Name: microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice
Uploaded: 2021-07-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice at JoVE.com

इस काम को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों, अनुदान संख्या R01NS100954 और R01NS099188 द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

यहां वर्णित सभी प्रायोगिक प्रक्रियाएं दक्षिणी मेथोडिस्ट विश्वविद्यालय में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) द्वारा अनुमोदित राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) के दिशा-निर्देशों के ?...

अभ्यास और सैन विच्छेदन प्रक्रिया माहिर के बाद से ऊतक नाजुक है और स्वस्थ ऊतक एक सफल रिकॉर्डिंग के लिए आवश्यक है जरूरी है । सैन विच्छेदन के दौरान, ऊतक के उचित क्षेत्र को प्राप्त करने के लिए सही अभिविन्यास...

हृदय एक जटिल अंग है जो हृदय-आंतरिक और बाह्य दोनों प्रभावों से संचालित होता है जैसे कि मस्तिष्क में उत्पन्न होने वाले। सिनोट्रायल नोड (सैन) दिल में एक परिभाषित क्षेत्र है जिसमें पेसमेकर कोशिकाएं (जिसे सिनोट्रायल कोशिकाओं, या एसए कोशिकाओं के रूप में भी जाना जाता है) स्तनधारी दिल की धड़कन1,2की दीक्षा और स्थायीकरण के लिए जिम्मेदार है। आंतरिक हृदय गति अन्य हृदय या न्यूरो-ह्यूमरल प्रभावों के प्रभाव के बिना पेसमेकर कोशिकाओं द्वारा संचालित दर है, लेकिन मनुष्यों और जीवित जानवरों में हृदय गति के पारंपरिक उपाय, जैसे इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम, दिल पर पेसमेकर और तंत्रिका प्रभाव दोनों को प्रतिबिंबित करते हैं। एसए कोशिकाओं पर सबसे उल्लेखनीय तंत्रिका प्रभाव स्वायत्त तंत्रिका तंत्र से है, जो शरीर की शारीरिक आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए लगातार फायरिंग पैटर्न को संशोधित करता है3। इस विचार का समर्थन करते हुए, सहानुभूतिपूर्ण और परानुभूति दोनों अनुमानों को सैन4के पास पाया जा सकता है । आंतरिक हृदय तंत्रिका तंत्र (आईसीएन) एक और महत्वपूर्ण तंत्रिका प्रभाव है जहां गैंगलियोनेट प्लेक्सी, विशेष रूप से सही अटरिया, इनरवेट में और सैन5,6की गतिविधि को विनियमित करता है।
पेसमेकिंग घाटे को समझना चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण है, क्योंकि शिथिलता कई हृदय विकारों को कम कर सकती है, साथ ही अन्य जटिलताओं के जोखिम में योगदान दे सकती है। बीमार साइनस सिंड्रोम (एसएसएस) सिनोट्रायल नोड की शिथिलता की विशेषता वाली बीमारियों की एक श्रेणी है जो उचित पेसमेकिंग7,8में बाधा डालती है। एसएसएस साइनस ब्रैडीकार्डिया, साइनस पॉज़, साइनस गिरफ्तारी, साइनोट्रायल एग्जिट ब्लॉक, और बारी-बारी से ब्रैडीरिथिमियास और टैचियारहिथमियास9 के साथ पेश कर सकता है और एम्बोलिक स्ट्रोक और अचानक मौत8,10के बढ़ते जोखिम सहित जटिलताओं का कारण बन सकता है। ब्रुगाडा सिंड्रोम वाले, अचानक हृदय मृत्यु के बढ़ते जोखिम के साथ वेंट्रिकुलर फिब्रिलेशन द्वारा चिह्नित कार्डियक डिसऑर्डर, अतालता की घटनाओं के लिए अधिक जोखिम में हैं, अगर उनके पास कोमोरबिड सैन डिसफंक्शन11,12भी हैं। सिनोलियल डिसफंक्शन के दिल से परे शारीरिक परिणाम भी हो सकते हैं। उदाहरण के लिए, सेरेब्रल हाइपोपरफ्यूजन13के कारण रोगी में दौरे को ट्रिगर करने के लिए एसएसएस देखा गया है।
सिनोट्रायल पेसमेकिंग घाटे की पहचान करने के लिए, आंतरिक हृदय दरों को स्वायत्त तंत्रिका तंत्र या विनोदी कारकों के प्रभाव के बिना सैन की गतिविधि को मापने के द्वारा निर्धारित करने की आवश्यकता होती है। चिकित्सकीय रूप से, यह औषधीय स्वायत्त नाकाबंदी14द्वारा अनुमानित किया जा सकता है, लेकिन आंतरिक हृदय समारोह15,16का अध्ययन करने के लिए स्तनधारी मॉडलों में भी यही तकनीक लागू की जा सकती है। हालांकि यह दृष्टिकोण तंत्रिका प्रभावों का योगदान करने के एक बड़े हिस्से को अवरुद्ध करता है और वीवो कार्डियक परीक्षा में अनुमति देता है, यह दिल पर सभी बाह्य प्रभावों को पूरी तरह से खत्म नहीं करता है। पशु मॉडल में आंतरिक हृदय समारोह का अध्ययन करने के लिए उपयोग की जाने वाली एक अन्य शोध तकनीक लैंगेंडोर्फ-परफ्यूस्ड दिलों का उपयोग करके अलग-अलग दिल रिकॉर्डिंग है, जिसमें आम तौर पर इलेक्ट्रोग्राम, पेसिंग, या एपिकार्डियलमल्टीइलेक्ट्रोड सरणी17, 18,19,20का उपयोग करके माप शामिल होते हैं। हालांकि यह तकनीक हृदय कार्य के लिए अधिक विशिष्ट है क्योंकि इसमें शरीर से दिल को हटाना शामिल है, माप अभी भी मशीनो-इलेक्ट्रिक ऑटोरेगुलेटरी तंत्र से प्रभावित हो सकते हैं जो आंतरिक हृदय गति माप21को प्रभावित कर सकते हैं। अलग दिल की रिकॉर्डिंग अभी भी आईसीएनएस5, 6 , 22 ,23केमाध्यम से स्वायत्त नियमन से प्रभावित हो सकती है । इसके अलावा, दिल के एक शारीरिक रूप से प्रासंगिक तापमान को बनाए रखने, जो हृदय समारोह माप के लिए महत्वपूर्ण है, अलग दिल दृष्टिकोण20में मुश्किल हो सकता है । सैन फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए एक अधिक प्रत्यक्ष तरीका विशेष रूप से सैन ऊतक को अलग करना और इसकी गतिविधि को मापना है। इसे सैन स्ट्रिप्स (अलग सैन ऊतक) या अलग सैन पेसमेकर कोशिकाओं24, 25के माध्यम से पूरा किया जा सकता है। दोनों को उच्च स्तर के तकनीकी प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है, क्योंकि सैन एक बहुत छोटा और अत्यधिक परिभाषित क्षेत्र है, और सेल अलगाव एक और भी बड़ी चुनौती बन गया है क्योंकि वियोजन सही ढंग से प्रदर्शन न करने पर कोशिका के समग्र स्वास्थ्य को नुकसान पहुंचा सकता है। इसके अलावा, इन तकनीकों को व्यक्तिगत रिकॉर्डिंग माइक्रोइलेक्ट्रोड का उपयोग करके ऊतक या कोशिकाओं से सफलतापूर्वक रिकॉर्ड करने के लिए विशेषज्ञ इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल कौशल की आवश्यकता होती है।
