Name: fibroblast derived human engineered connective tissue for screening applications
Uploaded: 2021-08-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications at JoVE.com

Эта работа была поддержана Немецким кардиологическим обществом (DGK Research Fellowship for GLS) и Немецким исследовательским фондом (DFG в рамках проекта IRTG 1816 для GLS и AD; DFG 417880571 и DFG TI 956/1-1 для MT; SFB 1002 TP C04 для MT и WHZ; SFB 1002 TP S01 для WHZ; и EXC 2067/1-390729940J для WHZ). WHZ поддерживается Федеральным министерством науки и образования Германии (BMBF через проект IndiHEART) и Fondation Leducq (20CVD04). MT, WHZ и SL поддерживаются Немецким центром сердечно-сосудистых исследований (DZHK).

Все шаги должны осуществляться в вытяжках биобезопасности класса II, установленных в лабораториях под уровнем локализации 1. В зависимости от местных правил и типа манипуляций, которые должны быть выполнены, таких как вирусно-опосредованный перенос генов, уровень сдерживания должен бы?...

Представленный протокол описывает генерацию ЭСТ от первичного муковисцидоза человека, что позволяет изучить механическое воздействие этих клеток на их внеклеточную матричную среду и наоборот.
Фибробласты должны быть расширены, чтобы получить достаточное количество к...

