pediatric population: A systematic review of the literature.</a> Journal of Neurotrauma. 28 (8), 1515-1524 (2011).</li><li>Vitale, M. G., Goss, J. M., Matsumoto, H., Roye, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+pediatric+spinal+cord+injury+in+the+united+states:+Years+1997+and+2000.">Epidemiology of pediatric spinal cord injury in the united states: Years 1997 and 2000.</a> Journal of Pediatric Orthopedics. 26 (6), 745-749 (2006).</li><li>Bregman, B. S., Goldberger, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+plasticity+and+sparing+of+function+after+spinal+cord+damage+in+neonatal+cats.">Anatomical plasticity and sparing of function after spinal cord damage in neonatal cats.</a> Science. 217 (4559), 553-555 (1982).</li><li>Castro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ipsilateral+corticospinal+projections+after+large+lesions+of+the+cerebral+hemisphere+in+neonatal+rats.">Ipsilateral corticospinal projections after large lesions of the cerebral hemisphere in neonatal rats.</a> Experimental Neurology. 46 (1), 1-8 (1975).</li><li>Commissiong, J. W., Toffano, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+spinal+cord+transection+at+different+postnatal+ages:+Recovery+of+motor+coordination+correlated+with+spinal+cord+catecholamines.">Complete spinal cord transection at different postnatal ages: Recovery of motor coordination correlated with spinal cord catecholamines.</a> Experimental Brain Research. 78 (3), 597-603 (1989).</li><li>Yuan, Q., Su, H., Chiu, K., Wu, W., Lin, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+neuropathology+and+functional+recovery+after+spinal+cord+injury+in+developing+and+adult+rats.">Contrasting neuropathology and functional recovery after spinal cord injury in developing and adult rats.</a> Neuroscience Bulletin. 29 (4), 509-516 (2013).</li><li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+transduction+of+the+neonatal+brain+delivers+controllable+genetic+mosaicism+for+visualizing+and+manipulating+neuronal+circuits+in+vivo.">Viral transduction of the neonatal brain delivers controllable genetic mosaicism for visualizing and manipulating neuronal circuits in vivo.</a> The European Journal of Neuroscience. 37 (8), 1203-1220 (2013).</li><li>Pawliuk, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+sickle+cell+disease+in+transgenic+mouse+models+by+gene+therapy.">Correction of sickle cell disease in transgenic mouse models by gene therapy.</a> Science. 294 (5550), 2368-2371 (2001).</li><li>Atasoy, D., Sternson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemogenetic+tools+for+causal+cellular+and+neuronal+biology.">Chemogenetic tools for causal cellular and neuronal biology.</a> Physiological Reviews. 98 (1), 391-418 (2018).</li><li>Brandt, H. M., Apkarian, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biotin-dextran:+A+sensitive+anterograde+tracer+for+neuroanatomic+studies+in+rat+and+monkey.">Biotin-dextran: A sensitive anterograde tracer for neuroanatomic studies in rat and monkey.</a> Journal of Neuroscience Methods. 45 (1-2), 35-40 (1992).</li><li>Veenman, C. L., Reiner, A., Honig, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biotinylated+dextran+amine+as+an+anterograde+tracer+for+single-+and+double-labeling+studies.">Biotinylated dextran amine as an anterograde tracer for single- and double-labeling studies.</a> Journal of Neuroscience Methods. 41 (3), 239-254 (1992).</li><li>Reiner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathway+tracing+using+biotinylated+dextran+amines.">Pathway tracing using biotinylated dextran amines.</a> Journal of Neuroscience Methods. 103 (1), 23-37 (2000).</li><li>Oguchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Double+virus+vector+infection+to+the+prefrontal+network+of+the+macaque+brain.">Double virus vector infection to the prefrontal network of the macaque brain.</a> PloS One. 10 (7), 0132825 (2015).</li><li>Kinoshita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+the+circuit+for+hand+dexterity+in+primates.">Genetic dissection of the circuit for hand dexterity in primates.</a> Nature. 487 (7406), 235-238 (2012).</li><li>Bernstein, D. R., Stelzner, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+the+corticospinal+tract+following+midthoracic+spinal+injury+in+the+postnatal+rat.">Plasticity of the corticospinal tract following midthoracic spinal injury in the postnatal rat.</a> The Journal of Comparative Neurology. 221 (4), 382-400 (1983).</li><li>Brown, K., Wolfe, B., Wrathall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+functional+recovery+after+spinal+cord+injury+in+young+rats.">Rapid functional recovery after spinal cord injury in young rats.</a> Journal of Neurotrauma. 22, 559-574 (2005).</li><li>Tillakaratne, N. J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+recovery+of+stepping+in+rats+after+a+complete+neonatal+spinal+cord+transection+is+not+due+to+regrowth+across+the+lesion+site.">Functional recovery of stepping in rats after a complete neonatal spinal cord transection is not due to regrowth across the lesion site.</a> Neuroscience. 166 (1), 23-33 (2010).</li><li>Kartje-Tillotson, G., Neafsey, E. J., Castro, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+analysis+of+motor+cortical+plasticity+after+cortical+lesions+in+newborn+rats.">Electrophysiological analysis of motor cortical plasticity after cortical lesions in newborn rats.</a> Brain Research. 332 (1), 103-111 (1985).</li><li>Gennaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+stroke+in+the+developing+rat+motor+cortex+induces+age-+and+experience-dependent+maladaptive+plasticity+of+corticospinal+system.">Focal stroke in the developing rat motor cortex induces age- and experience-dependent maladaptive plasticity of corticospinal system.</a> Frontiers in Neural Circuits. 11, 47 (2017).</li><li>Brichta, A. M., Grant, G., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoarchitectural+organization+of+the+spinal+cord.">Cytoarchitectural organization of the spinal cord.</a> The rat nervous system. 2, 294-309 (1985).</li><li>Kjell, J., Olson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+models+of+spinal+cord+injury:+From+pathology+to+potential+therapies.">Rat models of spinal cord injury: From pathology to potential therapies.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 9 (10), 1125-1137 (2016).</li><li>Takeoka, A., Arber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+local+proprioceptive+feedback+circuits+initiate+and+maintain+locomotor+recovery+after+spinal+cord+injury.">Functional local proprioceptive feedback circuits initiate and maintain locomotor recovery after spinal cord injury.</a> Cell Reports. 27 (1), 71-85 (2019).