Name: microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice
Uploaded: 2021-07-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av National Institutes of Health, tilskuddsnummer R01NS100954 og R01NS099188.

Alle eksperimentelle prosedyrer beskrevet her er utført i samsvar med retningslinjene fra National Institutes of Health (NIH), som godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Southern Methodist University.
1. Belegg multielektrode array (MEA) for opptak
<ol><li>Lag 25 mM boratbuffer.<ol>
<li>Løs opp 0,953 g Na2B4O7·10 H2O i 80 ml destillert vann.</li>
		<li>Juster pH til 8,4 med HCl og tilsett deretter destillert vann til...

Å praktisere og mestre SAN-disseksjonsprosessen er viktig siden vevet er skjøre og sunt vev er nødvendig for en vellykket registrering. Under SAN-disseksjonen er riktig orientering viktig for å oppnå riktig vevsområde. Imidlertid kan hjertets opprinnelige orientering lett gå tapt under disseksjonsprosessen, noe som kompliserer denne bestrebelsen. Derfor, for å sikre riktig venstre-høyre orientering, bør atriene inspiseres visuelt. Vanligvis har høyre atrium en tendens til å være mer gjennomsiktig, mens venst...

Hjertet er et komplekst organ styrt av både hjerte-iboende og ekstrinsiske påvirkninger som de som stammer fra hjernen. Den sinoatriale noden (SAN) er en definert region i hjertet som huser pacemakercellene (også referert til som sinoatriale celler eller SA-celler) som er ansvarlige for initiering og videreføring av pattedyrets hjerteslag1,2. Den iboende hjertefrekvensen er frekvensen drevet av pacemakercellene uten påvirkning av andre hjerte- eller nevro-humorale påvirkninger, men tradisjonelle mål på hjertefrekvens hos mennesker og levende dyr, som elektrokardiogrammer, gjenspeiler både pacemakeren og nevrale påvirkninger på hjertet. Den mest bemerkelsesverdige nevrale påvirkningen på SA-celler er fra det autonome nervesystemet, som hele tiden modulerer avfyringsmønstre for å møte kroppens fysiologiske krav3. Støtte denne ideen, både sympatiske og parasympatiske projeksjoner finnes i nærheten av SAN4. Det iboende hjertenervesystemet (ICNS) er en annen viktig nevral påvirkning der ganglionated plexi, spesielt i høyre atria, innervate og regulerer aktiviteten til SAN5,6.
Å forstå tempomaking underskudd er klinisk viktig, da dysfunksjon kan underbe tro mange hjertesykdommer, samt bidra til risikoen for andre komplikasjoner. Syk sinus syndrom (SSS) er en kategori av sykdommer preget av dysfunksjon av sinoatrial noden som hindrer riktig pacemaking7,8. SSS kan presentere med sinus bradykardi, sinus pauser, sinus arrestasjon, sinoatrial exit blokk, og vekslende bradyarrythmias og tachyarrhythmias9 og kan føre til komplikasjoner inkludert økt risiko for embolisk slag og plutselig død8,10. De med Brugada syndrom, en hjertesykdom preget av ventrikulær fibrillasjon med økt risiko for plutselig hjertedød, har større risiko for arytmogene hendelser hvis de også har komorbid SAN dysfunksjon11,12. Sinoatrial dysfunksjon kan også ha fysiologiske konsekvenser utover hjertet. For eksempel har SSS blitt observert for å utløse anfall hos en pasient på grunn av cerebral hypoperfusjon13.
For å identifisere sinoatrial pacemaking underskudd, iboende hjertefrekvenser må bestemmes ved å måle aktiviteten til SAN uten påvirkning av autonome nervesystemet eller humorale faktorer. Klinisk kan dette tilnærmes av farmakologisk autonom blokade14, men den samme teknikken kan også brukes i pattedyrmodeller for å studere iboende hjertefunksjon15,16. Selv om denne tilnærmingen blokkerer en stor del av å bidra med nevrale påvirkninger og tillater in vivo hjerteundersøkelse, eliminerer den ikke helt alle ekstrinsiske påvirkninger på hjertet. En annen forskningsteknikk som brukes til å studere iboende hjertefunksjon i dyremodeller, er isolerte hjerteopptak ved hjelp av Langendorff-perfused hjerter, som vanligvis innebærer målinger ved hjelp av elektrogrammer, pacing eller epikardiale multielektrode matriser17,18,19,20. Selv om denne teknikken er mer spesifikk for hjertefunksjon siden den innebærer å fjerne hjertet fra kroppen, kan målingene fortsatt påvirkes av mekano-elektriske autoregulatoriske mekanismer som kan påvirke iboende hjertefrekvensmålinger21. De isolerte hjerteopptakene kan også fortsatt påvirkes av autonom regulering gjennom ICNS5,6,22,23. Videre kan det være vanskelig å opprettholde en fysiologisk relevant temperatur i hjertet, som er kritisk for hjertefunksjonsmålinger, i isolerte hjertetilnærminger20. En mer direkte metode for å studere SAN-funksjonen er å isolere SAN-vev spesifikt og måle aktiviteten. Dette kan oppnås gjennom SAN-strimler (isolert SAN-vev) eller isolerte SAN pacemaker-celler24,25. Begge krever en høy grad av teknisk opplæring, da SAN er en svært liten og svært definert region, og celleisolasjon utgjør en enda større utfordring, da dissosiasjon kan skade cellens generelle helse hvis den ikke utføres riktig. Videre krever disse teknikkene ekspert elektrofysiologiske ferdigheter for å kunne registrere fra vevet eller cellene ved hjelp av individuelle opptaksmikroelektroder.
