Name: isolated lung perfusion system in the rabbit model
Uploaded: 2021-07-15T14:30:00
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Los autores desean agradecer a la Doctora Bettina Sommer Cervantes por su apoyo en la redacción de este manuscrito, y a Kitzia Elena Lara Safont por su apoyo con las ilustraciones.

El sistema de perfusión aislada en el modelo de conejo ha sido ampliamente utilizado en el Laboratorio de Hiperrespuesta Bronquial del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias. El protocolo incluye conejos de Nueva Zelanda con un peso aproximado de 2,5-3 kg. Todos los animales fueron mantenidos en condiciones estándar de vivero y alimentación ad libitum de conformidad con las directrices oficiales mexicanas para animales de laboratorio (NOM 062-ZOO-1999) y bajo la Guía para el Cuidado y Uso de Animal...

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	<li>Dixon, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contributions+to+the+physiology+of+the+lungs:+Part+I.+The+bronchial+muscles,+their+innervation,+and+the+action+of+drugs+upon+them.">Contributions to the physiology of the lungs: Part I. The bronchial muscles, their innervation, and the action of drugs upon them.</a> The Journal of Physiology. 29 (2), 97-173 (1903).</li><li>Nelson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ex+vivo+lung+perfusion+as+a+platform+for+transplantation+research.">Animal models of ex vivo lung perfusion as a platform for transplantation research.</a> World Journal of Experimental Medicine. 4 (2), 7-15 (2014).</li><li>Roman, M. A., Nair, S., Tsui, S., Dunning, J., Parmar, J. 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C., Parulekar, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+perfusate+exchange+during.">Is perfusate exchange during.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (3), 43 (2020).</li><li>Alquicira-Mireles, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Participaci&#243;n de la serotonina en los cambios de permeabilidad vascular en la preservaci&#243;n pulmonar en conejo. , (2013).</li><li>Arreola-Ram&#237;rez, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Papel de la liberaci&#243;n de acetilcolina y sustancia P en el deterioro de la funci&#243;n pulmonar en un modelo experimental de preservaci&#243;n pulmonar en conejo. , (2009).</li><li>Isolated lung perfusion systems for small to large animal models. Harvard Apparatus. Hugo Sachs Elektronik (HSE) Available from: <a target="_blank" href="https://www.harvardapparatus.com/media/harvard/pdf/Isolated%20Lung%20Perfusion%20Systems%20Brochure.pdf">https://www.harvardapparatus.com/media/harvard/pdf/Isolated%20Lung%20Perfusion%20Systems%20Brochure.pdf</a> (2021)</li><li>Jiao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+trend+of+EVLP:+Advancements+and+emerging+pathways.">Evolving trend of EVLP: Advancements and emerging pathways.</a> SN Comprehensive Clinical Medicine. 1 (4), 287-303 (2019).</li><li>Mordant, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell+treatment+is+associated+with+decreased+perfusate+concentration+of+interleukin-8+during+ex+vivo+perfusion+of+donor+lungs+after+18-hour+preservation.">Mesenchymal stem cell treatment is associated with decreased perfusate concentration of interleukin-8 during ex vivo perfusion of donor lungs after 18-hour preservation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation: The Official Publication of the International Society for Heart and Lung Transplantation. 35 (10), 1245-1254 (2016).</li><li>Cowan, P. J., Hawthorne, W. J., Nottle, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenogeneic+transplantation+and+tolerance+in+the+era+of+CRISPR-Cas9.">Xenogeneic transplantation and tolerance in the era of CRISPR-Cas9.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 24 (1), 5-11 (2019).</li><li>Collaborators, G. C. R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+and+attributable+health+burden+of+chronic+respiratory+diseases,+1990-2017:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2017.">Prevalence and attributable health burden of chronic respiratory diseases, 1990-2017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017.</a> The Lancet Respiratory Medicine. 8 (6), 585-596 (2020).</li><li>Bravo-Reyna, C. C., Torres-Villalobos, G., Aguilar-Blas, N., Fr&#237;as-Guill&#233;n, J., Guerra-Mora, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+capillary+filtration+coefficient+(Kfc)+determination+by+a+manual+and+automatic+perfusion+system.+Step+by+step+technique+review.">Comparative study of capillary filtration coefficient (Kfc) determination by a manual and automatic perfusion system. Step by step technique review.</a> Physiological Research. 68 (6), 901-908 (2019).</li><li>Pereira, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=COVID-19+in+solid+organ+transplant+recipients:+Initial+report+from+the+US+epicenter.">COVID-19 in solid organ transplant recipients: Initial report from the US epicenter.</a> American Journal of Transplantation. 20 (7), 1800-1808 (2020).</li></ol>