</li><li>Flynn, J. R., Graham, B. A., Galea, M. P., Callister, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+propriospinal+interneurons+in+recovery+from+spinal+cord+injury.">The role of propriospinal interneurons in recovery from spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 60 (5), 809-822 (2011).</li><li>Ohne, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+forelimb+motor+function+restoration+in+rats+with+cervical+spinal+cord+hemisection-neuroanatomical+validation.">Mechanism of forelimb motor function restoration in rats with cervical spinal cord hemisection-neuroanatomical validation.</a> IBRO Reports. 7, 10-25 (2019).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deconstruction+of+corticospinal+circuits+for+goal-directed+motor+skills.">Deconstruction of corticospinal circuits for goal-directed motor skills.</a> Cell. 171 (2), 440-455 (2017).</li><li>Sheikh, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrogradely+transportable+lentivirus+tracers+for+mapping+spinal+cord+locomotor+circuits.">Retrogradely transportable lentivirus tracers for mapping spinal cord locomotor circuits.</a> Frontiers in Neural Circuits. 12, 60 (2018).</li><li>Kinoshita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+the+circuit+for+hand+dexterity+in+primates.">Genetic dissection of the circuit for hand dexterity in primates.</a> Nature. 487, 235-238 (2012).</li><li>Keefe, K. M., Junker, I. P., Sheikh, I. S., Campion, T. J., Smith, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+injection+of+a+lentiviral+vector+highlights+multiple+motor+pathways+in+the+rat+spinal+cord.">Direct injection of a lentiviral vector highlights multiple motor pathways in the rat spinal cord.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (145), e59160 (2019).</li><li>Hutson, T. H., Verhaagen, J., Y&#225;&#241;ez-Mu&#241;oz, R. J., Moon, L. D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticospinal+tract+transduction:+A+comparison+of+seven+adeno-associated+viral+vector+serotypes+and+a+non-integrating+lentiviral+vector.">Corticospinal tract transduction: A comparison of seven adeno-associated viral vector serotypes and a non-integrating lentiviral vector.</a> Gene Therapy. 19 (1), 49-60 (2012).</li><li>Liu, Y., Keefe, K., Tang, X., Lin, S., Smith, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+self-complementary+adeno-associated+virus+serotype+2+as+a+tracer+for+labeling+axons:+Implications+for+axon+regeneration.">Use of self-complementary adeno-associated virus serotype 2 as a tracer for labeling axons: Implications for axon regeneration.</a> Plos One. 9 (2), 87447 (2014).</li><li>Tervo, D. G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+designer+AAV+variant+permits+efficient+retrograde+access+to+projection+neurons.">A designer AAV variant permits efficient retrograde access to projection neurons.</a> Neuron. 92 (2), 372-382 (2016).</li><li>Abdellatif, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=delivery+to+the+spinal+cord:+Comparison+between+lentiviral,+adenoviral,+and+retroviral+vector+delivery+systems.">delivery to the spinal cord: Comparison between lentiviral, adenoviral, and retroviral vector delivery systems.</a> Journal of Neuroscience Research. 84 (3), 553-567 (2006).</li><li>Zingg, B., Peng, B., Huang, J., Tao, H. W., Zhang, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+specificity+and+application+of+anterograde+transsynaptic+AAV+for+probing+neural+circuitry.">Synaptic specificity and application of anterograde transsynaptic AAV for probing neural circuitry.</a> The Journal of Neuroscience. 40 (16), 3250-3267 (2020).</li><li>Armbruster, B. N., Li, X., Pausch, M. H., Herlitze, S., Roth, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+the+lock+to+fit+the+key+to+create+a+family+of+G+protein-coupled+receptors+potently+activated+by+an+inert+ligand.">Evolving the lock to fit the key to create a family of G protein-coupled receptors potently activated by an inert ligand.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (12), 5163-5168 (2007).</li><li>Roth, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DREADDs+for+neuroscientists.">DREADDs for neuroscientists.</a> Neuron. 89 (4), 683-694 (2016).</li><li>Hasegawa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+forelimb+motor+function+restoration+after+cervical+spinal+cord+hemisection+in+rats:+A+comparison+of+juveniles+and+adults.">Mechanism of forelimb motor function restoration after cervical spinal cord hemisection in rats: A comparison of juveniles and adults.</a> Behavioural Neurology. 2016, 1035473 (2016).</li><li>Alstermark, B., Isa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circuits+for+skilled+reaching+and+grasping.">Circuits for skilled reaching and grasping.</a> Annual Review of Neuroscience. 35, 559-578 (2012).</li><li>Garc&#237;a-Al&#237;as, G., Truong, K., Shah, P. K., Roy, R. R., Edgerton, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+subcortical+pathways+promote+recovery+of+skilled+hand+function+in+rats+after+corticospinal+and+rubrospinal+tract+injuries.">Plasticity of subcortical pathways promote recovery of skilled hand function in rats after corticospinal and rubrospinal tract injuries.</a> Experimental Neurology. 266, 112-119 (2015).</li><li>Tohyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+propriospinal+neurons+to+recovery+of+hand+dexterity+after+corticospinal+tract+lesions+in+monkeys.">Contribution of propriospinal neurons to recovery of hand dexterity after corticospinal tract lesions in monkeys.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), 604-609 (2017).</li><li>Z'Graggen, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+sprouting+and+impulse+rerouting+after+unilateral+pyramidal+tract+lesion.">Compensatory sprouting and impulse rerouting after unilateral pyramidal tract lesion.</a> Journal of Neuroscience. 20 (17), 6561-6569 (2000).</li><li>Ueno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticospinal+circuits+from+the+sensory+and+motor+cortices+differentially+regulate+skilled+movements+through+distinct+spinal+interneurons.">Corticospinal circuits from the sensory and motor cortices differentially regulate skilled movements through distinct spinal interneurons.</a> Cell Reports. 23 (5), 1286-1300 (2018).</li><li>Kim, J., Grunke, S. D., Levites, Y., Golde, T. E., Jankowsky, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebroventricular+viral+injection+of+the+neonatal+mouse+brain+for+persistent+and+widespread+neuronal+transduction.">Intracerebroventricular viral injection of the neonatal mouse brain for persistent and widespread neuronal transduction.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (91), e51863 (2014).</li></ol>

