Name: brain pericyte calcium and hemodynamic imaging in transgenic mice in vivo
Uploaded: 2021-11-20T13:00:00
Duration: 14 min 22 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Brain Pericyte Calcium and Hemodynamic Imaging in Transgenic Mice In Vivo at JoVE.com

J. 메자는 미틱스와 연구 매니토바의 펠로우십에 의해 지원됩니다. 이 사업을 위한 기금은 건강 캐나다와 아즈릴리 재단의 재정 지원을 통해 매니토바와 뇌 캐나다 대학에서 시작 자금, 연구 매니토바, 매니토바 의료 서비스 재단, 신생 기금에 의해 제공되었다. 여기에 표현된 견해는 반드시 보건부 장관이나 캐나다 정부의 견해를 나타내는 것은 아닙니다.

<ol>
	<li>Armulik, A., Genov&#233;, G., Betsholtz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes:+Developmental,+physiological,+and+pathological+perspectives,+problems,+and+promises.">Pericytes: Developmental, physiological, and pathological perspectives, problems, and promises.</a> Developmental Cell. 21 (2), 193-215 (2011).</li><li>Armulik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+regulate+the+blood-brain+barrier.">Pericytes regulate the blood-brain barrier.</a> Nature. 468 (7323), 557-561 (2010).</li><li>Berthiaume, A. -. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+remodeling+of+pericytes+in+vivo+maintains+capillary+coverage+in+the+adult+mouse+brain.">Dynamic remodeling of pericytes in vivo maintains capillary coverage in the adult mouse brain.</a> Cell Reports. 22 (1), 8-16 (2018).</li><li>Rungta, R. L., Chaigneau, E., Osmanski, B. -. F. F., Charpak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+compartmentalization+of+functional+hyperemia+from+the+synapse+to+the+pia.">Vascular compartmentalization of functional hyperemia from the synapse to the pia.</a> Neuron. 99 (2), 362-375 (2018).</li><li>Shen, Z., Lu, Z., Chhatbar, P. Y., O'Herron, P., Kara, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+artery-specific+fluorescent+dye+for+studying+neurovascular+coupling.">An artery-specific fluorescent dye for studying neurovascular coupling.</a> Nature Methods. 9 (3), 273-276 (2012).</li><li>Gonzales, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+pericytes+determine+the+direction+of+blood+flow+at+capillary+junctions.">Contractile pericytes determine the direction of blood flow at capillary junctions.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (43), 27022-27033 (2020).</li><li>Hartmann, D. a., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericyte+structure+and+distribution+in+the+cerebral+cortex+revealed+by+high-resolution+imaging+of+transgenic+mice.">Pericyte structure and distribution in the cerebral cortex revealed by high-resolution imaging of transgenic mice.</a> Neurophotonics. 2 (4), 041402 (2015).</li><li>Grant, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organizational+hierarchy+and+structural+diversity+of+microvascular+pericytes+in+adult+mouse+cortex.">Organizational hierarchy and structural diversity of microvascular pericytes in adult mouse cortex.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 39 (3), 411-425 (2017).</li><li>Hill, R. A., Tong, L., Yuan, P., Murikinati, S., Gupta, S., Grutzendler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+blood+flow+in+the+normal+and+ischemic+brain+is+controlled+by+arteriolar+smooth+muscle+cell+contractility+and+not+by+capillary+pericytes.">Regional blood flow in the normal and ischemic brain is controlled by arteriolar smooth muscle cell contractility and not by capillary pericytes.</a> Neuron. 87 (1), 95-110 (2015).</li><li>28345 - STOCK Tg(RP23-370F21-RCaMP1.07)B3-3Mik/J. Jackson Laboratory Available from: <a target="_blank" href="https://www.jax.org/strain/028345">https://www.jax.org/strain/028345</a> (2021)</li><li>Ohkura, M., Sasaki, T., Kobayashi, C., Ikegaya, Y., Nakai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+genetically+encoded+red+fluorescent+Ca2++indicator+for+detecting+optically+evoked+action+potentials.">An improved genetically encoded red fluorescent Ca2+ indicator for detecting optically evoked action potentials.</a> PLoS ONE. 7 (7), (2012).</li><li>Stobart, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vivo+calcium+imaging+of+astrocytes+reveals+distinct+cellular+compartment+responses+to+sensory+stimulation.">Long-term in vivo calcium imaging of astrocytes reveals distinct cellular compartment responses to sensory stimulation.</a> Cerebral Cortex. 28 (1), 184-198 (2018).</li><li>Stobart, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+circuit+activity+evokes+rapid+astrocyte+calcium+signals+on+a+similar+timescale+to+neurons.">Cortical circuit activity evokes rapid astrocyte calcium signals on a similar timescale to neurons.</a> Neuron. 98 (4), 726-735 (2018).</li><li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+craniotomy+surgery+procedure+for+chronic+brain+imaging.">A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging.</a> JoVE. (12), e680 (2008).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+neural+activity+in+the+primary+somatosensory+cortex+using+Thy1-GCaMP6s+transgenic+mice.">Imaging neural activity in the primary somatosensory cortex using Thy1-GCaMP6s transgenic mice.</a> JoVE. (143), e56297 (2019).</li><li>Ellefsen, K. L., Settle, B., Parker, I., Smith, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+algorithm+for+automated+detection,+localization+and+measurement+of+local+calcium+signals+from+camera-based+imaging.">An algorithm for automated detection, localization and measurement of local calcium signals from camera-based imaging.</a> Cell Calcium. 56 (3), 147-156 (2014).</li><li>Barrett, M. J. P., Ferrari, K. D., Stobart, J. L., Holub, M., Weber, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CHIPS:+an+extensible+toolbox+for+cellular+and+hemodynamic+two-photon+image+analysis.">CHIPS: an extensible toolbox for cellular and hemodynamic two-photon image analysis.</a> Neuroinformatics. 16, 145-147 (2018).</li><li>Hall, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+pericytes+regulate+cerebral+blood+flow+in+health+and+disease.">Capillary pericytes regulate cerebral blood flow in health and disease.</a> Nature. 508 (1), 55-60 (2014).</li><li>Nilsson, H., Aalkjaer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasomotion:+mechanisms+and+physiological+importance.">Vasomotion: mechanisms and physiological importance.</a> Molecular interventions. 3 (2), 79-89 (2003).</li><li>Rungta, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+arbors+in+layer+II+/+III+somatosensory+cortex.">Vascular arbors in layer II / III somatosensory cortex.</a> Communications Biology. , (2021).</li></ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