Основным препятствием в изучении фиброзных заболеваний является отсутствие репрезентативных 3D-моделей тканей человека, которые дают представление о поведении фибробластов и их патологических производных. Для изучения фиброзных процессов стандартные системы 2D-культур являются неоптимальными, поскольку изолированные фибробласты быстро трансформенцируются в α гладкомышечные актины (СМА), экспрессирующие миофибробласты при культивировании на несоответствующих 2D-субстратах1,2,3. Таким образом, фибробласты в стандартной 2D культуре не отражают регулярный «здоровый» тканевый фенотип3,4,5,6. Культуры на гибких субстратах были введены для моделирования нефиброзной (10 кПа) и фиброзной (35 кПа) тканевой среды7, но им не хватает третьего измерения, что очень важно в отношении патофизиологии. Тканевая инженерия дает возможность преодолеть это ограничение, позволяя культивировать фибробласты в определенном и экспериментально перестраиваемом внеклеточном матриксе (ECM) -контексте, например, путем изменения клеточности, состава ECM и концентрации ECM, все из которых могут определять биомеханику ткани.
Различные 3D-модели были сгенерированы с использованием фибробластов. Плавающие диски и микросферы были одними из первых и демонстрируют, что коллаген ремоделируется и уплотняется в зависимости от времени. Фибробласты оказывают тракционные силы на коллагеновые фибриллы, процесс, который может быть облегчен добавлением профиброзных агентов, таких как трансформирующий фактор роста бета-1 (TGF-β1)8,9,10,11,12,13,14,15,16. Однако свободно плавающие культуры не допускают контролируемой внешней нагрузки и, следовательно, представляют собой непрерывно уменьшающиеся или уплотняющиеся модели. Листовидные инженерные ткани открыли возможность изучения гомеостатической регуляции биомеханических свойств тканей, а именно посредством одно-, би-, многоосевого или циклического тестирования деформаций17,18,19,20. Эти модели были использованы, например, для демонстрации влияния клеточного числа на жесткость тканей, которая, как было установлено, положительно коррелирует с целостностью цитоскелета и сократимостью цитоскелета актомиозина.18,19. Однако важно отметить, что превращения силы в деформацию осложняются неравномерной деформацией тканей вокруг точек зажима силовых преобразователей и опорных точек. Это внутреннее ограничение может быть обойдено собачьими костями или кольцеобразными тканями, предлагая некоторое укрепление тканей в опорных точках.21,22,23. Кольцеобразные ткани могут быть получены путем распределения клеточно-коллагенового гидрогеля в кольцеобразные формы. Когда гидрогель сжимается, вокруг несжимаемого внутреннего стержня формы образуется ткань, которая обеспечивает сопротивление дальнейшему сокращению ткани.24,25,26,27. После начального и, как правило, максимального уплотнения ткани также могут быть перенесены в регулируемые спейсеры для дальнейшего сдерживания круговой ЭСТ на определенной длине ткани.3,24,25,26,27,28,29,30. Биофизические свойства могут быть оценены в стандартных горизонтальных или вертикальных устройствах напряжения напряжения с соответствующими тензодатчиками при однонаправленной или динамической деформации3. Поскольку ткани имеют в значительной степени однородную круговую структуру и могут удерживаться на стержнях / крючках (точках крепления и / или преобразователях силы), хотя они все еще могут заключать области сжатия вокруг нагрузочных стержней, этот формат позволяет более равномерно варьировать деформацию по сравнению с зажимом.3. Кроме того, закрепленные ткани вызывают биполярную форму клеток, и клетки приспосабливаются к тканевым силам путем удлинения вдоль силовых линий, способствующих анизотропному вытяжению.31,32,33,34,35,36. Ранее мы применяли кольцеобразную ЭСТ от сердечных фибробластов крыс и человека (МВ) вокруг одного жесткого полюса в экспериментах с функциональным напряжением-деформацией и проводили исследования усиления и потери функции с использованием вирусно трансдуцированных фибробластов.24,25,26 и фармакологические исследования37. Кроме того, мы могли бы определить половые различия при муковисцидозе, опосредованном муковисцидозом, в модели ЭСТ.27.
Следующий протокол для генерации ЭСТ человека, примером которого является первичный человеческий муковисцидоз, полученный в виде криоконсервированного CF от коммерческих поставщиков (см. Таблицу материалов), сочетает в себе преимущества кольцеобразных тканей с простым и быстрым способом получения макроскопических тканей для 48-луночной платформы, предназначенной для параллельного тестирования с высоким содержанием.
Важно отметить, что модель ЭСТ не ограничена конкретным типом фибробластов, с документированным использованием в исследовании других фибробластов, например, фибробластов кожи38,39. Более того, фибробласты из биопсии пациента работают одинаково хорошо, и выбор фибробластов в конечном итоге зависит от научного вопроса, который необходимо решить.
Платформа, используемая для генерации ЭСТ, описанная в этом протоколе, представляет собой коммерчески доступную 48-луночную 3D-пластину для культивирования клеток/тканей (рисунок 1A). Описаны способы подготовки, культивирования и контроля образования и функционирования ЭСТ при заданной геометрии и механической нагрузке с помощью 48-луночной пластины. Сформированные ЭСТ удерживаются встроенными гибкими полюсами, и механическая нагрузка может быть точно настроена в соответствии с конечной целью с помощью полюсов с различной твердостью (значение Shore A 36-89), влияя на их жесткость изгиба. Рекомендуются столбы с берегом значения А 46. Протокол, кроме того, совместим с ранее описанной пользовательской круглой формой, где ЭСТ удерживается вокруг одного жесткого стержня37. Размеры этой формы приведены на рисунке 1B.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62700/62700fig01.jpg"> Рисунок 1: Схематическое изображение литейных форм. (A) Технический чертеж и размеры литейной формы с двумя гибкими полюсами. Форма содержит внутреннюю окружность, ограниченную короткой стенкой, которая удерживает двойные подпорные столбы в основном корпусе формы. Гибкие полюса имеют свободное горизонтальное расстояние друг от друга и соединены у основания. Пресс-форма допускает объем литья 180 мкл. Лунка каждой формы допускает объемную емкость не менее 600 мкл питательной среды. Различные композиции материалов могут быть использованы для получения столбов с определенной жесткостью (например, TM5MED-TM9MED). (B) Технический чертеж и размеры кольцеобразной формы с одним жестким стержнем. Это альтернативная форма с различной геометрией и механической средой, которая может использоваться с протоколом литья ECT37. Кольцеобразный метод сборки пресс-форм был адаптирован из опубликованных более крупных форматов28,41. Вкратце, способ включает в себя (1) импринтирование политетрафторэтиленовых (PTFE) формовочных распорок (диаметром 8 мм) в полидиметилсилоксане (PDMS, силикон), налитых в стеклянную посуду (диаметр 60 мм), и (2) фиксацию держателя полюса PDMS (диаметр 1,5 мм) концентрически внутри образовавшейся полой полости, которая служит для (3) удержания съемного полюса (силиконовая трубка диаметром 4 мм). Образовавшееся полое пространство позволяет увеличить объем литья 180 мкл. Каждая стеклянная тарелка может вмещать несколько отпечатанных форм (на примере с 5 формами) и имеет емкость до 5 мл питательной среды. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62700/62700fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell culture reagents:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase Solution</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>SCR005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissociation reagent &#8211; TrypLE Express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12604013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM) powder, high glucose</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12100061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s phosphate buffered saline (DPBS), pH 7.2, -Ca2+, -Mg2+</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGM-2 Fibroblast Growth Medium-2 BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBM&#160;Fibroblast Growth Basal Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGM-2 Fibroblast Growth Medium-2 SingleQuots,&#160;Supplements and Growth Factors</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast Growth Medium 3 KIT</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-23130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast Basal Medium 3</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-23230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth Medium 3 SupplementPack</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-39350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin (10000 U/mL)/ Streptomycin (10000 &#956;L/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide solution (NaOH) 1.0 N</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2770-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell sources:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal human cardiac fibroblasts from the ventricle (NHCF-V)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-2904</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cardiac Fibroblasts (HCF-c)</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-12375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Cardiac Fibroblasts (HCF-p)</td>
			<td>PromoCell</td>
			<td>C-12377</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary human foreskin fibroblasts-1 (HFF-1)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>SCRC- 1041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen sourses:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type I (bovine) in 0.01 M HCl</td>
			<td>LLC Collagen Solutions</td>
			<td>FS22024</td>
			<td>6-7 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type I (rat tail) in 0.02 M HCl</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354236</td>
			<td>~4 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drugs:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latrunculin-A (Lat-A)</td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>BML-T119-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic ware:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture plastic ware</td>
			<td>Sarstedt and Starlab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh cell strainer (Nylon, pore size 40 &#956;m)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>myrPlate-uniform</td>
			<td>myriamed GmbH</td>
			<td>TM5 med</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipettes wide opening, sterile (10 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>07-200-619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Specific instruments:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bi-telecentric CORE lens for 1/2&#8243; detectors</td>
			<td>OptoEngineering</td>
			<td>TCCR12096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Area scan camera Basler ace acA4024</td>
			<td>Basler</td>
			<td>107404</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fibroblast derived human engineered connective tissue for screening applications