Индуцируемая генетическая модуляция мозговой активности инъекционными хемогенетическими модификаторами является мощным инструментом в изучении различных механизмов, лежащих в основе восстановления после ТСМ. Точность нацеливания на индуцируемые рецепторы, связанные с G-белком (DREAD...

Хотя ТСМ является относительно редким явлением в педиатрической популяции, она особенно травматична и вызывает постоянную инвалидность, требующую огромного логистического предвидения. Кроме того, более высокая доля детских ВЦИ классифицируется как цервикальная и полная по сравнению со взрослым населением 1,2. Отличительной чертой всех видов млекопитающих является то, что новорожденные значительно лучше восстанавливаются после ТСМ, чем взрослые, и это дает возможность оценить движущие механизмы восстановления в более молодых популяциях 3,4,5. Несмотря на это, существует меньше мультимодальных исследований, посвященных исследованиям новорожденных и детенышей грызунов, отчасти из-за дополнительной сложности точного нацеливания на отдельные популяции нейронов в гораздо более жестких анатомических ориентирах молодых животных6. Эта статья посвящена прямому введению высокоэффективных антероградных и ретроградных аденоассоциированных векторов в спинной мозг крыс для модуляции основных двигательных путей с применением Cre-dependent-DREADD, расширяя охват исследований мультимодальной регенерации.
Вирусные векторы являются важными биологическими инструментами с широким спектром применений, включая введение генетического материала для замены генов-мишеней, повышения регуляции белков роста и отслеживания анатомического ландшафта ЦНС 7,8,9. Многие анатомические детали спинномозговых путей были изучены с использованием классических индикаторов, то есть биотинилированного декстранамина. В то время как традиционные индикаторы сыграли важную роль в раскрытии нейроанатомии, они не лишены своих недостатков: они без разбора маркируют пути, даже если они правильно введены, и исследования показали, что они поглощаются поврежденными аксонами 10,11,12. Следовательно, это может привести к неправильным интерпретациям в исследованиях регенерации, где отрезанные аксоны могут быть ошибочно приняты за регенерирующие волокна.
Следующий метод использует двухвирусную векторную систему, недавно популяризированную в исследованиях модуляции, с двумя различными вирусными векторами в двух отдельных областях одного и того же нейрона13,14. Первый представляет собой вектор, который локально заражает клеточные тела проекционных нейронов. Другой представляет собой ретроградный вектор, переносимый из аксонных терминалей проекционных нейронов (рисунок 1). Ретроградный вектор несет рекомбиназу Cre, а локальный вектор включает в себя двойную флоксированную последовательность «Cre-On», в которой кодируется флуоресцентный белок (mCherry). Нативный трансген, экспрессирующий как hM3Dq, так и mCherry, инвертирован относительно промотора и окружен двумя loxP-сайтами (рисунок 2). Таким образом, mCherry выражается только в дважды трансдуцированных проекционных нейронах, где cre-рекомбиназа индуцирует событие рекомбинации между сайтами LoxP, переворачивая ориентацию трансгена в соответствующую рамку считывания и позволяя экспрессировать как DREADD, так и флуоресцентный белок. Как только вирусный трансген находится в правильной ориентации, и когда это применимо, DREADD могут временно индуцировать нейромодуляцию через отдельно введенный лиганд, то есть клозапин-N-оксид. Протокол был разработан для аутентификации индуцируемых исследований нейромодуляции у новорожденных, в которых DREADDS вводятся для селективной модуляции ГПСП. Двухвирусная система действует как страховой полис, гарантируя, что каждая DREADD-положительная клетка отслеживается под флуоресценцией с высокой точностью для проверки инъекций.
Этот метод также помогает преодолеть разрыв в неонатальных исследованиях. Педиатрическая ТСМ представляет свои проблемы, и исследования, анализирующие регенерацию, прорастание или пластичность, должны подчеркнуть различия между новорожденными и взрослыми 3,15,16,17. Оптимизируя хирургическую процедуру и выполняя предыдущие анатомические исследования с окрашиванием Nissl, координаты как для черепных, так и для спинальных инъекций были проверены. Цель состояла в том, чтобы обеспечить метод двойных инъекций неонатальной крысе с повышенной точностью и живучестью.
Для текущей модели антероградный вектор вводили в клеточные тела соматодвигательной коры, используя брегму в качестве эталона18,19. С точки зрения спинальных инъекций, ретроградный вектор вводили в пластинки V-VII, где терминали аксона CST находятся20,21. Существует много фундаментальных вопросов, лежащих в основе того, как определенные модели поражения по-разному влияют на молодых животных и как последующее восстановление отличается от более старого животного. Это исследование демонстрирует надежные средства изучения травм шейки матки и восстанавливаемости функции передней конечности у новорожденных грызунов. Напротив, большинство предыдущих исследований касались восстановления локомоции после травм поясницы или грудной клетки 5,22,23,24. Сочетая двойной вирусный вектор с новой техникой инъекций, описанной здесь, этот протокол помогает смягчить определенные проблемы (например, живучесть), которые могут препятствовать исследованиям новорожденных грызунов. Этот метод является надежным, практичным и универсальным: небольшие вариации в технике позволят нацеливаться на различные пути, то есть вентральный CST, дорсальный CST и восходящие дорсальные пути.
