Research
Education
Sign In
EN
EN - English
CN - 中文
DE - Deutsch
ES - Español
KR - 한국어
IT - Italiano
FR - Français
PT - Português
TR - Turkish
JA - Japanese
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
2.4K Views
•
07:35 min
June 14th, 2021
DOI :
10.3791/62728-v
Chapters
0:05
Introduction
0:42
Amplifying the Gene Fragment via PCR
2:21
Digestion and Circularization
3:28
Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
4:28
Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
5:41
Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
6:49
Conclusion
Transcript
このプロトコルは、合成施設から受け取った小さな遺伝子断片から無細胞反応に使用する大量のDNAテンプレートを迅速に生成する方法を詳述しているため、重要です。転環増幅は、従来のクローニングよりも速く大量のDNAを生成することができます。したがって、合成DNAのライブラリからサイクルを学習する高スループット設計ビルドテストをサポートします。
これらの手法は、多くのステップと少量のボリュームが必要なため、新規ユーザーに対して大きな固有の変動を持つことができます。技術には細心の注意を払う
Sign in or start your free trial to access this content
Summary
この研究は、クローニングや生きている細胞を使用せずに、合成遺伝子断片からタンパク質スクリーニングキャンペーンのための大量(μg-mg)量のDNAを作成するためのプロトコルを記述しています。最小のテンプレートは酵素的に消化され、円形化され、等熱転がり円増幅を使用して増幅される。無細胞発現反応は、非精製物で行うことができる。
Explore More Videos
Privacy
Terms of Use
Policies
Contact Us
Recommend to library
JoVE NEWSLETTERS
JoVE Journal
Methods Collections
JoVE Encyclopedia of Experiments
Archive
JoVE Core
JoVE Business
JoVE Science Education
JoVE Lab Manual
Faculty Resource Center
Authors
Librarians
Access
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved