Name: fibroblast derived human engineered connective tissue for screening applications
Uploaded: 2021-08-20T13:00:00
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Este trabalho foi apoiado pela Sociedade Cardíaca Alemã (DGK Research Fellowship for GLS) e pela German Research Foundation (DFG através do projeto IRTG 1816 para GLS e AD; DFG 417880571 e DFG TI 956/1-1 para MT; SFB 1002 TP C04 para MT e WHZ; SFB 1002 TP S01 para WHZ; e EXC 2067/1-390729940J para WHZ). A WHZ conta com o apoio do Ministério Federal alemão da Ciência e Educação (BMBF), através do projeto IndiHEART, e da Fondation Leducq (20CVD04). MT, WHZ e SL são apoiados pelo Centro Alemão de Pesquisa Cardiovascular (DZHK).

Todas as etapas devem ser realizadas em uma classe II de biossegurança instalada em laboratórios sob o nível de contenção 1. Dependendo das regulamentações locais e do tipo de manipulações a serem realizadas, como a transferência de genes mediada por virais, o nível de contenção deve ser aumentado para o nível de biossegurança 2 ou 3. Todas as culturas são mantidas a 37 °C em uma incubadora de cultura celular com uma atmosfera umidificada de 5 % de CO2 no ar. Observe que os volumes (Passos 1 e...

O protocolo apresentado descreve a geração de ECT a partir de CF humano primário, o que permite estudar o impacto mecânico dessas células em seu ambiente de matriz extracelular e vice-versa.
Os fibroblastos precisam ser expandidos para produzir células suficientes para os experimentos planejados da ECT (0,75 x 106 células/ECT). Para a melhor reprodutibilidade, é aconselhável pré-cultura de fibroblastos congelados ou derivados de tecido na cultura de monocamadas 2D por uma ...