Este trabajo muestra una visión general del sistema de perfusión pulmonar aislada, una técnica esencial en la investigación de la fisiología pulmonar. El sistema de perfusión pulmonar aislada ofrece un gran grado de versatilidad en sus usos y permite la evaluación de varios parámetros relevantes en la prueba de una amplia gama de hipótesis15. Un sistema pulmonar aislado es una herramienta con presencia mundial que, en la última década, ha establecido aún más su relevancia para las eva...

Brodie y Dixon describieron por primera vez el sistema de perfusión pulmonar ex-vivo en 1903 1. Desde entonces, se ha convertido en una herramienta estándar de oro para el estudio de la fisiología, farmacología, toxicología y bioquímica de los pulmones2,3. La técnica ofrece una forma consistente y reproducible de evaluar la viabilidad de los trasplantes de pulmón y determinar el efecto de mediadores inflamatorios como la histamina, los metabolitos del ácido araquidónico y la sustancia P, entre otros, así como sus interacciones durante fenómenos pulmonares como la broncoconstricción, la atelectasia y el edema pulmonar. El sistema pulmonar aislado ha sido una técnica clave para desvelar el importante papel de los pulmones en la eliminación de las aminas biogénicas de la circulación general4,5. Además, el sistema se ha utilizado para evaluar la bioquímica del surfactante pulmonar6. En las últimas décadas, el sistema de perfusión pulmonar ex-vivo se ha convertido en una plataforma ideal para la investigación del trasplante pulmonar7. En 2001, un equipo dirigido por Stig Steen describió la primera aplicación clínica del sistema de perfusión pulmonar ex-vivo utilizándolo para reacondicionar los pulmones de un donante de 19 años, que inicialmente fue rechazado por los centros de trasplante debido a sus lesiones. El pulmón izquierdo fue cosechado y perfundido durante 65 min; después, fue trasplantado con éxito a un hombre de 70 años con EPOC8. Investigaciones adicionales sobre el reacondicionamiento pulmonar utilizando la perfusión ex-vivo condujeron al desarrollo de la técnica de Toronto para la perfusión pulmonar extendida para evaluar y tratar los pulmones de donantes lesionados9,10. Clínicamente, el sistema de perfusión pulmonar ex-vivo ha demostrado ser una estrategia segura para aumentar los grupos de donantes mediante el tratamiento y reacondicionamiento de pulmones de donantes por debajo del estándar, sin presentar diferencias significativas en los riesgos o resultados frente a los donantes de criterios estándar10.
La principal ventaja del sistema de perfusión pulmonar aislada es que los parámetros experimentales se pueden evaluar en un órgano funcional completo que conserva su función fisiológica bajo una configuración de laboratorio artificial. Además, permite la medición y manipulación de la ventilación mecánica pulmonar para analizar los componentes de la fisiología pulmonar como la resistencia de las vías respiratorias, la resistencia vascular total, el intercambio gaseoso y la formación de edemas, que hasta la fecha no se pueden medir con precisión in vivo en animales de laboratorio2. En particular, la composición de la solución con la que se perfunde el pulmón puede controlarse completamente, lo que permite la adición de sustancias para evaluar sus efectos en tiempo real y la recolección de muestras de perfusión para su posterior estudio11. Los investigadores que trabajan con el sistema pulmonar aislado deben tener en cuenta que la ventilación mecánica causa la descomposición del tejido pulmonar acortando su tiempo útil. Esta caída progresiva de los parámetros mecánicos puede retrasarse significativamente al hiperinflar los pulmones ocasionalmente durante el tiempo del experimento4. Aún así, la preparación no suele durar más de ocho horas. Otra consideración para el sistema de perfusión pulmonar ex-vivo es la ausencia de regulación nerviosa central y drenaje linfático. Los efectos de su ausencia aún no se comprenden completamente y podrían ser una fuente de sesgo en ciertos experimentos. 
La técnica del sistema de perfusión pulmonar aislada se puede realizar en el modelo de conejo con un alto grado de consistencia y reproducibilidad. Este trabajo describe los procedimientos técnicos y quirúrgicos para la implementación de la técnica de perfusión pulmonar aislada ex-vivo desarrollada para el modelo de conejo en el Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias en la Ciudad de México, con la intención de compartir las ideas y proporcionar una guía clara sobre los pasos clave en la aplicación de este modelo experimental.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Stop Tygon E-Lab Tubing, 3.17 mm ID, 12/pack, Black/White</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-1864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adapter for Positive Pressure Ventilation on IPL-4</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adapter for Positive Pressure Ventilation on IPL-4</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alternative Pressure-Free Gas Supply for IPL-4: To supply the trachea with gas mixture different from room air during negative ventilation</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4309</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Base Unit for the Rabbit to Fetal Pig Isolated Perfused Lung</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum A2:D41albumin lyophilized powder</td>
