Name: microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice
Uploaded: 2021-07-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af National Institutes of Health, tilskud numre R01NS100954 og R01NS099188.

Alle forsøgsprocedurer, der er beskrevet her, er blevet udført i overensstemmelse med retningslinjerne fra National Institutes of Health (NIH), som godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) på Southern Methodist University.
1. Belægning af multielektrodesystemet (MEA) til optagelse
<ol><li>Lav 25 mM boratbuffer.<ol>
<li>0,953 g af Na2B4O7,10H2O opløses i 80 mL destilleret vand.</li>
		<li>PH-pH-tallet justeres til 8,4 med...

Det er bydende nødvendigt at øve og mestre SAN dissektionsprocessen, da vævet er skrøbeligt, og sundt væv er nødvendigt for en vellykket optagelse. Under SAN dissektionen er korrekt orientering afgørende for at opnå den rette vævsregion. Men den oprindelige orientering af hjertet kan let gå tabt under dissektionsprocessen, hvilket komplicerer denne bestræbelse. For at sikre den korrekte venstre-højre orientering skal forkamrene derfor inspiceres visuelt. Typisk har højre atrium tendens til at være mere genn...

Hjertet er et komplekst organ styret af både hjerte-iboende og ydre påvirkninger som dem, der stammer fra hjernen. Den sinoatriale knude (SAN) er en defineret region i hjertet, der huser pacemakercellerne (også kaldet sinoatriale celler eller SA-celler), der er ansvarlige for indledningen og forevælelse af pattedyrets hjerteslag1,2. Den iboende puls er den hastighed, der drives af pacemakercellerne uden indflydelse fra andre hjerte- eller neuro-humoristiske påvirkninger, men traditionelle mål for puls hos mennesker og levende dyr, såsom elektrokardiogrammer, afspejler både pacemakeren og neurale påvirkninger på hjertet. Den mest bemærkelsesværdige neurale indflydelse på SA-celler er fra det autonome nervesystem, som konstant modulerer fyringsmønstre for at opfylde kroppens fysiologiske krav3. Støtte denne idé, både sympatiske og parasympatiske fremskrivninger kan findes i nærheden af SAN4. Det iboende hjertenervesystem (ICNS) er en anden vigtig neural indflydelse, hvor ganglioneret plexi, specielt i højre forkamre, innerver og regulere aktiviteten af SAN5,6.
Forståelse pacemaking underskud er klinisk vigtigt, som dysfunktion kan ligge til grund for mange hjertesygdomme, samt bidrage til risikoen for andre komplikationer. Syg sinus syndrom (SSS) er en kategori af sygdomme karakteriseret ved dysfunktion af den sinoatriale knude, som hindrer korrekt pacemaking7,8. SSS kan præsentere med sinus bradycardia, sinus pauser, sinus anholdelse, sinoatrial exit blok, og vekslende bradyarrytmier og tachyarrhytmier9 og kan føre til komplikationer, herunder øget risiko for embolisk slagtilfælde og pludselig død8,10. Personer med Brugada syndrom, en hjertesygdom præget af ventrikelflimmer med en øget risiko for pludselig hjertedød, har større risiko for arytmogenic hændelser, hvis de også har comorbid SAN dysfunktion11,12. Sinoatrial dysfunktion kan også have fysiologiske konsekvenser ud over hjertet. For eksempel er SSS blevet observeret for at udløse anfald hos en patient på grund af cerebral hypoperfusion13.
For at identificere sinoatrial pacemaking underskud, iboende hjertefrekvenser skal bestemmes ved at måle aktiviteten af SAN uden indflydelse af det autonome nervesystem eller humoristiske faktorer. Klinisk kan dette tilnærmes ved farmakologisk autonom blokade14, men den samme teknik kan også anvendes i pattedyrsmodeller for at studere iboende hjertefunktion15,16. Mens denne tilgang blokerer en stor del af bidragende neurale påvirkninger og giver mulighed for in vivo hjerteundersøgelse, det ikke helt fjerne alle ydre påvirkninger på hjertet. En anden forskningsteknik, der anvendes til at studere iboende hjertefunktion i dyremodeller er isolerede hjerte optagelser ved hjælp af Langendorff-perfused hjerter, som typisk involverer målinger ved hjælp af elektrogram, pacing, eller epicardial multielectrode arrays17,18,19,20. Mens denne teknik er mere specifik for hjertefunktion, da det indebærer at fjerne hjertet fra kroppen, kan målingerne stadig påvirkes af mechano-elektriske autoreguleringsmekanismer, der kan påvirke iboende pulsmålinger21. De isolerede hjerteoptagelser kan også stadig påvirkes af autonom regulering gennem ICNS5,6,22,23. Desuden kan det være svært at opretholde en fysiologisk relevant temperatur i hjertet, som er kritisk for hjertefunktionsmålinger, i isolerede hjertetilgange20. En mere direkte metode til at studere SAN-funktionen er specifikt at isolere SAN-væv og måle dets aktivitet. Dette kan opnås gennem SAN strips (isoleret SAN væv) eller isolerede SAN pacemaker celler24,25. Begge kræver en høj grad af teknisk uddannelse, da SAN er en meget lille og højt defineret region, og celleisolation udgør en endnu større udfordring, da afstand kan skade cellens generelle sundhed, hvis den ikke udføres korrekt. Desuden kræver disse teknikker ekspert elektrofysiologiske færdigheder for at kunne registrere fra væv eller celler ved hjælp af individuelle registrering mikroelektroder.