Для этой системы один локально действующий вирус (например, AAV2) вводится в область интересующих тел нейрональных клеток. Второй ретроградно транспортируемый вирус, который контролирует экспрессию местного вируса, вводится в терминалы аксона для этой нейронной популяции. Таким образом, по определению, маркируются только кортикоспинальные нейроны. РетроAAV-Cre вирус был выбран с конститутивно активным промотором ЦМВ, поскольку челночная плазмида используется для генерации нескольких серотипов AAV для Cre-зависимой экспрессии в нескольких типах клеток. Для корковых инъекций AAV2 был выбран с трансгеном, приводимым в действие промотором синапсина-1, чтобы ограничить любую экспрессию нейронами. Поскольку 2-вирусная система больше зависит от происхождения и прекращения интересующей нейронной популяции, можно использовать несколько различных промоторов, если они могут управлять экспрессией генов, представляющих интерес в интересующей нейронной популяции. Например, возбуждающий нейрональный промотор, CamKII, может быть заменен синапсином-1. В дополнение к использованию этих серотипов AAV, ретроградный транспорт в незрелый и в гораздо меньшей степени, взрослые кортикоспинальные двигательные нейроны также могут быть достигнуты с использованием высоко ретроградного транспортабельного лентивируса (HiRet)25. Лентивирусы HiRet используют химерный гликопротеин Rabies / VSV для нацеливания поглощения синапсом для ретроградного транспорта. В сочетании с промотором Tet-On эта 2-вирусная система поддерживает индуцируемую экспрессию ретроградно-зависимым образом26,27.
Ретроградные вирусы вставляют векторы в синаптическое пространство нейрона-мишени, позволяя ему поглощаться аксоном этой клетки и транспортироваться в тело клетки. В то время как лентивирусные векторы ранее имели огромный успех, обеспечивая долгосрочную экспрессию в исследованиях генной терапии, этот метод развернулся в сторону аденоассоциированных вирусных векторов по нескольким простым причинам26,28: AAV более экономичен, так же эффективен и представляет меньшую логистическую нагрузку, учитывая, что он имеет более низкий уровень биобезопасности 29,30,31,32 . В то время как AAV2, наиболее часто используемый серотип, демонстрирует надежную трансфекцию аксонов CST, будущие исследователи могут отметить, что AAV1 предлагает некоторую универсальность, поскольку он маркирует трансинаптически, тем самым выдвигая несколько возможных итераций в будущих исследованиях33. Окончательная адаптация заключается в кодировании ретроградного вируса кре-рекомбиназой таким образом, чтобы несколько антероградных векторов могли быть введены одновременно, тем самым уменьшая ненужные внутренние вирусные отходы и максимизируя вероятность того, что DREADD экспрессируются в правильной ориентации.
В конечном счете, этот протокол демонстрирует одновременную инъекцию в кору и шейный отдел позвоночника, особенно нацеленную на клеточные тела и аксонные терминали кортикоспинального тракта соответственно. Высокоточная трансфекция наблюдается в коре головного мозга и спинном мозге. В то время как описанный протокол был усовершенствован для крыс Sprague Dawley 5-дневного возраста, он подходит для послеродовых дней 4-10 с незначительными корректировками анестезии и стереотаксических координат.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>#11 scalpel blades</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9801-11</td>
			<td>For use with the scalpel.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#10 Scalpel Blades</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9801-10</td>
			<td>For use with the scalpel.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringes</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>309659</td>
			<td>For anesthetic SC injection and fluid bolus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.0 silk suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>771-683G</td>
			<td>For skin closure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.0 Chromic Catgut Suture</td>
			<td>DemeTECH</td>
			<td>NN374-16</td>
			<td>To re-bind muscle during closing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48000 Micropipette Beveler</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>32416</td>
			<td>Used to bevel the tips of the pulled glass capillary tubes to form functional glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5% Iodine Solution</td>
			<td>Purdue Products L.P.</td>
			<td>L01020-08</td>
			<td>For use in sterilzation of the surgical site.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For sterilization of newly prepared glass needles, animal models during surgical preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (Ketaset)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>240048</td>
			<td>For keeping the animal in the correct plane of consciousness during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Sterilizer</td>
			<td>CellPoint</td>
			<td>5-1450</td>
			<td>To heat sterilize surgical instruments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Scale</td>
			<td>Okaus</td>
			<td>REV.005</td>
			<td>For weighing the animal during surgical preparation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexible Needle Attachment</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>MF34G-5</td>
			<td>For cleaning glass needles and loading red oil into glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Capillary Tubes</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>4878</td>