Um grande obstáculo no estudo de doenças fibrosas é a falta de modelos representativos de tecido 3D humano que forneçam insights sobre o comportamento dos fibroblastos e seus derivados patológicos. Para estudar processos fibrosos, os sistemas de cultura 2D padrão são sub-ideais, uma vez que os fibroblastos isolados transdiferem rapidamente em α-smooth muscle actin (SMA) expressando miofibroblasts quando cultivados em substratos 2D não compatíveis1,2,3. Assim, os fibroblastos na cultura 2D padrão não refletem um fenótipo de tecido "saudável" regular3,4,5,6. Culturas em substratos flexíveis foram introduzidas para simular ambientes de tecidos não fibrosos (10 kPa) e fibrosos (35 kPa), mas estes não têm a terceira dimensão, o que é muito importante no que diz respeito à fisiopatologia. A engenharia de tecidos proporciona a oportunidade de superar essa limitação, permitindo a cultura do fibroblasto em um contexto de matriz extracelular (ECM) definida e experimentalmente, por alterações na celularidade, composição de ECM e concentração de ECM, tudo isso pode determinar a biomecânica tecidual.
Vários modelos 3D foram gerados usando fibroblastos. Discos flutuantes e microesferas estiveram entre os primeiros e demonstram que o colágeno é remodelado e compactado de forma dependente do tempo. Os fibroblastos exercem forças de tração em fibrilas de colágeno, um processo que pode ser facilitado pela adição de agentes pró-fibrosos, como a transformação do fator de crescimento-beta 1 (TGF-β1)8,9,10,11,12,13,14,15,16. No entanto, culturas livremente flutuantes não permitem o carregamento externo controlado e, portanto, constituem modelos de encolhimento ou compactação continuamente. Tecidos projetados em forma de folha abriram a possibilidade de estudar a regulação homeostática de propriedades biomecânicas dos tecidos, ou seja, através de testes de cepas uni, bi, multiaxial ou cíclica17,18,19,20. Esses modelos têm sido usados, por exemplo, para demonstrar a influência do número celular na rigidez tecidual, que foi encontrada para se correlacionar positivamente com a integridade do citoesqueleto e a contratilidade do citosqueleto18,19. No entanto, é importante notar que as conversões de força-a-tensão são complicadas pela deformação de tecido não uniforme em torno de pontos de fixação de transdutores de força e pontos de ancoragem. Essa limitação inerente pode ser contornada por tecidos em forma de osso de cachorro ou anel, oferecendo alguma aplicação tecidual em pontos de ancoragem21,22,23. Tecidos em forma de anel podem ser preparados distribuindo um hidrogel de colágeno celular em moldes em forma de anel. À medida que o hidrogel compacta, um tecido se forma em torno da haste interna descompressível do molde, que oferece resistência para maior contração tecidual24,25,26,27. Após a compactação inicial e tipicamente máxima, os tecidos também podem ser transferidos para espaçadores ajustáveis para conter ainda mais a ECT circular em um comprimento de tecido definido3,24,25,26,27,28,29,30. As propriedades biofísicas podem ser avaliadas em dispositivos de tensão horizontal ou vertical padrão com células de carga apropriadas sob tensão unidirecional ou dinâmica3. Como os tecidos possuem uma estrutura circular em grande parte uniforme e podem ser mantidos em barras/ganchos (pontos de ancoragem e/ou transdutores de força), embora estes ainda possam incluir áreas de compressão ao redor das barras de carregamento, este formato permite uma variação de tensão mais uniforme em comparação com a fixação3. Além disso, tecidos ancorados provocam uma forma celular bipolar, e as células se adaptam às forças teciduais pelo alongamento ao longo das linhas de força promovendo tração anisotrópico31,32,33,34,35,36. Nós já aplicamos ECT em forma de anel de fibroblastos cardíacos de ratos e humanos (CF) em torno de um único polo rígido em experimentos funcionais de tensão de estresse e realizamos ganhos e perdas de estudos de função usando fibroblastos viralmente transduzidos24,25,26 e estudos farmacológicos37. Além disso, poderíamos identificar diferenças sexuais na fibrose mediada por CF no modelo ECT27.
O seguinte protocolo para a geração de ECT humano, exemplificado com CF humano primário obtido como CF criopreservado de fornecedores comerciais (ver Tabela de Materiais), combina as vantagens dos tecidos em forma de anel com uma maneira fácil e rápida de produzir tecidos macroscópicos para uma plataforma de 48 poços projetada para testes paralelos de alto teor de conteúdo.
É importante ressaltar que o modelo ECT não se restringe a um tipo específico de fibroblasto, com o uso documentado na investigação de outros fibroblastos, por exemplo, fibroblastos de pele38,39. Além disso, os fibroblastos das biópsias do paciente funcionam igualmente bem, e a escolha dos fibroblastos depende, em última análise, da questão científica a ser abordada.