I denne protokol beskriver vi en teknik til at registrere SAN in vitro ved hjælp af et mikroelektrodesystem (MEA) for at opnå iboende pulsmålinger. Denne tilgang har den fordel, at meget specifikke elektrofysiologiske optagelser er tilgængelige for forskere, der mangler intensive elektrofysiologiske færdigheder. MeAs har tidligere været brugt til at studere kardiomyocyt funktion i primære kardiomyocyt kulturer26,27,28,29,30,31,32,hjerteplader33,34,35,36,37,38,39, og hele væv monterer40, 41,42,43,44,45,46,47. Tidligere arbejde er også blevet gjort for at undersøge feltpotentialer i SAN væv41,42. Her leverer vi en metode til at bruge MEA til at registrere og analysere murine iboende SAN fyring satser. Vi beskriver også, hvordan denne teknik kan bruges til at teste farmakologiske virkninger af lægemidler på SAN iboende fyring satser ved at give en prøve eksperiment, der viser virkningerne af 4-aminopyridin (4-AP), en spænding-gated K+ kanal blocker. Ved hjælp af definerede anatomiske landemærker kan vi nøjagtigt registrere SAN uden at skulle udføre de omfattende vævsdektioner eller celleisolationer, der kræves i andre metoder. Mens MEA kan være omkostningsoverkommelige, giver optagelserne meget specifikke og pålidelige målinger af pacemaking, der kan bruges i en lang række kliniske og fysiologiske forskningsapplikationer.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminopyridine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A78403-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5A</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-6C</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm Petri Dishes</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-105G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1C</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1D</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>16060-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2&#183;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen (95% O2, 5% CO2)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Scissors, 4&#34;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15024-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Acquisition PC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CPU: Intel Xeon or Intel Core i7, Memory: 8GB, HDD: 1TB, Graphic Card: NVIDIA or On-board, Screen: 1920x1080</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Microscope</td>
			<td>Jenco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #2 Laminectomy Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11223-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Extra Fine Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11152-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Chamber</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>49WF30</td>
			<td>Used for mouse euthanization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harp Anchor Kit</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>&#160;SHD-22CL/15 WI 64-0247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>SA48-4</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13013-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Aurobindo Pharma Limited IDA, Pashamylaram</td>
			<td>NDC 63739-953-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light for Dissection Microscope</td>
			<td>Dolan-Jenner</td>
			<td>MI150DG 660000391014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magesium chloride (MgCl2)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>208337-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Head Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64HE1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Main Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64MD1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Cap</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KCAP01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Pipe Holder Kit</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KPK02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 ThermoConnector</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-CP04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>&#160;Warner Instruments</td>
			<td>640246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode array (MEA)</td>
			<td>Alpha Med Scientific</td>
			<td>MED-R515A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mobius Software</td>
			<td>WitWerx Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Specific software for the MED64</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>S320-500</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Ultigiene</td>
			<td>NDC 50989-885-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint Brush</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1751733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F155009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump Tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-171-298</td>
			<td>1/8&#39;&#39; Interior Diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethyleneimine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9333-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S671-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgruard Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14074-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipets (3mL graduated)</td>
			<td>Samco Scientific</td>
			<td>225</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice

Den sinoatriale knude (SAN), der ligger i højre atrium, indeholder pacemakercellerne i hjertet, og dysfunktion i denne region kan forårsage takykardi eller bradykardi. Pålidelig identifikation af hjerte pacemaking defekter kræver måling af iboende hjertefrekvenser ved i vid udstrækning at forhindre indflydelsen af det autonome nervesystem, som kan maskere sats underskud. Traditionelle metoder til at analysere iboende hjerte pacemaker funktion omfatter narkotika-induceret autonom blokade til at måle in vivo hjertefrekvenser, isolerede hjerteoptagelser til at måle iboende hjertefrekvenser, og sinoatrial strimmel eller encellet patch-clamp optagelser af sinoatrial pacemaker celler til at måle spontan handling potentielle fyring satser. Men disse mere traditionelle teknikker kan være teknisk udfordrende og vanskelige at udføre. Her præsenterer vi en ny metode til måling af iboende hjertefyringshastighed ved at udføre mikroelektrode array (MEA) optagelser af hele mount sinoatrial node præparater fra mus. MeAs består af flere mikroelektroder arrangeret i et gitterlignende mønster til optagelse af in vitro ekstracellulære feltpotentialer. Den metode, der er beskrevet heri, har den kombinerede fordel, at den er relativt hurtigere, enklere og mere præcis end tidligere tilgange til registrering af iboende hjertefrekvenser, samtidig med at det giver mulighed for nem farmakologisk forhør.

Efter at have tilladt vævet at akklimatificer sig i fadet i 15 min, registreres 10 et-min spor. Vores nuværende protokol registrerer aktivitet i over en time, men vi har registreret stabile fyringsmønstre for ≥4 timer i ikke-offentliggjorte data, der ikke er vist her. Hvis et eksperimentelt præparat er godt til dataindsamling, skal hver optagelseskanal udvise ensartede og jævnt fordelte tilbagevendende bølgeformer (dvs. pigge) af ensartet form for en given kanal (Figur 11D). Disse b?...

Watch this Scientific Journal Video about Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice at JoVE.com

Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice

Denne protokol har til formål at beskrive en ny metode til måling af iboende hjertefyringshastighed ved hjælp af mikroelektrode array registrering af hele sinoatrial node væv til at identificere pacemaking defekter i mus. Farmakologiske agenser kan også indføres i denne metode for at undersøge deres virkninger på iboende pacemaking.

Microelectrode Array Registrering af sinoatrial Node Fyring Sats for at identificere iboende hjerte pacemaking defekter i mus

The sinoatrial node (SAN), located in the right atrium, contains the pacemaker cells of the heart, and dysfunction of this region can cause tachycardia or ...