			<td>For pulled glass needles - should be designed for nanoliter injectors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7231</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium Point Curved Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator with a Vernier Scale</td>
			<td>Kanetec</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For precise targeting during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5621</td>
			<td>For cutting glass whisps off of freshly pulled glass capillary tubes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Standard Stereotaxic Instrument</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51600</td>
			<td>To hold the neonatal sterotaxic holder in place</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2">Lab Standard with Mouse &#38; Neonates Adaptor</td>
			<td>51615</td>
			<td>For neonatal skull fixation during cranial surgery and spinal injections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope with Light and Vernier Scale Ocular</td>
			<td>Leitz Wetzlar</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to visualize and measure beveling of pulled glass capillary tubes into functional glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroSyringe Pump Controller</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>62403</td>
			<td>To control the rate of injection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoliter 2000 Pump Head Injector</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500150</td>
			<td>To load and inject virus in a controlled fashion.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>PC-100</td>
			<td>To heat and pull apart glass capillary tubes to form glass needles.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAAV-CMV-scCre</td>
			<td>Wu lab&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Cre plasmid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAAV-hSyn-DIO-hM3Dq-mCherry (plasmid #44361)</td>
			<td>Bryan Roth&#8217;s lab through Addgene</td>
			<td></td>
			<td>DREADD plasmid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-996</td>
			<td>To assist with loading virus into the nanoinjector.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needles (25G x 5/8)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>305122</td>
			<td>For use with the 1mL and 10 mL syringes to allow injection of the animal model.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Tooth Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5152</td>
			<td>For griping spinous processes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Oil</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To provide a front for visualization of virus entering tissue during injection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6510</td>
			<td>To hold open the surgical wound.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rongeurs</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-8300</td>
			<td>To remove muscle from the spinal column during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Handle</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-9843</td>
			<td>To slice open skin and fat pad of animal model during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5980</td>
			<td>For general use in surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Staple Removing Forceps</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>INS750347</td>
			<td>To remove the staples, should they be applied incorrectly.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cloth</td>
			<td>Phenix Research Products</td>
			<td>BP-989</td>
			<td>To provide a sterile surface for the operation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Cotton-Tipped Applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>806-WC</td>
			<td>To soak up blood in the surgical wound while maintaining sterility.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>2146</td>
			<td>To clean the surgical area and surgical tools while maintaining sterility.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Saline</td>
			<td>Baxter Healthcare Corporation</td>
			<td>281324</td>
			<td>For use in blood clearing, and for replacing fluids post-surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Gloves</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For use by the surgeon to maintain sterile field during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Heating Pad</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For maintaining the body temperature of the animal model during surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For enhanced visualization of the surgical wound.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Stapler</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>INS750546</td>
			<td>To apply the staples.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Convection Warming Pad</td>
			<td>Baxter Healthcare Corporation</td>
			<td>L1K018</td>
			<td>For use in the post-operational recovery area to maintain the body temperature of the unconscious animal.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighted Hooks</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To hold open the surgical wound.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid bandage</td>
			<td>NewSkin</td>
			<td>985838</td>
			<td>To apply along sutures following surgery and encourage wound healing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire Cage Lamp</td>
			<td>ZooMed</td>
			<td>LF10EC</td>
			<td>To help animals recover from anesthesia and retain warm body temperature naturally</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