			<td>sigma</td>
			<td>3912</td>
			<td>500 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride, CaCl2&#183;2H2O.</td>
			<td>JT Baker</td>
			<td>10035-04-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic vials</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430659</td>
			<td>2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucosa, C6H12O6.</td>
			<td>sigma</td>
			<td>G5767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Differential Low Pressure Transducer DLP2.5, Range +- 2.5 cmH2O, HSE Connector</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-3882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Differential Pressure Transducer MPX, Range +- 100 cmH2O, HSE Connector</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-0064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tubes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute HPLC grade</td>
			<td>Caledon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>14 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harvard Peristaltic Pump P-230 (Complete with Control Box and P-230 Motor Drive)</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>70-7001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated Linear Pneumotachometer 0 to 10 L/min flow range</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>59-9349</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heater Controller for Single Pneumotachometer 230 VAC, 50 Hz</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>59-9703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>PISA</td>
			<td></td>
			<td>5000 UI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC Column (C18 100A 5U)</td>
			<td>Alltech</td>
			<td>98121213</td>
			<td>150 mm x 4.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrophilic Syringe Filter</td>
			<td>Millex</td>
			<td>SLLGR04NL</td>
			<td>4 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPL-4 Core System for Isolated Rabbit to Fetal Pig Lung, 230</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPL-4 Core System for Isolated Rabbit to Fetal Pig Lung, 230 V</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jacketed Glass Reservoir for Buffer Solution, with Frit and Tubing, 6.0 L</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-0322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lauda Thermostatic Circulator, Type E-103, 230 V/50 Hz, 3 L Bath Volume, Temperature Range 20 to 150&#176;C</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-0125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Left Atrium Cannula for Rabbit with Basket, OD 5.9 mm</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Range Blood Pressure Transducer P75 for PLUGSYS Module</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate, MgSO4&#183;7H2O</td>
			<td>JT Baker</td>
			<td>10034-99-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative Pressure Ventilation Control Option with Pressure Regulator for IPL-4</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New Zeland rabbits</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PISABENTAL (Pentobarbital sodium)</td>
			<td>PISA</td>
			<td>Q-7833-215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLUGSYS Case, Type 603* 7</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLUGSYS TCM Time Counter Module</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-1750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLUGSYS Transducer Amplifier Module (TAM-A)</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-0065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLUGSYS Transducer Amplifier Module (TAM-D)</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-1793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLUGSYS VCM-4R Ventilation Control Module with Pressure Regulator</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-1755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride, KCl.</td>
			<td>JT Baker</td>
			<td>3040-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate, KH2PO4</td>
			<td>JT Baker</td>
			<td>7778-77-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PROCIN (Xylacine clorhydrate)</td>
			<td>PISA</td>
			<td>Q-7833-099</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pulmonary Artery Cannula for Rabbit with Basket, OD 4.6 mm</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel knife</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serotonin 5-HT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Servo Controller for Perfusion (SCP</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-2806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Snap Cap Microcentrifuge Tube</td>
			<td>Costar</td>
			<td>3620</td>
			<td>1.7 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate, NaHCO3</td>
			<td>sigma</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride, NaCl.</td>
			<td>sigma</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gloves No. 7 1/2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical gloves No. 8</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taygon tubes</td>
			<td>Masterflex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tracheal Cannula for Rabbit, OD 5.0 mm</td>
			<td>Hugo Sachs Elektronik (HSE)</td>
			<td>73-4163</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolated lung perfusion system in the rabbit model