본 방법은 깊이 스택을 위한 카테터, 2광자 현미경 이미지 수집, 세포 칼슘 신호 영상 생성, 혈역학 키모그래프 생성, 당사의 이미지 처리알고리즘(그림 1)을 이용한 칼슘 및 혈역학 분석을 통해 마우스 꼬리 정맥 주입에 대한 세부 정보를 제공한다(그림 1). 이러한 기술에는 생체 내 이미징 결과를 개선하고 세션 중에 시간, 자원 및 동물 스트레스를 줄이는 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, 꼬리 정맥 주입을 위한 카테터의 사용은 바늘, 주사기 및 마우스의 순환에 주입된 물질의 양을 더 많은 제어를 제공합니다. 또한, 그것은 꼬리 조직에 염료 주입을 방지, 비싼 시약을 절약. 둘째, 우리는 회신 백혈구에 유전으로 인코딩 된 칼슘 센서를 발현하는 트랜스 제닉 마우스를 사용하고 후속 이미징 세션에서 세포 식별 및 이전을 용이하게하는 깊이 z-스택으로 뇌 혈관 네트워크 내에서 국한하는 방법을 보여줍니다. 이것은 pericyte 연구 결과에 있는 중요한 요인이고 적당한 세포분류를6,7를보장합니다. 셋째, 당사는 동적 세포 신호를 측정하기 위한 좋은 출발점인 칼슘 영화와 혈역학 적 선 스캔 데이터를 수집하기 위한 매개 변수를 제공합니다. 마지막으로 이미지 사전 처리(스펙트럼 언믹싱), 칼슘 이미지 분석 및 혈역학 분석(직경, 속도 등)을 위한 여러 가지 접근 방식을 포함하는 포괄적인 이미지 처리 툴박스인 이미지 처리알고리즘(17)을소개합니다. 이러한 알고리즘은 데이터를 빠르고 쉽게 시각화할 수 있도록 플롯을 생성하는 동시에 결과를 분석하는 데 필요한 사용자 전문 지식 수준을 최소화할 수 있습니다. 또한 몇 줄의 코드로 자동화하여 동일한 매개 변수로 여러 데이터 집합을 신속하게 일괄 처리할 수 있습니다. 이를 통해 데이터 시각화와 연구원의 시간 투자를 잠재적으로 향상시킬 수 있습니다.
좋은 칼슘 이미징 데이터를 수집하는 열쇠는 명확한 형광 신호 수집을 위해 레이저 전력 및 PMT 설정을 조정하는 것이지만 전체 칼슘 이벤트를 캡처하기에 충분한 프레임 속도로 데이터를 수집하는 것입니다. 이 프로토콜의 데이터는 초당 10-11 프레임으로 획득되었으며, 이는 흡입 백혈구에서 느린 칼슘 진동을 포착합니다. 분석 중에 분석 결과를 개선할 수 있는 몇 가지 단계도 있습니다. 첫째, 스펙트럼 언믹싱은 형광의 방출 스펙트럼 사이에 상당한 중첩이 있는 경우 유익하다(도2). 플루오레세인-엑스트라넨은 혈역학측정에일반적으로 사용되는 비용 효율적이고 시판되는 dextran 컨쥬게이트이기 때문에 이 프로토콜에 사용되었다. 스펙트럼 언믹스는 칼슘 신호의 향상된 검출을 위한 데이터를 정리하는 것을 돕습니다, 그러나 더 좁은 방출 스펙트럼을 가진 대체 형광은 또한 사용될 수 있었습니다. 둘째, ROI(도3)로세포 구조를 직접 선택하는 것은 소마 또는 공정 분기와 같은 상이한 세포 영역에서 칼슘 이벤트를 분류하는 데 유용하다. 활동 기반 ROI 선택(그림 4)16개별 칼슘 이벤트에 대한 보다 많은 공간 및 측량 정보를 제공한다. 이것은 주어진 지역에 있는 칼슘 사건의 빈도 또는 그밖 세포 지역에 사건의 전파를 결정할 때 도움이 될 수 있습니다. 이미징 데이터를 분석하기 위해 프로그래밍 소프트웨어를 사용하면 데이터가 일괄 처리될 때 연구원의 시간을 절약할 수 있지만 최적의 결과를 위해 매개 변수를 조정하려면 초기 시간 투자가 필요합니다. 가장 중요한 요소는 활성 영역의 예상 크기(μm2)와신호의 지속 시간(최소 신호 시간 및 최대 신호 시간을 정의해야 합니다)입니다. 연구원은 데이터에 맞는 매개 변수를 가장 잘 결정하기 위해 먼저 몇 가지 예 T 시리즈 영화를 검사해야합니다. 마지막으로, 현미경에서 획득한 품질이 좋지 않는 데이터는 칼슘 및 혈역학의 분석을 크게 방해할 수있습니다(그림 6). 따라서, 초기에 현미경 획득 설정을 최적화하기 위해주의를 기울여야 한다. 이러한 요인을 염두에 두고, 다른 조직 또는 세포 유형에서 다른 동적 세포 신호(예: 형광나트륨, 칼륨, 대사 산물 또는 전압 변동)의 칼슘 이미징 또는 분석에 맞게 조정할 수 있는 이 프로토콜.
이 프로토콜에는 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 첫째, 데이터는 뇌 활동에 영향을 미치고 혈류에 영향을 미칠 수있는 마취 하에 수집됩니다. 유사한 화상 진찰은 더 생리적인 결과를 위한 머리 고정을 받아들이기 위하여 훈련된 깨어 있는 마우스에서 행해질 수 있습니다. 또한 생체 내에서3차원 세포및 혈관의 2차원 이미지를 수집한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 따라서, 우리는 한 번에 혈관의 단일 단면에 있는 이 세포 또는 혈류 내의 칼슘 사건의 파벌을 포착할 수 있습니다.
주목할 또 다른 제한사항은 2광자 칼슘 이미징이 초점 비행기 안팎의 움직임이 칼슘 변동으로 오인될 수 있는 모션 아티팩트에 민감하다는 것입니다. 이 프로토콜은 동물의 움직임을 제한하는 마취 하에 수행되었습니다. 그러나, 모션 아티팩트는 마우스의 호흡 속도, 심박수, 가능한 조직 부종, 및 복신의 경우, 혈관 수축 또는 혈관 수축 4,6,18,19에의해 도입될 수 있다. 모션 아티팩트는 여러 전략에 의해 완화될 수 있습니다. 이 프로토콜에 사용되는 이미지 프로세싱 패키지에는 2D 컨볼루션 엔진을 사용하여 보이는혈관(13,17)을기반으로 T 시리즈 내의 이미지를 정렬하는 선택적 모션 보정 단계가 포함됩니다. 초점 평면에 중요한 변화가 있는 프레임은 이 알고리즘에 의해 식별되며 분석에서 제외될 수 있습니다. 또한, 형광 흔적을 생성할 때 Z-점수와 같은 이미징 처리 패키지 내에서 통계적 전략을 사용하여 운동을 정상화할 수있다(20). 2광자 이미징에서 모션 아티팩트를 고려하는 가장 강력한 접근법은 칼슘 표시기(예를 들어, GCaMP)와 칼슘 독립적인 형광 기자(예를 들어, mCherry)와 같은 세포 내의 두 형광 지표의 발현을 결합하는 것입니다. 형광 기자의 변동은 운동에 기인할 수 있고 운동 아티팩트를 정상화하기 위하여 칼슘 표시기 신호에서 빼기 위하여.
이 프로토콜의 목적은 생체 내에서 최적의 칼슘 이미징 및 혈류 데이터를 수집하는 방법에 대한 명확한 이해를 제공하고 연구자가 결과를 개선하기 위해 구현할 수 있는 새로운 방법과 분석 도구를 제시하는 것입니다. 이 기술은 혈류 통제 또는 다른 두뇌 질병 상태에서 다른 pericytes 인구의 역할을 연구하기 위하여 적용될 수 있습니다. 이 화상 진찰 매개 변수는 또한 그밖 세포 모형 및 기관 시스템에서 칼슘 과 혈류를 연구하기 위하여 이용될 수 있고 유사한 원리는 칼슘을 넘어 그밖 유전으로 인코딩된 센서에 의해 가능하게 되는 그밖 동적 화상 진찰 기술에 적용됩니다.