targeting the corticospinal tract in neonatal rats with a double-viral vector using combined brain and spine surgery

Успешное устранение препятствий, которые сдерживают исследования на неонатальных крысах, важно для изучения различий в результатах, наблюдаемых при детских травмах спинного мозга (SCIs) по сравнению со взрослыми SCIs. Кроме того, надежное введение терапии в клетки-мишени центральной нервной системы (ЦНС) может быть сложной задачей, а неточности могут поставить под угрозу эффективность исследования или терапии. Этот протокол сочетает в себе вирусную векторную технологию с новым хирургическим методом для точного введения генной терапии у неонатальных крыс на послеродовом дне 5. Здесь вирус, спроектированный для ретроградного транспорта (retroAAV2) Cre, вводится в аксонные терминали кортикоспинальных нейронов в спинном мозге, где он впоследствии транспортируется в клеточные тела. Затем в соматодвигательную кору головного мозга вводится дизайнерский рецептор с двойной инвертированной ориентацией (DIO), активируемый исключительно вирусом дизайнерских лекарств (ов) (DREADD). Этот метод двойной инфекции способствует экспрессии DREADD только в коинфицированных нейронах кортикоспинального тракта (CST). Таким образом, одновременная совместная инъекция соматомоторной коры и шейных терминалей CST является допустимым методом изучения хемогенетической модуляции восстановления по моделям цервикальной ТСМ у новорожденных крыс.