इस प्रोटोकॉल में, हम आंतरिक हृदय गति माप प्राप्त करने के लिए माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणी (विदेश मंत्रालय) का उपयोग करके सैन इन विट्रो को रिकॉर्ड करने की तकनीक का वर्णन करते हैं। इस दृष्टिकोण में गहन इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल स्किलसेट की कमी वाले शोधकर्ताओं के लिए अत्यधिक विशिष्ट इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल रिकॉर्डिंग को सुलभ बनाने का लाभ है। एमईए का उपयोग पहले प्राथमिक कार्डियोमायोसाइटसंस्कृतियों26, 27, 28, 29,30,31,32,हृदय पत्रक33,34,35, 36,37,38,39,और ऊतक पूरे माउंट40,में कार्डियोमायोसाइट फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए किया गयाहै। 41,42,43,44,45,46,47. सैन टिश्यू41,42में क्षेत्र की क्षमता की जांच करने के लिएपिछलाकार्य भी किया गया है . यहां, हम मूरीन आंतरिक सैन फायरिंग दरों को रिकॉर्ड करने और विश्लेषण करने के लिए विदेश मंत्रालय का उपयोग करने के लिए एक पद्धति प्रदान करते हैं। हम यह भी वर्णन करते हैं कि कैसे इस तकनीक का उपयोग सैन आंतरिक फायरिंग दरों पर दवाओं के औषधीय प्रभावों का परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है, जो एक वोल्टेज-गेटेड के+ चैनल अवरोधक 4-अमीनोपिरिडीन (4-एपी) के प्रभाव को दर्शाने वाला नमूना प्रयोग प्रदान करता है। परिभाषित शारीरिक स्थलों का उपयोग करके, हम अन्य तरीकों में आवश्यक व्यापक ऊतक विच्छेदन या सेल अलगाव को किए बिना सैन को सटीक रूप से रिकॉर्ड कर सकते हैं। जबकि विदेश मंत्रालय लागत निषेधात्मक हो सकता है, रिकॉर्डिंग पेसमेकिंग के अत्यधिक विशिष्ट और विश्वसनीय उपाय प्रदान करती है जिसका उपयोग नैदानिक और शारीरिक अनुसंधान अनुप्रयोगों की एक विशाल सरणी में किया जा सकता है।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminopyridine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A78403-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5A</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-6C</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm Petri Dishes</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-105G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1C</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1D</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>16060-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2&#183;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen (95% O2, 5% CO2)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Scissors, 4&#34;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15024-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Acquisition PC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CPU: Intel Xeon or Intel Core i7, Memory: 8GB, HDD: 1TB, Graphic Card: NVIDIA or On-board, Screen: 1920x1080</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Microscope</td>
			<td>Jenco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #2 Laminectomy Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11223-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Extra Fine Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11152-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Chamber</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>49WF30</td>
			<td>Used for mouse euthanization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harp Anchor Kit</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>&#160;SHD-22CL/15 WI 64-0247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>SA48-4</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13013-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Aurobindo Pharma Limited IDA, Pashamylaram</td>
			<td>NDC 63739-953-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light for Dissection Microscope</td>
			<td>Dolan-Jenner</td>
			<td>MI150DG 660000391014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magesium chloride (MgCl2)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>208337-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Head Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64HE1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Main Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64MD1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Cap</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KCAP01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Pipe Holder Kit</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KPK02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 ThermoConnector</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-CP04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>&#160;Warner Instruments</td>
			<td>640246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode array (MEA)</td>
			<td>Alpha Med Scientific</td>
			<td>MED-R515A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mobius Software</td>
			<td>WitWerx Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Specific software for the MED64</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>S320-500</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Ultigiene</td>
			<td>NDC 50989-885-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint Brush</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1751733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F155009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump Tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-171-298</td>
			<td>1/8&#39;&#39; Interior Diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethyleneimine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9333-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S671-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgruard Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14074-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipets (3mL graduated)</td>
			<td>Samco Scientific</td>
			<td>225</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice

सही एट्रियम में स्थित सिनोट्रायल नोड (सैन) में दिल की पेसमेकर कोशिकाएं होती हैं, और इस क्षेत्र की शिथिलता टैचिकार्डिया या ब्रैडकार्डिया का कारण बन सकती है। हृदय गतिमान दोषों की विश्वसनीय पहचान काफी हद तक स्वायत्त तंत्रिका तंत्र है, जो मुखौटा दर घाटे कर सकते है के प्रभाव को रोकने के द्वारा आंतरिक दिल की दर के माप की आवश्यकता है । आंतरिक कार्डियक पेसमेकर फ़ंक्शन का विश्लेषण करने के लिए पारंपरिक तरीकों में वीवो हृदय दरों में मापने के लिए दवा-प्रेरित स्वायत्त नाकाबंदी, आंतरिक हृदय दरों को मापने के लिए अलग-थलग दिल रिकॉर्डिंग, और सहज कार्रवाई संभावित फायरिंग दरों को मापने के लिए सिनोट्रायल पेसमेकर कोशिकाओं की सिनोट्रायल स्ट्रिप या एकल-सेल पैच-क्लैम्प रिकॉर्डिंग शामिल हैं। हालांकि, इन अधिक पारंपरिक तकनीकों तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण और प्रदर्शन करने के लिए मुश्किल हो सकता है । यहां, हम चूहों से पूरे माउंट सिनोट्रायल नोड की रिकॉर्डिंग की माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणी (विदेश मंत्रालय) रिकॉर्डिंग का प्रदर्शन करके आंतरिक हृदय फायरिंग दर को मापने के लिए एक नई पद्धति पेश करते हैं। एमईए विट्रो एक्स्ट्रासेलुलर फील्ड क्षमता में रिकॉर्डिंग के लिए ग्रिड जैसे पैटर्न में व्यवस्थित कई माइक्रोइलेक्ट्रोड से बना है। यहां वर्णित विधि में आंतरिक हृदय दरों को रिकॉर्ड करने के लिए पिछले दृष्टिकोणों की तुलना में अपेक्षाकृत तेज, सरल और अधिक सटीक होने का संयुक्त लाभ है, जबकि आसान औषधीय पूछताछ की अनुमति भी है।