Фибробласты являются фенотипически высокодинамичными клетками, которые быстро трансформенцируются в миофибробласты в ответ на биохимические и биомеханические раздражители. Современное понимание фиброзных процессов, включая сердечный фиброз, остается плохим, что препятствует разработке новых антифиброзных методов лечения. Контролируемые и надежные модельные системы человека имеют решающее значение для лучшего понимания патологии фиброза. Это высоковоспроизводимый и масштабируемый протокол для генерации инженерных соединительных тканей (ЭСТ) в 48-луночной литейной пластине для облегчения исследований фибробластов и патофизиологии фиброзной ткани в 3-мерной (3D) среде. ЭСТ генерируются вокруг полюсов с перестраиваемой жесткостью, что позволяет проводить исследования при определенной биомеханической нагрузке. При определенных условиях нагрузки могут быть изучены фенотипические адаптации, контролируемые клеточно-матричными взаимодействиями. Параллельное тестирование возможно в формате 48 скважин с возможностью анализа времени и времени нескольких параметров, таких как уплотнение и сжатие тканей против нагрузки. Из этих параметров можно изучать биомеханические свойства, такие как жесткость и эластичность тканей.

ЭСТ достигает около 95% уплотнения по сравнению с исходным объемом гидрогеля клетки-коллагена в течение первых 24 ч. Уплотнение и сжатие тканей в контролируемых условиях и в присутствии FCS наступает через несколько часов после отливки и заметно увеличивается до 5 дня (рисунок 5A...

Watch this Scientific Journal Video about Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications at JoVE.com

Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

Здесь представлен протокол для генерации инженерных соединительных тканей для параллельной культуры из 48 тканей в многолуночной пластине с двойными полюсами, подходящей для механистических исследований, моделирования заболеваний и скрининговых приложений. Протокол совместим с фибробластами из разных органов и видов и иллюстрируется здесь с первичными сердечными фибробластами человека.