I denne protokollen beskriver vi en teknikk for å registrere SAN in vitro ved hjelp av en mikroelektrode array (MEA) for å oppnå iboende pulsmålinger. Denne tilnærmingen har fordelen av å gjøre svært spesifikke elektrofysiologiske opptak tilgjengelige for forskere som mangler intensive elektrofysiologiske ferdigheter. MEAer har tidligere blitt brukt til å studere kardiomyocyttfunksjon i primære kardiomyocyttkulturer26,27,28,29,30,31,32, hjerteark33,34,35,36,37,38,39og vev hele monteres40, 41,42,43,44,45,46,47. Tidligere arbeid er også gjort for å undersøke feltpotensialer i SAN vev41,42. Her tilbyr vi en metodikk for å bruke MEA til å registrere og analysere murine iboende SAN-avfyringshastigheter. Vi beskriver også hvordan denne teknikken kan brukes til å teste farmakologiske effekter av legemidler på SAN iboende avfyringshastigheter ved å gi et prøveeksperiment som viser effekten av 4-aminopyridin (4-AP), en spenningsportert K+ kanalblokker. Ved hjelp av definerte anatomiske landemerker kan vi registrere SAN nøyaktig uten å måtte utføre de omfattende vevspredningene eller celleisolasjonene som kreves i andre metoder. Selv om MEA kan være kostnadsforbudende, gir opptakene svært spesifikke og pålitelige mål på pacemaking som kan brukes i et stort utvalg av kliniske og fysiologiske forskningsapplikasjoner.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminopyridine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A78403-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5A</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 gauge syringe needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-6C</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60mm Petri Dishes</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>32-105G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1C</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 mL Pyrex Bottle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-414-1D</td>
			<td>Used to store solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bone Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>16060-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2&#183;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen (95% O2, 5% CO2)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo Scissors, 4&#34;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15024-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Acquisition PC</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>CPU: Intel Xeon or Intel Core i7, Memory: 8GB, HDD: 1TB, Graphic Card: NVIDIA or On-board, Screen: 1920x1080</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection Microscope</td>
			<td>Jenco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Pins</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #2 Laminectomy Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11223-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Extra Fine Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11152-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Chamber</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>49WF30</td>
			<td>Used for mouse euthanization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harp Anchor Kit</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>&#160;SHD-22CL/15 WI 64-0247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>SA48-4</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostat</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>13013-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Aurobindo Pharma Limited IDA, Pashamylaram</td>
			<td>NDC 63739-953-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-1389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15-950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light for Dissection Microscope</td>
			<td>Dolan-Jenner</td>
			<td>MI150DG 660000391014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magesium chloride (MgCl2)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>208337-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Head Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64HE1S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Main Amplifier</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-A64MD1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Cap</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KCAP01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 Perfusion Pipe Holder Kit</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-KPK02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MED64 ThermoConnector</td>
			<td>MED64</td>
			<td>MED-CP04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh</td>
			<td>&#160;Warner Instruments</td>
			<td>640246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode array (MEA)</td>
			<td>Alpha Med Scientific</td>
			<td>MED-R515A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mobius Software</td>
			<td>WitWerx Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Specific software for the MED64</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Fisher Chemicals</td>
			<td>S320-500</td>
			<td>Used for pH balancing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Ultigiene</td>
			<td>NDC 50989-885-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint Brush</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1751733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F155009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump Tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-171-298</td>
			<td>1/8&#39;&#39; Interior Diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethyleneimine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9333-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S671-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgruard Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14074-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipets (3mL graduated)</td>
			<td>Samco Scientific</td>
			<td>225</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microelectrode array recording of sinoatrial node firing rate to identify intrinsic cardiac pacemaking defects in mice