El sistema de perfusión pulmonar aislada ha sido ampliamente utilizado en la investigación pulmonar, contribuyendo a dilucidar el funcionamiento interno de los pulmones, tanto micro como macroscópicamente. Esta técnica es útil en la caracterización de la fisiología y patología pulmonar mediante la medición de las actividades metabólicas y las funciones respiratorias, incluidas las interacciones entre las sustancias circulatorias y los efectos de las sustancias inhaladas o perfundidas, como en las pruebas de drogas. Mientras que los métodos in vitro implican el corte y cultivo de tejidos, el sistema de perfusión pulmonar ex vivo aislado permite trabajar con un órgano funcional completo haciendo posible el estudio de una función fisiológica continua a la vez que recrea la ventilación y la perfusión. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que los efectos de la ausencia de inervación central y el drenaje linfático aún deben evaluarse completamente. Este protocolo tiene como objetivo describir el ensamblaje del aparato pulmonar aislado, seguido de la extracción quirúrgica y la canulación de pulmones y corazón de animales de laboratorio experimentales, así como mostrar la técnica de perfusión y el procesamiento de señales de datos. La viabilidad media del pulmón aislado oscila entre 5-8 h; durante este período, la permeabilidad capilar pulmonar aumenta, causando edema y lesión pulmonar. La funcionalidad del tejido pulmonar preservado se mide mediante el coeficiente de filtración capilar (Kfc), utilizado para determinar la extensión del edema pulmonar a través del tiempo.

El sistema de perfusión pulmonar aislada permite la manipulación de órganos para biopsia, la recolección de muestras de perfusión y la recopilación de datos en tiempo real de parámetros fisiológicos. El sistema aislado se puede utilizar para probar muchas hipótesis que involucran diferentes funciones y fenómenos pulmonares, desde la actividad metabólica y enzimática hasta la formación de edemas y los períodos de preservación para trasplantes de pulmón.
La F...

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Isolated Lung Perfusion System in the Rabbit Model

La preparación aislada del pulmón de conejo es una herramienta estándar de oro en la investigación pulmonar. Esta publicación tiene como objetivo describir la técnica desarrollada para el estudio de los mecanismos fisiológicos y patológicos involucrados en la reactividad de las vías respiratorias, la preservación pulmonar y la investigación preclínica en trasplante pulmonar y edema pulmonar.

Sistema de perfusión pulmonar aislada en el modelo de conejo

The isolated lung perfusion system has been widely used in pulmonary research, contributing to elucidate the lungs&#39; inner workings, both micro and ...