Фибробласт, полученный из искусственной соединительной ткани человека для скрининга

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...

Этот протокол позволяет фибробластам создавать и организовывать свою собственную среду в определенных механических условиях. Это приводит к образованию анизотропных тканей с жесткостью и матричными композициями, сопоставимыми с естественной средой клетки. Этот метод позволяет сравнивать до 48 условий параллельно.Он является гибким по отношению к используемому типу клеток и условиям культивирования. Используя только несколько четко определенных компонентов, он воспроизводится между лабораториями. Применяя профиброзные факторы или антифиброзные препараты, этот протокол может быть использован для изучения основных процессов и методов лечения фиброзных заболеваний любого рода.Демонстрировать процедуру будут Алиса Дегрейв, аспирант из нашей лаборатории, и я. Для начала разморозьте крио-сохраненные сердечные фибробласты на водяной бане при 37 градусах Цельсия в течение примерно двух минут, пока во флаконе не останется только небольшое количество льда. Затем перенесите клеточную суспензию по каплям с помощью серологической пипетки с двумя миллилитрами в соответствующую стерильную центрифужную трубку, содержащую 10 миллилитров питательной среды фибробластов.Для оптимального извлечения клеток промыть криокомандр одним миллилитом калечащих операций на женских половых органах и перенести его в трубку центрифуги. Аккуратно повторно суспендировать клетки и перенести в колбу клеточной культуры. Восполняйте калечащие операции на женских половых органах через день в течение пяти дней или до тех пор, пока клетки не достигнут 80%-ной концентрации.После аспирации среды из культивируемых клеток промыть клетки шестью миллилитрами PBS и аспирата, затем добавить шесть миллилитров реагента диссоциации клеток к клеткам и инкубировать до тех пор, пока не будет видна отслойка клеток. Нейтрализуют ферментативную активность, добавляя от шести до 12 миллилитров КОЖПО к вытесненным клеткам в клеточном ассоциативном реагенте. Аккуратно пипетку вверх и вниз четыре-восемь раз, используя 10-миллилитровую серологическую пипетку, чтобы обеспечить одноклеточную суспензию и перенести клетки в свежую 50-миллилитровую сборную трубку.Проверьте выход с помощью автоматизированного счетчика ячеек в соответствии с инструкциями производителя и гранулируйте ячейки. После центрифугирования аспирируйте супернатант, щелкните трубкой, чтобы выбить гранулу и повторно суспендировать клетки при калечащих операциях на женских половых органах. Затем процедите клеточную суспензию через 40-микрометровый сетчатый клеточный сетчатый фильтр, затем, используя автоматизированный счетчик клеток, оцените количество клеток и жизнеспособность путем исключения электрического тока, чтобы обеспечить надежные номера клеток, прежде чем приступать к инженерным соединительным тканям или препарату ЭСТ.Чтобы подготовиться к ЭСТ, отрегулируйте клеточную суспензию до 8,9 миллиона клеток на миллилитр при 20-25 градусах Цельсия, добавив FGM и удерживайте клетки на льду. Переложите все остальные трубки, содержащие отдельные компоненты гидрогелевой смеси ЭСТ, на лед и предварительно охладите пустую 50-миллилитровую центрифужную трубку для приготовления смеси. Начинают приготовление гидрогелевой смеси ЭСТ с добавления компонентов, описанных в тексте, в предварительно охлажденную 50-миллилитровую центрифужную трубку, предотвращая образование пузырьков воздуха.Во-первых, пипетка кислоторастворимого коллагена типа I гидрогеля в серологическую пипетку с широким наконечником отверстия. Отрегулируйте содержание соли в растворе коллагена, добавив DMEM, осторожно закручивая трубку для правильного смешивания. Чтобы нейтрализовать рН, добавляют 0,2 молярного гидроксида натрия во время закручивания трубки и подтверждают нейтрализацию, наблюдая за красным цветом индикатора фенол-красного цвета.Затем добавьте клеточную суспензию по каплям, осторожно закручивая трубку. Перемешайте суспензию, осторожно прокладывая трубы вверх и вниз только один раз, используя серологическую пипетку с широким наконечником отверстия, чтобы избежать образования пузырьков и свести к минимуму напряжение сдвига. Аккуратно закрутите трубку 10 раз для тщательного перемешивания.Держите центрифужную трубку, содержащую смесь гидрогеля ЭСТ, на льду на протяжении всего процесса литья. Смочите наконечник пипетки в один миллилитр в гидрогелевой смеси ЭСТ, затем равномерно распределите 180 микролитров гидрогелевой смеси в каждую форму 48-луночной литейной пластины, избегая чрезмерных сил сдвига, которые могут повлиять на целостность сборки коллагеновой матрицы и гарантируя, что вся пластина закончится за 15-20 минут. Убедитесь, что в пресс-форме образуется полная петля, поскольку прерывистое распределение смеси ЭСТ предотвратит полное образование кольца ЭСТ.