Den sinoatriale noden (SAN), som ligger i høyre atrium, inneholder pacemakercellene i hjertet, og dysfunksjon i denne regionen kan forårsake takykardi eller bradykardi. Pålitelig identifisering av hjerte-pacemaking-defekter krever måling av iboende hjertefrekvenser ved i stor grad å forhindre påvirkning av det autonome nervesystemet, noe som kan maskere hastighetsunderskudd. Tradisjonelle metoder for å analysere iboende hjerte pacemaker funksjon inkluderer narkotika-indusert autonom blokade for å måle in vivo hjertefrekvens, isolerte hjerteopptak for å måle iboende hjertefrekvenser, og sinoatrial stripe eller encellet patch-clamp opptak av sinoatrial pacemaker celler for å måle spontan handling potensielle avfyringshastigheter. Imidlertid kan disse mer tradisjonelle teknikkene være teknisk utfordrende og vanskelige å utføre. Her presenterer vi en ny metodikk for å måle egen hjerteavfyringshastighet ved å utføre mikroelektrode array (MEA) opptak av helmonterte sinoatriale nodepreparater fra mus. MEAer består av flere mikroelektroder arrangert i et rutenettlignende mønster for registrering av in vitro ekstracellulære feltpotensialer. Metoden som er beskrevet her, har den kombinerte fordelen av å være relativt raskere, enklere og mer presis enn tidligere tilnærminger for registrering av iboende hjertefrekvenser, samtidig som det tillater lett farmakologisk forhør.

Etter å ha tillatt vevet å akklimatisere seg i parabolen i 15 min, registreres 10 en-min spor. Vår nåværende protokoll registrerer aktivitet i over en time, men vi har registrert stabile avfyringsmønstre for ≥4 t i upubliserte data som ikke vises her. Hvis et eksperimentelt preparat er bra for datainnsamling, bør hver innspillingskanal vise konsekvente og jevnt fordelte tilbakevendende bølgeformer (dvs. pigger) av ensartet form for en gitt kanal (Figur 11D). Disse bølgeformene til...

Watch this Scientific Journal Video about Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice at JoVE.com

Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice

Denne protokollen tar sikte på å beskrive en ny metodikk for å måle iboende hjerteavfyringshastighet ved hjelp av mikroelektrode array-opptak av hele sinoatrial nodevevet for å identifisere pacemaking-defekter hos mus. Farmakologiske midler kan også innføres i denne metoden for å studere deres effekter på iboende pacemaking.

Microelectrode Array Recording av sinoatrial node avfyringshastighet for å identifisere iboende hjerte pacemaking defekter hos mus

The sinoatrial node (SAN), located in the right atrium, contains the pacemaker cells of the heart, and dysfunction of this region can cause tachycardia or ...