A plataforma utilizada para a geração de ECT descrita neste protocolo é uma placa de cultura celular/tecido 3D disponível comercialmente (Figura 1A). Os métodos para a formação, cultivo e monitoramento da formação e função ect sob uma geometria definida e carga mecânica com a ajuda da placa de 48 poços são descritos. A ECT formada é mantida por polos flexíveis integrados e a carga mecânica pode ser ajustada de acordo com o propósito final usando postes com dureza diferentes (Valor 36-89 da Costa A), influenciando suas rigidezs de dobra. Polos com uma costa Um valor de 46 são recomendados. O protocolo é, além disso, compatível com um molde circular personalizado descrito anteriormente, onde o ECT é mantido em torno de uma única haste rígida37. As dimensões deste molde são dadas na Figura 1B.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62700/62700fig01.jpg"> Figura 1: Representação esquemática dos moldes de fundição. (A) Desenho técnico e dimensões de um molde de fundição com dois polos flexíveis. O molde compreende uma circunferência interna delimitada por uma parede curta que contém polos de retenção duplas no corpo principal do molde. Os polos flexíveis têm uma distância horizontal livre entre si e estão conectados na base. O molde permite um volume de fundição de 180 μL. O poço de cada molde permite uma capacidade de volume de pelo menos 600 μL de mídia cultural. Diferentes composições materiais podem ser usadas para produzir polos com rigidezs específicas (por exemplo, TM5MED-TM9MED). (B) Desenho técnico e dimensões de um molde em forma de anel com uma única haste dura. Trata-se de um molde alternativo com geometria distinta e ambiente mecânico, que pode ser usado com o protocolo de fundição ECT37. O método de montagem do molde em forma de anel foi adaptado a partir de formatos maiores publicados28,41. Em suma, o método inclui (1) fixação de espaçadores de moldagem politetrafluoroetileno (PTFE) (8 mm de diâmetro) em polidimtilsiloxano (PDMS, silicone) derramado em pratos de vidro (diâmetro de 60 mm) e (2) fixação de um suporte de poste PDMS (1,5 mm de diâmetro) concentricamente dentro da cavidade oca formada, que serve para (3) segurar um poste removível (tubo de silicone de 4 mm de diâmetro). O resultante do espaço oco permite 180 μL de volume de fundição. Cada prato de vidro pode portar múltiplos moldes impressos (exemplarmente mostrados com 5 moldes) e tem capacidade para até 5 mL de meio de cultura. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62700/62700fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell culture reagents:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase Solution</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>SCR005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissociation reagent &#8211; TrypLE Express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12604013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) powder, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12100061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s phosphate buffered saline (DPBS), pH 7.2, -Ca2+, -Mg2+</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGM-2 Fibroblast Growth Medium-2 BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBM&#160;Fibroblast Growth Basal Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGM-2 Fibroblast Growth Medium-2 SingleQuots,&#160;Supplements and Growth Factors</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast Growth Medium 3 KIT</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-23130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast Basal Medium 3</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-23230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth Medium 3 SupplementPack</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-39350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin (10000 U/mL)/ Streptomycin (10000 &#956;L/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide solution (NaOH) 1.0 N</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2770-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell sources:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal human cardiac fibroblasts from the ventricle (NHCF-V)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-2904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cardiac Fibroblasts (HCF-c)</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-12375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cardiac Fibroblasts (HCF-p)</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-12377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary human foreskin fibroblasts-1 (HFF-1)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>SCRC- 1041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen sourses:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type I (bovine) in 0.01 M HCl</td>
			<td>LLC Collagen Solutions</td>
			<td>FS22024</td>
			<td>6-7 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type I (rat tail) in 0.02 M HCl</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354236</td>
			<td>~4 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drugs:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latrunculin-A (Lat-A)</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>BML-T119-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic ware:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture plastic ware</td>
			<td>Sarstedt and Starlab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh cell strainer (Nylon, pore size 40 &#956;m)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>myrPlate-uniform</td>
			<td>myriamed GmbH</td>
			<td>TM5 med</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes wide opening, sterile (10 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>07-200-619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specific instruments:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bi-telecentric CORE lens for 1/2&#8243; detectors</td>
			<td>OptoEngineering</td>
			<td>TCCR12096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Area scan camera Basler ace acA4024</td>
			<td>Basler</td>
			<td>107404</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fibroblast derived human engineered connective tissue for screening applications