Избегайте пипетки во внутреннюю скважину и образования пузырьков во время пипетки, чтобы обеспечить равномерное литье гидрогеля ЭСТ для формирования однородной и функциональной ткани. Осторожно поместите 48-луночную литейную пластину внутрь инкубатора клеточных культур, чтобы восстановить гидрогелевую смесь ЭСТ в течение 15-30 минут. После инкубации он выглядит гелеобразным и непрозрачным.Аккуратно добавьте 600 микролитров теплого КЖПО 37 градусов по Цельсию на скважину вдоль стены, чтобы избежать отслоения ЭСТ от дна. Заменяйте среду каждый день 500 микролитрами калечащих операций на женских половых органах до анализа. В нужных временных точках используйте стереомикроскоп для записи микроскопических изображений верхнего и бокового видов ЭСТ.Используйте программу обработки изображений для выполнения анализа сканирования строки. Установите шкалу и используйте инструмент «Прямая линия» для отслеживания и измерения диаметров ЭСТ не менее чем в шести положениях на руку в каждой плоскости изображения. Представьте себе 48-луночную литейную пластину под записывающим устройством со встроенной камерой сканирования площади, размещенной на фиксированном расстоянии, оснащенной монохромным датчиком изображения высокого разрешения и источником света, близким к ультрафиолетовому излучению.Выполните автоматическое обнаружение наконечников полюсов, содержащих флуоресцентный краситель для максимизации контрастности. Измерьте расстояние между полюсами из ежедневных записей с помощью автоматизированного анализа, запустив записанные изображения на программном обеспечении для обнаружения высококонтрастных ярких пикселей на темном фоне или программе обработки изображений. Снимите ЭСТ с опорных столбов и вставьте передающий крюк и петлю ЭСТ.Затем перенесите ЭСТ на два крючка, зажатых к неподвижному рычагу, и рычаг преобразователя удлинительного динамического механического риометра, оснащенного закаленной органной ванной с температурой 37 градусов Цельсия, заполненной PBS. Применяйте одноосное натяжение с постоянной линейной скоростью, установив риометр примерно на 1% от начального расстояния между крючками в секунду. Постоянная скорость растяжения 0,03 миллиметра в секунду может быть использована с типичными размерами ЭСТ.Разорвите усилие преобразователя и инициируйте растяжение. Ведите запись до точки разрыва ЭСТ после нормализации измеряемой силы по площади поперечного сечения и построения кривой напряжения-деформации, определяющей различные биомеханические параметры. Непосредственно перед тем, как ткань начинает микроразрыв пласта, верхняя граница эластичной области соответствует температуре текучести, а ее деформация является мерой эластичности ткани.Пластиковая область находится между температурой текучести и точкой отказа. Точка отказа соответствует внезапному падению напряжения из-за разрыва ткани, определяя конечную деформацию, которая является мерой растяжимости ткани. Третья точка измерения соответствует максимальной прочности, определяемой самым высоким напряжением, которое ткань может выдержать, не ломаясь во время растяжения.Упругость и ударная вязкость, задаваемые областью под кривой, соответствуют энергии, поглощаемой тканью, вплоть до температуры текучести и точки отказа соответственно. Для каждой полученной кривой наклон линейной части упругой области соответствует модулю Юнга, также известному как модуль упругости. Это механическое свойство, которое измеряет жесткость ткани.Используя этот протокол, уплотнение и сжатие ЭСТ в контрольных условиях и в присутствии FCS последовали через несколько часов после заброса и заметно увеличились до пятого дня. Когда ЭСТ обрабатывали ингибитором полимеризации актина Латрункулином А, уплотнение ЭСТ уменьшали, о чем свидетельствует значительно более высокая площадь поперечного сечения по сравнению с контролем. Сокращение тканей оценивали в течение пяти дней посева.При отсутствии латрункулина А сокращение постепенно увеличивалось до пятого дня, достигая около 40% сокращения. Тем не менее, присутствие латрункулина А повлияло на сокращение ткани, что привело только к 20% максимальному сокращению. Ингибирование полимеризации актина привело к значительному снижению примерно на 50% жесткости тканей по сравнению с контролем.Эти результаты показывают, что целостность актина цитоскелета необходима для уплотнения, сокращения и жесткости ЭСТ. Важно выбрать надежный, высококачественный коллагеновый раствор и убедиться, что одноклеточная суспензия с высокой жизнеспособностью используется для восстановления инженерных соединительных тканей.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Protocol for Relative Hydrodynamic Assessment of Tri-leaflet Polymer Valves