Успешная инъекция и транспортировка вирусного вектора должны привести к трансдукции односторонних нейронов в спинном мозге и моторной коре. Рисунок 4 демонстрирует маркировку нейронов слоя V CST в моторной коре коронального отдела мозга, экспрессирующих Cre-dependent-DREADDs-mCherr...

Watch this Scientific Journal Video about Targeting the Corticospinal Tract in Neonatal Rats with a Double-Viral Vector using Combined Brain and Spine Surgery at JoVE.com

Targeting the Corticospinal Tract in Neonatal Rats with a Double-Viral Vector using Combined Brain and Spine Surgery

Этот протокол демонстрирует новый метод применения генной терапии к субпопуляциям клеток у неонатальных крыс в постнатальном возрасте 5-10 дней путем введения антероградного хемогенетического модификатора в соматодвигательную кору и ретроградно транспортируемой рекомбиназы Cre в шейный спинной мозг.

Нацеливание на кортикоспинальный тракт у неонатальных крыс с двойным вирусным вектором с использованием комбинированной хирургии головного мозга и позвоночника

Successfully tackling the obstacles that constrain research on neonatal rats is important for studying the differences in outcomes seen in pediatric ...

Это первый протокол, демонстрирующий успешную коинфекцию кортикоспинального тракта у неонатальных крыс. Он предоставляет точный план для изучения того, как отдельные субпопуляции клеток у молодых млекопитающих способствуют восстановлению после травмы спинного мозга. Как и другие методы двойного вирусного вектора, этот метод позволяет пользователю точно трансдуцировать специфические субпопуляции нейронов, в свою очередь, позволяя исследователям определить эффективность различных химиогенетических методов в содействии выздоровлению.Мы ожидаем, что исследователи, которые не знакомы с этой техникой, будут бороться с поиском правильной анатомии позвоночника. И поэтому мы рекомендуем вам постоянно подсчитывать позвоночные сегменты часто и всегда возвращаться к вашим ориентирам. После подтверждения глубины анестезии у неонатального щенка Sprague Dawley определите область, где будет сделан разрез, надавливая щипцы в средней линии на верхней части кожи головы, ощупывая сагиттальный шов.Удерживая кожу натянутой, чтобы обеспечить чистый, прямой и точный разрез, сделайте разрез в один сантиметр вдоль плоскости сагиттального шва, начиная непосредственно над линией I. Затем определите брегму, осторожно прощупав щипцы вдоль поверхности черепа, обращая пристальное внимание на линии шва и углубление, вызванное щипцами, идущими вдоль теменной и лобной костей. Поддерживайте отверстие, применяя утяжеленные крючки на интересующую сторону.Очистите апоневроз, используя комбинацию ватных наконечников и микроножек, чтобы максимизировать экспозицию брегмы для повышения точности. Убедитесь, что корональный шов находится на видном месте достаточно далеко сбоку, чтобы обеспечить грубый шаблон для последующих инъекций. С помощью микроножек вырежьте примерно три на два миллиметра участок левой лобной кости черепа, непосредственно прилегающий к брегме.Очистите любой мусор, спинномозговую жидкость и кровь с помощью ватных кончиков. Чтобы ввести вирус, поместите иглу на место и запрограммируйте инжектор на инъекцию одного микролитра со скоростью 250 нанолитров в минуту. По завершении инъекции дайте игле отдохнуть в коре в течение трех минут.Повторите инъекции по другим координатам в общей сложности три инъекции вдоль коры по отношению к брегме, все на глубине 0,6 миллиметра. После завершения инъекций зашить кожу головы и перенести животное на другой операционный стол для шейной ламинэктомии. Пальпируйте основание черепа с помощью пальцев для идентификации места разреза.Держите кожу подтянутой, применяя натяжение большим и указательным пальцами. Используя лезвие No 11, начните разрез по средней линии на один-два миллиметра кзади основания черепа и вытяните разрез на один сантиметр сзади, чтобы обнажить поверхностную мышцу. Используя острое острие лезвия, аккуратно сделайте серию разрезов вдоль средней линии поверхностной мышцы, чтобы обнажить спинномозговую полость и глубокие спинные мышцы.Затем используйте пару щипцов, чтобы раздвинуть мышцу и визуализировать хирургическое окно. После того, как глубокие спинные мышцы были обнажены, вставьте ретракторы в хирургическое окно и втягивайте хирургическое окно до семи-восьми миллиметров в ширину, обеспечивая беспрепятственный обзор позвоночника. Определите второй шейный позвонок по его выдающемуся остистому отростку, который выступает дорсально и инкапсулирует большую куполообразную мышцу.Используя плоский край костного скребка, аккуратно соскоблите глубокие спинномозговые мышцы в стороны, чтобы подвергнуть C3 позвонкам C7. Начинают медиально и соскребают латерально вдоль направления, параллельному пластинкам позвонка, чтобы обеспечить надлежащее воздействие, позволяя четко различать позвоночные пластинки. Контролируйте любое кровотечение с помощью хлопковых наконечников.Используя С2 в качестве ориентира при подсчете уровней позвонков, аккуратно срежьте боковые края хрящевых пластинок при С6 и С7 с помощью микроножек. Используя пару тонких щипцов, осторожно удалите рассеченную часть пластинки, чтобы обнажить спинной мозг, гарантируя, что спинномозговое окно достаточно велико, чтобы вместить желаемое место инъекции. Поместите животное в стереотаксический краниальный держатель и поместите свернутый кусок марли под хобот животного, чтобы поднять его задние четверти.Перед началом инъекций очистите спинномозговое окно от любой крови или спинномозговой жидкости, осторожно приложив ватные кончики и треугольники Суги к области, следя за тем, чтобы не оскорбить спинной мозг. Кроме того, создайте барьер по периметру окна, поместив небольшой кусочек рассасывающейся ваты в боковые части спинномозгового окна, чтобы предотвратить окклюзию места инъекции путем непрерывного кровотечения или утечки ликвора. Для прямых инъекций в спинной мозг используйте кончик стеклянной инъекционной иглы, чтобы приблизить среднюю линию спинного мозга, идентифицируя спинную артерию.Затем поместите иглу чуть позади ламины С5 на приблизительной средней линии и используйте ее в качестве точки отсчета. Затем, используя микроманипулятор, переместите иглу сбоку вправо на 0,3 миллиметра и опустите иглу до тех пор, пока она просто не коснется поверхности спинного мозга. С этой глубины погрузите иглу.0,6 миллиметра в спинной мозг. Введите один микролитр ретро-аденоассоциированного вируса, несущего ген Cre recombinase со скоростью 250 нанолитров в минуту. Затем подождите две минуты, пока вирус диффундирует в спинной мозг, прежде чем медленно выводить иглу.Здесь показана маркировка пятого слоя нейронов кортикоспинального тракта в моторной коре коронального отдела мозга, экспрессирующих Cre-зависимые DREADDs mCherry, совместно вводимые с контралатеральной инъекцией ретро Cre в позвоночник. Возможность нацеливаться на конкретные нейронные популяции поможет очертить нюансы, способствующие восстановлению, и обеспечить большую точность лечения основной травмы спинного мозга в развивающейся нервной системе. Этот метод проложил нам путь к исследованию жизнеспособности использования возбуждающих DREADD в качестве средства для лечения травмы спинного мозга у ювенильных крыс.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Stereotaxic Surgery for Excitotoxic Lesion of Specific Brain Areas in the Adult Rat