Os fibroblastos são células fenotipicamente altamente dinâmicas, que rapidamente se transviam em miofibroblasts em resposta a estímulos bioquímicos e biomecânicos. A compreensão atual dos processos fibrosos, incluindo a fibrose cardíaca, continua fraca, o que dificulta o desenvolvimento de novas terapias anti-fibrosas. Sistemas de modelos humanos controláveis e confiáveis são cruciais para uma melhor compreensão da patologia da fibrose. Trata-se de um protocolo altamente reprodutível e escalável para gerar tecidos conjuntivos projetados (ECT) em uma placa de fundição de 48 poços para facilitar estudos de fibroblastos e da fisiopatologia do tecido fibroso em um ambiente tridimensional (3D). A ECT é gerada ao redor dos polos com rigidez tabilidade, permitindo estudos sob uma carga biomecânica definida. Sob as condições de carregamento definidas, podem ser estudadas adaptações fenotípicas controladas por interações célula-matriz. Testes paralelos são viáveis no formato 48-well com a oportunidade de análise de tempo-curso de múltiplos parâmetros, como compactação tecidual e contração contra a carga. A partir desses parâmetros, podem ser estudadas propriedades biomecânicas como rigidez tecidual e elasticidade.

A ECT atinge cerca de 95 % de compactação em comparação com o volume inicial de hidrogel celular-colágeno dentro das primeiras 24 horas. A compactação tecidual e a contração sob condições de controle e na presença de FCS segue-se algumas horas após o fundição e notavelmente aumenta até o dia 5 (Figura 5A). A deflexão do polo pode aumentar ainda mais durante os 15 dias seguintes (20 dias foi o maior tempo testado). A magnitude da deflexão do polo depende do tipo celular, est...

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Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

Apresentado aqui é um protocolo para gerar tecidos conjuntivos projetados para uma cultura paralela de 48 tecidos em uma placa multi-bem com polos duplos, adequado para estudos mecanísticos, modelagem de doenças e aplicações de rastreamento. O protocolo é compatível com fibroblastos de diferentes órgãos e espécies e é exemplificado aqui com fibroblastos cardíacos primários humanos.

Tecido conjuntivo de engenharia humana derivada do fibroblasto para aplicações de triagem

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...