Протокол Относительная оценка гидродинамических трехстворчатый клапан полимеров

Limitations of currently available prosthetic valves, xenografts, and homografts have prompted a recent resurgence of developments in the area of ...

A Novel Stretching Platform for Applications in Cell and Tissue Mechanobiology

Роман Растяжка Платформа для приложений в клеточной и тканевой Mechanobiology

Tools that allow the application of mechanical forces to cells and tissues or that can quantify the mechanical properties of biological tissues have ...

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

Surgical Retrieval, Isolation and In vitro Expansion of Human Anterior Cruciate Ligament-derived Cells for Tissue Engineering Applications

Хирургическое извлечение, Изоляция и<em&gt; В пробирке</em&gt; Расширение человека передней крестообразной связки клетки, полученные из за тканевой инженерии

Injury to the ACL is a commonly encountered problem in active individuals. Even partial tears of this intra-articular knee ligament lead to biomechanical ...

Production, Characterization and Potential Uses of a 3D Tissue-engineered Human Esophageal Mucosal Model

Производственные, характеристики и потенциальные возможности использования в 3D тканевой инженерии человека пищевода слизистой модели

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Применения<em&gt; В Vivo</em&gt; Функциональное тестирование Крысы передней большеберцовой для оценки Tissue Engineered скелетной мускулатуре Ремонт

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...

Automated Contraction Analysis of Human Engineered Heart Tissue for Cardiac Drug Safety Screening

Автоматизированный анализ Сужение человеческого Engineered ткани сердца для скрининга сердца безопасности лекарственных средств

Cardiac tissue engineering describes techniques to constitute three dimensional force-generating engineered tissues. For the implementation of these ...

Custom Engineered Tissue Culture Molds from Laser-etched Masters

Пользовательские инженерных форм культуры ткани от мастеров лазером

As the field of tissue engineering has continued to mature, there has been increased interest in a wide range of tissue parameters, including tissue ...

Two Methods for Decellularization of Plant Tissues for Tissue Engineering Applications

Два метода для Decellularization растительных тканей для приложений, инженерия тканей

The autologous, synthetic, and animal-derived grafts currently used as scaffolds for tissue replacement have limitations due to low availability, poor ...

Applications for Open Source Microplate-Compatible Illumination Panels

Приложения для microplate-совместимых панелей для освещения с открытым исходным кодом

Microplates are commonly used in the modern laboratory environment for a wide variety of tasks both in small-scale laboratory benchtop operations as well ...

Tissue-Engineered Graft for Circumferential Esophageal Reconstruction in Rats

Ткань-инженерный трансплантат для обрезанной реконструкции пищевода у крыс

The use of biocompatible materials for circumferential esophageal reconstruction is a technically challenging task in rats and requires an optimal implant ...