Måling af iboende puls er en vigtig indikator for hjertesundhed. Denne teknik måler nøjagtigt denne sats, samtidig med at de fleste forvirrende påvirkninger på den sinoatriale knude. MEA-registrering af iboende puls fanger nøjagtige fyringshastighedsdata svarende til enkeltcellede optagelser uden omfattende elektrofysiologitræning.Personer, der bruger denne teknik, kan have svært ved at opnå sunde vævspræparater i tidlige eksperimenter, så øv dissektionen og optimerer buffere og dataindsamlingsindstillinger, før du begynder den rigtige dataindsamling. Demonstrere proceduren vil være Læger Man Si og Praveen Kumar, post-ph.d.-forskere i mit laboratorium. Begynd med at holde huden på den aflivede mus med en hæmostat og bruge kirurgisk saks til at gøre en tværgående snit i huden lige under bunden af brystkassen fra venstre costal bue til højre costal bue.Brug kirurgisk saks til at skære op bughinden og omhyggeligt adskille leveren fra mellemgulvet uden nicking leveren for at forhindre overdreven blødning. Incise mellemgulvet langs brystkassen for at afsløre brysthulen. Brug den kirurgiske saks til at skære de laterale vægge af brystkassen fra kanterne af de costal buer op til kraveben til at udsætte hjertet, derefter bruge en 23 gauge sprøjte nål til pin brystkassen over skulderen.Brug en overførsel pipette til at droppe varm heparinized komplet Tyrode opløsning på hjertet for at holde det fugtigt. Hold lungerne med ekstra fine Graefe-sammentak og skær luftrøret med kirurgisk saks for at fjerne lungerne. For at fjerne hjertet, holde toppen af hjertet med ekstra fine Graefe kraft og skære aorta og ringere vena cava med kirurgisk saks.Overfør hjertet til en Petriskål indeholdende hærdet silikoneelastomer og brug en overførselspipette til badning af hjertet med to til tre milliliter varm hepariniseret komplet Tyroders opløsning. Fastgør hjertets spids til fadet med en dissektionsstift. Hold den ringere vena cava med Dumont 2 laminectomy forceps.Indsæt en 22 gauge sprøjte nål gennem ringere og overlegen vena cava at finde deres position i højre atrium, som også identificerer den omtrentlige position af sinoatrial node. Hold det rigtige atrie vedhæng med Dumont 2 laminectomy pinps, og sæt en dissektionsnål gennem det rigtige atrie vedhæng for at holde den på plads. Gentag den samme procedure for venstre atrie vedhæng, og fjern derefter sprøjtenålen, der spænder over vena cavae.Brug Castroviejo saks til at fjerne toppen af hjertet ved at gøre en tværgående snit på tværs af hjertekamrene for at frigive blodet fra hjertet, derefter vaske hjertet ved at tilføje varm heparinized komplet Tyrode løsning. Brug Castroviejo saks til at skære langs atrioventrikulær septum indtil forkamrene er adskilt fra hjertekamrene og holde snittet tættere på ventrikel. Skær langs den interarterial septum for at fjerne venstre atrium.Placer dissektionsstifterne i periferien af det højre atrium for at få den til at lægge sig fladt. Fjern eventuelt resterende fedt, fartøjer eller væv fra atriummet ved hjælp af Castroviejo-saksen, og find den sinoatriale knude i højre atrium. Tilføj Tyrodes løsning til inputløsningsmodellen, og tænd for strømmen af carbogengas for at ilte Tyroders løsning.Indstil den peristaltiske pumpe til 25 omdr./min., hvilket giver en strømningshastighed på to milliliter i minuttet. Når pumpen er startet, skal du sørge for, at bufferen ikke lækker fra systemet, og indstil temperaturregulatoren til 37 grader Celsius. Brug Dumont 55-sammenkædning til at overføre det dissekerede væv fra petriskålen til mikroelektrodematrixen.Placer forsigtigt vævet med en blød pensel for at overlejre den sinoatriale noderegion i elektrodegitteret. Placer derefter masken over vævet ved hjælp af knogletrakkerne eller eventuelle buede sammenkr vilne. Brug knogletr frem, placer harpeankeret på masken for at holde alt på plads.Arranger mikroelektrode array skålen på stikpladen. Placer forsigtigt perfusionshætten på mikroelektrodeskålen uden at forstyrre harpeskivens anker og fastgør perfusionskløften med tape. Tænd forstærkeren, og konfigurer en arbejdsgang for optagelsen i softwaren.Vælg beat_recording. moflo-skabelon. Åbn den og angiv antallet af spor, sporvarighed, sporinterval, indgangsspænding, prøveudtagningshastighed og andre registreringsparametre i henhold til de ønskede registreringsbetingelser.Klik på optage- og afspilningsknappen for at starte optagelsen og hente data i 10 spor af et minuts varighed med to minutters mellemrum mellem sporene. Sæt pumpen på pause, og skift pumpeindløbsslangen fra den normale optagelsesløsning til Tyroders opløsning, der indeholder det ønskede foretrukne lægemiddel. Genstart pumpen, og fortsæt optagelsen.Når den lægemiddelinfunderede Tyrodes opløsning har nået vævet, optager 10 spor på samme måde som tidligere for baselineoptagelserne. Tag et sidste billede af placeringen af vævet på mikroelektrode array. Åbn den gemte registrerede datafil i analysesoftwaren med beatfrekvensanalyse.Klik på afspil og tillade hele optagelsen til at køre for data visualisering og derefter tildele passende analyse parametre. Vælg de kanaler, der skal medtages i analysen, og angiv de ønskede amplitudmaksima- eller amplititude minimatærskelværdier for automatisk bølgeform peakidentifikation. Klik på afspilningsikonet igen for at køre datasættet igen og bekræfte, at analyseparametrene er passende for en spikeudtræk.Til analyse, identificere de tre mest stabile på hinanden følgende spor, der udviser en stabil slå sats for hvert spor på tværs af de fleste kanaler i den oprindelige periode af eksperimentet og yderligere tre på hinanden følgende stabile spor i løbet af narkotika eksponering periode. Klik på ikonet afspil og optag for at starte analysen. Dataene blev indsamlet fra en 45 dage gammel mandlig vild-type sort schweizisk mus for sinoatrial node beat frekvens måling.Bølgeformene med forskellige former og amplituder blev observeret i forskellige kanaler, og alle kanaler viste identiske interspike intervaller og fyringsfrekvenser. Imidlertid kan graden af vævskontakt med elektroden også påvirke bølgeformegenskaberne såsom amplitud. Ud af de 10 registrerede spor blev de tre på hinanden følgende kanaler med stabil beatfrekvens og interspikeinterval valgt til yderligere analyse.De dårlige ekstraherede spike mønstre bør være fraværende, men hvis til stede er enten påvirket af støj eller ustabil. De bølgeformer, der svarer til individuelle hjerteslag afspejler iboende hjerte pacemaking aktivitet. Mikroelektrode array systemet giver mulighed for nem anvendelse af lægemiddelmidler til at analysere de farmakologiske virkninger.Den iboende affyringshastighed for udvalgte tre spor på tværs af alle 64 kanaler viste sig at være ca. 320 slag i minuttet i prøvetagningsdataene. Indførelsen af 4-aminopyrimidin øgede interspike intervaller som forventet, hvilket reducerede beatfrekvensen fra 320 til 210 slag i minuttet. For at indsamle pålidelige data til analyse er det vigtigt at bekræfte, at væv er sundt under registreringen ved at kontrollere, at sporene er stabile og opfylder standardkriterierne.MeAs kan bruges til at registrere hjerteaktivitet i andre regioner af hjertet, så detaljeret region-specifikke karakterisering, der er modtagelige for at studere virkningerne af genetisk og farmakologisk manipulation.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