Este protocolo permite que o fibroblasto construa e organize seu próprio ambiente em condições mecânicas definidas. Estes resultam em tecidos anisotrópicos com rigidez e composições matriciais comparáveis ao ambiente natural da célula. Este método permite comparar até 48 condições em paralelo.É flexível em relação ao tipo de célula usada e às condições de cultura. Usando apenas alguns componentes bem definidos, é reprodutível entre laboratórios. Aplicando fatores pró-fibrosos ou antifibrotic, este protocolo pode ser usado para estudar os processos e terapias subjacentes de doenças fibrosas de qualquer tipo.Demonstrando o procedimento estará Alisa Degrave, uma estudante de doutorado do nosso laboratório, e eu. Para começar, descongele os fibroblastos cardíacos preservados por crio-preservados em um banho de água a 37 graus Celsius por aproximadamente dois minutos até que o frasco fique com apenas uma pequena quantidade de gelo. Em seguida, transfira a suspensão celular em sentido de gota usando uma pipeta sorológica de dois mililitros em um tubo de centrífuga estéril apropriado contendo 10 mililitros de meio de crescimento de fibroblasto.Para a recuperação ideal da célula, enxágue o crio-frasco com um mililitro de FGM e transfira-o para o tubo de centrífuga. Levemente resuspenque as células e transfira para um frasco de cultura celular. Reponha a FGM a cada dois dias durante cinco dias ou até que as células tenham atingido 80% de confluência.Depois de aspirar o meio das células cultivadas, lave as células com seis mililitros de PBS e aspira, em seguida, adicione seis mililitros do reagente de dissociação celular às células e incuba até que o descolamento celular seja visível. Neutralizar a atividade enzimática adicionando seis a 12 mililitros de FGM às células desalojadas no reagente da associação celular. Pipeta suavemente para cima e para baixo quatro a oito vezes usando uma pipeta sorológica de 10 mililitros para garantir uma suspensão unicelular e transferir as células para um tubo fresco de coleta de 50 mililitros.Verifique o rendimento com a ajuda de um contador automático de células de acordo com as instruções do fabricante e pelota para baixo das células. Após a centrifugação, aspire o supernasce, flick o tubo para desalojar a pelota e resuspensar as células em FGM. Em seguida, coe a suspensão celular através de um filtro de célula de malha de 40 micrômetros, em seguida, usando um contador celular automatizado, avalie o número celular e a viabilidade por exclusão elétrica de corrente elétrica para garantir números celulares confiáveis antes de prosseguir com tecidos conjuntivos projetados ou preparação de ECT.Para se preparar para a ECT, ajuste a suspensão celular para as 8,9 milhões de células por mililitro a 20 a 25 graus Celsius adicionando FGM e mantendo as células no gelo. Transfira todos os outros tubos contendo os componentes individuais da mistura de hidrogel ECT para gelo e pré-esfrie um tubo vazio de centrífuga de 50 mililitros para preparar a mistura. Comece a preparar a mistura de hidrogel ECT adicionando componentes descritos no texto ao tubo de centrífuga pré-refrigerado de 50 mililitros evitando a formação de bolhas de ar.Em primeiro lugar, pipeta o colágeno solúvel ácido I hidrogel em uma pipeta sorológica com uma ponta larga de furo. Ajuste o teor de sal da solução de colágeno adicionando o DMEM enquanto gira suavemente o tubo para uma mistura adequada. Para neutralizar o pH, adicione 0,2 hidróxido de sódio molar enquanto gira o tubo e confirme a neutralização observando a cor vermelha do indicador vermelho fenol.Em seguida, adicione a suspensão da célula em sentido baixo enquanto gira suavemente o tubo. Misture a suspensão gentilmente encanando para cima e para baixo apenas uma vez usando uma pipeta sorológica com uma ponta larga para evitar a formação de bolhas e minimizar o estresse da tesoura. Gire suavemente o tubo 10 vezes para misturar completamente.Mantenha o tubo de centrífuga contendo mistura de hidrogel ECT no gelo durante todo o processo de fundição. Molhe uma ponta de pipeta de um mililitro na mistura de hidrogel ECT, depois distribua 180 microliters de mistura de hidrogel uniformemente em cada molde da placa de fundição de 48 poços evitando forças excessivas de cisalhamento que podem afetar a integridade da montagem da matriz de colágeno e garantindo que toda a placa termine em 15 a 20 minutos. Certifique-se de que um laço completo se forme dentro do molde, pois a distribuição descontínua da mistura ECT impedirá uma formação completa do anel ECT.Evite a tubulação no poço interno e a formação de bolhas durante a pipetação para garantir uma fundição uniforme de hidrogel ECT para formação homogênea e funcional do tecido. Coloque cuidadosamente a placa de fundição de 48 poços dentro da incubadora de cultura celular para reconstituir a mistura de hidrogel ECT por 15 a 30 minutos. Após a incubação, parece gel e opaco.Adicione 600 microliters de 37 graus Celsius quente FGM por poço ao longo da parede suavemente para evitar o descolamento de ECT a partir da parte inferior. Substitua o meio todos os dias por 500 microliters de FGM até a análise. Nos pontos de tempo desejados, use um microscópio estéreo para gravar imagens microscópicas