중추 신경계 혈관은 관통하는 동맥, 모세 혈관 및 오름차순 정맥으로 구성됩니다. 이 네트워크 내에서, 혈관 평활근 세포와 같은 벽화 세포는 제1 동맥 가지 및 모세 혈관1을따라 세포 과정을 확장한다. Pericytes는 혈액-뇌 장벽1,2,이동 및운동성3,잠재적 줄기 세포 특성 및 뇌 혈류량4,5,6의조절의 유지를 포함하여 뇌 내에서 여러 가지 역할을 갖는 것으로 보인다. pericytes의 기능적 역할의 대부분은 이들 세포의 팽창 또는 수축을 조절할 수 있는 세포내 칼슘의 변동에 연결되어4,5,6.
몇몇 최근 연구는 두뇌 pericytes7의다른 모형을 확인하기 위한 기준을설정했습니다 7,8. 관통하는 동맥의 처음 4개 가지 내의 벽화 세포는 수축 단백질 α-부드러운 근육 액틴(αSMA)과 혈관7,8,9를감싸는 공정을 통해 돌출, 오보이드 소마타의 발현에 기초하여 pericytes를 천신시키고 있다. 이 프로토콜은 천신 성 과구의 칼슘 변동을 시각화하기 위해 Tg (RP23-370F21-RCaMP1.07)B3-3Mik /J10으로알려진 새로운 형질형 마우스 라인 인 Acta2-RCaMP1.07을 사용합니다. 이 마우스는 적색 유전적으로 인코딩된 칼슘 표시기, RCaMP1.07을 αSMA 발현 세포(혈관 의 매끄러운 근육 세포 및 천신 성 동맥)에서 표현한다. 사육 식민지는 헤미지고테스와 비 캐리어 동물을 건너 유지됩니다. RCaMP1.07은 칼모둘린 결합 도메인을 가진 적색 형광 단백질로, 세포내칼슘(10)및11에결합할 때 형광을 증가시킨다. 이 프로토콜은 형광염료의 꼬리 정맥 주입, 마취 마우스의 현미경 이미지 수집, 프로그래밍 플랫폼을 사용하여 데이터 분석을 포함하여 2개의 광자 현미경 검사법에 의한 천식 성구 및 혈류 측정의 결합된 칼슘 이미징단계를 간략하게 설명합니다(그림1). 이러한 기술은 벽화 세포 생리학에 대 한 질문을 해결 하기 위해 유용 하지만 뇌 또는 다른 장기 시스템에 있는 모든 세포 모형에 칼슘 과도 를 공부 하도록 적응될 수 있다.
10개월 된 여성 Acta2-RCaMP1.07 마우스가 이 문서에서 제시된 실험에 사용되었습니다. 마우스는 만성 두개골 창 및 머리 포스트 이식 2 개월 전에 수술을 받았다. 수술 프로토콜에 대한 세부 사항은 이전 연구에서 논의된다12,13 유사한 절차는 이전에 출판 된 다른 프로토콜에서 수행되었다14,15. 혈관분기는 정맥 주사녹색 형광술-Dextran (70,000 MW, 애니온 용액, 2.5 % w /v)로 표시됩니다. 이 염료는 비용 효과적이고 상용 소스에서 쉽게 구할 수 있지만 RCaMP 방출과 겹치고 현미경 이미지 수집 중에 출혈 될 수있는 더 넓은 방출 스펙트럼을 가지고 있습니다. 스펙트럼 언믹싱을 위한 단계는 이를 우회하기 위해 아래 섹션 4에 설명되어 있지만 EGFP를 기반으로 하는 것과 같이 더 좁은 배출 스펙트럼을 가진 다른 녹색 염료도 사용될 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acta2-RCaMP1.07</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>28345</td>
			<td>In the video protocol the animal model used is a female mouse&#160; of&#160; 10 months, 1 day old.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applicators (Regular)</td>
			<td>Bisco</td>
			<td>X-80250P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioFormats package for MATLAB</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>Denominated in this protocol as &#34;image processing packages&#34;.&#160; Available in: https://docs.openmicroscopy.org/bio-formats/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIPS MATLAB toolbox</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>Denomitaded in this protocol as &#34;image processing algorithms&#34;. Barrett MJP, Ferrari KD, Stobart JL, Holub M, Weber B. CHIPS: an Extensible Toolbox for Cellular and Hemodynamic Two-Photon Image Analysis. Neuroinformatics. 2018;16(1):145-147. doi:10.1007/s12021-017-9344-y. Available in: https://github.com/EIN-lab/CHIPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Ultrasound Gel, Medium viscosity</td>
			<td>HealthCare Plus</td>
			<td>UGC250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran, fluorescein, 70,000 MW, anionic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran, Texas Red, 70,000 MW, neutral</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye Lube Plus</td>
			<td>Optixcare</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td>Image J</td>
			<td>NA</td>
			<td>Denominated in this protocol as &#34;image processor software&#34;.&#160; Available in: https://imagej.net/Fiji/Downloads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCaMP6sfl/fl</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head Post fixing platform</td>
			<td>University of Zurich</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (Narketan 100 mg/mL)</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td>440893</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB R2020b</td>
			<td></td>
			<td>NA</td>
			<td>Denominated in this protocol as &#34;programming platform &#34;. Available in: https://www.mathworks.com/downloads/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 0.3mmx25mm</td>
			<td>BD PrecisionGlide</td>
			<td>305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective XLUMPLFLN20XW</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>NA</td>
			<td>https://www.olympus-lifescience.com/en/objectives/lumplfln-w/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDGFR&#946;-CreERT2</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>30201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene Tubing, PE10 I.D. 28mm (0.11&#8221;) O.D. 61mm (.024&#8221;)</td>
			<td>BD Intramedic</td>
			<td>427401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prairie View</td>
			<td>Bruker Fluorescence Microscopy</td>
			<td>NA</td>
			<td>https://www.bruker.com/en/products-and-solutions/fluorescence-microscopy/multiphoton-microscopes/ultima-in-vitro.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultima In Vitro Multiphoton Microscope</td>
			<td>Bruker Fluorescence Microscopy</td>
			<td>NA</td>
			<td>https://www.bruker.com/en/products-and-solutions/fluorescence-microscopy/multiphoton-microscopes/ultima-in-vitro.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Under Tank Heater</td>
			<td>Reptitherm U.T.H</td>
			<td>E169064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (Rompun 20 mg/mL)</td>
			<td>Bayer HealthCare</td>
			<td>2169592</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