ऊतक को 15 मिनट के लिए पकवान में acclimate करने की अनुमति देने के बाद, 10 1-मिनट के निशान दर्ज किए जाते हैं। हमारे वर्तमान प्रोटोकॉल एक घंटे से अधिक के लिए गतिविधि रिकॉर्ड करता है, लेकिन हमने यहां नहीं दिखाए गए अप्र?...

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Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice

इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य चूहों में पेसमेकिंग दोषों की पहचान करने के लिए पूरे सिनोट्रायल नोड ऊतक की माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणी रिकॉर्डिंग का उपयोग करके आंतरिक कार्डियक फायरिंग दर को मापने के लिए एक नई पद्धति का वर्णन करना है। आंतरिक पेसमेकिंग पर उनके प्रभावों का अध्ययन करने के लिए इस विधि में औषधीय एजेंटों को भी पेश किया जा सकता है।

चूहों में आंतरिक हृदय गतिमान दोषों की पहचान करने के लिए सिनोट्रायल नोड फायरिंग रेट की माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणी रिकॉर्डिंग

The sinoatrial node (SAN), located in the right atrium, contains the pacemaker cells of the heart, and dysfunction of this region can cause tachycardia or ...

आंतरिक हृदय गति को मापना हृदय स्वास्थ्य का एक महत्वपूर्ण संकेतक है। यह तकनीक सिनोट्रायल नोड पर अधिकांश भ्रामक प्रभावों को छोड़कर इस दर को सटीक रूप से मापती है। आंतरिक हृदय गति की विदेश मंत्रालय रिकॉर्डिंग व्यापक इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी प्रशिक्षण के बिना एकल सेल रिकॉर्डिंग के समान सटीक फायरिंग दर डेटा कैप्चर करती है।इस तकनीक का उपयोग करने वाले व्यक्ति शुरुआती प्रयोगों में स्वस्थ ऊतक तैयारी प्राप्त करने के लिए संघर्ष कर सकते हैं, इसलिए विच्छेदन का अभ्यास करें और वास्तविक डेटा संग्रह शुरू करने से पहले बफ़र्स और डेटा संग्रह सेटिंग्स का अनुकूलन करें। प्रक्रिया का प्रदर्शन डॉक्टरों आदमी सी और प्रवीण कुमार, मेरी प्रयोगशाला में डॉक्टरेट के बाद शोधकर्ताओं होगा । एक हीमोस्टेट के साथ इच्छामृत्यु माउस की त्वचा को पकड़ कर शुरू करें और बाएं कोस्टल आर्क से दाएं कॉस्टल आर्क से रिबकेज के नीचे त्वचा में एक ट्रांसवर्स चीरा बनाने के लिए सर्जिकल कैंची का उपयोग करें।पेरिटोनम को खोलने के लिए सर्जिकल कैंची का उपयोग करें और अत्यधिक रक्तस्राव को रोकने के लिए यकृत को निकिंग के बिना डायाफ्राम से यकृत को सावधानी से अलग करें। छाती गुहा को बेनकाब करने के लिए छाती के साथ डायाफ्राम को चीरना। दिल को बेनकाब करने के लिए क्लैविक्स तक तटीय मेहराब के किनारों से रिबकेज की पार्श्व दीवारों को काटने के लिए सर्जिकल कैंची का उपयोग करें, फिर कंधे पर रिबकेज पिन करने के लिए 23 गेज सिरिंज सुई का उपयोग करें।इसे नम रखने के लिए दिल पर गर्म हेपरिनाइज्ड पूर्ण टायरोड के समाधान को छोड़ने के लिए एक स्थानांतरण पिपेट का उपयोग करें। फेफड़ों को अतिरिक्त ठीक ग्रीफ संदंश के साथ पकड़ें और फेफड़ों को हटाने के लिए सर्जिकल कैंची के साथ श्वासनली को तोड़ दें। दिल को हटाने के लिए, अतिरिक्त ठीक ग्रीफे संदंश के साथ दिल के शीर्ष पकड़ो और सर्जिकल कैंची के साथ महाधमनी और अवर वेना कावा काट।