Måling av egenpuls er en viktig indikator på hjertehelse. Denne teknikken måler nøyaktig denne hastigheten mens den ekskluderer de fleste forvirrende påvirkninger på sinoatrialnoden. MEA-registrering av egenpuls fanger opp nøyaktige avfyringshastighetsdata som ligner på encellede opptak uten omfattende elektrofysiologitrening.Personer som bruker denne teknikken kan slite med å oppnå sunne vevspreparater i tidlige eksperimenter, så øv på disseksjonen og optimaliser bufferne og datainnsamlingsinnstillingene før du begynner den virkelige datainnsamlingen. Demonstrere prosedyren vil være Leger Man Si og Praveen Kumar, postdoktorer i mitt laboratorium. Begynn med å holde huden på den euthanized musen med en hemostat og bruk kirurgisk saks for å lage et tverrgående snitt i huden like under bunnen av ribbeina fra venstre kostbar bue til høyre kostbar bue.Bruk kirurgisk saks for å kutte opp bukhinnen og forsiktig skille leveren fra membranen uten å nicking leveren for å forhindre overdreven blødning. Øk membranen langs thoraxen for å eksponere thoraxhulen. Bruk den kirurgiske saksen til å kutte ribbens sidevegger fra kantene på kostbuene opp til kragebenene for å eksponere hjertet, og bruk deretter en 23 gauge sprøytenål til å feste ribbeina over skulderen.Bruk en overføringspipette for å slippe varm heparinisert komplett Tyrodes løsning på hjertet for å holde den fuktig. Hold lungene med ekstra fine Graefe tang og kutt luftrøret med kirurgisk saks for å fjerne lungene. For å fjerne hjertet, hold toppen av hjertet med ekstra fine Graefe tang og kutt aorta og dårligere vena cava med kirurgisk saks.Overfør hjertet til en Petri-tallerken som inneholder herdet silikonelastomer og bruk en overføringspipette for å bade hjertet med to til tre milliliter varm heparinisert komplett Tyrodes løsning. Fest toppen av hjertet til parabolen med en disseksjonspinne. Hold den dårligere vena cava med Dumont 2 laminectomy tang.Sett inn en 22 gauge sprøytenål gjennom den dårligere og overlegne vena cava for å finne sin posisjon i riktig atrium, som også identifiserer den omtrentlige posisjonen til den sinoatriale noden. Hold høyre atrievedheng med Dumont 2 laminektomi tang, og legg en formidlingspinne gjennom høyre atrievedheng for å holde den på plass. Gjenta den samme prosedyren for venstre atrievedheng, og fjern deretter sprøytenålen som spenner over vena cavae.Bruk Castroviejo saks for å fjerne toppen av hjertet ved å lage et tverrgående snitt over ventriklene for å frigjøre blodet fra hjertet, og vask deretter hjertet ved å legge til varm heparinisert komplett Tyrodes løsning. Bruk Castroviejo saks til å kutte langs atrioventrikulær septum til atriene er skilt fra ventriklene og hold snittet nærmere ventrikelen. Klipp langs interarterial septum for å fjerne venstre atrium.Plasser disseksjonspinnene i periferien av høyre atrium for å få det til å ligge flatt. Fjern eventuelt gjenværende fett, kar eller vev fra atriet ved hjelp av Castroviejo-saksen og finn den sinoatriale noden i høyre atrium. Tilsett Tyrodes løsning i inngangsløsningsmodellen og slå på strømmen av karbogengass for å oksygenere Tyrodes løsning.Sett den peristaltiske pumpen til 25 RPM, noe som gir en strømningshastighet på to milliliter per minutt. Etter at du har startet pumpen, må du sørge for at bufferen ikke lekker fra systemet og sett temperaturregulatoren til 37 grader Celsius. Bruk Dumont 55 tang til å overføre det dissekerte vevet fra dissekering Petri parabolen på mikroelektrode array rutenettet.Plasser vevet forsiktig med en myk pensel for å legge over sinoatrial nodeområdet i elektrodegitteret. Plasser deretter nettet over vevet ved hjelp av bein tang eller buede tang. Bruk bein tang, plasser harpeankeret på nettet for å holde alt på plass.Ordne mikroelektrode array-parabolen på kontaktplaten. Plasser forsiktig perfusjonshetten på mikroelektrode array-parabolen uten å forstyrre harpeskiveankeret og fest perfusjonsgapet med tape. Slå på forsterkeren og sett opp en arbeidsflyt for innspillingen i programvaren.Velg beat_recording. moflo-mal. Åpne den og angi antall spor, sporvarighet, sporintervall, inngangsspenning, samplingsfrekvens og andre registreringsparametere i henhold til de ønskede opptaksbetingelsene.Klikk på opptaks- og avspillingsknappen for å starte innspillingen og hente data for 10 spor av ett minutts varighet med to minutter med intervaller mellom sporene. Sett pumpen på pause og sett pumpeinnstrømningsslangen på pause fra den vanlige opptaksløsningen til Tyrodes løsning som inneholder ønsket valgte legemiddel. Start pumpen på nytt og gjenoppta opptaket.Når den legemiddelinfunderte Tyrodes løsning har nådd vevet, registrerer du 10 spor på samme måte som tidligere for basisopptakene. Ta et siste bilde av plasseringen av vevet på mikroelektrode arrayet. Åpne den lagrede registrerte datafilen i beatfrekvensanalysemalen til analyseprogramvaren.Klikk på stykket og la hele innspillingen kjøre for datavisualisering og tilordne deretter passende analyseparametere. Velg kanalene som skal inkluderes i analysen, og angi de ønskede amplitude maxima- eller amplitude minima-terskelverdiene for automatisert toppidentifikasjon for bølgeform. Klikk på avspillingsikonet igjen for å kjøre datasettet på nytt og bekrefte at analyseparametrene passer for en spikeuttrekking.For analyse, identifiser de tre mest stabile påfølgende sporene som viser en stabil slagrate for hvert spor på tvers av de fleste kanaler i løpet av eksperimentets basisperiode og ytterligere tre påfølgende stabile spor i løpet av narkotikaeksponeringsperioden. Klikk spill av og spill inn-ikonet for å starte analysen. Dataene ble samlet inn fra en 45-dagers mannlig villtype svart sveitsisk mus for sinoatrial node beatfrekvensmåling.Bølgeformene med forskjellige former og amplituder ble observert i forskjellige kanaler, og alle kanalene viste identiske interspikeintervaller og avfyringsfrekvenser. Imidlertid kan graden av vevskontakt med elektroden også påvirke bølgeformegenskapene som amplitude. Fra de 10 registrerte sporene ble de tre påfølgende kanalene med stabil beatfrekvens og interspikeintervall valgt for videre analyse.De dårlige ekstraherte piggmønstrene skal være fraværende, men hvis de er til stede, påvirkes de enten av støy eller ustabile. Bølgeformene som tilsvarer individuelle hjerteslag reflekterer egen hjerte-pacemaking aktivitet. Mikroelektrode array-systemet gjør det enkelt å bruke legemiddelmidler for å analysere de farmakologiske effektene.Den iboende avfyringshastigheten til utvalgte tre spor på tvers av alle de 64 kanalene ble funnet å være omtrent 320 slag per minutt i prøvetakingsdataene. Innføringen av 4-aminopyrimidin økte interspike intervallene som forventet, noe som reduserte beatfrekvensen fra 320 til 210 slag per minutt. For å samle pålitelige data for analyse, er det viktig å bekrefte at vev er sunt under registrering ved å bekrefte at sporene er stabile og oppfyller standardkriteriene.MEAer kan brukes til å registrere hjerteaktivitet i andre områder av hjertet, slik at detaljert regionspesifikk karakterisering som er egnet til å studere effekten av genetisk og farmakologisk manipulasjon.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