Esta técnica es útil en la caracterización de la fisiología y patología pulmonar mediante la medición de las actividades metabólicas y la función respiratoria. El sistema de perfusión pulmonar aislada permite trabajar con un órgano funcional completo haciendo posible el estudio de una función fisiológica continua a la vez que recrea la ventilación y la perfusión. Este método podría proporcionar información sobre la caracterización de las capacidades no respiratorias de los tejidos pulmonares, como la actividad metabólica y las actividades de varios componentes como los macrófagos alveolares y el tejido endotelial.Para empezar, ensamble el aparato de trabajo, asegurándose de que contenga la columna de acero principal montada en una placa base que sostiene el tórax artificial con el neumotacómetro y el transductor de peso ubicados sobre la columna y detrás de la bobina de precalentamiento con una trampa de burbujas. Conecte todos los transductores a la unidad electrónica central y prepare el sistema de ventilación además del aparato. Después de afeitar el sitio quirúrgico del conejo anestesiado, haga una incisión ventral en la línea mediana de tres a cinco centímetros desde el manubrio del esternón hasta el cuello.Use las tijeras de operación para cortar los 2/3 anteriores de la tráquea entre los anillos del cartílago. Inserte una cánula traqueal de cinco milímetros a través de la membrana fibrosa traqueal y fije la cánula cuidadosamente con una sutura de seda 4-0. Coloque las pinzas o pinzas debajo de la tráquea para asegurarse de que la cánula no se doble contra la tráquea.Conecte la bomba de respiración a la cánula traqueal, ajuste el volumen corriente a 10 mililitros por kilogramo e inicie la ventilación rápidamente después de la traqueotomía y antes de que se abra el tórax para mantener la presión positiva en los pulmones para prevenir el colapso pulmonar durante la cirugía. Para acceder a la cavidad torácica, use un bisturí o tijeras para abrir la pared del tórax y realizar una esternotomía medial hasta el tercio superior del tórax. Mantenga las mitades del tórax abiertas con dos retractores.Localiza la vena cava superior e inferior y etiquétala con hilos. Antes de la exsanguinación del animal, identifique el ventrículo derecho e inyecte 1, 000 unidades internacionales por kilogramo de heparina. Inmediatamente después de la inyección, ligar la vena cava superior e inferior con el hilo pre-asado.Cortar a través del manubrium sterni para extender la esternotomía medial hacia la cánula traqueal, liberando la tráquea en ambos lados del tejido de conexión. Ahora reseque la tráquea por encima de la cánula traqueal y tire suavemente de la cánula en un eje craneal / caudal. Después de la exsanguinación para cosechar el bloqueo cardiopulmonar, use disección digital directa o tijeras de resorte para separar el tejido conectivo y extraer los pulmones del tórax.A continuación, diseccionar la vasculatura y el esófago. Levante los pulmones aislados del tórax y coloque cuidadosamente los pulmones sobre una gasa estéril en una placa de Petri. Para prevenir la atelectasia, ventile los pulmones mediante ventilación con presión positiva con presión espiratoria final positiva establecida en dos centímetros de columna de agua.Cortar los ventrículos del corazón a nivel del surco auriculoventricular. Después de abrir los dos ventrículos, introduzca la cánula de la arteria pulmonar a través de la arteria pulmonar derecha y la cánula de la aurícula izquierda a través de la válvula mitral en la aurícula izquierda. Fije las cánulas con una sutura de seda 4-0 que incluya los tejidos circundantes en las ligaduras de la arteria pulmonar y la aurícula izquierda para evitar la distensión estructural.Inyecte 250 mililitros de solución isotónica salina a través de la cánula arterial para eliminar la sangre restante del lecho vascular. Para la configuración de perfusión, coloque los pulmones aislados cuidadosamente en la cámara pulmonar. Conecte la tráquea al transductor en la cubierta de la cámara y conecte los recipientes canulados al sistema de perfusión, luego cierre y asegure la cámara con la cerradura giratoria.A continuación, conecte la tapa de la cámara y cambie sobre la llave de paso para cambiar de ventilación de presión positiva a negativa. Perfunda los pulmones con 200 mililitros de perfusato libre de sangre artificial comenzando con el flujo a tres mililitros por minuto por kilogramo, luego aumente lentamente el flujo durante cinco minutos a cinco mililitros por minuto por kilogramo. Y durante los próximos cinco minutos, permita que el flujo alcance los ocho mililitros por minuto por kilogramo, seguido de un flujo máximo de 10 mililitros por minuto por kilogramo durante cinco minutos.Ventilar los pulmones con aire humidificado a una frecuencia de 30 latidos por minuto, un volumen corriente de 10 mililitros por kilogramo y una presión espiratoria final de dos centímetros de columna de agua. Para lograr las condiciones de la zona tres, espere de 10 a 15 minutos para obtener un equilibrio caracterizado por un estado gravimétrico ISO, asegurando que la presión venosa sea estable en todo el registro. Asegúrese de que el peso del pulmón permanezca constante y que las presiones arterial y auricular izquierda sean estables para lograr condiciones de zona tres para abrir un número máximo de vasos pulmonares y mantener el contenido de lecho microvascular durante el experimento.Para el control electrónico y procesamiento de señales, asegurar que el flujo respiratorio, los cambios de peso, la presión microvascular, el volumen corriente, la resistencia vascular, entre otros, estén registrados en una unidad electrónica central múltiple que integre las señales provenientes de los transductores y las muestre en el sistema de evaluación. Se evaluó la concentración de 5-HT y monoaminooxidasa implicada en el metabolismo pulmonar y la permeabilidad vascular. La concentración de 5-HT y monoaminooxidasa alcanzó su punto máximo después de 15 minutos de conservación y luego disminuyó durante las siguientes seis horas.Después, los niveles de perfusión mostraron un aumento no estadísticamente significativo hasta las 24 horas. Las tasas de liberación de 5-HT y monoaminooxidasa indicaron que durante la primera hora de la preservación, los niveles de 5-HT aumentaron más que la monoaminooxidasa y disminuyeron dentro de las seis horas posteriores a ser recapturados por células endoteliales y plaquetas, así como catabolismo mediado por monoaminooxidasa. La actividad de la endopeptidasa neutra aumentó a las nueve horas y luego disminuyó y se mantuvo estable durante 12 a 24 horas.La actividad de la enzima convertidora de angiotensina disminuyó después de cuatro horas, luego aumentó y se mantuvo estable a través del tiempo hasta las 24 horas. El efecto de la preservación pulmonar en la permeabilidad capilar se evaluó durante 24 horas, lo que indica que el pulmón perfundido sufrió un aumento progresivo del coeficiente de filtración capilar. Se comprobó el efecto de diferentes aditivos en la permeabilidad capilar del sistema de perfusión pulmonar aislada en diversas condiciones y se observó un aumento máximo de la permeabilidad con atropina.La maniobra más importante es colocar correctamente los pulmones en una cámara pulmonar y conectar los vasos canulados al sistema de perfusión. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia las interacciones entre las sustancias circulatorias y los efectos de las sustancias inhaladas o perfundidas como en las pruebas de drogas y diversas patologías pulmonares.