brain pericyte calcium and hemodynamic imaging in transgenic mice in vivo

단백질 생물학및 마우스 유전학에 있는 최근 어드밴스는 생체내 뇌 세포의 세포내 칼슘 변동을 측정하고 현지 혈역학과 상관관계를 가능하게 했습니다. 이 프로토콜은 만성 두개골 창으로 준비된 형질전환 마우스를 사용하고 유전적으로 인코딩된 칼슘 지표인 RCaMP1.07을 α 부드러운 근육 액틴 프로모터하에서 혈관 의 부드러운 근육 세포 및 천신 성 동맥과 같은 벽화 세포를 구체적으로 라벨링합니다. 단계는 혈액 흐름을 추적하기 위해 형광 염료의 정맥 주사를 위한 꼬리 정맥 카테터를 준비하는 방법뿐만 아니라 뇌 백혈구 칼슘 및 국부 혈관 혈역학 (직경, 적혈구 속도 등)을 측정하는 방법에 대해 설명되어 있습니다. 마지막으로, 2018년 Barrett 외에서 개발한 이미지 처리 알고리즘을 통해 칼슘 변동 및 혈류 영화의 분석을 위해 세부 사항이 제공되며, 이러한 프로세스가 다른 세포 이미징 데이터에 어떻게 적응할 수 있는지에 중점을 두고 있습니다.