Cardiac Stress Test indusert av Dobutamine og overvåkes av Hjertekateterisering i Mus

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the ...

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

En metode for å studere virkningen av kjemisk-indusert eggstokksvikt på arbeidskapasiteten og Cardiac Adaptation i Mus

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Multi-elektrode Array Recordings of Human Epileptiske Postoperativ Kortikal Tissue

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Cardiac Catheterization in Mice to Measure the Pressure Volume Relationship: Investigating the Bowditch Effect

Hjertekateterisering i Mus for å måle trykket Volume Forholdet: Gransker Bowditch Effect

Animal models that mimic human cardiac disorders have been created to test potential therapeutic strategies. A key component to evaluating these ...

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

Hjerteinfarkt i Neonatal mus, en modell av Cardiac Regeneration

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

En lukket-brystet modell å indusere tverrgående aorta Constriction i mus

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

Adeno-Associated Virus-Mediated Delivery of CRISPR for Cardiac Gene Editing in Mice

Adeno-assosiert Virus-mediert levering av CRISPR for Cardiac genet redigering i mus

The clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system has greatly facilitated genome engineering in both cultured cells and ...

Autonomic Function Following Concussion in Youth Athletes: An Exploration of Heart Rate Variability Using 24-hour Recording Methodology

Autonome funksjon etter hjernerystelse i unge idrettsutøvere: en utforskning av hjertefrekvensen med 24-timers opptak metodikk

Participation in organized sports makes a significant contribution to youth development, but places youth at a higher risk for sustaining a concussion. To ...

Transdermal Measurement of Glomerular Filtration Rate in Mice

Transdermal måling av Glomerular filtrering i mus

Transdermal analysis of glomerular filtration rate (GFR) is an established technique that is used to assess renal function in mouse and rat models of ...