Research

JoVE Journal

Medicine

Microsurgical Venous Pouch Arterial-Bifurcation Aneurysms in the Rabbit Model: Technical Aspects

Microcirugía venosa bolsa arterial-Bifurcación Los aneurismas en el modelo de conejo: Aspectos Técnicos

For ruptured human cerebral aneurysms endovascular embolization has become an equivalent alternative to aneurysm clipping.1 However, large clinical trials ...

Investigación

Medicina

NADH Fluorescence Imaging of Isolated Biventricular Working Rabbit Hearts

NADH fluorescencia de imágenes de biventricular aislada Trabajo corazones de conejo

Since its inception by Langendorff1, the isolated perfused heart remains a prominent tool for studying cardiac physiology2. However, it is not well-suited ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

Sistema optimizado para la monitorización de la perfusión cerebral en el modelo de rata de Carrera intraluminal oclusión arteria cerebral media

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

The Rabbit Blood-shunt Model for the Study of Acute and Late Sequelae of Subarachnoid Hemorrhage: Technical Aspects

El Conejo Modelo Blood-shunt para el Estudio de la aguda y secuelas tardías de Hemorragia subaracnoidea: Aspectos Técnicos

Early brain injury and delayed cerebral vasospasm both contribute to unfavorable outcomes after subarachnoid hemorrhage (SAH). Reproducible and ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

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Método de aislados<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusión pulmonar en un modelo de rata: Lecciones Aprendidas de Desarrollo de un Programa EVLP Rata

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Isolated Hepatic Perfusion as a Treatment for Liver Metastases of Uveal Melanoma

Aislado hepática de perfusión como un tratamiento para las metástasis hepáticas de melanoma uveal

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic ...

Open Tracheostomy Gastric Acid Aspiration Murine Model of Acute Lung Injury Results in Maximal Acute Nonlethal Lung Injury

La traqueostomía abierta ácido gástrico aspiración modelo murino de lesión pulmonar aguda Resultados en máxima no letal aguda lesión pulmonar

Acid pneumonitis is a major cause of sterile acute lung injury (ALI) in humans. Acid pneumonitis spans the clinical spectrum from asymptomatic to acute ...

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Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

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The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Transthoracic Echocardiographic Examination in the Rabbit Model

Examen Ecocardiográfico Transtorácico en el Modelo Conejo

Large animal models such as the rabbit are valuable for translational preclinical research. Rabbits have a similar cardiac electrophysiology compared to ...