플루오레세인-엑스트라른은 적색 채널로 출혈할 수 있는 광범위한 방출 스펙트럼을 가지며, 광신백세포(그림2A)에서RCaMP 검출에 영향을 미친다. 소프트웨어 프로그램에서 데이터 수집 후 스펙트럼 혼합해제(도 2B,하음)를 통해 형광출혈을 감소시키고, 후속 분석 단계에서 칼슘 신호 검출을 강화한다.
이 프로토콜에 사용되는 이미지 처리 알고리즘을 사용한 칼슘 분석은 ROI 및 세포내 칼슘 변동(즉, 칼슘 신호)을 식별하는 여러 가지 접근 방식을 허용합니다. 손으로 세포 구조를 선택하면 단일 피크 및 다중피크와 같은 다양한 유형의 신호 피크를 포함하여 이들 영역 내의 칼슘 변동을 검출할 수 있으며, 정규화된 칼슘 흔적이 낮은 패스 및 대역 통과 필터링(도3B)이허용된다. 또한, ROI는 Ellefsen 외. 201416 및 Barrett 외. 201817(그림 4)에의해 개발된 이미지 처리 알고리즘을 사용하여 시간이 지남에 따라 형광 강도가 변하는 활성 픽셀을 함께 그룹화하여 식별된다. 이는 신호의 예상 크기와 모양을 포괄하는 시간, 임계값 및 공간 파라미터를 조정하여 동적 셀룰러 신호에 적용될 수 있다. 신호 식별임계값을 낮추면 관심 영역이 더 많이 발견됩니다(그림4B).
밝고 명확한 혈역학 키모그래프는 심히 하는 백혈구 근처의 혈관에서 직경 및 RBC 속도를 측정하도록 분석할 수있다(도 5A,B). 직경은 전체 폭에서 형광(도5C)의절반 최대값으로 계산됩니다. RBC 속도는 라벨이 없는 RbC로 만들어진 줄무늬로부터 근사되며, 각도는 라돈 변환으로 입력되어 속도, 플럭스(cells/s) 및 선형 밀도(cells/mm; 그림 5D). 형광 포화도가 떨어지는 저품질 키모그래프, 이미징 필드의 노이즈 비 또는 이동에 대한 신호불량(도 6A)은데이터를 확인할 수 없는 오류 점(적십자)을 사용하여 신뢰할 수 없는 플롯을 생성한다(도6B,C). 획득된 데이터의 품질은 좋은 결과에 중요하며 이 프로토콜에 설명된 단계를 따라 하면 좋은 결과를 얻을 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62725/62725fig01.jpg"> 그림 1. 프로토콜 요약입니다. 이 프로토콜은 마취된 마우스에서 인근 혈관에서 뇌천면 과낭 및 혈류 데이터로부터 형광 칼슘 이미지를 획득하고 분석하는 단계를 제시합니다. 프로토콜은 4단계로 나뉩니다. 1) 절차 준비 : 장비 및 카테터 준비의 설정; 2) 꼬리 정맥 주입; 3) 2광자 현미경 검사법에 의한 데이터 수집; 4) 이미지 처리 알고리즘을 사용하여 데이터 분석. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62725/62725fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62725/62725fig02.jpg"> 그림 2. 형광의 스펙트럼 혼합. A) T 시리즈 인수에서 RCaMP ensheathing pericyte 및 플루오레세인-dextran 라벨 혈관의 대표적인 평균 이미지. 배율 막대 = 10 μm.B) 어퍼: 개별 채널을 고려할 때 채널 2의 출혈이 채널 1(왼쪽)에서 명백합니다. 아래쪽: 스펙트럼 해제 후 출혈이 감소하고 RCaMP의 신호가 회낭 구조에서 더 두드러집니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62725/62725fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62725/62725fig03.jpg"> 그림 3. 손으로 선택한 ROI와 최적화된 칼슘 흔적. A) 사용된 이미지 처리 소프트웨어(무지개 모양)에서 선택된 관심 영역을 사용하여 칼슘 신호 추적을 식별할 수 있다. B) 정규화된 추적의 신호 피크는 데이터를 필터링하는 로우 패스 및 대역 패스로 식별됩니다. 신호 임계값을 기준 기간(처음 30프레임)의 표준 편차의 3배로 정의했으며 이 임계값을 초과한 피크는 신호(낮은 추적)로 간주되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62725/62725fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62725/62725fig04.jpg"> 그림 4. 칼슘 분석을 위한 자동화된 활동 기반 ROI. 동일한 데이터는 기준선(A)의 표준 편차의 7배, 기준선(B)의 표준 편차의 3배에 달하는 임계값으로 분석하였다. 활성 픽셀을 식별하기 위한 임계값을 줄이면 pericytes 내에서 더 많은 ROI(B) 및 신호 피크(원형 차트)가 발견됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62725/62725fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62725/62725fig05.jpg"> 그림 5. 키모그래프 혈역학 측정. A) 예를 들어 선박을 통해 스캔합니다. B) 직경(왼쪽) 및 속도(오른쪽)에 대해 잘 정의된 키모그래프의 예입니다. 형광의 오른쪽 밴드 내의 검은 줄무늬는 명확한 혈관 운동 변동과 RbC.C) 직경 해석에 해당합니다. D) Y축= RBC 플럭스(셀/s), 라인 밀도(셀/mm), 속도(mm/s), 줄무늬 각도(도), 신호 대 잡음 비율(임의 단위, a.u.), X 축=시간(초)에 대한 플롯을 사용하여 속도 분석. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62725/62725fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62725/62725fig06.jpg"> 그림 6. 품질이 좋지 는 혈역학 측정을 표현합니다. A) 형광 포화, 낮은 신호 대 잡음 비 또는 습득 중 이미징 필드의 움직임을 가진 열악한 품질의 키모그래프의 예. B와 C) 키모그래프의 품질이 좋지 않아 오류점(적점)이 있는 직경 및 속도 데이터의 그림 7과 유사한 플롯을 그립니다. (이미지 E, Y 축=직경(μm), X 축=시간(초), 이미지 F, Y 축= RBC 플럭스(셀/s), 라인 밀도(셀/mm), 속도(mm/s), 그리고 줄무늬 각도(도), 신호 대 노이즈 비(a.u.), X 축=시간(초). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62725/62725fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Brain Pericyte Calcium and Hemodynamic Imaging in Transgenic Mice In Vivo

이 프로토콜은 마취마우스에 있는 가까운 혈관에서 백혈구 및 혈류 데이터를 심신하는 두뇌에서 형광 칼슘 심상을 취득하고 분석하는 단계를 제시합니다. 이러한 기술은 벽화 세포 생리학의 연구에 유용하며 모든 세포 유형의 칼슘 과도를 조사하기 위해 적응 할 수 있습니다.

생체 내 트랜스제닉 마우스의 뇌 성 구체 칼슘 및 혈역학 이미징

Recent advances in protein biology and mouse genetics have made it possible to measure intracellular calcium fluctuations of brain cells in vivo and to ...

뇌 혈관은 관통 동맥, 모세 혈관, 그리고 오름차순 의 정맥의 복잡한 네트워크입니다. 이 혈관은 알파 부드러운 근육 액틴을 표현하는 천신 pericytes와 같은 벽화 세포에 의해 싸여 있으며, 관통 동맥에서 처음 네 가지 내에서 발견된다. 우리는 Acta2-RCaMP 1.07 형질전환 마우스를 사용하여 유전적으로 인코딩된 칼슘 지표 RCaMP의 발현을 통해 이러한 세포에서 칼슘 과도를 시각화합니다.칼슘은 이러한 세포와 혈류 조절의 수축에 강한 역할을 한다. 모세관 pericytes는 혈관 네트워크에서 더 먼 하류에서 찾아내고 그밖 형질 생성모형에 표지될 수 있습니다. 그러나, 우리는이 방법에 pericytes를 ensheathing에 초점을 맞추고 있습니다.우리의 마우스는 화상 진찰을 위한 두뇌 혈관에 접근을 허용하는 만성 두개골 창으로 외과적으로 이식되었습니다. 여기서, 우리는 pericyte 칼슘 데이터 및 마취 동물의 혈류에 대한 정보를 획득하는 데 필요한 두 개의 광자 이미징 및 분석 방법에 따라 필요한 준비 단계와 꼬리 정맥 주입을 설명합니다. 꼬리 정맥 카테터 주입에 필요한 항목: 인슐린 주사기, PE10 튜브의 15 센티미터 조각, 30 게이지 바늘, 거즈, 식염수, 집게, 녹색 형광염, 펜치, 및 가위.우리는 또한 케타민 자일라진 마취를 가진 바늘이 있어 혈류 측정을 위한 이소플루란보다 낫기 때문에 화상 진찰 전에 주입할 것입니다. 펜치를 사용하여 허브에서 30 게이지 바늘을 끊습니다. 식염수 채워진 주사기에 부착 된 PE10 튜브의 조각의 끝에 바늘을 조심스럽게 삽입합니다.이것은 주입을위한 카테터입니다. 이소플루란으로 마우스를 마취하고 I-루브 젤을 바르습니다. 꼬리에 따뜻한 물이 있는 장갑장을 놓고 측면 정맥을 넓습니다.에탄올로 꼬리를 청소한 후 바늘을 정맥에 넣고 카테터를 통해 식염수에 부드럽게 주입하여 바늘이 올바르게 배치되도록 합니다. 코테터의 주사기를 전환하여 형광제 드엑스트라인 염료로 채워진 주사기를 제거합니다. 천천히 염료를 주입하여 거품이 튜브에 들어가지 않도록 합니다.덱스네 주사기를 식염수 주사기로 교체하고 튜브에 염료가 남지 않고 튜브를 헹굴수 있습니다. 바늘을 제거하고 거즈로 누릅니다. 화상 진찰을 위해 케타민 자일라진 마취를 주입하십시오.가열 패드에 고정 된 마우스 헤드로 치과 어플리케이터로 두개골 창을 청소하십시오. 창에 초음파 젤을 바르고 두 개의 광자 현미경 목표를 통해 집중하십시오. 두 개의 광자 이미징의 경우, 당사는 방출 감지를 위해 형광, 여기 및 광증 증식관을 위해 튜닝 가능한 티타늄 사파이어 레이저가 있는 현미경을 사용합니다.현미경 소프트웨어에서, RCaMP와 형광 dextran 모두를 흥분시키기 위해 파장을 990 나노미터로 설정합니다. 다음으로 포크셀 전압과 PMT 검출기 감도를 조정하여 레이저 전력을 설정합니다. 이러한 매개 변수및 고해상도, RCaMP 양성 벽화 세포 및 형광으로 표지된 혈장으로 실시간 스캐닝을 볼 수 있다.심도 스택을 획득하여 혈관 네트워크에서 pericytes를 올바르게 찾는 것이 좋습니다. PO 혈관 근처의 조직의 상단에 초점을 맞출 때, 이것을 제드 시리즈 스택의 제로 포인트 와 상단으로 설정한 다음 조직을 원하는 깊이로 집중하고 이를 스택의 바닥으로 설정합니다. 현미경이 스택을 통해 더 깊게 이동함에 따라 레이저 전력을 조정하여 증가시켜야 합니다.이미지 처리 소프트웨어에서 제드 시리즈를 열고 두 채널을 컬러 이미지로 병합하고 스택을 통해 관심 있는 혈관을 스캔합니다. pericytes를 포함하는 관심 영역을 선택하고 향후 이미징 세션에서 이러한 스팟을 다시 찾는 데 도움이 되는 위치를 저장합니다. 회혈 칼슘 이벤트를 수집하고 이동하려면 획득 프레임 속도를 초당 10프레임 이상으로 늘립니다.이미징 기간을 60초로 설정하고 고유한 파일 이름으로 저장 경로를 업데이트합니다. 용기에 광학적으로 줌을 사용하여 낮은 해상도를 고려하고 회화물을 더 자세히 볼 수 있습니다. T 계열을 획득합니다.혈관 직경과 적혈구 속도를 측정하려면, 현미경으로 1 차원 검사를 시작하기 위해 라인 스캔을 선택합니다. 먼저 스캔 기간을 밀리초 단위로 설정합니다. 그런 다음 관심있는 선박을 양분하고 선박을 따라 평행하게 움직이는 선을 그립니다.이것은 왼쪽에 혈관 직경의 kymograph를 생성하고 오른쪽에있는 혈관을 통해 이동하는 적혈구의 줄무늬. 이 프로토콜에 사용되는 프로그램 및 패키지의 전체 목록은 재질 테이블을 참조하십시오. 먼저 이미지 처리 소프트웨어에 손으로 관심 영역을 선택합니다.T 시리즈 파일을 로드하고 스택의 평균을 가지고 색이미지를 만듭니다. 