ठीक सिलिकॉन इलास्टोमर युक्त पेट्री डिश में दिल को स्थानांतरित करें और गर्म हेपरिनाइज्ड पूर्ण टायरोड के समाधान के दो से तीन मिलीलीटर के साथ दिल को स्नान करने के लिए स्थानांतरण पिपेट का उपयोग करें। एक विच्छेदन पिन के साथ पकवान के लिए दिल के शीर्ष संलग्न करें। ड्यूमोंट 2 लेमिनेक्टोमी संदंश के साथ अवर वेना कावा पकड़ो।सही एट्रियम में अपनी स्थिति का पता लगाने के लिए अवर और बेहतर वेना कावा के माध्यम से 22 गेज सिरिंज सुई डालें, जो सिनोट्रायल नोड की अनुमानित स्थिति को भी पहचानता है। ड्यूमोंट 2 लेमिनेक्टॉमी संदंश के साथ सही अलिंद उपांग पकड़ो, और इसे जगह में रखने के लिए सही अलिंद उपांग के माध्यम से एक विच्छेदन पिन डाल दिया। बाएं अलिंद उपांग के लिए एक ही प्रक्रिया दोहराएं, फिर सिरिंज सुई को हटा दें जो वेना कैवे तक फैला है।दिल से रक्त को रिहा करने के लिए वेंट्रिकल्स भर में एक उलटा चीरा बनाकर दिल के शीर्ष को हटाने के लिए कैस्ट्रोविजो कैंची का उपयोग करें, फिर गर्म हेपरिनाइज्ड पूर्ण टायरोड के समाधान को जोड़कर दिल को धोएं। एट्रीयोवेंट्रिकुलर सेप्टम के साथ काटने के लिए कैस्ट्रोविजो कैंची का उपयोग करें जब तक कि अटरिया वेंट्रिकल्स से अलग न हो जाए और चीरा को वेंट्रिकल के करीब रखें। बाएं एट्रियम को हटाने के लिए अंतरआर्टेरियल पट के साथ काटें।विच्छेदन पिन को सपाट बनाने के लिए सही एट्रियम की परिधि में रखें। कैस्ट्रोविजो कैंची का उपयोग करके एट्रियम से किसी भी शेष वसा, जहाजों या ऊतकों को हटा दें और सही एट्रियम में सिनोट्रायल नोड का पता लगाएं। इनपुट समाधान मॉडल में टायरोड का समाधान जोड़ें और टायरोड के समाधान को ऑक्सीजन करने के लिए कार्बोजन गैस के प्रवाह को चालू करें।पेरिस्टाल्टिक पंप को 25 आरपीएम सेट करें, जो प्रति मिनट दो मिलीलीटर की प्रवाह दर देता है। पंप शुरू करने के बाद, सुनिश्चित करें कि बफर सिस्टम से लीक नहीं हो रहा है और तापमान नियंत्रक को 37 डिग्री सेल्सियस तक सेट करें। विच्छेदन पेट्री डिश से विच्छेदन पेट्री डिश से विच्छेदन वाले ऊतकों को माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणी ग्रिड पर स्थानांतरित करने के लिए ड्यूमोंट 55 संदंश का उपयोग करें।इलेक्ट्रोड ग्रिड के सिनोट्रायल नोड क्षेत्र को ओवरले करने के लिए नरम तूलिका के साथ धीरे-धीरे ऊतक की स्थिति। फिर हड्डी संदंश या किसी भी घुमावदार संदंश का उपयोग कर ऊतक के ऊपर जाल रखें। हड्डी संदंश का उपयोग करना, जगह में सब कुछ पकड़ करने के लिए जाल पर वीणा लंगर की स्थिति ।कनेक्टर प्लेट पर माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणी पकवान की व्यवस्था करें। ध्यान से वीणा टुकड़ा लंगर परेशान बिना माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणी पकवान पर परफ्यूजन टोपी जगह है और टेप के साथ परफ्यूजन अंतर सुरक्षित । एम्पलीफायर चालू करें और सॉफ्टवेयर में रिकॉर्डिंग के लिए एक वर्कफ्लो सेट करें।beat_recording का चयन करें। मोफ्लो टेम्पलेट। इसे खोलें और वांछित रिकॉर्डिंग शर्तों के अनुसार निशान, ट्रेस अवधि, ट्रेस अंतराल, इनपुट वोल्टेज, नमूना दर और अन्य रिकॉर्डिंग पैरामीटर की संख्या निर्धारित करें।