Cardiac Stress Test induceret af Dobutamin og overvåges af hjertekateterisation i mus

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the ...

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

En metode til at undersøge virkningen af ​​Kemisk induceret ovariesvigt på arbejdskapacitet og Cardiac Tilpasning i mus

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Multi-elektrodeformation Optagelser af menneskelige Epileptiske Postoperativ cortexvæv

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Hjertekateterisation i mus til at måle trykket Volume Forholdet: Undersøgelse af Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

Myokardieinfarkt i neonatale mus, en model af Cardiac Regeneration

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

En lukket-bryst Model til at fremkalde tværgående aorta konstriktion i mus

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice

Adeno-associeret Virus-medieret levering af CRISPR for hjerte gen redigering i mus

The clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system has greatly facilitated genome engineering in both cultured cells and ...

Autonomic Function Following Concussion in Youth Athletes: An Exploration of Heart Rate Variability Using 24-hour Recording Methodology

Autonom funktion efter hjernerystelse i unge atleter: en udforskning af pulsvariationen 24-timers optagelse metode

Participation in organized sports makes a significant contribution to youth development, but places youth at a higher risk for sustaining a concussion. To ...

Transdermal Measurement of Glomerular Filtration Rate in Mice

Transdermal måling af glomerulær filtrationshastighed i mus

Transdermal analysis of glomerular filtration rate (GFR) is an established technique that is used to assess renal function in mouse and rat models of ...