다각형 도구를 선택하고 소마 및 프로세스와 같은 눈에 보이는 열반 페리시테 구조를 간략하게 설명합니다. 관심있는 각 영역에 고유 한 이름을 주고 프로그래밍 소프트웨어의 나중에로드 할 수있는 zip 폴더로 저장합니다.프로그래밍 소프트웨어를 열고 이미지 처리 패키지의 폴더가 경로에 있는지 확인합니다. 칼슘 T 계열을 프로그래밍 소프트웨어로 가져오고 각 채널에 있는 것을 정의합니다. 이 경우 채널 2의 채널 1 및 혈장에 대한 세포 신호입니다.시각화를 용이하게 하기 위해 프로그래밍 소프트웨어 내에서 데이터를 동영상으로 플롯합니다. 빨간색 RCaMP 채널로 흘러 들어가는 형광 dextran에서 녹색 형광을 제거하기 위해 이미지 처리 패키지의 채널을 혼합 취소하십시오. 먼저 이 경우 불소 1, RCaMP만 포함하는 영역을 선택합니다.두 번째는 혈장에 형광2, 형광을 포함하는 영역을 선택한다. 마지막으로 불소가 없는 배경 영역을 선택합니다. 이렇게 하면 각 채널의 각 픽셀에 적용되는 스펙트럼 기여 매트릭스가 생성됩니다.RCaMP 신호의 국소화를 크게 향상시켜 이러한 구조에서 칼슘 사건의 검출을 향상시킵니다. 화상 처리 패키지 내에서 칼슘 이미징 데이터를 분석할 수 있는 여러 가지 방법이 있습니다. 먼저 혼합되지 않은 칼슘 동영상상에 세포 신호 분석을 실행하고, 손으로 백혈구로부터 선택된 지퍼 폴더로부터 관심 영역을 로드한다.영역크기를 조정할 필요가 없으므로 배율 계수를 하나로 설정합니다. 처리 후 각 ROY와 정규화된 칼슘 흔적을 다른 색상으로 생성합니다. 코드가 개별 추적에서 대부분의 칼슘 이벤트를 감지하지 못하는 경우, T 계열의 첫 30프레임인 기준 기간의 표준 편차인 단축 패스 필터링 데이터에 대한 임계값을 3배로 줄이는 등 최적화 상자 내의 기본 제공 매개변수를 수정합니다.신호를 감지하고 분류하기 위해 정규화된 칼슘 트레이스는 긴 패스와 대역 패스 필터링되어 진폭 및 추정데이터를 원활하게 할 뿐만 아니라 신호가 단일 피크, 다중 피크 또는 고원인지 를 결정하는 데 도움이 됩니다. 추가 통계 분석을 위해 데이터를 CSV 파일로 출력합니다. 세포 신호 분석을 혼합된 칼슘 동영상에서 두 번째로 실행하고 3차원, X, Y 및 시간으로 형광의 활성 및 변화에 따라 자동 이자 식별 영역을 선택합니다.식별된 관심 영역을 보려면 프로세스 결과를 플롯하는 것은 색상이 다릅니다. 알고리즘이 영화에서 눈으로 명확하게 보이는 ROY를 감지하지 못하면 데이터를 제 시간에 부드럽게 하는 가우시안 필터를 늘리고 기준선의 표준 편차의 표준 편차를 찾는 임계값을 줄이는 등의 기본 제공 매개 변수를 수정합니다. 추가 시각화를 위해 ROY를 영화로 플롯합니다.추가 통계 분석을 위해 데이터를 CSV 파일로 출력합니다. 라인 스캔 kymograph 데이터 파일을 프로그래밍 소프트웨어로 가져오고 각 채널에 있는 내용을 정의합니다. 라인 스캔에서 직경 분석 함수를 실행하여 상자를 열어 kymograph의 직경에 해당하는 영역을 선택합니다.혈관 직경에 해당하는 키모그래프 형광의 경계 바깥에 상자를 그립니다. 이 데이터 클래스를 처리하여 선박 직경의 절반 최대값으로 전체 폭을 측정하고 플롯을 생성합니다. 다음으로 변환 분석에 대한 속도 속도를 실행하고 kymograph 형광의 테두리 안에 상자를 그립니다.적혈구의 속도, 플럭스 및 선형 밀도를 계산하기 위해 이 데이터 클래스를 처리합니다. 추가 분석을 위해 혈류 결과를 CSV 파일로 출력합니다. 손으로 세포 구조를 선택하면 정규화된 칼슘 흔적이 낮은 패스 와 대역 패스여과 같은 단일 피크 및 다중 피크와 같은 다양한 유형의 신호 피크를 포함하여 이들 영역 내의 칼슘 변동을 감지할 수 있습니다.또한 이미지 처리 알고리즘을 사용하여 시간이 지남에 따라 형광의 강도가 변경되는 활성 픽셀을 함께 그룹화하여 관심 영역을 식별합니다. 이는 신호의 예상 크기와 모양을 포괄하는 시간, 임계값 및 공간 파라미터를 조정하여 동적 셀룰러 신호에 적용될 수 있다. 신호 식별 임계값을 줄이면 관심 영역이 더 많이 발견됩니다.명확한, 혈역학 kymographs는 심시 백혈구 근처 혈관에 있는 직경 그리고 적혈구 속도를 측정하기 위하여 분석됩니다. 직경은 전체 폭에서 형광의 절반 최대값으로 계산됩니다. 적혈구 속도는 라벨이 없는 적혈구로 만든 줄무늬에서 근사치되며, 각도는 라돈 변환으로 입력되어 속도를 계산합니다.형광 포화도, 노이즈 비율에 대한 신호 불량 또는 이미징 필드의 움직임이있는 열악한 품질 kymographs는 데이터를 결정할 수없는 적색 십자가로 표시된 오류 지점으로 신뢰할 수없는 플롯을 만듭니다. 획득된 데이터의 품질은 좋은 결과에 중요하며 이 프로토콜에 설명된 단계를 따라 하면 좋은 결과를 얻을 수 있습니다. 이 비디오에서는 두 개의 광자 현미경 검사법에 의한 뇌 내포성 과혈 측정의 결합된 칼슘 이미징 절차를 설명합니다.이러한 기술은 뇌 혈관 네트워크 내의 벽화 세포 생리학 및 국소화에 대한 질문을 해결하는 데 유용하지만 뇌 또는 다른 장기 시스템의 모든 세포 유형에서 칼슘 과도를 연구하도록 조정할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Brain Pericyte Calcium and Hemodynamic Imaging in Transgenic Mice In Vivo