Стереотаксической хирургии эксайтотоксичного Поражение конкретных областей мозга в взрослых крыс

Many behavioral functions in mammals, including rodents and humans, are mediated principally by discrete brain regions. A common method for discerning the ...

Unilateral Pyramidotomy of the Corticospinal Tract in Rats for Assessment of Neuroplasticity-inducing Therapies

Односторонний пирамидотомия из кортикоспинальных тракта у крыс для оценки нейропластики вызывающие Терапии

The corticospinal tract (CST) can be completely severed unilaterally in the medullary pyramids of the rodent brainstem. The CST is a motor tract that has ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

Интрацеребровентрикулярное Вирусный Инъекция по неонатологии мозга мыши для устойчив и распространен нейронов трансдукции

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Regioselective Biolistic Targeting in Organotypic Brain Slices Using a Modified Gene Gun

Региоселективный Biolistic Ориентация в Органотипической мозга Ломтики Использование модифицированного гена Gun

Transfection of DNA has been invaluable for biological sciences and with recent advances to organotypic brain slice preparations, the effect of various ...

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

Запись ЭЭГ в свободно перемещающихся крысах новорожденных с использованием нового метода

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging нейронной активности в первичной соматосенсорной коры, с помощью Thy1-GCaMP6s трансгенных мышей

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

Stereotaxic Surgery for Genetic Manipulation in Striatal Cells of Neonatal Mouse Brains

Стереотаксической хирургии для генетических манипуляций в полосатой клеток мозга новорожденных мыши

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, ...

Advanced Diffusion Imaging in The Hippocampus of Rats with Mild Traumatic Brain Injury

Расширенный диффузии изображений в гиппокампе крыс с мягкой травматического повреждения головного мозга

Mild traumatic brain injury (mTBI) is the most common type of acquired brain injury. Since patients with traumatic brain injury show a tremendous ...

Determining the Functional Status of the Corticospinal Tract Within One Week of Stroke

Определение функционального состояния Кортикоспинального тракта в течение одной недели после инсульта

High interindividual variability in the recovery of upper limb (UL) function after stroke means it is difficult to predict an individual&#39;s potential ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

Лазерная травма головного мозга в моторном кортексе крыс

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...