रिकॉर्डिंग शुरू करने और निशान के बीच दो मिनट के अंतराल के साथ एक मिनट की अवधि के 10 निशान के लिए डेटा प्राप्त करने के लिए रिकॉर्ड और प्ले बटन पर क्लिक करें । पंप को रोकें और सामान्य रिकॉर्डिंग समाधान से सामान्य रिकॉर्डिंग समाधान से पंप इनोफ्लो ट्यूबिंग को पसंद की वांछित दवा वाले टायरोड के समाधान पर स्विच करें। पंप को फिर से शुरू करें और रिकॉर्डिंग फिर से शुरू करें।एक बार दवा संचार है Tyrode समाधान ऊतक तक पहुंच गया है, उसी तरीके से 10 निशान रिकॉर्ड के रूप में बेसलाइन रिकॉर्डिंग के लिए पहले किया । माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणी पर ऊतक की स्थिति की अंतिम तस्वीर लें। विश्लेषण सॉफ्टवेयर के बीट फ्रीक्वेंसी एनालिसिस टेम्पलेट में सेव किए गए रिकॉर्डेड डेटा फाइल को खोलें।नाटक पर क्लिक करें और पूरी रिकॉर्डिंग डेटा विज़ुअलाइज़ेशन के लिए चलाने के लिए और फिर उचित विश्लेषण मापदंडों को आवंटित करने की अनुमति दें। विश्लेषण में शामिल किए जाने वाले चैनलों का चयन करें और स्वचालित तरंग शिखर पहचान के लिए वांछित आयाम मैक्सिमा या आयाम मिनीमा दहलीज मूल्यों को सेट करें। डेटासेट को फिर से चलाने के लिए प्ले आइकन पर फिर से क्लिक करें और पुष्टि करें कि विश्लेषण पैरामीटर स्पाइक निष्कर्षण के लिए उपयुक्त हैं।विश्लेषण के लिए, तीन सबसे स्थिर लगातार निशान है कि प्रयोग की आधारभूत अवधि के दौरान सबसे चैनलों में प्रत्येक ट्रेस के लिए एक स्थिर पिटाई दर प्रदर्शन और दवा जोखिम अवधि के दौरान एक और लगातार तीन स्थिर निशान की पहचान । विश्लेषण शुरू करने के लिए प्ले और रिकॉर्ड आइकन पर क्लिक करें। डेटा एक ४५ दिन पुराने पुरुष जंगली प्रकार काले स्विस माउस से सिनोट्रायल नोड बीट आवृत्ति माप के लिए एकत्र किया गया था ।विभिन्न चैनलों में विभिन्न आकृतियों और आयामों के साथ तरंग ों को देखा गया और सभी चैनलों ने समान इंटरसिके अंतराल और फायरिंग आवृत्तियों को दिखाया। हालांकि, इलेक्ट्रोड के साथ ऊतक संपर्क की डिग्री भी आयाम जैसे तरंग विशेषताओं को प्रभावित कर सकती है। 10 रिकॉर्ड किए गए निशानों से, स्थिर बीट फ्रीक्वेंसी और इंटरसिक इंटरपिक इंटरवल के साथ लगातार तीन चैनलों को आगे के विश्लेषण के लिए चुना गया था।खराब निकाले गए स्पाइक पैटर्न अनुपस्थित होने चाहिए, लेकिन यदि वर्तमान या तो शोर या अस्थिर से प्रभावित होते हैं। तरंग जो व्यक्तिगत दिल की धड़कनों के अनुरूप होती है, आंतरिक हृदय गति निर्माण गतिविधि को दर्शाती है। माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणी सिस्टम दवा एजेंटों के आसान आवेदन को औषधीय प्रभावों का विश्लेषण करने की अनुमति देता है।सभी ६४ चैनलों में चयनित तीन निशानों की आंतरिक गोलीबारी दर नमूना डेटा में प्रति मिनट लगभग ३२० धड़कता पाया गया था । 4-अमीनोपीरिमिडीन की शुरूआत ने उम्मीद के अनुसार इंटरसिक अंतराल में वृद्धि की, जिससे बीट आवृत्ति 320 से 210 बीट्स प्रति मिनट कम हो गई। विश्लेषण के लिए विश्वसनीय डेटा एकत्र करने के लिए, यह पुष्टि करना महत्वपूर्ण है कि रिकॉर्डिंग के दौरान ऊतक स्वस्थ है कि निशान स्थिर हैं और मानक मानदंडों को पूरा करते हैं।MEAs का उपयोग हृदय के अन्य क्षेत्रों में हृदय गतिविधि को रिकॉर्ड करने के लिए किया जा सकता है, जिससे विस्तृत क्षेत्र-विशिष्ट लक्षण वर्णन की अनुमति मिल सकती है जो आनुवंशिक और औषधीय हेरफेर के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए उत्तरदायी है।