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

초음파 혈액 - 뇌 장벽 파괴 및 망간 향상된 MRI를 사용하여 기능성 Neuroimaging

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

연구

신경과학

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

C.의 생체 Neuronal 칼슘 이미징에서 elegans

The nematode worm C. elegans is an ideal model organism  for relatively simple, low cost neuronal imaging in vivo. Its small transparent body and simple, ...

In Vivo Functional Brain Imaging Approach Based on Bioluminescent Calcium Indicator GFP-aequorin

In Vivo Functional Brain Imaging Approach Based on Bioluminescent Calcium Indicator GFP-aequorin

발광 생물 칼슘 표시 GFP - 쿼린을 기반으로 생체 기능성 뇌 영상의 접근 방식

Functional in vivo imaging has become a powerful approach to study the function and physiology of brain cells and structures of interest. Recently a new ...

Bioluminescence Imaging of Neuroinflammation in Transgenic Mice After Peripheral Inoculation of Alpha-Synuclein Fibrils

알파 - 시누 클레인 브릴의 주변 접종 후 형질 전환 마우스의 신경 염증의 생물 발광 영상

To study the prion-like behavior of misfolded alpha-synuclein, mouse models are needed that allow fast and simple transmission of alpha-synuclein ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Thy1를 사용 하 여 기본 Somatosensory 피 질에서 신경 활동을 이미징-GCaMP6s 유전자 변형 쥐

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

두뇌 조각에서 신경 모 수석에서 2 광자 칼슘 이미지

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

Ex Vivo Calcium Imaging for Visualizing Brain Responses to Endocrine Signaling in Drosophila

전 비보 내 분 비 신호 초파리 에 두뇌 응답을 시각화 칼슘 이미징

Organ-to-organ communication by endocrine signaling, for example, from the periphery to the brain, is essential for maintaining homeostasis. As a model ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

애벌레 Zebrafish의 측면 라인 세포의 생체 내 칼슘 이미징

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

In vivo Calcium Imaging in Mouse Inferior Olive

생체 내 마우스 열등올리브의 칼슘 이미징

Inferior olive (IO), a nucleus in the ventral medulla, is the only source of climbing fibers that form one of the two input pathways entering the ...

Stereotaxic Viral Injection and Gradient-Index Lens Implantation for Deep Brain In Vivo Calcium Imaging

Stereotaxic Viral Injection and Gradient-Index Lens Implantation for Deep Brain In Vivo Calcium Imaging

입체 택시 바이러스 주입 및 생체 내 심부 뇌를위한 그라디언트 인덱스 렌즈 이식

A miniature fluorescence microscope (miniscope) is a potent tool for in vivo calcium imaging from freely behaving animals. It offers several advantages ...