das vistas superiores e laterais da ECT.Use um programa de processamento de imagens para realizar uma análise de varredura de linha. Defina uma escala e use a ferramenta de linha reta para rastrear e medir os diâmetros da ECT em um mínimo de seis posições por braço em cada plano de imagem. Imagem a placa de fundição de 48 poços sob um dispositivo de gravação com uma câmera de varredura de área integrada colocada a uma distância fixa equipada com um sensor de imagem monocromática de alta resolução e uma fonte de luz quase UV.Realize a detecção automatizada das pontas dos polos contendo corante fluorescente para maximizar o contraste. Meça a distância entre os polos dos registros diários usando uma análise automatizada executando as imagens gravadas em software para detectar pixels brilhantes de alto contraste em um fundo escuro ou em um programa de processamento de imagens. Remova o ECT dos postes de retenção e insira um gancho de transferência e um laço ECT.Em seguida, transfira o ECT para dois ganchos fixados no braço estacionário e o braço transdutor de um riometro mecânico dinâmico extensal equipado com um banho de órgão temperado de 37 graus Celsius cheio de PBS. Aplique tensão uniaxial a uma taxa linear constante, definindo o riometro em aproximadamente 1% da distância inicial entre os ganchos por segundo. Uma taxa de alongamento constante de 0,03 milímetros por segundo pode ser usada com dimensões típicas de ECT.Rasgue a força do transdutor e inicie o trecho. Continue registrando até o ponto de ruptura da ECT após normalizar a força medida por área transversal e plote a curva de tensão determinando diferentes parâmetros biomecânicos. Pouco antes do tecido iniciar a micro fratura, o limite superior da região elástica corresponde ao ponto de rendimento e sua tensão é uma medida de elasticidade tecidual.A região de plástico está entre o ponto de rendimento e o ponto de falha. O ponto de falha corresponde a uma queda repentina do estresse devido à ruptura do tecido, definindo a tensão final que é uma medida de extensibilidade tecidual. O terceiro ponto de medição corresponde à força máxima definida pelo maior estresse que o tecido pode suportar sem quebrar durante o trecho.A resiliência e resistência dada pela área sob a curva corresponde à energia absorvida pelo tecido até o ponto de rendimento e ponto de falha, respectivamente. Para cada curva obtida, a inclinação da parte linear da região elástica corresponde ao módulo de Young, também conhecido como módulo elástico. É uma propriedade mecânica que mede a rigidez do tecido.Usando este protocolo, a compactação e contração da ECT sob condições de controle e na presença de FCS se seguiu algumas horas após o casting e notavelmente aumentou até o quinto dia. Quando a ECT foi tratada com o inibidor de polimerização de actina Latrunculin A, a compactação da ECT foi reduzida conforme indicado pela área transversal significativamente maior em comparação com o controle. A contração dos tecidos foi avaliada durante os cinco dias de cultura.Na ausência de Latrunculin A, a contração aumentou gradualmente até o quinto dia, atingindo cerca de 40% de contração. No entanto, a presença de Latrunculin A afetou a contração tecidual, resultando em apenas uma contração máxima de cerca de 20%. A inibição da polimerização de actina levou a uma redução significativa de cerca de 50% na rigidez tecidual sobre o controle.Esses resultados demonstram que a integridade citoesquelética actin é essencial para a compactação, contração e endurecimento da ECT. É importante selecionar uma solução confiável e de alta qualidade de colágeno e garantir que uma suspensão unicelular com alta viabilidade seja usada para reconstituir tecidos conjuntivos projetados.

Research

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Protocol for Relative Hydrodynamic Assessment of Tri-leaflet Polymer Valves

Protocolo Relativo Avaliação hidrodinâmica de Tri-folheto polímero Válvulas

Limitations of currently available prosthetic valves, xenografts, and homografts have prompted a recent resurgence of developments in the area of ...

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Uma plataforma Novel Alongamento para Aplicações em Celular e Tecidual mechanobiology

Tools that allow the application of mechanical forces to cells and tissues or that can quantify the mechanical properties of biological tissues have ...

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

Recuperação cirúrgica, isolamento e<em&gt; In vitro</em&gt; Expansão de humanos anteriores Cruciate células do ligamento derivados para aplicações em engenharia de tecidos

Injury to the ACL is a commonly encountered problem in active individuals. Even partial tears of this intra-articular knee ligament lead to biomechanical ...

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Produção, Caracterização e usos potenciais de uma mucosa esofágica Modelo 3D Human Tissue-engenharia

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

aplicações de<em&gt; In Vivo</em&gt; Teste Funcional do Rato tibial anterior para a Avaliação da engenharia de tecidos Repair Músculo Esquelético

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...

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