Research

JoVE Journal

Medicine

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

एक रणनीति autism और एक प्रकार का पागलपन जैसे आम विकार में डी Novo उत्परिवर्तनों को पहचानें

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

कार्डियक तनाव परीक्षण Dobutamine द्वारा प्रेरित और चूहे में कार्डियक कैथीटेराइजेशन द्वारा निगरानी

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the ...

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

चूहे में व्यायाम क्षमता और कार्डिएक अनुकूलन पर रासायनिक प्रेरित डिम्बग्रंथि विफलता के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए एक विधि

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

मानव मिरगी पश्चात cortical ऊतक की बहु इलेक्ट्रोड सरणी रिकॉर्डिंग

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Bowditch &#39;प्रभाव की जांच: दबाव माप उपाय रिश्ते को चूहे में कार्डिएक कैथीटेराइजेशन

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

नवजात चूहों में रोधगलन, कार्डिएक पुनर्जनन की एक मॉडल

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

एक बंद छाती मॉडल चूहों में अनुप्रस्थ महाधमनी कसना प्रेरित करने के लिए

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice

Adeno-जुड़े वायरस-चूहों में कार्डियक जीन संपादन के लिए CRISPR की मध्यस्थता डिलीवरी

The clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system has greatly facilitated genome engineering in both cultured cells and ...

Autonomic Function Following Concussion in Youth Athletes: An Exploration of Heart Rate Variability Using 24-hour Recording Methodology

स्वायत्त समारोह युवा एथलीटों में हिलाना निंनलिखित: दिल की दर परिवर्तनशीलता का एक अंवेषण 24 घंटे रिकॉर्डिंग पद्धति का उपयोग

Participation in organized sports makes a significant contribution to youth development, but places youth at a higher risk for sustaining a concussion. To ...

Transdermal Measurement of Glomerular Filtration Rate in Mice

चूहों में Glomerular निस् दर का ट्रांसडर्मल मापन

Transdermal analysis of glomerular filtration rate (GFR) is an established technique that is used to assess renal function in mouse and rat models of ...